本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，具體涉及的是一種用于防治農(nóng)作物病害的微生物制劑，所述微生物制劑在應(yīng)用中對(duì)人體安全、對(duì)環(huán)境無公害。
背景技術(shù)：
生物農(nóng)藥是指使用活體微生物、植物源農(nóng)藥、微生物次生代謝產(chǎn)物等用于防治各種昆蟲和病害的農(nóng)藥種類。尤其是微生物農(nóng)藥，由于自然界中潛在的微生物資源種類豐富，在微生物農(nóng)藥的產(chǎn)品開發(fā)方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)，因此，世界各國(guó)都投入了大量的人力和財(cái)力進(jìn)行研究，在我國(guó)，微生物農(nóng)藥的研制和開發(fā)已經(jīng)成為國(guó)家科技公關(guān)和高新技術(shù)發(fā)展的計(jì)劃；各地方政府也把微生物農(nóng)藥作為生物領(lǐng)域的一個(gè)重點(diǎn)研發(fā)方向。
微生物農(nóng)藥是實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整、促進(jìn)循環(huán)經(jīng)濟(jì)和社會(huì)可持續(xù)發(fā)展的重要保障，因此，研究開發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型微生物農(nóng)藥，并以此帶動(dòng)其它高科技產(chǎn)業(yè)，如發(fā)酵工程、制劑加工、精細(xì)化工領(lǐng)域的協(xié)同發(fā)展是微生物農(nóng)藥發(fā)展的一個(gè)重要目標(biāo)。微生物農(nóng)藥不僅具有高效、安全、低殘留、易降解的特點(diǎn)，而且微生物本身來源于環(huán)境本身，對(duì)環(huán)境友好，且微生物作用機(jī)理復(fù)雜，作用位點(diǎn)多，一般微生物活菌和次生代謝產(chǎn)物都能夠應(yīng)用于抑制有害生物的生長(zhǎng)，因而備受人們關(guān)注。目前，放線菌、細(xì)菌等在農(nóng)業(yè)上已經(jīng)有廣泛推廣使用，然而，應(yīng)用酵母菌進(jìn)行生物防治雖然已經(jīng)有研究，但真正應(yīng)用的還較少。
酵母菌一般對(duì)化學(xué)殺菌劑抗性較大，甚至能和化學(xué)殺菌劑結(jié)合使用，一旦篩選得到合適的復(fù)配種類，不僅能夠降低化學(xué)農(nóng)藥的使用劑量，而且可以減少對(duì)環(huán)境和人體潛在為害的同時(shí)，提高生物防治效果。另外，酵母菌具有遺傳穩(wěn)定、營(yíng)養(yǎng)要求簡(jiǎn)單、抑菌譜廣、生長(zhǎng)速度快的特點(diǎn)，和在多種脅迫環(huán)境和逆境下的較強(qiáng)耐受力、對(duì)多數(shù)化學(xué)殺菌劑不敏感、能與一些化學(xué)或物理方法相結(jié)合，成為微生物防治研究的熱點(diǎn)。
草莓是一種集栽培和觀賞于一體的宿根性、多年生草本資源植物。在草莓栽培區(qū)，灰霉病、炭疽病、白粉病是阻礙草莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸，其中，草莓灰霉病的危害最為嚴(yán)重，在每年的草莓生長(zhǎng)期危害莖、葉柄、葉片、托葉，在后期危害花和果實(shí)，直接影響到草莓產(chǎn)量、造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)草莓灰霉病的防治大多數(shù)采用化學(xué)農(nóng)藥噴灑植株表面，造成土壤不同程度的農(nóng)藥殘留和污染問題，嚴(yán)重影響產(chǎn)品質(zhì)量和人體的身體健康。從保護(hù)生態(tài)環(huán)境和食品安全的角度處罰，草莓生產(chǎn)需要有低毒、污染少，對(duì)人體安全的微生物制劑來控制草莓病害，從而達(dá)到草莓安全食用的目的，也符合生物農(nóng)業(yè)發(fā)展和政府、社會(huì)與生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于針對(duì)草莓灰霉病對(duì)草莓造成影響的情況，提供一種微生物活菌制劑，從而解決現(xiàn)有技術(shù)中大量使用化學(xué)農(nóng)藥造成的農(nóng)藥殘留、環(huán)境安全性問題。
本發(fā)明的另一目的在于提供所述微生物活菌制劑的應(yīng)用，所述微生物活菌制劑適用于防治草莓灰霉病。
本發(fā)明應(yīng)用的微生物活菌制劑的原料為馬克斯克魯維酵母，所述酵母菌種可以通過市售手段購買得到，本發(fā)明所用的馬克斯克魯維酵母購自上海撫生實(shí)業(yè)有限公司。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下步驟制備得到一種微生物活菌制劑：
1、將馬克斯克魯維酵母菌種接種到nydb液體培養(yǎng)基中，于28℃下，在200r/min搖床中培養(yǎng)48h;
2、將培養(yǎng)好的酵母菌菌液在3000r/min條件下離心10分鐘，收集菌體細(xì)胞，再用無菌蒸餾水洗滌菌體兩次，然后用無菌蒸餾水洗下酵母菌并用移液槍反復(fù)吸打兩三次使酵母菌重懸浮成菌懸液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，算出酵母菌懸液的濃度，然后用無菌蒸餾水調(diào)整菌懸液的濃度至1×109cfu/ml。
進(jìn)一步的，所述微生物菌劑的施用方式為使用所述的馬克斯克魯維酵母均勻噴霧。
較佳的，本發(fā)明的微生物菌劑可以與化學(xué)殺菌劑啶酰菌胺復(fù)配使用，效果更佳。
進(jìn)一步的，本發(fā)明的微生物菌劑的施用方法為，預(yù)防處理，在發(fā)病前或發(fā)病初期用藥，連續(xù)施藥三次，間隔7-10天。
進(jìn)一步的，當(dāng)使用本發(fā)明的微生物菌劑時(shí)，取決于施用的作物種類、防治病害的不同等，使用劑量可以在相當(dāng)寬的范圍內(nèi)變化。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的微生物菌劑的有益效果為：
1、本發(fā)明拓寬了微生物制劑用于生物防治的種類，首次將市售可以獲得的已知菌株經(jīng)過大量的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其可以用于防治草莓灰霉??；
2、本發(fā)明的微生物菌劑儲(chǔ)存性質(zhì)穩(wěn)定，防治效果好，大規(guī)模生產(chǎn)的發(fā)酵工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低廉；
3、本發(fā)明的微生物菌劑與啶酰菌胺復(fù)配后，兩者可以完美共存，可以更好的防治草莓灰霉病；
4、本發(fā)明的微生物菌劑對(duì)作物安全、對(duì)環(huán)境無污染，效能穩(wěn)定在45%以上，與化學(xué)殺菌劑啶酰菌胺復(fù)配后效能在85%以上，可以減少化學(xué)農(nóng)藥的用量。
具體實(shí)施方式
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，本發(fā)明用以下具體實(shí)施例進(jìn)行說明，但本發(fā)明絕非限于這些例子。以下所述僅為本發(fā)明較好的實(shí)施例，僅僅用于解釋本發(fā)明，但不能因此理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換或改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)，因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
本發(fā)明實(shí)施例中所使用的材料、試劑等，如無特別說明，均可以通過商業(yè)途徑購買得到和/或通過已知的常規(guī)方法制備得到。
一、馬克斯克魯維酵母微生物菌劑的制備
本發(fā)明的馬克斯克魯維酵母微生物菌劑的制備方法可以通過如下方法制備得到：
1、將馬克斯克魯維酵母菌種接種到nydb液體培養(yǎng)基中，于28℃下，在200r/min搖床中培養(yǎng)48h;
2、將培養(yǎng)好的酵母菌菌液在3000r/min條件下離心10分鐘，收集菌體細(xì)胞，再用無菌蒸餾水習(xí)題菌體兩次，然后用無菌蒸餾水洗下酵母菌并用移液槍反復(fù)吸打兩三次使酵母菌重懸浮成菌懸液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，算出酵母菌懸液的濃度，然后用無菌蒸餾水調(diào)整菌懸液的濃度至1×109cfu/ml。
二、室內(nèi)生物測(cè)定
本發(fā)明的微生物菌懸液與化學(xué)殺菌劑啶酰菌胺給定的預(yù)期活性可以如下計(jì)算（參見，colby,s.r.“calculatingsynergisticandantagonisticresponsesofherbicidecombinations”,weed15,(1967),20-22）:
如果
x是當(dāng)組分a在x的使用劑量施用時(shí)的效力，
y是當(dāng)組分b在y的使用劑量施用時(shí)的效力，
e是當(dāng)組分a和組分b分別以用量x和y的使用劑量施用時(shí)的效力，則
e=x+y-xy/100
效力值以%計(jì)，0%指效力相當(dāng)于對(duì)照，而效力100%是指未觀察到感染。
如果實(shí)際的殺真菌活性超過計(jì)算值，則該組合物的活性是超加和，即存在協(xié)同增效作用。在次情況下，實(shí)際觀察稻的效力必須大于由上面提到的公式計(jì)算出的預(yù)期效力（e）。
1、防治草莓灰霉病活性測(cè)定
對(duì)草莓灰霉病的活性測(cè)定以50%啶酰菌胺水分散粒劑作為對(duì)照藥劑（購自巴斯夫公司），測(cè)定活性保護(hù)時(shí)，將草莓幼苗用本發(fā)明所述的微生物菌劑懸浮液和50%啶酰菌胺水分散粒劑兌水稀釋后噴霧，噴液層變干后，將植株用草莓灰霉病的孢子水懸浮液接種，之后，將植株置于20℃和相對(duì)濕度為80%的溫室中培養(yǎng)。
接種草莓灰霉病孢子懸浮液三天后進(jìn)行評(píng)價(jià)，試驗(yàn)組、使用劑量和試驗(yàn)結(jié)果如表1所示：
由以上試驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的微生物制劑單獨(dú)使用時(shí)，對(duì)草莓灰霉病的防治表現(xiàn)出一定的防治效果，當(dāng)本發(fā)明的微生物制劑與啶酰菌胺有效成分用量100g/公頃時(shí)，防治效果可以達(dá)到89.7%，表現(xiàn)出明顯的協(xié)同增效作用，防治效果與50%啶酰菌胺以有效成分用量200ga.i./hm2施用時(shí)，防效效果相當(dāng)。