本發(fā)明涉及抗癌藥物領(lǐng)域，特別是3-取代苯基-6-丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥是一大類惡性腫瘤的統(tǒng)稱，嚴(yán)重威脅人類的健康。目前，抗腫瘤藥物的種類繁多，尤其是以三唑或噻二唑為母體結(jié)構(gòu)的化合物，在以往的研究和報道中，均表現(xiàn)出了較好的抗癌活性。在20世紀(jì)中期，人們首次將三唑和噻二唑稠合在一個分子中，自此已合成了許多具有廣泛的生物活性的三唑并噻二唑的稠環(huán)化合物。最新的研究表明，此類化合物具有消炎、殺菌、舒張血管和抗阿爾茲海默癥等作用。通過對三唑并噻二唑母體骨架的3-位和6-位進(jìn)行修飾，引入新的取代基，可以合成出新的三唑并噻二唑衍生物。因此，具有廣譜生物活性的三唑并噻二唑已成為藥物開發(fā)中不可缺少的雜環(huán)骨架，三唑并噻二唑衍生物的合成與生物活性的研究已引起了人們廣泛關(guān)注。參見：文獻(xiàn)1)Mona M.；Kamel,Nadia Y.；Megally Abdo.Eur.J.Med.Chem.2014,86,75-80；文獻(xiàn)2)Thomas R.；Nicholas M.；Xi Jin.J.Med.Chem.2013,56,1301-1310；文獻(xiàn)3)Rania H.；Noha Z.；Samia Ali,et al.Bioor.Med.Chem.Let.2013,93,1391-1394；文獻(xiàn)4)Ramaprasad,G.；Kalluraya,B.；Sunil,K.B.Med.Chem.Res.2014,23,3644；文獻(xiàn)5)Kalluraya,B.；Kumar,B.；Mallya,S.Pharma.Chem.2012,49,1026；文獻(xiàn)6)Sunil,D.；Isloor,A.M.；Shetty,P.；Satyamoorthy,K.；Prasad,A.Med.Chem.Res.2011,20,1074；文獻(xiàn)7)Badr,I.；Barwa,R.M.Bioorg.Med.Chem.2011,19,4506；文獻(xiàn)8)Kotaiah,Y.；Nagaraju,K.；Harikrishna,N.Eur.J.Med.Chem.2014,75,195；文獻(xiàn)9)Akhter,M.W.；Hassan,M.Z.；Amir,M.ArabianJ.Chem.2014,7,955；文獻(xiàn)10)Malladi,S.；Isloor,A.M.；Shetty,P.et al.Med.Chem.Res.2012,21,3272.

近年來，為了發(fā)現(xiàn)更新更有效和更廣譜的抗癌新藥，本發(fā)明對3-取代苯基-6-丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物做了進(jìn)一步研究。發(fā)現(xiàn)有十個化合物對三種癌細(xì)胞表現(xiàn)了很好的增殖抑制活性，均具有開發(fā)為新的抗癌藥物的前景。目前尚無關(guān)于該十個化合物的相關(guān)抗癌作用的文獻(xiàn)報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對上述技術(shù)分析，提供1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物的應(yīng)用。該類化合物具有抗癌活性，為研制新的抗癌藥物和豐富臨床用藥品種開辟新的途徑。

本發(fā)明的技術(shù)方案：

所述1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物的應(yīng)用，用于制備抗癌藥物。

所述的化合物為一組3-取代苯基-6-丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：

結(jié)構(gòu)式中：R₁為苯基、對甲氧基苯基、對氯苯基、對氟苯基、3,4,5-三甲氧基苯基；R₂為正丁基、異丁基、仲丁基。

所述的化合物包括3-苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-對甲氧基苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-對甲氧基苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-對甲氧基苯基-6-仲丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-對氯苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-對氯苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-對氯苯基-6-仲丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-對氟苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑、3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑。

所述1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物的制備方法，步驟如下：

1)芳基甲酸甲酯與水合肼80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得芳基甲酰肼。

2)以無水乙醇為溶劑，將芳基甲酰肼和氫氧化鉀室溫攪拌溶解，5℃下滴入二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-芳基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)以無水甲醇為溶劑，將3-芳基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑和氫氧化鉀室溫攪拌溶解，5℃下滴入二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-芳基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)將3-芳基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑和巰基異硫脲鹽酸鹽在乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶即得目標(biāo)化合物。

所述水合肼的用量均為過量，約30-40ml；芳基甲酰肼、氫氧化鉀和二硫化碳的摩爾比為1:1.3-1.5:1.1-1.2；3-芳基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑、氫氧化鉀和二硫化碳的摩爾比為1:3:10；3-芳基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑與巰基異硫脲鹽酸鹽的摩爾比為1:1-1.3；3-芳基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑與乙醇的用量比為1mmol：5-8ml；碳酸氫鈉與3-芳基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑的摩爾比為1.2-1.5:1；巰基異硫脲鹽酸鹽為正丁巰基異硫脲鹽酸鹽、異丁巰基異硫脲鹽酸鹽、仲丁巰基異硫脲鹽酸鹽。

1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物的應(yīng)用，用于制備抗癌藥物，包括抗宮頸癌(Hela)、肝癌(SMMC-7721)和肺癌(A549)。

本發(fā)明的優(yōu)點是：十個3-取代苯基-6-丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物具有很強(qiáng)的抗癌活性，為研制新的抗癌藥物和豐富臨床用藥品種開辟新的途徑；其制備方法工藝簡單、易于實施、收率較高，可適用于規(guī)?；纳a(chǎn)。

具體實施方式

為了尋找療效好和對多種癌細(xì)胞均有抑制活性的抗癌藥物，結(jié)合對抗癌藥物的認(rèn)識，根據(jù)文獻(xiàn)報導(dǎo)和申請人實驗室多年研究工作成果，合成了多個化合物，并對獲得的目標(biāo)化合物進(jìn)行體外抗癌活性初篩藥理試驗。發(fā)現(xiàn)其中十個3-取代苯基-6-丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑類化合物具有很強(qiáng)的抗癌活性，具有開發(fā)為新的抗癌藥物的前景。目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)已經(jīng)由紅外光譜和核磁共振氫譜確證。本發(fā)明化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下所示：

結(jié)構(gòu)式中：R₁為苯基、對甲氧基苯基、對氯苯基、對氟苯基、3,4,5-三甲氧基苯基；R₂為正丁基、異丁基、仲丁基。

實施例1：

3-苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，依次加入苯甲酸甲酯12.21g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得苯甲酰肼。

2)取苯甲酰肼6.15g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.03g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑0.95g(0.005mol)和正丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.81g，收率85.2％，熔點92.3-93.7℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為a。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物a結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1613,1452,1381,1230,685,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.18(d,2H,Ar-H),7.55-7.62(m,3H,Ar-H),3.09(t,2H,CH₂),1.67-1.74(m,2H,CH₂),1.33-1.43(m,2H,CH₂),0.89(t,3H,CH₃)。

實施例2：

3-苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，依次加入苯甲酸甲酯12.21g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得苯甲酰肼。

2)取苯甲酰肼6.15g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.03g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑0.95g(0.005mol)和異丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.78g，收率82.2％，熔點105.1-106.3℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為b。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物b結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2931,1610,1451,1380,1232,683,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.8(d,2H,Ar-H),7.55-7.62(m,3H,Ar-H),3.01(d,2H,CH₂),1.93-2.03(m,1H,CH),1.01(d,6H,CH₃)。

實施例3：

3-對甲氧基苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，加入對甲氧基苯甲酸甲酯14.64g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得對甲氧基苯甲酰肼。

2)取對甲氧基苯甲酰肼8.05g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-對甲氧基苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-對甲氧基苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.48g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-對甲氧基苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-對甲氧基苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑1.10g(0.005mol)和正丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-對甲氧基苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.94g，收率85.4％，熔點90.3-91.6℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為c。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物c結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1614,1449,1379,1230,679,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.10(d,2H,Ar-H),7.15(d,2H,Ar-H),3.84(s,3H,OCH₃),3.09(t,2H,CH₂),1.66-1.73(m,2H,CH₂),1.37-1.43(m,2H,CH₂),0.89(t,3H,CH₃)。

實施例4：

3-對甲氧基苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，加入對甲氧基苯甲酸甲酯14.64g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得對甲氧基苯甲酰肼。

2)取對甲氧基苯甲酰肼8.05g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-對甲氧基苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-對甲氧基苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.48g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-對甲氧基苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-對甲氧基苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑1.10g(0.005mol)和異丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-對甲氧基苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.89g，收率80.9％，熔點85.6-87.3℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為d。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物d結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1613,1452,1383,1233,680,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.12(d,2H,Ar-H),7.15(d,2H,Ar-H),3.84(s,3H,OCH₃),3.01(d,2H,CH₂),1.94-2.01(m,1H,CH),1.01(d,6H,CH₃)。

實施例5：

3-對甲氧基苯基-6-仲丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，加入對甲氧基苯甲酸甲酯14.64g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得對甲氧基苯甲酰肼。

2)取對甲氧基苯甲酰肼8.05g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-對甲氧基苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-對甲氧基苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.48g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-對甲氧基苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-對甲氧基苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑1.10g(0.005mol)和2-丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-對甲氧基苯基-6-仲丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.86g，收率78.2％，熔點87.8-88.6℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為e。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物e結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1616,1450,1381,1235,683,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.11(d,2H,Ar-H),7.15(d,2H,Ar-H),3.84(s,3H,OCH₃),3.25-3.32(m,1H,CH),1.58-1.76(m,2H,CH₂),1.356(d,3H,CH₃),0.99(t,3H,CH₃)。

實施例6：

3-對氯苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，加入對氯苯甲酸甲酯15.12g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得對氯苯甲酰肼。

2)取對氯苯甲酰肼8.32g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-對氯苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-對氯苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.56g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-對氯苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-對氯苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑1.13g(0.005mol)和正丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-對氯苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.86g，收率76.5％，熔點95.6-96.7℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為f。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物f結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1615,1449,1381,1230,684,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.19(d,2H,Ar-H),7.68(d,2H,Ar-H),3.09(t,2H,CH₂),1.66-1.74(m,2H,CH₂),1.37-1.43(m,2H,CH₂),0.89(t,3H,CH₃)。

實施例7：

3-對氯苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，加入對氯苯甲酸甲酯15.12g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得對氯苯甲酰肼。

2)取對氯苯甲酰肼8.32g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-對氯苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-對氯苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.56g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-對氯苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-對氯苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑1.13g(0.005mol)和異丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-對氯苯基-6-異丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.84g，收率74.2％，熔點101.1-102.3℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為g。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物g結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1612,1449,1381,1230,685,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.18(d,2H,Ar-H),7.68(d,2H,Ar-H),3.01(d,2H,CH₂),1.94-2.01(m,1H,CH),1.01(d,6H,CH₃)。

實施例8：

3-對氯苯基-6-仲丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，加入對氯苯甲酸甲酯15.12g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得對氯苯甲酰肼。

2)取對氯苯甲酰肼8.32g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-對氯苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-對氯苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.56g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-對氯苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-對氯苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑1.13g(0.005mol)和2-丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-對氯苯基-6-仲丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.85g，收率75.6％，熔點90.7-92.3℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為h。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物h結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1610,1449,1381,1229,685,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.18(d,2H,Ar-H),7.68(d,2H,Ar-H),3.26-3.31(m,1H,CH),1.58-1.78(m,2H,CH₂),1.36(d,3H,CH₃),0.99(t,3H,CH₃)。

實施例9：

3-對氟苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，加入對氟苯甲酸甲酯12.32g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得對氟苯甲酰肼。

2)取對氟苯甲酰肼6.76g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-對氟苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-對氟苯基-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑2.31g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-對氟苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-對氟苯基-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑1.05g(0.005mol)和正丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-對氟苯基-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑0.82g，收率77.8％，熔點64.7-65.3℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為i。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物i結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1609,1451,1381,1229,684,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):8.22(t,2H,Ar-H),7.46(t,2H,Ar-H),3.09(t,2H,CH₂),1.66-1.74(m,2H,CH₂),1.36-1.45(m,2H,CH₂₎,0.89(t,3H,CH₃)。

實施例10：

3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑，制備步驟如下：

1)在100ml圓底燒瓶中，加入3,4,5-三甲氧基苯甲酸甲酯19.44g(80.0mmmol)和水合肼30ml(過量)于80℃下回流5h，反應(yīng)完全后低溫冷卻析出固體，抽濾、干燥即得3,4,5-三甲氧基苯甲酰肼。

2)取3,4,5-三甲氧基苯甲酰肼10.69g(44.0mmol)和氫氧化鉀3.12g(53.6mmol)室溫攪拌溶解于50ml無水乙醇中，5℃下滴入3ml(0.005mol)二硫化碳，立即產(chǎn)生白色沉淀，繼續(xù)反應(yīng)4h，抽濾，再與水合肼(35ml,85wt％)80℃下回流6h，反應(yīng)完全后倒入150ml冰水中，用濃鹽酸調(diào)PH值至3-4，生成大量沉淀，抽濾后用無水乙醇重結(jié)晶，得3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑。

3)取3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑3.38g(0.015mol)和氫氧化鉀2.52g(0.045mol)室溫攪拌溶解于100ml無水甲醇中，5℃下滴入9ml(0.15mol)二硫化碳，70℃下回流8-12h，反應(yīng)完全后倒入冰水中，用冰乙酸調(diào)PH值至4，抽濾沉淀，得3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑。

4)取3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-巰基-1,2,4-三唑并[3,4-b]噻二唑1.4g(0.005mol)和正丁巰基異硫脲鹽酸鹽在20ml乙醇中溶解并攪拌均勻，在5℃下滴入濃度為4wt％碳酸氫鈉水溶液，立即產(chǎn)生沉淀，反應(yīng)2h后抽濾、干燥，用無水乙醇重結(jié)晶制得目標(biāo)物3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-正丁基二硫基-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑1.12g，收率80.5％，熔點106.6-107.3℃。該制得的產(chǎn)物設(shè)編號為j。

通過紅外光譜(IR)和核磁共振譜(¹H-NMR)確證化合物j結(jié)構(gòu)：IR(KBr)cm^-1:2930,1615,1450,1381,1230,684,504；¹H-NMR(DMSO-d₆):7.48(s,2H,Ar-H),3.87(s,6H,CH₃O),3.75(s,3H,CH₃O),3.09(t,2H,CH₂),1.62-1.72(m,2H,CH₂),1.33-1.45(m,2H,CH₂),0.89(t,3H,CH₃)。

體外抗癌活性測定：

以上實施例所制得的產(chǎn)物抗癌活性體外篩選試驗：

產(chǎn)物樣品以DMSO溶解，受試化合物濃度為5×10^-5mol/L，藥劑處理48小時，采用CCK-8法測定系列化合物對人體宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人體肝癌細(xì)胞(SMMC-7721)和人體肺癌細(xì)胞(A549)的增殖抑制率如表1所示：

表1

表1檢測結(jié)果表明：該類化合物對癌細(xì)胞增殖具有較好的抑制效果，具有應(yīng)用于制備抗癌藥物，包括抗宮頸癌(Hela)、肝癌(SMMC-7721)和肺癌(A549)的前景。

上述內(nèi)容，僅是本發(fā)明代表性實施例，并非對本發(fā)明作任何形式的限制，凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。