1.一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,包括PCR反應液,PCR反應啟動液、PCR反應酶系,HCV特異性引物及探針,內(nèi)標18S RNA的特異性引物及探針,陰陽性質(zhì)控品,其特征在于:所述的HCV特異性引物及探針、內(nèi)標18S RNA的特異性引物及探針序列如下:
檢測HCV的上游引物F1的序列為:
CCTACTACCGCGGTCTTGACGTGTCTGTCATC;
檢測HCV的下游引物R1的序列為:CAGTCTATCACCGAGTCGAAATCGCCGGTAAAGCC;
檢測HCV的熒光探針P1序列為:FAM-CGGCCAGTG(dSpacer)CGATGTTGTCGTAGTGGCAAC-BHQ;
檢測內(nèi)標18SRNA的上游引物F1序列為:CCGATCGCACGCCCCCCGTGGCGGCGACGACC;
檢測內(nèi)標18SRNA的下游引物R1的序列為:CCCGTCACCCGTGGTCACCATGGTAGGCAC;
檢測內(nèi)標18SRNA的熒光探針P1序列為:
HEX-CGAACGTCT(dSpacer)CCCTATCAACTTTCGATGGTAGTC-BHQ。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,其特征在于:其PCR反應液成分包括:
Tris-緩沖液 50~100mmol/L
KCl 20~60mmol/L
二硫蘇糖醇 2~5mmol/L
甜菜堿 0.5~2mol/L
海藻糖 1%~4%
PEG 2%~5%
BSA 0.1~0.6mg/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,其特征在于:Tris-緩沖液可選自Tris-H2SO4、Tris-乙酸、Tris-HCl中的任意一種或多種,Tris-緩沖液的pH為7.0~9.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,其特征在于:其PCR啟動液成分包括:
Mg2+ 8mM~30mM 。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,其特征在于:Mg2+來自于硫酸鎂、乙酸鎂、氯化鎂中的任意一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,其特征在于:其PCR反應酶系成分包括:
dNTPs 180~250μmol/L
聚合酶Bsu 120~160ng/μl
單鏈結(jié)合蛋白 200~700ng/μl
重組酶 100~300ng/μl
逆轉(zhuǎn)錄酶 0.05~0.9U/μl。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,其特征在于:重組酶選自E.coli RecT蛋白;λ噬菌體β蛋白;啤酒酵母SepΙ/STPβ;啤酒酵母DPA蛋白;啤酒酵母STPα蛋白;粟酒裂殖酵母p140/Exo∥蛋白以及RrpΙ、HPP-Ι、v-SEP、ICP8蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,其特征在于:HCV探針連接的熒光基團不同于內(nèi)標18SRNA探針連接的熒光基團。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4、6所述的一種丙型肝炎病毒(HCV)恒溫檢測試劑盒,其特征在于:恒溫擴增的擴增溫度為35℃~42℃。