本發(fā)明屬于環(huán)境微生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種用于城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)的復(fù)合微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：城市河道和湖泊是與人類生產(chǎn)和生活緊密相連的水環(huán)境，作為城市生態(tài)系統(tǒng)重要的組成部分，具有供應(yīng)水源、改善環(huán)境、提供綠地、文化教育和娛樂休閑等功能，對城市的生態(tài)建設(shè)具有重要意義。但是隨著城市化進程的不斷加快，城市人口聚集，經(jīng)濟活動日趨頻繁，工業(yè)廢水和生活污水大量排放增，垃圾的隨意丟棄，導(dǎo)致水體中有機物、氨氮、總磷和硫化氫等污染物持續(xù)增加，環(huán)境污染問題日益嚴(yán)重，嚴(yán)重制約城市的社會、經(jīng)濟與環(huán)境可持續(xù)發(fā)展，同時危及人民的身體健康。去除水體污染物傳統(tǒng)的手段主要有物理和化學(xué)方法，雖然在河道及湖泊污染治理上具有一定效果，但也存在著問題。例如物理方法中的底泥疏浚能否對河道污染物具有長效的控制以及是否對底棲生境產(chǎn)生負(fù)面影響還存在爭議?；瘜W(xué)絮凝處理技術(shù)中的加入鐵鹽促進磷沉淀、加入石灰脫氮等方法，雖然見效快、效率高，但易造成二次污染。生物修復(fù)技術(shù)是近期快速發(fā)展起來的一項水體污染物修復(fù)的新技術(shù)，它利用特定生物特別是微生物對水體中污染物的吸收、轉(zhuǎn)化或降解，達(dá)到減緩或最終消除水體污染、恢復(fù)水體生態(tài)功能的生物措施。微生物具因其培養(yǎng)周期短、生長繁殖迅速、適應(yīng)能力強、轉(zhuǎn)化效率高等特點，在治理河道污染水體的過程中發(fā)揮著重要作用。微生物修復(fù)河道污水的作用主要包括：1)微生物通過同化作用會轉(zhuǎn)化部分有機污染物為自身物質(zhì)，另一方面微生物會產(chǎn)生不同的生物酶能快速降解大分子有機物，實現(xiàn)對水體有機污染物的降解和去除。2)一些氨化細(xì)菌、硝化細(xì)菌及反硝化細(xì)菌可以降解水中的氨基氮和硝基氮，實現(xiàn)水體中氮素的生物地球化學(xué)循環(huán)過程，并最終使水體中過量的氮素以氮氣的形式逸出水體。3)一些微生物通過特性的的代謝作用可以降低水體中磷素濃度，另一方面某些微生物能通過同化作用，將水體中的有效磷轉(zhuǎn)化為菌體自身的有機磷，通過食物鏈的傳遞作用，去除水體中的磷。4)通過復(fù)合微生物的協(xié)同作用，降低水體巾氮、磷營養(yǎng)鹽水平，通過營養(yǎng)競爭的方式抑制藻類的生長；同時通過改善水體理化環(huán)境，促進浮游動物種群的生長壯大，以浮游動物捕食藻類的方式控制藻類的生長。申請?zhí)枮?01410449850.X的發(fā)明專利公開了一種城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑及其制備方法，該方法通過將嗜酸芽孢桿菌制劑、熱帶假絲酵母菌劑和枯草芽抱桿菌菌劑混合制備成復(fù)合微生物菌劑，適于城市問道河水COD和氨氮含量超標(biāo)、河水污濁、發(fā)臭等污染的修復(fù)與治理，其可快速修復(fù)水體生態(tài)環(huán)境，防止水體二次污染，并能很快恢復(fù)水體的自凈化功能，消解河底污泥。申請?zhí)枮?01510949257.6的發(fā)明專利公開了一種用于河道治理的復(fù)合微生物制劑，復(fù)合微生物包括亞硝酸純球菌、氧化硫桿菌、脫氮副球菌、芽抱桿菌、紅螺旋菌、乳酸桿菌及釀酒酵母。該復(fù)合微生物菌劑投入污染水體中，能明顯改善水體發(fā)黑發(fā)臭問題，降低水質(zhì)氨氮與總磷含量。申請?zhí)枮?01310126043.X的發(fā)明專利公開了一種用于凈化問道污水的微生物菌劑及其制備方法，其包括下述重量份的組分：納豆芽抱桿菌20～40份、硝化細(xì)菌10～30份、白腐真菌5～15份、假單胞菌5～15份、光合細(xì)菌10～40份。該微生物菌劑具有適應(yīng)性強，能快速形成優(yōu)勢菌群，補充水體土著菌。投入水中能降低污染河水的COD、NH3-N、總氮、TP等，且能除臭除色。并能產(chǎn)生高潔性生物酶，抑制有害菌的生長，加速分解殘留餌料、動植物殘體，具有顯著的水質(zhì)凈化效果?？梢姡^續(xù)探索微生物菌劑用于河道治理的研究，有望緩解或徹底改善日益嚴(yán)重的水體環(huán)境污染問題。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)的復(fù)合微生物菌劑，可以分解不同有機物、降解水中的氨基氮和硝基氮、降低水體中磷素濃度以及抑制藻類的生長。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出以下技術(shù)方案：一種復(fù)合微生物菌劑，所述復(fù)合微生物菌劑包括假單胞菌制劑、不動桿菌制劑、解淀粉芽孢桿菌制劑、枯草芽胞桿制劑、地衣芽胞桿菌制劑、乳酸乳球菌制劑、類球紅細(xì)菌制劑、堿湖迪茨氏菌制劑和沼澤紅假單胞菌制劑。上述的復(fù)合微生物菌劑，優(yōu)選的，假單胞菌為保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.13433的假單胞菌。上述的復(fù)合微生物菌劑，優(yōu)選的，所述復(fù)合微生物菌劑中各組分的體積份為：假單胞菌制劑5～15份、不動桿菌制劑5～15份、解淀粉芽孢桿菌制劑5～15份、枯草芽孢桿菌制劑5～15份、地衣芽孢桿菌制劑5～15份、乳酸乳球菌制劑5～15份、類球紅細(xì)菌制劑5～15份、堿湖迪茨氏菌制劑5～15份、沼澤紅假單胞菌制劑5～15份。上述的復(fù)合微生物菌劑，優(yōu)選的，所述復(fù)合微生物菌劑中，總菌落數(shù)≥6.0×1010cfu/mL。上述的復(fù)合微生物菌劑，優(yōu)選的，不動桿菌為不動桿菌CGMCCNo.1.8587，解淀粉芽孢桿菌為解淀粉芽孢桿菌CGMCCNo.1.7463，枯草芽胞桿菌為枯草芽胞桿菌CGMCCNo.1.2162，地衣芽胞桿菌為地衣芽胞桿菌CGMCCNo.1.6510，乳酸乳球菌為乳酸乳球菌CGMCCNo.1.3920，類球紅細(xì)菌為類球紅細(xì)菌CGMCCNo.1.2174，堿湖迪茨氏菌為堿湖迪茨氏菌CGMCCNo.1.6147，沼澤紅假單胞菌為沼澤紅假單胞菌CGMCCNo.1.2351。作為一個總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟：(1)將假單胞菌接種于固體斜面培養(yǎng)基I中進行活化，制得活化假單胞菌；然后將活化假單胞菌接種于液體培養(yǎng)基I進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于3.0×109cfu/mL的假單胞菌制劑；(2)將不動桿菌接種于固體斜面培養(yǎng)基II中進行活化，制得活化不動桿菌；然后將活化不動桿菌接種于液體培養(yǎng)基II進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于5.0×107cfu/mL的不動桿菌制劑；(3)將解淀粉芽孢桿菌接種于固體斜面培養(yǎng)基III中進行活化，制得活化解淀粉芽孢桿菌；然后將活化解淀粉芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基III進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于8.0×109cfu/mL的解淀粉芽孢桿菌制劑；(4)將枯草芽胞桿菌接種于固體斜面培養(yǎng)基IV中進行活化，制得活化枯草芽胞桿菌；然后將活化枯草芽胞桿菌接種于液體培養(yǎng)基IV進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基IV中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于6.0×109cfu/mL的枯草芽胞桿菌制劑；(5)將地衣芽胞桿菌接種于固體斜面培養(yǎng)基V中進行活化，制得活化地衣芽胞桿菌；然后將活化地衣芽胞桿菌接種于液體培養(yǎng)基V進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基V中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于8.0×108cfu/mL的地衣芽胞桿菌制劑；(6)將乳酸乳球菌接種于固體斜面培養(yǎng)基VI中進行活化，制得活化乳酸乳球菌；然后將活化乳酸乳球菌接種于液體培養(yǎng)基VI進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基VI中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于7.0×105cfu/mL的乳酸乳球菌制劑；(7)將類球紅細(xì)菌接種于固體斜面培養(yǎng)基VII中進行活化，制得活化類球紅細(xì)菌；然后將活化類球紅細(xì)菌接種于液體培養(yǎng)基VII進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基VII中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于8.0×107cfu/mL的類球紅細(xì)菌制劑；(8)將堿湖迪茨氏菌接種于固體斜面培養(yǎng)基IIX中進行活化，制得活化堿湖迪茨氏菌；然后將活化堿湖迪茨氏菌接種于液體培養(yǎng)基IIX進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基IIX中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于6.0×107cfu/mL的堿湖迪茨氏菌制劑；(9)將沼澤紅假單胞菌接種于固體斜面培養(yǎng)基IX中進行活化，制得活化沼澤紅假單胞菌；然后將活化沼澤紅假單胞菌接種于液體培養(yǎng)基IX進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基IX中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于4.0×107cfu/mL的沼澤紅假單胞菌制劑；(10)將步驟(1)制得的假單胞菌制劑、步驟(2)制得的不動桿菌制劑、步驟(3)制得的解淀粉芽孢桿菌制劑、步驟(4)制得的枯草芽胞桿菌制劑、步驟(5)制得的地衣芽胞桿菌制劑、步驟(6)制得的乳酸乳球菌制劑、步驟(7)制得的類球紅細(xì)菌制劑、步驟(8)制得的堿湖迪茨氏菌制劑和步驟(9)制得的沼澤紅假單胞菌制劑按照比例混合后，得到復(fù)合微生物菌劑。上述的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基I中，含蛋白胨1g/100mL，酵母粉1.5g/100mL，葡萄糖2g/100mL，磷酸氫二鉀0.1g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6～8；所述固體培養(yǎng)基II中，含蛋白胨1.5g/100mL，葡萄糖1g/100mL，氯化鈉0.5g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6.5～7.5；所述固體培養(yǎng)基III中，含胰蛋白胨1g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化鈉1g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6～8；所述固體培養(yǎng)基IV中，含胰蛋白胨1g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化鈉1g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6～8；所述固體培養(yǎng)基V中，含蛋白胨1g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化鈉1g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6～8；所述固體培養(yǎng)基VI中，含牛肉膏0.5g/100mL，蛋白胨0.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，番茄汁5g/100mL，葡萄糖1.0g/100mL，碳酸氫鈣1.0g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值4～6.5；所述固體培養(yǎng)基VII中，含牛肉膏0.5g/100mL，蛋白胨0.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6.5～7.5；所述固體培養(yǎng)基IIX中，含葡萄糖1g/100mL，乙酸鈉0.2g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化銨0.25g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6.5～7.5；所述固體培養(yǎng)基IX中，含葡萄糖1g/100mL，乙酸鈉0.2g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，維生素H0.01g/100mL，硫酸鎂0.02g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6.5～7.5。上述的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，優(yōu)選的，所述液體培養(yǎng)基I中，含葡萄糖1.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，蛋白胨1g/100mL，磷酸二氫鉀0.05g/100mL，硫酸鎂0.04g/100mL；所述液體培養(yǎng)基II中，含葡萄糖1.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，蛋白胨1g/100mL，氯化鈉0.5g/100mL；液體培養(yǎng)基III中，含葡萄糖2.5g/100mL，酵母膏0.2g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL；所述液體培養(yǎng)基IV中，含葡萄糖2.5g/100mL，酵母膏0.2g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL；所述液體培養(yǎng)基V中，含甘油2.0g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，玉米漿1.5g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL；所述液體培養(yǎng)基VI中，含葡萄糖2.0g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，玉米漿1.5g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL，碳酸氫鈣1.0g/100mL；所述液體培養(yǎng)基VII中，含葡萄糖2.0g/100mL，玉米漿1.5g/100mL，硫酸銨1.0g/100mL，谷氨酸鈉0.2g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL；所述液體培養(yǎng)基IIX中，含葡萄糖1g/100mL，乙酸鈉0.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化銨0.5g/100mL，硝酸鉀0.2g/100mL，硫酸鎂0.02g/100mL，磷酸氫二鉀0.05g/100mL；所述液體培養(yǎng)基IX中，含葡萄糖1.0g/100mL，乙酸鈉1.0g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化銨0.5g/100mL，硫酸鎂0.05g/100mL，磷酸氫二鉀0.02g/100mL。上述的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，優(yōu)選的，所述發(fā)酵培養(yǎng)基I中，含葡萄糖0.5～5g/100mL，酵母膏0.5～4g/100mL，黃豆粉1.0～6g/100mL，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100mL，硫酸鎂0.01～0.1g/100mL；所述發(fā)酵培養(yǎng)基II中，含葡萄糖0.5～5g/100mL，酵母膏0.3～3g/100mL，(NH4)2SO40.1～2.0g/100mL，檸檬酸鈉0.1～1g/100mL，硫酸鎂0.01～0.5g/100mL；所述發(fā)酵培養(yǎng)基III中，含糖蜜0.5～5.0g/100mL，紅糖0.3～3.0g/100mL，酵母膏0.2～2.0/100mL，玉米漿0.5～5.0/100mL，磷酸二氫鉀0.01～0.05g/100mL，硫酸鎂0.005～0.05g/100mL；所述發(fā)酵培養(yǎng)基IV中，含糖蜜0.5～5.0g/100mL，紅糖0.5～5.0g/100mL，黃豆粉0.5～3.0g/100mL，玉米漿1.0～5.0g/100mL，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100mL；所述發(fā)酵培養(yǎng)基V中，含甘油1.0～5.0g/100mL，糖蜜1.0～5.0/100mL，玉米漿1.0～5.0g/100mL，黃豆粉0.5～3.0g/100mL，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100mL，硫酸鎂0.01～0.1g/100mL；所述發(fā)酵培養(yǎng)基VI中，含葡萄糖1.0～5.0g/100mL，酵母膏1.0～5.0g/100mL，玉米漿1.0～5.0/100mL，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100mL，碳酸氫鈣0.5～2.0g/100mL，檸檬酸0.2～2.0g/100mL；所述發(fā)酵培養(yǎng)基中，含葡萄糖1.0～5.0g/100mL，玉米漿1.0～5.0g/100mL，硫酸銨1.0～5.0g/100mL，谷氨酸鈉0.1～1.5g/100mL，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100mL；所述發(fā)酵培養(yǎng)基IIX中，含葡萄糖1.0～5.0g/100mL，乙酸鈉0.5～2.0g/100mL，酵母膏1.0～5.0g/100mL，氯化銨0.5～2.0g/100mL，硝酸鉀0.05～0.5g/100mL，硫酸鎂0.01～0.1g/100mL，磷酸氫二鉀0.01～0.1g/100mL，酒石酸鉀鈉0.1～1.0g/100mL；所述發(fā)酵培養(yǎng)基IX中，含葡萄糖0.2～2.0g/100mL，乙酸鈉0.2～2.0g/100mL，酵母膏0.2～2.0g/100mL，氯化銨0.2～2.0g/100mL，硫酸鎂0.01～0.1g/100mL，磷酸氫二鉀0.01～0.1g/100mL。優(yōu)選的，所述步驟(1)中，所述活化條件為：30～38℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床180rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～200rpm轉(zhuǎn)速下，30～38℃培養(yǎng)48～96h。優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述活化條件為：30～38℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床180rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～160rpm轉(zhuǎn)速下，30～38℃培養(yǎng)49～120h。優(yōu)選的，所述步驟(3)中，所述活化條件為：32～38℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～200rpm轉(zhuǎn)速下，30～38℃培養(yǎng)48～120h。優(yōu)選的，所述步驟(4)中，所述活化條件為：32～38℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～200rpm轉(zhuǎn)速下，32～38℃培養(yǎng)48～120h。優(yōu)選的，所述步驟(5)中，所述活化條件為：32～38℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～200rpm轉(zhuǎn)速下，30～38℃培養(yǎng)48～120h。優(yōu)選的，所述步驟(6)中，所述活化條件為：32～38℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，35℃培養(yǎng)72h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床30～100rpm轉(zhuǎn)速下，28～38℃培養(yǎng)72～200h。優(yōu)選的，所述步驟(7)中，所述活化條件為：32～38℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)72h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～200rpm轉(zhuǎn)速下，28～38h℃培養(yǎng)72～200h。優(yōu)選的，所述步驟(8)中，所述活化條件為：32～38℃，活化培養(yǎng)72～96h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)72h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床50～100rpm轉(zhuǎn)速下，30～38℃培養(yǎng)72～160h。優(yōu)選的，所述步驟(9)中，所述活化條件為：32～38℃，活化培養(yǎng)72～96h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床50rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床50～100rpm轉(zhuǎn)速下，32～38℃培養(yǎng)100～200h。作為一個總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的復(fù)合微生物菌劑或上述的復(fù)合微生物菌劑的制備方法所制備的復(fù)合微生物菌劑在城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述應(yīng)用包括分解有機物、降解水中的氨基氮和硝基氮、降低水體中磷素濃度和/或抑制藻類的生長。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：1、本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑，可以同時分解不同有機物、降解水中的氨基氮和硝基氮、降低水體中磷素濃度以及抑制藻類的生長。利用本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑進行城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)，具有高效、快速、無二次污染、操作簡單等特點，有利于大規(guī)模推廣應(yīng)用。2、本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑包含的假單胞菌CGMCCNo.13433，是申請人經(jīng)過篩選得到的一種高效的異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌株，且兼具高效的苯酚降解性能。異養(yǎng)硝化性能測定結(jié)果表明，該菌株對于氨氮具有很高的去除率，且中間產(chǎn)物硝酸鹽和亞硝酸鹽積累量極少；好氧反硝化性能測定結(jié)果表明，該菌株在有氧條件下能夠?qū)⑾鯌B(tài)氮和亞硝態(tài)氮很好的去除，且中間產(chǎn)物累積量極少，無二次污染。同時，菌株擴大培養(yǎng)后應(yīng)用于SBR(序批式活性污泥法)工藝，對生活污水中氨氮、總氮和COD均有較高的去除率，在生活污水以及其他各種污染水體治理中具有很高的應(yīng)用價值。苯酚降解性能研究結(jié)果表明，苯酚濃度為0-100mg/L區(qū)間，去除率可以達(dá)到95％以上，100-200mg/L區(qū)間，一步去除率也可以達(dá)到80％左右，因此，該菌株在工農(nóng)業(yè)及地下水的氨氮超標(biāo)兼苯酚污染的水處理或治理中有非常好的應(yīng)用前景。生物材料保藏信息本發(fā)明的假單胞菌(Pseudomonassp.)，已于2016年12月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。該菌株的名稱是：蒙氏假單胞菌PS02，分類命名為PseudomonasmonteiliiPS02，保藏編號為：CGMCCNo.13433。具體實施方式以下結(jié)合說明書附圖和具體優(yōu)選的實施例對本發(fā)明作進一步描述，但并不因此而限制本發(fā)明的保護范圍。實施例1：假單胞菌CGMCCNo.13433的篩選及性能測定、培養(yǎng)和保存(1)假單胞菌CGMCCNo.13433的篩選及性能測定該假單胞菌CGMCCNo.13433是從上海污水處理池中活性污泥中分離選育而得的一種高效的異養(yǎng)硝化-好氧反硝化細(xì)菌，經(jīng)中國微生物菌種保藏中心鑒定為假單胞菌，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。具體篩選過程如下：活性污泥取至上海污水處理池中污水處理池，從該活性污泥中取5mL泥水混合液至45mL滅菌的異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基中。異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基的配方為：(NH4)2SO40.945g/L，檸檬酸鈉6.536g/L，MgSO4·7H2O1g/L，NaCl0.12g/L，MnSO4·H2O0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.02g/L，KH2PO40.2g/L，Na2HPO40.3g/L，pH7.0～7.5。然后置于30℃，200rpm的氣浴搖床富集培養(yǎng)12h。將富集液進行梯度稀釋后，均勻涂布于異養(yǎng)硝化固體培養(yǎng)基(瓊脂20g/L，其余成分同異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基)。在30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1d后，挑取形態(tài)大小不同的單克隆，劃線純化后編號保藏，經(jīng)初篩共得到10余株菌株。將以上初篩菌株接種到溴百里酚藍(lán)(BTB)分離培養(yǎng)基。BTB培養(yǎng)基的配方為：KNO31g/L，琥珀酸鈉8.5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，CaCl20.15g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.05g/L，KH2PO40.25g/L，Na2HPO40.3g/L，1％BTB1mL，瓊脂20g/L，pH7.0～7.5。1gBTB溶于100ml無水乙醇即得1％BTB乙醇溶液。在30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1d后，挑取周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)藍(lán)色暈圈的菌株至BTB培養(yǎng)基，劃線純化并編號保藏。從平板挑取菌落至富集培養(yǎng)基，富集培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖6g/L，酵母粉12g/L，MgSO4·7H2O2.5g/L，CaCl20.5g/L，KH2PO42.5g/L，pH7.0。30℃氣浴搖床200rpm培養(yǎng)12h，取1％(體積比)菌液離心洗滌，接種至硝化培養(yǎng)基。硝化培養(yǎng)基的配方為：(NH4)2SO40.945g/L，檸檬酸鈉16.34g/L，MgSO4·7H2O1g/L，KH2PO40.2g/L，Na2HPO40.3g/L。30℃，200rpm搖瓶培養(yǎng)，定期取樣測定氨氮(NH4+-N)、硝酸鹽(NO3--N)和亞硝酸鹽(NO2--N)的濃度，通過分析總氮(TN)的去除率來判斷菌株的異養(yǎng)硝化性能。圖1為假單胞菌CGMCCNo.13433對氨氮的去除效果圖，由圖1可以看出，假單胞菌CGMCCNo.13433具備很好的脫氮性能，24h時對總氮去除率達(dá)到98.7％，并且作為中間產(chǎn)物的硝態(tài)氮和亞硝態(tài)氮極少積累，累積量在0.02mg/L左右。挑取硝化性能好的菌落至富集培養(yǎng)基，30℃氣浴搖床200rpm培養(yǎng)12h，取1％(體積比)菌液離心洗滌，接種至反硝化培養(yǎng)基。反硝化培養(yǎng)基配方為：KNO30.722g/L，檸檬酸鈉6.128g/L，MgSO4·7H2O1g/L，KH2PO40.25g/L，Na2HPO40.3g/L。30℃，200rpm搖瓶培養(yǎng)，定期取樣測定氨氮(NH4+-N)、硝酸鹽(NO3--N)和亞硝酸鹽(NO2--N)的濃度，通過分析總氮(TN)的去除率來判斷菌株的好氧反硝化性能。圖2為假單胞菌CGMCCNo.13433對硝酸鹽的去除效果圖，由圖2可以看出，假單胞菌CGMCCNo.13433具有良好的脫氮性能，在以硝酸鹽為唯一氮源時，其脫氮率達(dá)到99.7％。(2)培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基為：葡萄糖1.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，蛋白胨1g/100mL，磷酸二氫鉀0.05g/100mL，硫酸鎂0.04g/100mL。將假單胞菌CGMCCNo.13433接種于上述培養(yǎng)基中，在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)24h，即得適于接種的種子。(3)保存在步驟(2)中培養(yǎng)好的假單胞菌種子中加入經(jīng)過高溫滅菌的甘油，甘油在種子液中的濃度為30％(V/V)，放在-80℃冰箱保存。實施例2城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)的復(fù)合微生物菌劑的制備(1)取假單胞菌CGMCCNo.13433種子，接種于固體培養(yǎng)基I中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：37℃，活化培養(yǎng)48h，制得活化假單胞菌CGMCCNo.13433；然后將活化假單胞菌CGMCCNo.13433接種于液體培養(yǎng)基I進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床180rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的假單胞菌種子按發(fā)酵液體積的10％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h后，制得假單胞菌制劑，假單胞菌菌體濃度為4.0×109cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基I中，含蛋白胨1g/100mL，酵母粉1.5g/100mL，葡萄糖2g/100mL，磷酸氫二鉀0.1g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6～8；液體培養(yǎng)基I中，含葡萄糖1.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，蛋白胨1g/100mL，磷酸二氫鉀0.05g/100mL，硫酸鎂0.04g/100mL；發(fā)酵培養(yǎng)基I中，含葡萄糖2g/100mL，酵母膏1.5g/100mL，黃豆粉2/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL，硫酸鎂0.01g/100mL。(2)取不動桿菌CGMCCNo.1.8587，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：37℃，活化培養(yǎng)60h，制得活化不動桿菌；然后將活化不動桿菌接種于液體培養(yǎng)基II進行擴大培養(yǎng)；擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床180rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的不動桿菌種子按發(fā)酵液體積的10％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h后，制得不動桿菌制劑，不動桿菌菌體濃度為8.0×107cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基II中，含蛋白胨1.5g/100mL，葡萄糖1g/100mL，氯化鈉0.5g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6.5～7.5；液體培養(yǎng)基II中，含葡萄糖1.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，蛋白胨1g/100mL，氯化鈉0.5g/100mL；發(fā)酵培養(yǎng)基II中，含葡萄糖3g/100mL，酵母膏1.5g/100mL，(NH4)2SO40.5g/100mL，檸檬酸鈉0.2g/100mL，硫酸鎂0.02g/100mL。(3)取解淀粉芽孢桿菌CGMCCNo.1.7463，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：37℃，活化培養(yǎng)48h，制得活化解淀粉芽孢桿菌；然后將活化解淀粉芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基III進行擴大培養(yǎng)；擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的解淀粉芽孢桿菌種子按發(fā)酵液體積的10％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)72h后，制得解淀粉芽孢桿菌制劑，解淀粉芽孢桿菌體濃度為9.0×109cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基III中，含胰蛋白胨1g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化鈉1g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6～8；液體培養(yǎng)基III中，含葡萄糖2.5g/100mL，酵母膏0.2g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL；發(fā)酵培養(yǎng)基III中，糖蜜1.5g/100mL、紅糖1.0g/100mL、酵母膏1.5/100mL、玉米漿1.5/100mL、磷酸二氫鉀0.02g/100mL，硫酸鎂0.01g/100mL。(4)取枯草芽胞桿菌CGMCCNo.1.2162，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：37℃，活化培養(yǎng)60h，制得活化枯草芽胞桿菌；然后將活化枯草芽胞桿菌接種于液體培養(yǎng)基IV進行擴大培養(yǎng)；擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的枯草芽胞桿菌種子按發(fā)酵液體積的5％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基IV中，在旋轉(zhuǎn)式搖床180rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)72h后，制得枯草芽胞桿菌制劑，枯草芽胞桿菌體濃度為8.0×109cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基IV中，含胰蛋白胨1g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化鈉1g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6～8；液體培養(yǎng)基IV中，含葡萄糖2.5g/100mL，酵母膏0.2g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL；發(fā)酵培養(yǎng)基IV中，含糖蜜2.0g/100mL、紅糖1.5g/100mL、黃豆粉2.0g/100mL、玉米漿1.5g/100mL、磷酸二氫鉀0.02g/100mL。(5)取地衣芽胞桿菌CGMCCNo.1.6510，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：35℃，活化培養(yǎng)48h；制得活化地衣芽胞桿菌；然后將活化地衣芽胞桿菌接種于液體培養(yǎng)基V進行擴大培養(yǎng)；擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的地衣芽胞桿菌種子按發(fā)酵液體積的10％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基V中，在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h后，制得地衣芽胞桿菌制劑，地衣芽胞桿菌菌體濃度為1.0×109cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基V中，含蛋白胨1g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化鈉1g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6～8；液體培養(yǎng)基V中，含甘油2.0g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，玉米漿1.5g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL；發(fā)酵培養(yǎng)基V中，含甘油2.0g/100mL、糖蜜1.5/100mL、玉米漿3.0g/100mL、黃豆粉1.5g/100mL、磷酸二氫鉀0.03g/100mL、硫酸鎂0.02g/100mL。(6)取乳酸乳球菌CGMCCNo.1.3920，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：37℃，活化培養(yǎng)72h，制得活化乳酸乳球菌；然后將活化乳酸乳球菌接種于液體培養(yǎng)基VI進行擴大培養(yǎng)；擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，35℃培養(yǎng)72h；將擴大培養(yǎng)的乳酸乳球菌種子按發(fā)酵液體積的10％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基VI中，在旋轉(zhuǎn)式搖床50rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)150h后，制得乳酸乳球菌制劑，乳酸乳球菌菌體濃度為8.0×105cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基VI中，含牛肉膏0.5g/100mL，蛋白胨0.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，番茄汁5g/100mL，葡萄糖1.0g/100mL，碳酸氫鈣1.0g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值4～6.5；液體培養(yǎng)基VI中，含葡萄糖2.0g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，玉米漿1.5g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL，碳酸氫鈣1.0g/100mL；發(fā)酵培養(yǎng)基VI中，含葡萄糖2.5g/100mL、酵母膏2.0g/100mL、玉米漿3.0/100mL、磷酸二氫鉀0.02g/100mL，碳酸氫鈣1.0g/100mL、檸檬酸0.5g/100mL。(7)取類球紅細(xì)菌CGMCCNo.1.2174，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：35℃，活化培養(yǎng)72h；制得活化類球紅細(xì)菌；然后將活化類球紅細(xì)菌接種于液體培養(yǎng)基VII進行擴大培養(yǎng)；擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)72h；將擴大培養(yǎng)的類球紅細(xì)菌種子按發(fā)酵液體積的10％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基VII中，在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h后，制得類球紅細(xì)菌制劑，類球紅細(xì)菌菌體濃度為9.0×107cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基VII中，含牛肉膏0.5g/100mL，蛋白胨0.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6.5～7.5；液體培養(yǎng)基VII中，含葡萄糖2.0g/100mL，玉米漿1.5g/100mL，硫酸銨1.0g/100mL，谷氨酸鈉0.2g/100mL，磷酸二氫鉀0.02g/100mL；發(fā)酵培養(yǎng)基VII中，含葡萄糖3.0g/100mL、玉米漿2.0g/100mL、硫酸銨1.5gg/100mL、谷氨酸鈉1.5g/100mL、磷酸二氫鉀0.02g/100mL。(8)取堿湖迪茨氏菌CGMCCNo.1.6147，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：32℃，活化培養(yǎng)96h，制得活化堿湖迪茨氏菌；然后將活化堿湖迪茨氏菌接種于液體培養(yǎng)基IIX進行擴大培養(yǎng)；擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)72h；將擴大培養(yǎng)的堿湖迪茨氏菌種子按發(fā)酵液體積的15％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基IIX中，在旋轉(zhuǎn)式搖床50rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)120h后，制得堿湖迪茨氏菌制劑，堿湖迪茨氏菌菌體濃度為7.0×107cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基IIX中，含葡萄糖1g/100mL，乙酸鈉0.2g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化銨0.25g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6.5～7.5；液體培養(yǎng)基IIX中，含葡萄糖1g/100mL，乙酸鈉0.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化銨0.5g/100mL，硝酸鉀0.2g/100mL，硫酸鎂0.02g/100mL，磷酸氫二鉀0.05g/100mL；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基IIX組分如下：葡萄糖2.0g/100mL、乙酸鈉1.5g/100mL、酵母膏1.0g/100mL、氯化銨1.5g/100mL、硝酸鉀0.2g/100mL、硫酸鎂0.03g/100mL、磷酸氫二鉀0.02g/100mL、酒石酸鉀鈉0.2g/100mL。(9)取沼澤紅假單胞菌CGMCCNo.1.2351，接種于固體培養(yǎng)基IX中，經(jīng)活化培養(yǎng)，活化條件為：32℃，活化培養(yǎng)96h，制得活化沼澤紅假單胞菌；然后將活化沼澤紅假單胞菌接種于液體培養(yǎng)基IX進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床50rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h；將擴大培養(yǎng)的沼澤紅假單胞菌種子按發(fā)酵液體積的15％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基IX中，在旋轉(zhuǎn)式搖床50rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)160h后，制得沼澤紅假單胞菌制劑，沼澤紅假單胞菌菌體濃度為5.0×107cfu/mL。其中，固體培養(yǎng)基IX中，含葡萄糖1g/100mL，乙酸鈉0.2g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，維生素H0.01g/100mL，硫酸鎂0.02g/100mL，瓊脂2g/100mL，pH值6.5～7.5；液體培養(yǎng)基IX中，含葡萄糖1.0g/100mL，乙酸鈉1.0g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，氯化銨0.5g/100mL，硫酸鎂0.05g/100mL，磷酸氫二鉀0.02g/100mL；發(fā)酵培養(yǎng)基IX中，含葡萄糖1.5g/100mL、乙酸鈉1.0g/100mL、酵母膏1.5g/100mL、氯化銨0.5g/100mL、硫酸鎂0.05g/100mL、磷酸氫二鉀0.02g/100mL。(10)將步驟(1)制得的假單胞菌制劑15份、步驟(2)制得的不動桿菌制劑10份、步驟(3)制得的解淀粉芽孢桿菌制劑8份、步驟(4)制得的枯草芽胞桿菌制劑12份、步驟(5)制得的地衣芽胞桿菌制劑8份、步驟(6)制得的乳酸乳球菌制劑15份、步驟(7)制得的類球紅細(xì)菌制劑12份、步驟(8)制得的堿湖迪茨氏菌制劑10份和步驟(9)制得的沼澤紅假單胞菌制劑10份混合，制得復(fù)合微生物菌劑，含活菌數(shù)約等于7.5×1010cfu/mL。實施例3復(fù)合微生物菌劑在城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)的應(yīng)用上海郊區(qū)某河道，河水呈黑色，散發(fā)濃烈臭味，COD、氨氮和總磷超標(biāo)。從該河道取2L水樣，加入液體復(fù)合微生物菌劑2mL，每三天加菌劑一次，連續(xù)投料三周天后，測定結(jié)果表明，水體COD由投放微生物前的265mg/L下降至15.3mg/L；氨氮含量由修復(fù)前的16.8mg/L下降至0.69mg/L；總氮由31.53mg/L下降至0.97；總磷由2.82mg/L下降至0.23，修復(fù)后的水體達(dá)到了中華人民共和國地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)V類水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。表現(xiàn)了明顯的水體修復(fù)效果(見表1)表1復(fù)合微生物菌劑對河道污水的修復(fù)效果COD(mg/L)NH3-N(mg/L)總氮(mg/L)總磷(mg/L)河道污水處理前26516.831.532.82加微生物菌劑處理后15.30.690.970.23去除率94.22％95.89％96.23％91.84％以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明的保護范圍并不僅局限于上述實施例。凡屬于本發(fā)明思路下的技術(shù)方案均屬于本發(fā)明的保護范圍。應(yīng)該指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下的改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3