本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別地，涉及一種磁珠法分離純化dna的方法。

背景技術(shù)：

dna測序作為一種重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，在生物學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用。早在dna雙螺旋結(jié)構(gòu)(watsonandcrick，1953)被發(fā)現(xiàn)后不久就有人報(bào)道過dna測序技術(shù)，但是當(dāng)時的操作流程復(fù)雜，沒能形成規(guī)模。隨后在1977年sanger發(fā)明了具有里程碑意義的末端終止測序法，同年a.m.maxam和w.gilbert發(fā)明了化學(xué)降解法。sanger法因?yàn)榧群啽阌挚焖?，并?jīng)過后續(xù)的不斷改良，成為了迄今為止dna測序的主流。然而隨著科學(xué)的發(fā)展，傳統(tǒng)的sanger測序已經(jīng)不能完全滿足研究的需要，對模式生物進(jìn)行基因組重測序以及對一些非模式生物的基因組測序，都需要費(fèi)用更低、通量更高、速度更快的測序技術(shù)，第二代測序技術(shù)(next-generationsequencing)應(yīng)運(yùn)而生。第二代測序技術(shù)的核心思想是邊合成邊測序(sequencingbysynthesis)，即通過捕捉新合成的末端的標(biāo)記來確定dna的序列，現(xiàn)有的技術(shù)平臺主要包括roche/454flx、illumina/solexagenomeanalyzer和appliedbiosystemssolidsystem。在整個dna測序過程中，分離提取的dna的純度起到至關(guān)重要的作用。

磁珠法純化dna主要是利用利息交換吸附材料以吸附核酸，從而將核酸和蛋白質(zhì)等其細(xì)胞中其他物質(zhì)分離。核酸在細(xì)胞中總是與各種蛋白質(zhì)結(jié)合在一起的，核酸的分離主要是指將核酸與蛋白質(zhì)、多糖、脂肪等生物大分子物質(zhì)分開。在分離核酸時應(yīng)遵循保證核酸分子一級結(jié)構(gòu)的完整性以及排除其他分子污染的原則。

大多數(shù)核酸分離與純化的方法一般都包括了細(xì)胞裂解、酶處理、核酸與其他生物大分子物質(zhì)分離、核酸純化等幾個主要步驟。每一步驟又可由多種不同的方法單獨(dú)或聯(lián)合實(shí)現(xiàn)。

現(xiàn)有磁珠法純化dna方法中，磁珠純化過程中，在洗滌磁珠時，通常采用磁力架上下顛倒的方式進(jìn)行洗滌磁珠，但是，上述磁珠洗滌方法存在磁珠洗滌不夠徹底的問題，常導(dǎo)致dna產(chǎn)物的純度不高；而且離心管蓋上也會有酒精殘留，容易造成交叉污染。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種磁珠法分離純化dna的方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中磁珠洗滌不徹底、影響dna產(chǎn)物純度的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種磁珠法純化dna的磁珠洗滌方法，包括如下步驟：

(1)將吸附dna分子后的磁珠置于離心管中；

(2)將所述離心管置于磁力架上轉(zhuǎn)動洗滌；

(3)固液分離。

所述步驟(2)中，所述轉(zhuǎn)動洗滌為轉(zhuǎn)動一周。

所述步驟(1)中還包括加入70v/v％酒精的步驟。

所述磁珠為agencourtampurexp。

本發(fā)明還公開了一種磁珠法分離純化dna的方法，包括如所述洗滌方法對磁珠進(jìn)行洗滌的步驟。

本發(fā)明還公開了一種磁珠法分離純化dna的方法，包括如下步驟：

(1)將dna轉(zhuǎn)入分裝好磁珠的離心管中，混勻并于室溫下靜置處理；

(2)將離心管置于磁力架上，吸附至溶液澄清，去除上清；

(3)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述洗滌方法對磁珠進(jìn)行洗滌；

(4)將洗滌后的離心管置于40℃干式加熱器上干燥磁珠至磁珠表面不反光；

(5)向離心管加入ddh2o，回溶磁珠；

(6)將離心管于室溫下靜置處理，并置于磁力架上吸附至澄清；

(7)將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中備用，進(jìn)行后續(xù)測序處理。

所述步驟(3)中，所述磁珠洗滌的步驟為重復(fù)2次。

所述步驟(1)中，所述靜置處理步驟為10min。

所述步驟(6)中，所述靜置處理步驟為5min。

本發(fā)明還公開了一種二代dna測序方法，即包括所述的分離純化dna的方法。

本發(fā)明還公開了一種的磁珠法分離純化dna的方法，包括如下步驟：

本發(fā)明所述磁珠法分離純化dna的方法，在磁珠洗滌步驟中，采用在磁力架上轉(zhuǎn)動洗滌的方式，使得每個磁珠小微粒都能洗滌到，具有更好的洗滌效果，進(jìn)一步提高了dna產(chǎn)物純度；同時，由于采用轉(zhuǎn)動洗滌的方式，不需顛倒，離心管蓋上沒有液體，能最大程度的減少交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中轉(zhuǎn)動洗滌磁珠的操作示意圖；

圖2為本發(fā)明對比例中上下顛倒磁力架洗滌磁珠的操作示意圖。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例所述磁珠法分離純化dna的方法，具體包括如下步驟：

(1)將收集的dna轉(zhuǎn)入分裝好磁珠的1.5ml離心管中，吹打混勻，室溫靜置10分鐘；

(2)將離心管置于磁力架上，吸附至溶液澄清，去除上清；

(3)向離心管中加入70％酒精，蓋下管蓋，如圖1所示，轉(zhuǎn)動離心管一周以洗滌磁珠，隨后開蓋去除上清，并重復(fù)上述洗滌步驟2次；

(4)將離心管置于40℃干式加熱器上干燥磁珠至磁珠表面不反光；

(5)向離心管加入ddh2o，以回溶磁珠；

(6)將離心管于室溫靜置5分鐘后，置于磁力架上吸附至澄清；

(7)將上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中備用，進(jìn)行后續(xù)測序處理。

對比例

本對比例所述磁珠法分離純化dna的方法，與實(shí)施例1相同，其區(qū)別僅在于，所述磁珠洗滌步驟(3)中，如圖2中(a)和(b)所示，采用現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)方法，即在磁力架上以上下顛倒磁力架的方式進(jìn)行洗滌。

實(shí)驗(yàn)例

對上述實(shí)施例1中以優(yōu)化后轉(zhuǎn)動洗滌的方法和以現(xiàn)有上下顛倒磁力架的方式所提取得到的dna樣本濃度純度進(jìn)行檢測并對比，記錄數(shù)據(jù)如下表1。

表1兩種洗滌方法dna樣本濃度純度檢測

從上表數(shù)據(jù)可知，采用本發(fā)明優(yōu)化后的磁珠洗滌方法可以充分的洗滌磁珠，進(jìn)一步提高產(chǎn)物純度；同時，由于樣本在洗滌過程中，不會接觸到離心管蓋上，因而不會有液體殘留，并最大限度的減少了交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。

以上對本發(fā)明實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個例對本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在具體實(shí)施方式及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別地，涉及一種磁珠法分離純化DNA的方法。本發(fā)明所述磁珠法分離純化DNA的方法，在磁珠洗滌步驟中，采用在磁力架上轉(zhuǎn)動洗滌的方式，使得每個磁珠小微粒都能洗滌到，具有更好的洗滌效果，進(jìn)一步提高了DNA產(chǎn)物純度；同時，由于采用轉(zhuǎn)動洗滌的方式，不需顛倒，離心管蓋上沒有液體，能最大程度的減少交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)研發(fā)人員：吳少鴻;李欣;劉奇志;王祖雄;付劍鋒;李勝果;周文根
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廈門美因生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：2017.05.18
技術(shù)公布日：2017.08.18