相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求以2013年3月15日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?1/791,933為優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)，所述專(zhuān)利申請(qǐng)的所有內(nèi)容都以引用方式被納入本申請(qǐng)中。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的領(lǐng)域在于鑒定與人類(lèi)疾病有關(guān)的各種基因型。
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及識(shí)別不同基因型。序列特異性引物-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(SSP-PCR)、DNA測(cè)序、DNA指紋，和單核苷酸多態(tài)性(SNP)基因分型等技術(shù)，已被應(yīng)用于基因分型(PCT申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)WO/2011/139750)。在這些技術(shù)中，單核苷酸多態(tài)性(SNP)基因分型有較高的識(shí)別力。然而，大多數(shù)涉及DNA雜交的基因分型檢測(cè)都要求較高的運(yùn)行成本和較長(zhǎng)的操作時(shí)間，因此有必要開(kāi)發(fā)更有效的基因分型方法，達(dá)至更快、更便宜及覆蓋更多基因型。結(jié)核分枝桿菌(MTB)檢測(cè)結(jié)核病(TB)是由結(jié)核分枝桿菌(MycobacteriumtuberculosisMTB)引起的。耐藥性結(jié)核分枝桿菌(DR-MTB)的出現(xiàn)是在工業(yè)化國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家結(jié)核病控制項(xiàng)目中的一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題。除了在臨床和流行病學(xué)上的重要性，耐藥性結(jié)核病(DR-MTB)更有重要的經(jīng)濟(jì)影響，因其治療成本比普通的MTB為高。DR-MTB被定義為對(duì)至少兩個(gè)最有效的第一線(xiàn)藥物有耐藥性，包括利福平(rifampinRIF)和異煙肼(isoniazidINH)。DR-MTB病例在全球有上升的趨勢(shì)，顯著的發(fā)病率和死亡率。一線(xiàn)抗結(jié)核藥物的耐藥性已被發(fā)現(xiàn)與幾個(gè)MTB基因突變有關(guān)：rpoB(耐RIF)；katG基因和inhA基因(耐INH)。DR-MTB的檢測(cè)有幾種不同技術(shù)可用。雖然傳統(tǒng)的表型藥物敏感性試驗(yàn)(DST)仍然是測(cè)試MTB耐藥性的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”，但DST可能要長(zhǎng)達(dá)八個(gè)星期才能完成。結(jié)核分枝桿菌是生長(zhǎng)緩慢的細(xì)菌。MTB每15-20小時(shí)才分裂一次，并取決于所使用的介質(zhì)一般需要4至6周才能生長(zhǎng)成菌落。此后，當(dāng)DST所培養(yǎng)的MTB被識(shí)別，藥敏試驗(yàn)通常再還需時(shí)2周。DST因此需要較長(zhǎng)時(shí)間，導(dǎo)致了治療疾病的延誤，尤其通常的做法是在DST完成前已經(jīng)要開(kāi)始治療。業(yè)界開(kāi)發(fā)中的替代培養(yǎng)或能縮短測(cè)試所需的時(shí)間；然而，某些類(lèi)型樣品中的MTB不適合用替代培養(yǎng)。商業(yè)環(huán)境中并不經(jīng)常使用常規(guī)的DNA測(cè)序來(lái)檢測(cè)MTB耐藥突變，因?yàn)槠浜臅r(shí)和需要專(zhuān)門(mén)的知識(shí)。市場(chǎng)上有不同技術(shù)的試劑盒，包括實(shí)時(shí)PCR和用于檢測(cè)單一類(lèi)型MTB或耐藥性MTB的常規(guī)雜交。特別是實(shí)時(shí)PCR，由于其可用信道數(shù)量有限，所以通常難以同時(shí)檢測(cè)多種耐藥MTB。雖然常規(guī)雜交也適用于檢測(cè)多藥耐藥MTB；然而，它需要長(zhǎng)的溫育時(shí)間(至少4小時(shí))。對(duì)比下，本發(fā)明通過(guò)利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和“導(dǎo)流”雜交技術(shù)，提供了一種陣列測(cè)試，可以在一個(gè)平臺(tái)上同時(shí)檢測(cè)單一耐藥MTB和多重耐藥MTB，檢測(cè)時(shí)間比常規(guī)的雜交短(～35分鐘)。從提取樣品中DNA到分析的整個(gè)測(cè)試只需少于4小時(shí)，檢測(cè)結(jié)果有高度的特異性和敏感性。β地中海貧血的檢測(cè)β地中海貧血由常染色體突變引起，是一種血紅蛋白疾病，可根據(jù)β-球蛋白的生產(chǎn)受影響的程度再分類(lèi)。其中有些突變導(dǎo)致β球蛋白(表示為β+)輕度減產(chǎn)，有些導(dǎo)致β-球蛋白基因的絕對(duì)沉默而不能生產(chǎn)或只生產(chǎn)出失去功能的β球蛋白(表示為β0)。據(jù)估計(jì)，世界約有1.5％的人口有β-地中海貧血基因型的雜合體，父母都是雜合體的話(huà)其后代可能是純合體。β地中海貧血有三個(gè)嚴(yán)重程度：輕度(輕型地中海貧血，β+/β或β0/β)、中度(中度地中海貧血：β+/β或β0/β)和嚴(yán)重(重型地中海貧血：β+/β+，β0/β+或β0/β0)。遺傳了地中海貧血的人主要會(huì)出現(xiàn)低色素性貧血，并可能需要終身輸血?？刂痞?地中海貧血的最好方法是避免β地中海貧血患兒的出生，這要準(zhǔn)父母做產(chǎn)前檢測(cè)和遺傳咨詢(xún)；這已被證實(shí)是最有效管理地中海貧血的方法。β-地中海貧血流行于溫帶地區(qū)，如地中海沿岸國(guó)家，中東和東南亞地區(qū)。β-地中海貧血的分子基礎(chǔ)已有被廣泛研究，發(fā)現(xiàn)β-球蛋白基因的點(diǎn)突變?cè)诓煌牡貐^(qū)有不同的突變方式和突變頻率。當(dāng)前的檢測(cè)技術(shù)包括微陣列，等位基因特異性PCR(AS-PCR)和直接測(cè)序。微陣列可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)DNA芯片上，因此適用于同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品。然而，它的應(yīng)用是因其高成本的限制，結(jié)果不能用肉眼觀察，需使用高性能掃描器和復(fù)雜的分析軟件進(jìn)行解釋。等位基因特異性PCR是使用等位基因特異性引物，以檢測(cè)多態(tài)性或突變，這技術(shù)中只有與目標(biāo)DNA完全匹配的寡核苷酸能夠充當(dāng)引物以擴(kuò)增目標(biāo)DNA。該技術(shù)的限制是在一個(gè)反應(yīng)的有限的吞吐量。直接DNA測(cè)序涉及體外DNA復(fù)制過(guò)程其中DNA聚合酶選擇性地?fù)饺腈溄K止雙脫氧核苷酸，該技術(shù)的吞吐量低和需要長(zhǎng)時(shí)間操作，因此檢測(cè)效率低。另一方面，本發(fā)明提供了一種結(jié)合使用PCR和反向斑點(diǎn)雜交的DNA檢測(cè),能夠提供了一個(gè)高度敏感和特異的檢測(cè)的β-球蛋白基因的突變，以協(xié)助β-地中海貧血的檢測(cè)。乙型肝炎病毒檢測(cè)乙型肝炎病毒是最小的DNA病毒，其包括3000個(gè)由蛋白質(zhì)衣殼圍繞的核苷酸。乙型肝炎病毒通過(guò)與受感染者的血液或體液接觸傳播。約二十億人感染乙肝病毒；其中超過(guò)3.5億成為乙肝病毒攜帶者。大約五分之一乙型肝炎病毒感染會(huì)發(fā)展出肝硬化或肝癌。檢測(cè)乙型肝炎病毒可以通過(guò)簡(jiǎn)單的表面抗原血液測(cè)試，或使用應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和乙型肝炎病毒DNA的測(cè)量進(jìn)行診斷。此外，通過(guò)分析乙型肝炎病毒基因組序列的差異已鑒定了10種乙型肝炎病毒基因型(A至J)和幾種亞型。乙型肝炎病毒基因型和亞型明顯表現(xiàn)出不同的地域分布。各種乙型肝炎病毒基因型在致病和治療上存在差異。乙型肝炎病毒基因型的確定可以為慢性乙型肝炎病毒感染和治療前的評(píng)估提供信息。DNA測(cè)序被認(rèn)為是對(duì)乙型肝炎病毒基因型檢測(cè)的黃金標(biāo)準(zhǔn)方法。但它在檢測(cè)混合基因型的效率較低。另外，分子DNA技術(shù)提供了一個(gè)用于高度敏感地檢測(cè)乙型肝炎病毒基因型的具體方法。性病病原體檢測(cè)性病是常見(jiàn)的世界性疾病。根據(jù)2005年世界衛(wèi)生組織估計(jì)，每年有448萬(wàn)新發(fā)并可治愈的性病病例(梅毒，淋病，衣原體和滴蟲(chóng))，主要發(fā)生在世界各地的15至49歲的成年人。香港在2010年每550個(gè)孕婦有一個(gè)被檢測(cè)出患有性傳播疾病(不包括艾滋病)。性病能傳染孕婦的孩子，無(wú)論是在懷孕期間或在寶寶出生后。當(dāng)中，淋球菌和衣原體可導(dǎo)致不育。因此，準(zhǔn)婚夫婦和孕前婦女有檢測(cè)性病的潛在需要。此外，中國(guó)也是檢測(cè)性病病原體的潛在市場(chǎng)，在過(guò)去20年性病患者數(shù)量急劇增加。因此中國(guó)需要快速，低價(jià)，準(zhǔn)確的性病病原體檢試劑盒幫助控制性病。目前市場(chǎng)上的性病檢試劑盒可用于檢測(cè)單個(gè)病原體或同時(shí)檢測(cè)3-4個(gè)病原體，一般沒(méi)有包括人類(lèi)乳頭狀瘤病毒(HPV)。由于性病的發(fā)病率增加，有需要同時(shí)篩選分析和檢測(cè)多個(gè)性病病原體。血栓形成傾向檢測(cè)血栓形成傾向是指血液有異常的凝固，增加了出現(xiàn)血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。研究報(bào)告顯示，有血栓形成傾向并出現(xiàn)血栓形成的病人中,約40％與遺傳因素有關(guān)，并且被證實(shí)有較高風(fēng)險(xiǎn)患上靜脈血栓形成等心血管疾病和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)等生殖障礙。也有越來(lái)越多的意見(jiàn)認(rèn)為帶有遺傳性血栓形成傾向的孕婦較易出現(xiàn)妊娠不良，癥狀包括復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、胎死宮內(nèi)、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩、先兆性子癇和胎盤(pán)早剝等。在過(guò)去的二十年間，一些基因突變已被確定與遺傳性血栓形成傾向有關(guān)。最常見(jiàn)的四個(gè)基因突變?yōu)椋喝R頓凝血第五因子FactorVLeiden(FVL)[1691G>A]，凝血酶原FactorII(FII或稱(chēng)為凝血第二因子)[20210G>A]，亞甲基四氫葉酸還原酶MethylenetetrahydrofolateReductase(MTHFR)[677C>T]及亞甲基四氫葉酸還原酶MethylenetetrahydrofolateReductase(MTHFR)[1298A>C]。檢測(cè)這些基因突變有助于識(shí)別有血栓形成傾向和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的高危人群，從而幫助個(gè)別人士預(yù)防疾病及降低患病風(fēng)險(xiǎn)，并提供預(yù)防性治療的指導(dǎo)。發(fā)明概要SNP基因分型作為診斷工具SNP基因分型除了可用于DNA指紋外，還可以用于鑒定基因片段、多態(tài)性基因、具有改變的基因，或功能有問(wèn)題的基因。本發(fā)明提供方法和試劑盒用于快速，明確地鑒定具傳染性的病原體，或由于特定DNA序列的存在或缺失所引起的遺傳性疾病。如以上所論，市場(chǎng)上的雜交格式需要由具高解象度的圖像分析儀進(jìn)行分析。以膜為基礎(chǔ)的等位特異寡核苷酸探針-反向點(diǎn)雜交(ASO-RDB)導(dǎo)流雜交格式(例如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,741,647)可被應(yīng)用于SNP基因分型。微陣列雜交格式能產(chǎn)生可見(jiàn)的點(diǎn)，并可以通過(guò)目測(cè)和/或使用成本較低的圖像分析儀進(jìn)行分析。導(dǎo)流雜交DNA雜交一直是現(xiàn)代生物科學(xué)研究并涉及基因分子生物學(xué)研究中的最重要方法。各種基因組的核酸序列復(fù)雜性能通過(guò)特定互補(bǔ)的DNA序列在溶液中雜交被揭示和分析。簡(jiǎn)言之，目標(biāo)DNA被擴(kuò)增或消化，并使其與在固體支持介質(zhì)(如硝酸纖維素膜)上的互補(bǔ)DNA探針雜交。然而，傳統(tǒng)的雜交技術(shù)原則上受限于膜的面積，并通常需要較長(zhǎng)的溫育時(shí)間。導(dǎo)流雜交方法和設(shè)備可以準(zhǔn)確地控制雜交條件,不會(huì)有傳統(tǒng)雜交技術(shù)需時(shí)較長(zhǎng)的問(wèn)題。導(dǎo)流DNA雜交技術(shù)可將雜交時(shí)間從數(shù)小時(shí)或數(shù)天減至數(shù)分鐘(整個(gè)雜交測(cè)定可以在5-30分鐘內(nèi)完成，具體時(shí)間取決于用于產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)的方法)。導(dǎo)流雜交設(shè)備的制造成本低廉，并且使用比傳統(tǒng)雜交設(shè)備少10倍的試劑量，因此使DNA檢測(cè)技術(shù)比前更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。導(dǎo)流雜交技術(shù)提供更靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)和鑒定結(jié)果，并普遍適用于各種不同技術(shù)例如傳統(tǒng)DNA印跡法(Southernblotting)、RNA印跡法(Northernblotting)、斑點(diǎn)印跡法、狹槽印跡法和反向斑點(diǎn)印跡法的雜交。PCT申請(qǐng)WO/2011/139750描述了一個(gè)連接到中央控制單元的多個(gè)橫向快速導(dǎo)流檢測(cè)設(shè)備。雜交設(shè)備包含一個(gè)連接到一個(gè)或多個(gè)橫流設(shè)備的中央控制單元。橫流設(shè)備進(jìn)行雜交過(guò)程和顯影程序，并由中央控制單元控制和供電。單個(gè)橫流設(shè)備或幾個(gè)設(shè)備可以同時(shí)測(cè)試若干反應(yīng)(或者若干樣品和/或分析物),并在獨(dú)立的控制下以不同條件進(jìn)行程序。橫流設(shè)備可以是“nxm”點(diǎn)陣(矩陣)的形式，也可以是線(xiàn)陣的形式。更多有關(guān)于執(zhí)行導(dǎo)流雜交的方法和設(shè)備的描述可參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利5,741,647、美國(guó)專(zhuān)利6,020,187和PCT申請(qǐng)WO/2011/139750。本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員可以使用美國(guó)專(zhuān)利5,741,647或美國(guó)專(zhuān)利6,020,187中所述的類(lèi)近導(dǎo)流雜交技術(shù)，或者能夠執(zhí)行導(dǎo)流雜交技術(shù)的任何新方法或設(shè)備來(lái)實(shí)踐本發(fā)明。雜交設(shè)備附有的成像系統(tǒng)，例如FT-Pro，可以將信號(hào)檢測(cè)數(shù)碼化。本發(fā)明所述的雜交設(shè)備可以是自動(dòng)化的設(shè)備，可以使用其內(nèi)置的數(shù)碼化功能以進(jìn)行所有分析。導(dǎo)流雜交法比傳統(tǒng)雜交技術(shù)有更高的效率、準(zhǔn)確度和靈敏度。耐藥性結(jié)核分支桿菌(MTB)檢測(cè)本發(fā)明提供方法和試劑盒以PCR和“導(dǎo)流”式雜交技術(shù)檢測(cè)對(duì)利福平(RIF)和異煙肼(INH)有耐藥性的結(jié)核分支桿菌(MTB)。MTB的RNA聚合酶β亞基的rpoB基因突變與對(duì)利福平的耐藥性有關(guān)；而katG基因(過(guò)氧化氫酶)和INHA基因(烯?；鵄CP還原酶)的突變與對(duì)異煙肼的耐藥有關(guān)。在本發(fā)明中，特異性引物被用于擴(kuò)增INHA、rpoB基因，和katG基因；特異性引物已被證實(shí)沒(méi)有與人類(lèi)基因組有交叉反應(yīng)。引物RS-IAC充當(dāng)內(nèi)部控制，其不針對(duì)任何人類(lèi)或MTB基因組，用于監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程。探針包括有十個(gè)用于檢測(cè)耐藥性的基因突變DNA探針；這基因突變有rpoB(D516V，D516G，H526D，H526Y，H526L1，S531L和S531W)，katG(S315T1和S315T2)，和inhA(-15TC/T)。探針也包括有五個(gè)用于檢測(cè)野生型MTB基因組的DNA探針，這有助于驗(yàn)證rpoB基因，katG基因和inhA基因的PCR擴(kuò)增反應(yīng)是否已完成。雜交引物可以是已被生物素化來(lái)支持。β地中海貧血檢測(cè)本發(fā)明提供檢測(cè)β-球蛋白基因突變的方法及試劑盒，突變包括TATA-28(A>G)，TATA-29(A>G)的檢測(cè)，起始密碼子(G>A)，密碼子5(-CT)，密碼子8/9(+G)，密碼子15(G>A)，密碼子16n(-C)，密碼子17(A>T)，密碼子19(A>G)，密碼子26(G>A)密碼子27/28(+C)，密碼子為30G>C，IVS1.1(G>T)，IVS1.1(G>A)，IVS1.5(G>C)，密碼子41/42(-TCTT)，密碼子43(G>T)，密碼子71/72(+A)，IVS2.1(G>A)，IVS2.654(C>T)和619bp的缺失。乙型肝炎病毒檢測(cè)本發(fā)明提供方法和試劑盒以檢測(cè)8個(gè)乙型肝炎病毒基因型(乙型肝炎病毒基因型A，B，C，D，E，F(xiàn)，G和H)是否存在于病人的血清樣品中的。檢測(cè)性病病原體本發(fā)明提供方法和試劑盒，以檢測(cè)在各個(gè)標(biāo)本中，如尿液，泌尿生殖系統(tǒng)拭子(尿道、陰道、子宮頸和各種病變)和液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本(PreservCytTM和SurePathTM)的原生物、細(xì)菌，和病毒的存在。擴(kuò)增控制(AC)包括用于檢測(cè)人類(lèi)DNA，以檢查結(jié)果有足夠的細(xì)胞含量和有效性。AC可用來(lái)監(jiān)測(cè)在PCR擴(kuò)增過(guò)程中PCR抑制劑的存在和提取的DNA量是否足夠。沒(méi)有AC信號(hào)表示在PCR擴(kuò)增過(guò)程的存在抑制劑或DNA量不足(或不存在檢體)。正控制(PC)包含一個(gè)正模板核酸分子來(lái)監(jiān)測(cè)PCR試劑的性能。DNA雜交和PCR技術(shù)可更快的檢測(cè)在尿、泌尿生殖系統(tǒng)拭子(尿道、陰道、子宮頸和各種病變)，和液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本(PreservCytTM和SurePathTM)中的性病病原體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法和試劑盒可檢測(cè)的12種常見(jiàn)性病病原體：1種原生動(dòng)物(陰道毛滴蟲(chóng))，7種菌(沙眼衣原體、淋病奈瑟菌、生殖支原體、人型支原體、解脲支原體、解孢子蟲(chóng)和梅毒螺旋體)和4種病毒(單純皰疹病毒1&2型，人乳頭瘤病毒6型和11型)。這些病原體都與子宮頸炎、尿道炎、滴蟲(chóng)病和盆腔炎有關(guān)。本發(fā)明提供的通用引物和病原體特異性引物，用于檢測(cè)性病病原體。通用引物用來(lái)實(shí)現(xiàn)多種不同的目標(biāo)同時(shí)的PCR平衡擴(kuò)增。通用引物序列已通過(guò)PCR和凝膠電泳來(lái)測(cè)試特異性，以證明不與其他病原體和人類(lèi)基因組有交叉反應(yīng)。兩個(gè)通用引物序列分別被加入到病原體特異性引物和AC特異性引物的5'端。通用引物和病原體特異性引物標(biāo)記再通過(guò)PCR和凝膠電泳進(jìn)一步測(cè)試，證明沒(méi)有與其它病原體和人類(lèi)基因組有交叉反應(yīng)(圖1)。在一個(gè)實(shí)施方案中，病原體特異性引物和兩個(gè)通用序列標(biāo)記(引物)包括在單個(gè)PCR擴(kuò)增。在第一輪PCR，病原體特異性引物結(jié)合其特定的目標(biāo)，并創(chuàng)建一個(gè)攜帶通用序列的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。接著，在第二輪PCR中，通用引物結(jié)合到通用序列標(biāo)記的PCR產(chǎn)物(圖2)。在優(yōu)化的PCR下，我們可以實(shí)現(xiàn)平衡擴(kuò)增以避免因不同目標(biāo)病原體DNA序列有不同的擴(kuò)增效率而導(dǎo)致結(jié)果有偏差。所述實(shí)施方案還確保病原體的擴(kuò)增產(chǎn)物僅由通用引物產(chǎn)生，與DNA探針從而有更精確的檢測(cè)。本文所描述的通用引物系統(tǒng)也可應(yīng)用到其他方法和試劑盒來(lái)檢測(cè)未在本發(fā)明中描述的DR-MTB，β球蛋白，乙肝病毒和血栓形成傾向，以及與其它疾病有關(guān)的核酸或基因。血栓形成傾向檢測(cè)本發(fā)明提供檢測(cè)與遺傳性血栓形成傾向有關(guān)的基因突變的方法，所述基因突變包括萊頓凝血第五因子FactorVLeiden(FVL)[1691G>A]，凝血酶原FactorII(FII或稱(chēng)為凝血第二因子)[20210G>A]，亞甲基四氫葉酸還原酶MethylenetetrahydrofolateReductase(MTHFR)[677C>T]和甲基四氫葉酸還原酶MethylenetetrahydrofolateReductase(MTHFR)[1298A>C]。盡管本發(fā)明的驗(yàn)證數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)使用PCR以擴(kuò)增序列，任何可以產(chǎn)生足夠份量特定目標(biāo)序列以進(jìn)行鑒定和導(dǎo)流雜交分析的方法亦可被使用。如果所得到的目標(biāo)序列份量足夠，就可能不需要使用PCR擴(kuò)增。檢測(cè)可以通過(guò)檢測(cè)目標(biāo)DNA或接合物上的標(biāo)記來(lái)實(shí)現(xiàn)。附圖說(shuō)明圖1a示出了使用通用引物(序列號(hào)285和286)擴(kuò)增臨床樣品PCR反應(yīng)物的電泳圖像。僅在存有病原體的陽(yáng)性樣品(即CT-陽(yáng)性，NG-陽(yáng)性，HPV-6和HPV-11陽(yáng)性)中觀察到特定頻帶，這表明通用引物不會(huì)與人類(lèi)DNA有反應(yīng)。圖1b示出了使用病原體特異性引物(序列號(hào)263-282)和通用引物(序列號(hào)285和286)擴(kuò)增人類(lèi)臨床樣品的PCR反應(yīng)物的電泳圖像。每個(gè)樣品觀察到對(duì)應(yīng)特定病原體的特定頻帶，表明引物與其對(duì)應(yīng)的病原體有高度特異性。類(lèi)似的情況在單個(gè)和多個(gè)PCR反應(yīng)中都可以觀察到。圖2示出了一個(gè)用在單個(gè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的通用引物和基因特異性引物的實(shí)施例。圖3示出了一個(gè)DR-MTB匣子(左圖)和一個(gè)實(shí)施方案的DR-MTB檢測(cè)的信號(hào)位置(右圖)(格線(xiàn)僅供說(shuō)明用途)。IAC內(nèi)部控制監(jiān)測(cè)PCR的擴(kuò)增過(guò)程。HC是雜交控制，監(jiān)測(cè)雜交過(guò)程。圖4示出了不同的MTB突變體的視覺(jué)解釋的一個(gè)例子。圖5示出了一種β-地中海貧血匣子和信號(hào)位置實(shí)施方案(格線(xiàn)僅供說(shuō)明用途)。圖6a示出了一個(gè)解釋不同的β-地中海貧血基因型的一個(gè)例子。圖6b示出了使用β-地中海貧血匣子的各種臨床樣品的測(cè)試結(jié)果。圖7示出了乙型肝炎病毒檢驗(yàn)試劑盒檢測(cè)的一個(gè)實(shí)施例，有個(gè)8個(gè)乙型肝炎病毒基因型(乙型肝炎病毒的A，B，C，D，E，F(xiàn)，G和H)的存在。通用引物IAC和HC也包括在內(nèi)。圖8示出了一個(gè)例子去解釋不同乙型肝炎病毒基因型。圖9a示出了本發(fā)明和其他制造廠一個(gè)性病試劑盒的敏感性的比較。圖9b示出的本發(fā)明的性能和其它生產(chǎn)廠家的性病試劑盒的臨床樣品比較。圖10a示出了一種性病試劑陣列，匣子格式和信號(hào)位置的實(shí)施方案。所述芯片可以檢測(cè)12種常見(jiàn)致病原體的存在：1種原生動(dòng)物(陰道毛滴蟲(chóng))，7種菌(沙眼衣原體，淋球菌，支原體，人型支原體，解脲支原體，解脲孢子蟲(chóng)，梅毒螺旋體)和4種病毒(單純皰疹病毒1&2型，人乳頭瘤病毒6型和11型)。放大控制(AC)用于監(jiān)測(cè)在PCR擴(kuò)增過(guò)程中有抑制劑的存在和提取的DNA量是否足夠。放大控制信號(hào)不存在表示在PCR擴(kuò)增中有抑制劑或DNA量不足(或不存在檢體)。梅毒螺旋體(TP)，可以提供作為陽(yáng)性對(duì)照(PC)，其含有的正模板核酸分子來(lái)監(jiān)測(cè)PCR試劑的性能。圖10b示出了性病試劑盒陣列的一個(gè)例子。圖11示出了一個(gè)血栓形成傾向試劑盒陣列的實(shí)施例。圖12示出了一個(gè)血栓形成傾向試劑盒陣列的實(shí)施例，以及其測(cè)試結(jié)果的詮釋。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：以下術(shù)語(yǔ)用于描述本發(fā)明。如沒(méi)有闡述特定定義，用于描述本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)應(yīng)當(dāng)給予由普通技術(shù)人員所理解的普通含義。如本文所述，“等位特異寡核苷酸探針-反向點(diǎn)雜交(ASO-RDB)”指的是使用能夠通過(guò)雜交方法捕獲在固體中的ASO-RDB靶分子的檢測(cè)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“導(dǎo)流雜交”指的是利用在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,741,647中描述的技術(shù)的雜交過(guò)程。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“導(dǎo)流雜交設(shè)備”或“導(dǎo)流裝置”指的是在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,020,187中所描述的設(shè)備和/或在PCT申請(qǐng)?zhí)朩O/2011/139,750中所描述的側(cè)向液流裝置或隨后設(shè)計(jì)的任何導(dǎo)流裝置。檢測(cè)病原體和目標(biāo)DNA本發(fā)明提供的方法、引物、探針和試劑盒用于檢測(cè)各種核酸、突變、物質(zhì)、和病原體/或疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明應(yīng)用于檢測(cè)結(jié)核病、乙型肝炎、丙型肝炎、SARS、呼吸道感染病毒、性病病原體、β-珠蛋白、血栓形成傾向和/或有關(guān)核酸的存在(單獨(dú)一種或多種)。所述方法的PCR使用特異性引物來(lái)產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物，所述擴(kuò)增產(chǎn)物與寡核苷酸探針雜交。所得雜交譜將反映核酸、基因突變、物質(zhì)、病原體和/或疾病的存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，擴(kuò)增產(chǎn)物和寡核苷酸探針的雜交采用導(dǎo)流方法、橫向?qū)Я鞣椒ɑ蚰嫦驅(qū)Я鞣椒āＴ谝粋€(gè)實(shí)施方案中，用于雜交的寡核苷酸探針是被固定在膜的。在導(dǎo)流方法的實(shí)施方案中，雜交的敏感性取決于包括所述探針陣列的膜的總面積。在橫向?qū)Я鞣椒ǖ膶?shí)施方案中，雜交的敏感性取決于包括所述探針跨越流動(dòng)方向上的膜的總截面面積。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)核酸和/或外源物質(zhì)的存在的方法，包括以下步驟：(a)擴(kuò)增來(lái)自受試者樣品中的核酸模板核酸分子，其中引物選自序列號(hào)為：174-181，201-205，241-244，263-286和299-306，以產(chǎn)生單獨(dú)一種或多種擴(kuò)增產(chǎn)物；和(b)所述擴(kuò)增產(chǎn)物與寡核苷酸探針雜交，探針包括選自序列號(hào)182-200，206-240，245-260，287-298，和307-314，以單獨(dú)一種或多種寡核苷酸探針來(lái)產(chǎn)生雜交譜，示出目標(biāo)核酸和/或外源物質(zhì)是否存在于受試者樣品。在一個(gè)實(shí)施方案中，所選擇引物的數(shù)量為2-49；所選定探針的數(shù)目是2-92。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所選定引物的數(shù)量為2-24；所選定探針的數(shù)目是2-35。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種方法用于檢測(cè)樣品中是否存在核酸和/或外源物質(zhì)，所述方法包括以下步驟：(a)擴(kuò)增來(lái)自受試者樣品中的模板核酸分子，其中所用引物選自序列號(hào)為：174-181，201-205，241-244，263-286和299-306，以產(chǎn)生足夠的單獨(dú)一種或多種擴(kuò)增產(chǎn)物；和(b)所述擴(kuò)增產(chǎn)物與寡核苷酸探針雜交，探針包括選自序列號(hào)182-200，206-240，245-260，287-298，和307-314，以單獨(dú)一種或多種寡核苷酸探針來(lái)產(chǎn)生雜交譜，示出目標(biāo)核酸和/或外源物質(zhì)是否存在于受試者樣品。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)多重耐藥性結(jié)核分枝桿菌(DR-MTB)或其核酸的方法，所述方法包含以下步驟：(a)獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用選自引物序列號(hào)為174-181的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為182-200的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示多重耐藥性結(jié)核菌(DR-MTB)或其核酸是否存在。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)多重耐藥性結(jié)核分枝桿菌(DR-MTB)或其核酸的方法，所述方法包含以下步驟：(a)獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用序列號(hào)為174-181的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與序列號(hào)為182-200的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示多重耐藥性結(jié)核菌(DR-MTB)或其核酸是否存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，引物包含一個(gè)產(chǎn)生信號(hào)的標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施例中，所述擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒ɑ蚰嫦驅(qū)Я鞣椒ê?或有關(guān)設(shè)備與多個(gè)寡核苷酸探針雜交。在一個(gè)實(shí)施例中，上述方法可以檢測(cè)多重耐藥性結(jié)核分枝桿菌的存在(DR-MTB)，或具有以下一種或多種DR-MTB突變的核酸：rpoB基因的七個(gè)突變之一；katG基因兩個(gè)突變之一；和inhA基因的一個(gè)突變。本發(fā)明還提供了一種試劑盒，用于檢測(cè)多重耐藥性結(jié)核分枝桿菌的存在(DR-MTB)或其核酸，試劑盒包含選自由序列號(hào)為182-200的引物和選自序列號(hào)為174-181的寡核苷酸探針。在一個(gè)實(shí)施例中，試劑盒用于檢測(cè)多重耐藥性分枝桿菌的存在(DR-MTB)，或DR-MTB的核酸，試劑盒包含序列號(hào)為174-181的引物和序列號(hào)為182-200的寡核苷酸探針。本發(fā)明還提供了檢測(cè)患有β-地中海貧血癥的受試者其β-球蛋白突變的方法，包含以下步驟：(a)從受試者獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用序列號(hào)為201-205的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為206-240的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示β-地中海貧血癥的基因型。在一個(gè)實(shí)施例中，檢測(cè)患有β-地中海貧血癥的受試者其β-球蛋白基因突變的方法包含以下步驟：(a)從受試者獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用序列號(hào)為201-205的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與序列號(hào)為206-240的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示β-地中海貧血癥的基因型。在一個(gè)實(shí)施例中，引物包含一個(gè)產(chǎn)生信號(hào)的標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施癥中，所述擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒?，或逆向?qū)Я鞣椒ê?或有關(guān)設(shè)備與多個(gè)寡核苷酸探針雜交。在一個(gè)實(shí)施例中，上述檢測(cè)β-球蛋白突變的方法可以檢測(cè)出21個(gè)β-球蛋白的突變之一。本發(fā)明也提供用于檢測(cè)β-球蛋白基因突變的試劑盒，試劑盒包含選自序列號(hào)為201-205的引物和選自序列號(hào)為206-240的寡核苷酸探針。在一個(gè)實(shí)施例中，用于檢測(cè)β-球蛋白的突變的試劑盒含序列號(hào)為201-205的引物和序列號(hào)為206-240的寡核苷酸探針。本發(fā)明還提供了一種用于檢測(cè)乙型肝炎病毒或其核酸的方法，步驟包含：(a)獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用選自序列號(hào)為241-244的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到乙型肝炎病毒的擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為245-260的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示乙型肝炎病毒或其核酸是否存在。在一個(gè)實(shí)施例中，用于檢測(cè)乙型肝炎病毒或其核酸的方法包含以下步驟：(a)獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用序列號(hào)為241-244的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與序列號(hào)為245-260的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示乙型肝炎病毒或其核酸是否存在。在一個(gè)實(shí)施例中，引物包含一個(gè)產(chǎn)生信號(hào)的標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施例中，所述擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒ɑ蚰嫦驅(qū)Я鞣椒ê?或有關(guān)設(shè)備與多個(gè)寡核苷酸探針雜交。在一個(gè)實(shí)施方案中，上述方法可以檢測(cè)乙型肝炎病毒或其核酸，所述乙型肝炎病毒選自基因型A到H。本發(fā)明還提供了一種用于檢測(cè)乙型肝炎病毒或其核酸的試劑盒，包含選自序列號(hào)為241-244的引物和序列號(hào)為245-260的寡核苷酸探針。在一個(gè)實(shí)施例中，用于檢測(cè)乙型肝炎病毒或其核酸的試劑盒包含序列號(hào)為241-244的引物和序列號(hào)為245-260的寡核苷酸探針。本發(fā)明還提供了一種方法，用于檢測(cè)受試者是否存在性病病原體或其核酸，所述方法包含以下步驟：(a)從所述受試者獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用選自序列號(hào)為263-286的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為287-298的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示樣本是否存在來(lái)自或會(huì)引起性病的病原體的核酸。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種方法，用于檢測(cè)受試者是否存在性病病原體或其核酸，包含以下步驟：(a)從所述受試者獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用序列號(hào)為263-286的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與序列號(hào)為287-298的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示樣本是否存在來(lái)自或會(huì)引起性病的病原體的核酸。在一個(gè)實(shí)施例中，引物包含一個(gè)產(chǎn)生信號(hào)的標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施例中，所述擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒ɑ蚰嫦驅(qū)Я鞣椒ê?或有關(guān)設(shè)備與多個(gè)寡核苷酸探針雜交。在一個(gè)實(shí)施例中，用于檢測(cè)受試者中性病病原體的方法可以檢測(cè)以下性病病原體:陰道毛滴蟲(chóng)，沙眼衣原體，淋病奈瑟菌，生殖支原體，人型支原體，解脲支原體，解孢子蟲(chóng)，梅毒螺旋體，單純皰疹病毒1型，單純皰疹病毒2型，人乳頭瘤病毒6型，和人乳頭瘤病毒11型。本發(fā)明還提供了一種用于檢測(cè)受試者中性病病原體或其核酸的存在的試劑盒，所述試劑盒包含選自序列號(hào)為263-286的引物和選自序列號(hào)為287-298的寡核苷酸探針。在一個(gè)實(shí)施例中，用于檢測(cè)受試者樣品中性病病原體或其核酸的試劑盒包含序列號(hào)為263-286的引物和序列號(hào)為287-298的寡核苷酸探針。本發(fā)明提供了用于檢測(cè)與血栓形成傾向有關(guān)的基因突變的方法，所述方法包含以下步驟：(a)獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用選自序列號(hào)為299-306的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為307-314的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示與血栓形成傾向有關(guān)的基因突變是否存在。在一個(gè)實(shí)施例中，所述引物包含一個(gè)產(chǎn)生信號(hào)的標(biāo)簽。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述方法用于檢測(cè)與血栓形成傾向有關(guān)的基因突變，所述方法包含以下步驟：(a)獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用序列號(hào)為299-306的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與序列號(hào)為307-314的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示與血栓形成傾向有關(guān)的基因突變是否存在。在一個(gè)實(shí)施例中，所述引物包含一個(gè)產(chǎn)生信號(hào)的標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施例中，所述擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒?，逆向?qū)Я鞣椒ê?或有關(guān)設(shè)備與多個(gè)寡核苷酸探針雜交。在一個(gè)實(shí)施例中，所述方法用于檢測(cè)與血栓形成傾向有關(guān)的基因突變，所述基因選自萊頓凝血第五因子FactorVLeiden(FVL)，凝血酶原FactorII(FII或凝血第二因子)，和亞甲基四氫葉酸還原酶MethylenetetrahydrofolateReductase(MTHFR)。本發(fā)明還提供了用于檢測(cè)與血栓形成傾向有關(guān)的基因突變的試劑盒，所述試劑盒包含選自序列號(hào)為299-306的引物和選自序列號(hào)為307-314的寡核苷酸探針。在一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑盒包含序列號(hào)為299-306的引物和序列號(hào)為307-314的寡核苷酸探針。通過(guò)引用以下的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解所提供的實(shí)施例僅作為說(shuō)明作用，而非限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的范圍將由隨后的權(quán)利要求所界定。在本申請(qǐng)中的，引用了不同的參考文獻(xiàn)或出版物。這些參考或出版物的全文和公開(kāi)都結(jié)合到本申請(qǐng)中,從而更全面地描述本發(fā)明的情況。應(yīng)當(dāng)指出的是，過(guò)渡語(yǔ)“包含”與“包括”﹑“含有”或“以…為特征”是同義的，是包括性或開(kāi)放式的，當(dāng)中并不排除有另外未列舉的元素或方法步驟。實(shí)施例1測(cè)試程序用于DNA，PCR擴(kuò)增，雜交，檢測(cè)樣品及結(jié)果分析的分離步驟，如WO/2011/139750或已知為本領(lǐng)域技術(shù)人員在有關(guān)的程序和技術(shù)可以應(yīng)用到本發(fā)明。各種內(nèi)部對(duì)照(IC)可以包括在所述測(cè)試試驗(yàn)，以驗(yàn)證DNA樣品，PCR擴(kuò)增和結(jié)果顯色。各個(gè)導(dǎo)流膜陣列的大小和格式，可用于根據(jù)個(gè)體的需要，或用于優(yōu)化反應(yīng)室的使用，以達(dá)到最大化的節(jié)約成本。實(shí)施例2基因分型耐多藥結(jié)核病在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了DR-MTB基因分型的方法和試劑盒。所述方法與試劑盒采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和“導(dǎo)流”雜交技術(shù)，用于檢測(cè)對(duì)利福平(RIF)和異煙肼(INH)有耐藥性的結(jié)核分支桿菌(MTB)。用于擴(kuò)增rpoB基因，katG基因和INHA基因的相應(yīng)引物已被證實(shí)沒(méi)有與人類(lèi)基因組有交叉反應(yīng)。RS-IAC是一個(gè)內(nèi)部控制引物，不針對(duì)人類(lèi)或MTB基因組，用于監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程。所用探針檢測(cè)耐藥性的基因突變包括rpoB基因(D516V，D516G，H526D，H526Y，H526L1，S531L和S531W)，katG基因(S315T1和S315T2)，和inhA基因(-15TC/T)。也有五個(gè)探針用于檢測(cè)野生型MTB的突變，這有助于驗(yàn)證rpoB基因，katG基因和inhA基因的PCR擴(kuò)增反應(yīng)是否已完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，引物被生物素化以便進(jìn)行雜交。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于檢測(cè)多重耐藥結(jié)核分枝桿菌(DR-MTB)的方法，包括以下步驟：(a)獲得包含模板核酸分子的樣品；(b)與選自序列號(hào)為：174-181的引物，擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為：182-200的寡核苷酸探針?biāo)M成的組雜交，所得雜交譜將顯示多重耐藥結(jié)核分枝桿菌的存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明可以檢測(cè)多重耐藥性結(jié)核分枝桿菌，并具有下列其中一個(gè)或多個(gè)突變的存在：rpoB基因中的七個(gè)突變；katG基因中的兩個(gè)突變；inhA基因中的一個(gè)突變。在一個(gè)實(shí)施方案中，擴(kuò)增產(chǎn)物是通過(guò)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒?，或逆向?qū)Я鞣椒?，與多個(gè)寡核苷酸探針的雜交。圖3示出了一個(gè)DR-MTB匣子(左圖)和探頭和信號(hào)(右圖)的各個(gè)位置體現(xiàn)。IAC是內(nèi)部放大控制，以監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程。HC是雜交控制，監(jiān)測(cè)雜交過(guò)程。圖4示出了一個(gè)用于檢測(cè)DR-MTB陣列配置的實(shí)施方案。在一個(gè)實(shí)施方案中，分別對(duì)RIF和異煙肼有耐藥性的MTB株被檢測(cè)出來(lái)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)RIF和INH有耐藥性(多重耐藥性)的MTB菌株被檢測(cè)出來(lái)。在一個(gè)實(shí)施方案中，既不是耐利福平(RIF)，也不是耐異煙肼(INH)的MTB菌株被檢測(cè)出來(lái)。檢測(cè)包含各種控制。引物引物ID引物序列(5'-3')5'修飾序列號(hào)MTB-DR-Rpob-FTCAACATCCGGCCGGTGGTC生物素174MTB-DR-Rpob-RCCGGCACGCTCACGTGACAGA生物素175MTB-DR-KatG-FTGGCACCGGAACCGGTAAGGA生物素176MTB-DR-KatG-RCGCCAGCAGGGCTCTTCGT177MTB-DR-inhA-FAAGTTCCCGCCGGAAATCGCAG生物素178MTB-DR-inhA-RCCGGTAACCAGGACTGAACGGGAT179RS-IAC-FCGAGTTCCCGCCCATAACC180RS-IAC-RGGAAGTTGCAACGCCGTCC生物素181探針探針I(yè)D探針序列(5'-3')5'修飾序列號(hào)MTB-DR-Rpob-CTRLGCTGGTGCCGAAGAA胺基182MTB-DR-KatG-CTRLCGGGGTGTTCGTCCATAC胺基183MTB-DR-inhA-CTRLGGTATGTCCACGAGCGTAAC胺基184MTB-DR-Rpob-WTcGGTTGTTCTGGTCCATG胺基185MTB-DR-Rpob-WteTGACCCACAAGCGCCGA胺基186MTB-DR-Rpob-WtfGACTGTCGGCGCTGG胺基187MTB-DR-KatG-WTGATGCCGCTGGTGATCG胺基188MTB-DR-inhA-WTAACCTATCGTCTCGCCG胺基189MTB-DR-Rpob-MUTc1GGTTGTTCTGGACCATGA胺基190MTB-DR-Rpob-MUTc2GGTTGTTCTGGCCCATG胺基191MTB-DR-Rpob-MUTe1GACCGACAAGCGCCGA胺基192MTB-DR-Rpob-MUTe2GCGCTTGTAGGTCAACC胺基193MTB-DR-Rpob-MUTe3GCGCTTGAGGGTCAAC胺基194MTB-DR-Rpob-MUTf1CCCCAGCGCCAACAGT胺基195MTB-DR-Rpob-MUTf2GACTGTGGGCGCTGG胺基196MTB-DR-KatG-MUT1GATGCCGGTGGTGATC胺基197MTB-DR-KatG-MUT2GATGCCTGTGGTGATCG胺基198MTB-DR-inhA-MUT1CAACCTATCATCTCGCCG胺基199RS-IAC-PCTCGAATGCCTCGTATCAT胺基200下面是一些用于PCR和雜交的示例:雜交協(xié)議的一個(gè)實(shí)施例:實(shí)施例3β地中海基因分型本發(fā)明提供了一種系統(tǒng)的β-球蛋白基因突變的檢測(cè)，所述基因突變包括TATA-28(A>G)，TATA-29(A>G)，起始密碼子(G>A)，密碼子5(-CT)的檢測(cè)，密碼子8/9(+G)，密碼子15(G>A)，密碼子16(-C)，密碼子17(A>T)，密碼子19(A>G)，密碼子26(G>A)(血紅蛋白E)，密碼子27/28(+三)，密碼子為30G>C，IVS1.1(G>T)，IVS1.1(G>A)，IVS1.5(G>C)，密碼子41/42(-TCTT)，密碼子43(G>T)，密碼子71/72(+A)，IVS2.1(G>A)，IVS2.654(C>T)和619bp的缺失。本發(fā)明還提供了檢測(cè)受試者樣品中β-球蛋白突變的方法，所述方法包括以下步驟：(a)從受試者獲得包含模板核酸分子的樣品；(b)與選自序列號(hào)為：201-205的引物所組成的組擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為：206-240的寡核苷酸探針?biāo)M成的組雜交，所得雜交譜將表明β-地中海貧血的基因型。在一個(gè)實(shí)施方案中，引物包括一個(gè)信號(hào)產(chǎn)生標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施方案中，擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒?，或逆向?qū)Я鞣椒?，與多個(gè)寡核苷酸探針雜交。在一個(gè)實(shí)施方案中，上述方法球以檢測(cè)21種β-珠蛋白突變之中的任何其中一種。圖5示出了一種β-地中海貧血匣子和其信號(hào)位置(圖中格線(xiàn)僅供說(shuō)明用途)的實(shí)施方案。圖6a示出了不同β-地中海貧血基因型的一個(gè)例子。圖6b示出關(guān)于使用β-地中海貧血匣子各種臨床樣品的測(cè)試結(jié)果，表明本發(fā)明能從人類(lèi)樣品中識(shí)別β-地中海貧血的基因型。引物序列(加入號(hào)AF007546.1):引物ID方向5'修飾引物序列(5'到3')序列號(hào)HBB引物1正向引物生物素GTACGGCTGTCATCACTTAGACCTCA201HBB引物2反向引物生物素TTATCCCCTTCCTATGACATGAAC202HBB引物3正向引物生物素GTGTACACATATTGACCAAA203HBB引物4反向引物生物素GCAAGAAAGCGAGCTTAG204HBB引物5反向引物生物素GTATCTCTAAGCAAGAGAAC205探針序列(加入號(hào)AF007546.1):探針I(yè)D有義/反義鏈5'修飾探針序列(5'到3')序列號(hào)HBB2-A1有義鏈胺基AGACACCATGGTGCATCTG206HBB2-A1a有義鏈胺基AGACACCATGGTGCACCT207HBB2-A2有義鏈胺基CAAACAGACACCAGGGTG208HBB2-A3有義鏈胺基GCTGGGCATAAAAGTCAGG209HBB2-A4反義鏈胺基CCTGACTTCTATGCCCAGC210HBB2-A5反義鏈胺基CCCTGACTTTCATGCCC211HBB2-B1有義鏈胺基GCATCTGACTCCTGAGGA212HBB2-B1a有義鏈胺基GCACCTGACTCCTGAGG213HBB2-B2反義鏈胺基ACTTCTCCTCGAGTCAGAT214HBB2-B3反義鏈胺基CAGGGCCTCACCACCA215HBB2-B4有義鏈胺基GTTGGTGGTAAGGCCCT216HBB2-B5反義鏈胺基CCAGGGGCCTCACCA217HBB2-C1有義鏈胺基AGGAGAAGTCTGCCGTTACT218HBB2-C2有義鏈胺基AGGAGAAGGTCTGCCGTTA219HBB2-C3有義鏈胺基GAGGTTCTTTGAGTCCTTTGG220HBB2-C4反義鏈胺基CAAAGGACTCAACCTCTGG221HBB2-C5有義鏈胺基CCCAGAGGTTCTTTTAGTC222HBB2-D1有義鏈胺基TGTGGGGCAAGGTGAAC223HBB2-D2有義鏈胺基CCGTTACTGCCCTGTAGG224HBB2-D3有義鏈胺基CTGTGGGGAAGGTGAAC225HBB2-D4反義鏈胺基TGTGGGGCTAGGTGAACG226HBB2-D5反義鏈胺基CTTCATCCACGCTCACCT227HBB2-E1反義鏈胺基TGATACCAACCTGCCCAG228HBB2-E2有義鏈胺基CTGGGCAGATTGGTATCA229HBB2-E3有義鏈胺基CCCTGGGCAGTTTGGTATC230HBB2-E4有義鏈胺基GCAGGTTGCTATCAAGGTTAC231HBB2-E5反義鏈胺基ATACCAACGTGCCCAGG232HBB2-F1有義鏈胺基GGTGCCTTTAGTGATGGC233HBB2-F2有義鏈胺基TCGGTGCCTTTAAGTGATG234HBB2-F3有義鏈胺基TGGGTTAAGGCAATAGCAATAT235HBB2-F4反義鏈胺基ATATTGCTATTACCTTAACCC236HBB2-G1有義鏈胺基CATACCTCTTATCTTCCTCC237HBB2-G2有義鏈胺基TGTAACAAGTAGAGATTCAAGTA238HBB2-G3有義鏈胺基GAACTTCAGGGTGAGTCTAT239HBB2-G4反義鏈胺基GAACTTCAGGATGAGTCTATG240下面是一些用于PCR和雜交的示例協(xié)議:雜交協(xié)議的一個(gè)實(shí)施例:數(shù)據(jù)解讀為β球突變:實(shí)施例4乙型肝炎病毒基因分型本發(fā)明還提供了一種用于檢測(cè)乙型肝炎病毒的方法，所述方法包括步驟：(a)獲得包含模板核酸分子的樣品；(b)用選自序列號(hào)為：241-244的引物所組成的組擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為：245-260的寡核苷酸探針?biāo)M成的組雜交，所得雜交譜將顯示乙型肝炎病毒的存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，引物包括一個(gè)信號(hào)產(chǎn)生標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施方案中，擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒?，或逆向?qū)Я鞣椒?，與多個(gè)寡核苷酸探針雜交。在一個(gè)實(shí)施方案中，通用探針序列號(hào)257被用于捕獲各種基因型的乙型肝炎病毒的核酸。圖7示出了一個(gè)的乙型肝炎病毒試劑盒所檢測(cè)的8個(gè)乙型肝炎病毒基因型(乙型肝炎病毒的A，B，C，D，E，F(xiàn)，G和H型)的實(shí)施例。圖8示出了檢測(cè)不同乙型肝炎病毒基因型的一個(gè)例子。引物序列:探針序列:乙型肝炎病毒陽(yáng)性對(duì)照序列[560bp](pUC57載體):TGGGATTCTATATAAGAGGGAAACTACACGTAGCGCCTCATTTTGCGGGTCACCATATTCTTGGGAACAAGAGCTACATCATGGGAGGTTGGTCATCAAAACCTCGCAAAGGCATGGGGACGAACCTTTCTGTTCCCAACCCTCTGGGATTCTTTCCCGATCATCAGTTGGACCCTGCATTCGGAGCCAATTCAAACAATCCAGATTGGGACTTCAACCCCATCAAGGACCACTGGCCACAAGCCAACCAGGTAGGAGTGGGAGCATTCGGGCCAGGGTTCACTCCCCCACACGGAGGTGTTTTGGGGTGGAGCCCTCAGGCTCAGGGCATATTGGCCACAGTGCCAGCAGTGCCTCCTCCTGCCTCCACCAATCGGCAGTCAGGAAGGCAGCCTACTCCCATCTCTCCACCTCTAAGAGACAGTCATCCTCAGGCCATGCAGTGGAATTCCACAGCTTTCCACCAAGCTCTGCAAGATCCCAGAGTCAGGGGCCTGTATTTTCCTGCTGGTGGCTCCAGTTCAGGAACACTCAACCCTGTTCCAACTATTGCCTCTCAC(序列號(hào)261)內(nèi)部控制序列[500bp](pUC57載體):GAGACAGGTTCGTCCAATCCCGTGCCGCGGCCTTGGCAGGGGGTTCGCAGGCCCCACCCGAAGCGTTGCTGAAGGCTCAGGCCTCTGAGCGACAAAAGCTTTAAACGCGAGTTCCCGCCCATAACCTGGACCGAATGCGGGACCATGCATCGTTCCACTGTGTTTGTCCCATGTAGGACGGGCGCAAGGCGTGCTTAGCTCAGCCTCGAATGCCTCGTATCATTGTGCACCCGCCGGTCACCAGCCAACGATGTGCGGACGGCGTTGCAACTTCCGGGGCCCAACCTGACCGTCCTGGGTACCGCACTCTGGGCAGTGCGAGGTAATGCCAGTCGCCCAGTGCCGAACAACACCTGACCTAACGGTAAGAGGCTCACATAATGGCTCCGCCGGCGCGCCCAGGGTACATTAGGTCAGCATCGGATGGACTGACATGAACCTTCACACCGAAGCGGAAACGGGTGCGTGGACCAGCGAGGAGCAAACGAAAATTCCTGGCC(序列號(hào)262)以下是一些PCR協(xié)議和雜交協(xié)議的示例:成分容量(μL)乙型肝炎病毒引物預(yù)混合19.6IAC0.1Taq聚合酶0.3模板核酸分子5.0*無(wú)核酸酶水可變總計(jì)25.00*建議血清中總乙型肝炎病毒病毒DNA的多于4000IU/mL.這種溫度曲線(xiàn)適用于應(yīng)用生物系統(tǒng)公司珀金埃爾默(ABI-PE)9600，基因擴(kuò)增PCR系統(tǒng)9700，Veriti(AppliedBiosystems公司)，PTC-200(MJ研究)。雜交協(xié)議的一個(gè)實(shí)施例:實(shí)施例5基因分型，并同時(shí)檢測(cè)多種性病病原體在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)性病病原體的方法，所述病原體包括但不局限于，原生動(dòng)物，細(xì)菌和病毒。在一個(gè)實(shí)施方案中，性病病原體存在于尿液，泌尿生殖系統(tǒng)拭子(尿道，陰道，子宮頸和損傷)和液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本(PreservCytTM和SurePathTM)。在一個(gè)實(shí)施方案中，放大控制(AC)包括用于檢測(cè)人類(lèi)DNA的材料。用PCR擴(kuò)增尿泌尿生殖系統(tǒng)拭子(尿道，陰道，子宮頸和損傷)和液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本(PreservCytTM和SurePathTM)中提取的靶DNA，再通過(guò)雜交，達(dá)至更快速，更靈敏和更特異地檢測(cè)性病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可以檢測(cè)的12種常見(jiàn)的性病病原體，包括1種原生動(dòng)物(陰道毛滴蟲(chóng))，7種菌(沙眼衣原體，淋病奈瑟菌，生殖支原體，人型支原體，解脲支原體，解孢子蟲(chóng)，梅毒螺旋體)和4種病毒(單純皰疹病毒1型&2型，人乳頭瘤病毒6型和11型)。這些病原體都與子宮頸炎，尿道炎，滴蟲(chóng)病和盆腔炎有關(guān)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)試中包括有通用引物(S)和/或放大控制。本發(fā)明還提供了一種方法，用于檢測(cè)受試者樣品中存在的性病病原體，所述方法的步驟包括：(a)從受試者獲得包含模板核酸分子的樣品；(b)通過(guò)選自序列號(hào)為:263-286的引物所組成的組，擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為：287-298的寡核苷酸探針雜交，所得雜交譜將顯示有核酸片段來(lái)源于性病病原體。在一個(gè)實(shí)施方案中，引物包括一個(gè)信號(hào)產(chǎn)生標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施方案中，與多個(gè)寡核苷酸探針的擴(kuò)增產(chǎn)物的雜交是在一個(gè)導(dǎo)流方法，橫向?qū)Я鞣椒ɑ蚰嫦驅(qū)Я鞣椒ê?或有關(guān)設(shè)備。序列號(hào)263-284的引物由兩部分組成：5'部分是人工合成的核酸序列，和目標(biāo)病原體并不同源，也沒(méi)涉及任何可在人類(lèi)中可找到的生物體的序列；3'部分是病原體特異性序列，使引物能有效結(jié)合到相應(yīng)病原體的核酸，以產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。所有引物序列的5'部分是通用序列。通用引物序列設(shè)計(jì)是經(jīng)過(guò)深思熟慮和實(shí)驗(yàn)的，能排除擴(kuò)增樣本中的其他生物體，例如其他病原體和人類(lèi)基因組的任何脫氧核糖核酸(圖1)。諸如那些在本發(fā)明中公開(kāi)的被選擇驗(yàn)證為特定通用序列然后與各種病原體特異性序列合并，得到病原體特異性引物，其能夠產(chǎn)生包含通用序列的擴(kuò)增產(chǎn)物。這些擴(kuò)增產(chǎn)物成為第二次PCR的模板核酸分子，然后再使用序列號(hào)為：285和286的通用引物以相同效率擴(kuò)增所有模板核酸分子。因此線(xiàn)性產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物最終濃度會(huì)和初始靶DNA的濃度成正比。就算樣本中目標(biāo)拷貝數(shù)低，仍然可以放大以達(dá)到相當(dāng)濃度再檢出陽(yáng)性，使用通用引物可以糾正錯(cuò)誤，大幅提高靈敏度。在一個(gè)實(shí)施方案中，兩步驟的PCR反應(yīng)在單一試管中進(jìn)行；其中的病原體特異性引物通過(guò)其基因特異性3'區(qū)域結(jié)合到目標(biāo)分子，以產(chǎn)生含有5'通用序列的初始擴(kuò)增產(chǎn)物。這些擴(kuò)增產(chǎn)物作為所述第二組引物(通用引物)的模板核酸分子，以產(chǎn)生含有信號(hào)的擴(kuò)增產(chǎn)物并通過(guò)雜交被檢測(cè)出來(lái)。圖2示出一個(gè)擴(kuò)增方案的實(shí)施例。由于本發(fā)明使用通用引物，因此比市場(chǎng)上其他性病病原體試劑盒的檢測(cè)方法更準(zhǔn)確、更靈敏。正如圖9a所示，本發(fā)明能檢測(cè)低至50-300個(gè)性病病原體拷貝數(shù)，而另一個(gè)制造廠的試劑盒的檢測(cè)至少要有500個(gè)性病病原體拷貝數(shù)；因此本發(fā)明能夠檢測(cè)有較低病原體濃度的樣品。圖9b示出了本發(fā)明和市場(chǎng)上其他性病檢試劑盒的性能比較。結(jié)果通過(guò)定量PCR(qPCR)確認(rèn)四個(gè)測(cè)試和實(shí)際基因型。確認(rèn)病原體的基因型后，本發(fā)明(如圖中試驗(yàn)3和4)比其他試劑盒較少出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果(如圖中試驗(yàn)1和2)。另外，本發(fā)明可檢測(cè)多種病原體(如圖9b所示出)，因此，與市場(chǎng)上其他試劑盒相比，本發(fā)明同時(shí)檢測(cè)12種病原體為最高的數(shù)目。感染HPV6和HPV11后的發(fā)病率很高，因此本發(fā)明對(duì)HPV6型和11型的覆蓋是非常有用的。生殖器疣是一種具有高度傳染力的性病，其中90％的病例是由于感染HPV6和HPV11所引起。圖10a示出了一個(gè)檢測(cè)性病陣列的實(shí)施例，陣列可檢測(cè)12種常見(jiàn)性病病原體的存在：1種原生動(dòng)物(陰道毛滴蟲(chóng))，7種菌(沙眼衣原體，淋病奈瑟菌，生殖支原體，人型支原體，解脲支原體，解孢子蟲(chóng)，梅毒螺旋體)和4種病毒(單純皰疹病毒1型和2型，人乳頭瘤病毒6型和11型)。放大控制(AC)示出結(jié)果是否有效。圖10b示出了一個(gè)解釋性病陣列的例子。在一個(gè)實(shí)施方案中，原生動(dòng)物、細(xì)菌和病毒被分別檢測(cè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，原生動(dòng)物、細(xì)菌和病毒(多重感染)被同時(shí)檢測(cè)。在一個(gè)實(shí)施方案中，梅毒螺旋體(TP)的模板核酸分子被提供為陽(yáng)性對(duì)照(PC)以用于監(jiān)測(cè)PCR試劑的性能。如果一個(gè)測(cè)試中不出現(xiàn)TP的陽(yáng)性對(duì)照(PC)信號(hào)，這可能是因?yàn)樗鯠NA因長(zhǎng)期貯存或核酸酶受污染而已經(jīng)退化。然而，如果測(cè)試樣品產(chǎn)生的陽(yáng)性信號(hào)為任何病原體，檢測(cè)結(jié)果仍然是有效的。在陽(yáng)性對(duì)照(PC)的測(cè)試，由于正對(duì)照樣品僅包含梅毒螺旋體(TP)，但沒(méi)有內(nèi)源性的人基因組DNA，將導(dǎo)致缺乏AC信號(hào)。在陽(yáng)性對(duì)照的AC信號(hào)的存在(PC)的測(cè)試表明對(duì)照測(cè)試是無(wú)效的，這可能是由于污染和試驗(yàn)應(yīng)所述重復(fù)。如AC信號(hào)不出現(xiàn)，這表示測(cè)試樣品中的DNA量不足或不存在。然而，如果測(cè)試樣品產(chǎn)生任何病原體的陽(yáng)性信號(hào)，測(cè)試仍然是有效的。由于可能有來(lái)自其他病原體DNA的競(jìng)爭(zhēng)，在一些樣品中AC信號(hào)可能不出現(xiàn)。在這種情況下，只要陣列上有一個(gè)或多個(gè)正信號(hào)，檢測(cè)結(jié)果仍然是有效的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在導(dǎo)流過(guò)程中使用的陣列盒和/或裝置有不同的形式和尺寸。除了使用10個(gè)點(diǎn)的陣列外，也可用35點(diǎn)陣列，也可再加陣列點(diǎn)以用于檢測(cè)例如額外的病原體基因亞型和/或耐藥菌株的基因突變。檢測(cè)信號(hào)也可通過(guò)使用伴隨FT-Pro雜交設(shè)備的影像系統(tǒng)以達(dá)至數(shù)字化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所用雜交裝置是一個(gè)自動(dòng)化裝置，有結(jié)合分析與數(shù)字化功能。本發(fā)明比市場(chǎng)上現(xiàn)有的檢測(cè)方法和試劑盒更為便利，因本發(fā)明可同時(shí)擴(kuò)增和檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)，具有高靈敏度并涵蓋12種性病病原體，包括被市場(chǎng)上大部分現(xiàn)有試劑盒所排除在外的HPV亞基因型。通過(guò)與導(dǎo)流雜交聯(lián)接，本發(fā)明允許快速靈敏和高通量的性病病原體檢測(cè)。引物序列:探針序列:下面是一些示例PCR和雜交協(xié)議:成分容量(μL)PCR預(yù)混合18.6性病引物預(yù)混合1.0DNATaq聚合酶0.4性病DNA正控制最多5.0*無(wú)核酸酶水可變總計(jì)25.0*總DNA的建議的范圍:5ng–100ng.以上熱循環(huán)程序是適合用于ThermalCycler(Lifetechnologies)和S1000TMThermalCycler(Bio-rad)。以上熱循環(huán)程序可經(jīng)修改后用于其它熱循環(huán)儀(斜坡率達(dá)3℃/秒)。雜交協(xié)議的一個(gè)實(shí)施例:實(shí)施例6血栓形成傾向的有關(guān)基因分型本發(fā)明還提供了用于檢測(cè)與血栓形成傾向有關(guān)的基因突變的方法，所述方法包含以下步驟：(a)獲得包含模板核酸分子的樣本；(b)使用選自序列號(hào)為299-306的引物擴(kuò)增所述模板核酸分子，從而得到擴(kuò)增產(chǎn)物；和(c)將所得的擴(kuò)增產(chǎn)物與選自序列號(hào)為307-314的寡核苷酸探針雜交，所得雜交結(jié)果顯示與血栓形成傾向有關(guān)的基因突變是否存在。在一個(gè)實(shí)施例中，所述引物包含一個(gè)產(chǎn)生信號(hào)的標(biāo)簽。在一個(gè)實(shí)施例中，所述擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)導(dǎo)流方法、橫向?qū)Я鞣椒ɑ蚰嫦驅(qū)Я鞣椒ㄅc多個(gè)寡核苷酸探針雜交。在一個(gè)實(shí)施例中，上述方法可以檢測(cè)選自萊頓凝血第五因子FactorVLeiden(FVL)，凝血酶原FactorII(FII或凝血第二因子)，和亞甲基四氫葉酸還原酶MethylenetetrahydrofolateReductase(MTHFR)的基因突變。圖11示出了一個(gè)血栓形成傾向試劑盒陣列的實(shí)施例。圖12示出了血栓形成傾向試劑盒其測(cè)試結(jié)果的一個(gè)詮釋例子。引物序列:探針序列:探針探針序列(5'-3')5'修飾序列號(hào)FVL_WTGGACAGGCGAGGAAT胺基307FVL_MUTTGGACAGGCAAGGAAT胺基308FII_WTTCTCAGCGAGCCTC胺基309FII_MUTACTCTCAGCAAGCC胺基310MTH677_WTCGGGAGCCGATTTCA胺基311MTH677_MUTATGATGAAATCGACTCC胺基312MTH1298_WTCAGTGAAGAAAGTGTCT胺基313MTH1298_MUTGACCAGTGAAGCAAGTG胺基314反應(yīng)混合液:成分容量(μL)ThrombophiliaPCR預(yù)混合21.6Thrombophilia引物預(yù)混合1.0酶混合液0.4模板核酸分子最多2.0無(wú)核酸酶水可變總計(jì)25.00*DNA總量的建議的范圍：10ng–100ng。雜交程序的一個(gè)實(shí)施例:序列表<110>達(dá)雅高生物科技有限公司<120>快速并靈敏基因型鑒定及核酸檢測(cè)<130>897-F-PCT-CN<140><141><150>PCT/CN2014/000275<151>2014-03-17<150>61/791,933<151>2013-03-15<160>141<210>174<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>174tcaacatccggccggtggtc20<210>175<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>175ccggcacgctcacgtgacaga21<210>176<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>176tggcaccggaaccggtaagga21<210>177<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>177cgccagcagggctcttcgt19<210>178<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>178aagttcccgccggaaatcgcag22<210>179<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>179ccggtaaccaggactgaacgggat24<210>180<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>180cgagttcccgcccataacc19<210>181<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>181ggaagttgcaacgccgtcc19<210>182<211>15<212>DNA<213>人工序列<220><223>探針<400>182gctggtgccgaagaa15<210>183<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>探針<400>183cggggtgttcgtccatac18<210>184<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>探針<400>184ggtatgtccacgagcgtaac20<210>185<211>17<212>DNA<213>人工序列<22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