本發(fā)明涉及同位素標記領域，尤其是涉及一種穩(wěn)定同位素標記α-乳白蛋白特征肽段的合成方法。

背景技術：

食品過敏原是指食品中存在的能夠選擇性激活人體細胞，誘導產生特異性抗體應答、引起變態(tài)反應的抗原性物質。一般來說，食品過敏原為蛋白質或糖蛋白，分別屬于不同的蛋白質家族。目前大約有160多種食品含有可以導致過敏反應的過敏原，大約有260種分子被標記為食品過敏原。流行病學研究顯示，90％的食物過敏是由8類食物引起的，通常被稱為“8大”致敏食物，包括奶類、蛋類、大豆、花生、堅果、小麥、魚類和貝類。食物過敏的癥狀包括蕁麻疹、嘔吐和哮喘等，嚴重時甚至會危及生命。在世界衛(wèi)生組織報告的威脅人類健康的因素中，食物過敏排在第4位。在近年來國內外食品有關的警示通報中過敏原問題數量排名第2，僅次于微生物污染，成為國際普遍關注的行業(yè)熱點。

牛乳含有豐富的蛋白質，深受人們的青睞,尤其對嬰幼兒和老年人來說，是日常生活中主要的營養(yǎng)物質來源。但同時，牛乳又是主要的過敏食物之一。調查表明,牛乳過敏在人群中的發(fā)病率為0.3-7.5％，其中一歲以下嬰幼兒中的發(fā)病率達到2-3％。牛乳中α-乳白蛋白屬于溶菌酶家族，是導致牛乳過敏的主要過敏原蛋白之一，據不完全統(tǒng)計，超過51％的牛乳過敏是由α-乳白蛋白引起的。牛乳中α-乳白蛋白與人乳中α-乳白蛋白的同源性約為74％，另有6％的氨基酸殘基化學性質相似，營養(yǎng)價值高、但致敏性強。牛乳常作為原料用于各種食品，所以開展針對食品中α-乳白蛋白的檢測具有重要的理論和現(xiàn)實意義。

目前對于過敏原牛α-乳白蛋白檢測的方法主要有免疫分析法，pcr法以及儀器分析法，在儀器分析法中高效液相色譜-串聯(lián)質譜法(lc/ms/ms)應用最多。但是，食品中的基質效應以及不科學的前處理方法會對分析結果造成較大偏差。

同位素稀釋質譜法idms(isotopedilutionmassspectrometry)采用與待測物具有相同分子結構的穩(wěn)定同位素(²h、¹³c、¹⁵n)標記的有機物作為內標，利用質譜測定混合后樣品中內標和待測物的摩爾離子數之比，很少受到各種物理和化學因素的干擾，能夠有效消除基質效應和前處理等因素對分析結果的影響。目前，發(fā)達國家對于食品中過敏原α-乳白蛋白一般采用同位素稀釋質譜法進行檢測。

穩(wěn)定同位素標記的α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk已經成為目前分析檢測實驗室必須采購的消耗品。但α-乳白蛋白特征肽段內標試劑完全依賴進口，價格昂貴，嚴重限制了其食品安全和檢驗檢疫等領域的應用。而穩(wěn)定同位素α-乳白蛋白特征肽段的開發(fā)成功，將為更準確定量α-乳白蛋白提供標準試劑，完善我國食品安全檢測體系。

國外以美國cil公司為代表的同位素公司在同位素標記試劑方面已形成較為完整的技術和產品鏈，但出于技術保密和產品壟斷等原因，有關同位素內標試劑合成的各類技術文獻和專利幾乎未見完整的報道。

中國專利cn103642895a公開了一種定量檢測人α-乳白蛋白含量的方法以及試劑盒。利用人α-乳白蛋白酶解后所獲得的特異多肽序列celsqllk，設計出同位素標記的特異肽和同位素標記內標物的序列，并基于內標法提供了一種全新的準確定量檢測方法對人α-乳白蛋白進行定量檢測。但是該專利公開的是一種檢測方法，并沒有公開蛋白質特征肽段的合成方法。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了填補國內穩(wěn)定同位素標記α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk空白，而提供一種工藝路線簡單、反應迅速、易于制備的穩(wěn)定同位素標記α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk的合成方法。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現(xiàn)：

利用液相合成多肽方法，以穩(wěn)定同位素標記或非標記纈氨酸(val)為起始原料，和fmoc保護的非標記或者標記甘氨酸(gly)，在縮合劑的作用下，合成二肽，然后脫掉保護基fmoc，再和fmoc保護的非標記或者標記異亮氨酸(ile)，在縮合劑的作用下，生成三肽，脫掉保護基fmoc，按照此種方法依次和fmoc保護的非標記或者標記天冬酰胺(asn)、酪氨酸(tyr)、色氨酸(trp)、亮氨酸(leu)、丙氨酸(ala)、組氨酸(his)以及和cbz保護的非標記或者標記賴氨酸(lys)進行反應，最終生成穩(wěn)定同位素標記α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk，具體采用以下步驟：

1)以穩(wěn)定同位素標記或非標記纈氨酸(h-val-mh2)為起始原料，與fmoc保護的非標記或者標記甘氨酸(fmoc-gly-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到二肽fmoc-gly-val-nh2，再脫掉保護基fmoc得到h-gly-val-nh2；

2)步驟1)制備得到的h-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記異亮氨酸(fmoc-ile-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到三肽fmoc-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-ile-gly-val-nh2；

3)步驟2)制備得到的h-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記天冬酰胺(fmoc-asn-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到四肽fmoc-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-asn-ile-gly-val-nh2；

4)步驟3)制備得到的h-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記酪氨酸(fmoc-tyr-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到五肽fmoc-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

5)步驟4)制備得到的h-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記色氨酸(fmoc-trp-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到六肽fmoc-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

6)步驟5)制備得到的h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記亮氨酸(fmoc-leu-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到七肽fmoc-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

7)步驟6)制備得到的h-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記丙氨酸(fmoc-ala-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到八肽fmoc-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

8)步驟7)制備得到的h-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記組氨酸(fmoc-his-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到九肽fmoc-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

9)步驟8)制備得到的h-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與cbz保護的非標記或者標記賴氨酸(cbz-lys-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到十肽cbz-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基cbz得到h-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，即為α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk。

以非標記纈氨酸(h-val-mh2)為起始原料時，步驟1)至步驟9)中fmoc保護的9種氨基酸及cbz保護的賴氨酸，至少有一種是穩(wěn)定同位素¹³c、¹⁵n、d的一種或幾種標記的氨基酸。

步驟1)中，所述的穩(wěn)定同位素標記或非標記纈氨酸(h-val-mh2)和fmoc保護的非標記或者標記甘氨酸(fmoc-gly-oh)進行偶合的工藝條件為：

采用的縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

穩(wěn)定同位素標記或非標記纈氨酸(h-val-mh2)、fmoc保護甘氨酸(fmoc-gly-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除fmoc-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，控制反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟2)中，所述的h-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記異亮氨酸(fmoc-ile-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

h-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記異亮氨酸(fmoc-ile-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除fmoc-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟3)中，所述的h-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記天冬酰胺(fmoc-asn-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

h-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記天冬酰胺(fmoc-asn-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除fmoc-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟4)中，所述的h-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記酪氨酸(fmoc-tyr-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

h-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記酪氨酸(fmoc-tyr-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除fmoc-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟5)中，所述的h-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記色氨酸(fmoc-trp-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

h-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記色氨酸(fmoc-trp-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除fmoc-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟6)中，所述的h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記亮氨酸(fmoc-leu-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記亮氨酸(fmoc-leu-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除fmoc-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟7)中，所述的h-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記丙氨酸(fmoc-ala-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

h-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記丙氨酸(fmoc-ala-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除fmoc-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟8)中，所述的h-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記組氨酸(fmoc-his-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

h-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記組氨酸(fmoc-his-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除fmoc-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟9)中，所述的h-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與cbz保護的非標記或者標記賴氨酸(cbz-lys-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，

h-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和cbz保護的非標記或者標記賴氨酸(cbz-lys-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；

脫除cbz-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中cbz保護基是在金屬鈀催化下通入氫氣或溴化氫/醋酸混合溶劑；cbz-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、金屬鈀和氫氣摩爾比為1:0.01:1-1:0.05:15，反應溫度為0-50℃，反應時間1-4小時；cbz-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、溴化氫/醋酸的摩爾比為1:1-1:5，反應溫度為0-50℃，反應時間1-4小時。

制備得到的α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk為穩(wěn)定同位素標記¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記，其分子結構式如下所示：h-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，其中，

h-lys-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-his-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-ala-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-leu-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-trp-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-tyr-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-asn-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-ile-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-gly-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；

h-val-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明首次公開了一種穩(wěn)定同位素標記α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk合成方法，國內未見有此肽段的同位素標記合成報道，原因主要是受價格和應用的限制，現(xiàn)在有國標的檢測方法的內標多肽，就是將此肽段需要做成同位素標記的肽段才能進行過敏原的檢測，故需要同位素標記，國內沒有報道，本申請是第一次報道；

2、本發(fā)明采用工藝路線簡單，反應時間短，易于合成，穩(wěn)定同位素原子利用率高；

3、本發(fā)明產品易分離提純，液相法合成的多肽是從溶劑中析出的晶體，故純度較好，產品化學純度在99％以上，同位素豐度在99％以上，可充分滿足食品中過敏原α-乳白蛋白痕量檢測的需求；

4、本發(fā)明經濟性和使用價值良好，具有較好的市場推廣前景。

具體實施方式

穩(wěn)定同位素標記α-乳白蛋白特征肽段的合成方法，利用液相合成多肽方法，以穩(wěn)定同位素標記或非標記纈氨酸(val)為起始原料，和fmoc保護的非標記或者標記甘氨酸(gly)，在縮合劑的作用下，合成二肽，然后脫掉保護基fmoc，再和fmoc保護的非標記或者標記異亮氨酸(ile)，在縮合劑的作用下，生成三肽，脫掉保護基fmoc，按照此種方法依次和fmoc保護的非標記或者標記天冬酰胺(asn)、酪氨酸(tyr)、色氨酸(trp)、亮氨酸(leu)、丙氨酸(ala)、組氨酸(his)以及和cbz保護的非標記或者標記賴氨酸(lys)進行反應，最終生成穩(wěn)定同位素標記α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk，具體采用以下步驟：

1)以穩(wěn)定同位素標記或非標記纈氨酸(h-val-mh2)為起始原料，與fmoc保護的非標記或者標記甘氨酸(fmoc-gly-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到二肽fmoc-gly-val-nh2，再脫掉保護基fmoc得到h-gly-val-nh2；

2)步驟1)制備得到的h-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記異亮氨酸(fmoc-ile-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到三肽fmoc-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-ile-gly-val-nh2；

3)步驟2)制備得到的h-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記天冬酰胺(fmoc-asn-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到四肽fmoc-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-asn-ile-gly-val-nh2；

4)步驟3)制備得到的h-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記酪氨酸(fmoc-tyr-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到五肽fmoc-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

5)步驟4)制備得到的h-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記色氨酸(fmoc-trp-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到六肽fmoc-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

6)步驟5)制備得到的h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記亮氨酸(fmoc-leu-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到七肽fmoc-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-

nh2，脫掉保護基fmoc得到h-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

7)步驟6)制備得到的h-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記丙氨酸(fmoc-ala-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到八肽fmoc-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

8)步驟7)制備得到的h-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記組氨酸(fmoc-his-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到九肽fmoc-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基fmoc得到h-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2；

9)步驟8)制備得到的h-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與cbz保護的非標記或者標記賴氨酸(cbz-lys-oh)在縮合劑的作用下進行偶合反應，然后依次進行干燥，減壓蒸餾，重結晶得到十肽cbz-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，脫掉保護基cbz得到h-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，即為α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk。

需要注意的是，步驟1)中如果以非標記纈氨酸(h-val-mh2)為起始原料時，步驟1)至步驟9)中fmoc保護的9種氨基酸及cbz保護的賴氨酸，至少有一種是穩(wěn)定同位素¹³c、¹⁵n、d的一種或幾種標記的氨基酸。

步驟1)中，穩(wěn)定同位素標記或非標記纈氨酸(h-val-mh2)和fmoc保護的非標記或者標記甘氨酸(fmoc-gly-oh)進行偶合的工藝條件為：采用的縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，穩(wěn)定同位素標記或非標記纈氨酸(h-val-mh2)、fmoc保護甘氨酸(fmoc-gly-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除fmoc-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，控制反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟2)中，h-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記異亮氨酸(fmoc-ile-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，h-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記異亮氨酸(fmoc-ile-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除fmoc-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟3)中，h-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記天冬酰胺(fmoc-asn-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，h-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記天冬酰胺(fmoc-asn-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除fmoc-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟4)中，h-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記酪氨酸(fmoc-tyr-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，h-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記酪氨酸(fmoc-tyr-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除fmoc-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟5)中，h-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記色氨酸(fmoc-trp-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，h-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記色氨酸(fmoc-trp-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除fmoc-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟6)中，h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記亮氨酸(fmoc-leu-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記亮氨酸(fmoc-leu-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除fmoc-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟7)中，h-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記丙氨酸(fmoc-ala-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，h-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記丙氨酸(fmoc-ala-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除fmoc-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟8)中，h-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與fmoc保護的非標記或者標記組氨酸(fmoc-his-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，h-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和fmoc保護的非標記或者標記組氨酸(fmoc-his-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除fmoc-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中fmoc保護基采用的試劑為三乙胺、二乙胺、哌啶中的一種或幾種，溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙醚中的一種或幾種，fmoc-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、脫除用試劑和溶劑的摩爾比為1:1:5-1:3:15，反應溫度0-20℃，反應時間2-6小時。

步驟9)中，h-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2與cbz保護的非標記或者標記賴氨酸(cbz-lys-oh)進行偶合的工藝條件為：縮合劑為edci、dmap、dcc中的一種或兩種混合物與hbtu、hctu、hobt、hoct中的一種或者兩種混合物的混合液，溶劑為氯仿，反應溫度為0-20℃，h-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2和cbz保護的非標記或者標記賴氨酸(cbz-lys-oh)及縮合劑的摩爾比為1:1:1.1-1:1:2；脫除cbz-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2中cbz保護基是在金屬鈀催化下通入氫氣或溴化氫/醋酸混合溶劑；cbz-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、金屬鈀和氫氣摩爾比為1:0.01:1-1:0.05:15，反應溫度為0-50℃，反應時間1-4小時；cbz-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2、溴化氫/醋酸的摩爾比為1:1-1:5，反應溫度為0-50℃，反應時間1-4小時。

制備得到的α-乳白蛋白特征肽段vginywlahk為穩(wěn)定同位素標記¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記，其分子結構式如下所示：h-lys-his-ala-leu-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2，其中，

h-lys-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-his-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-ala-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-leu-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-trp-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-tyr-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-asn-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-ile-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-gly-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記；h-val-nh2為¹³c、¹⁵n、d三種同位素中的一種或者多種標記。

下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應當指出的是，對本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。

實施例1

穩(wěn)定同位素標記h-lys-¹³c6-his-¹³c6-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

1、fmoc-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-val-¹³c5-nh21.22g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-gly-¹³c2-oh3.0g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物3.45g，收率85.5％，純度99.0％，豐度99.1atom％¹³c。

2、h-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh24.0g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物1.56g，收率86.2％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹³c。

3、fmoc-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh21.81g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-ile-¹³c6-oh3.53g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物4.37g，收率84.8％，純度98.8％，豐度99.1atom％¹³c。

4、h-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh25.15g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物2.56g，收率85.2％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹³c。

5、fmoc-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh23.0g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-asn-¹³c4-oh3.54g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物5.80g，收率88.1％，純度98.6％，豐度99.1atom％¹³c。

6、h-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh26.58g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物3.54g，收率84.7％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹³c。

7、fmoc-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh24.18g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-tyr-¹³c9-oh4.12g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物6.81g，收率83.9％，純度98.8％，豐度99.1atom％¹³c。

8、h-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh28.11g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物5.05g，收率85.5％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹³c。

9、fmoc-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh25.90g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-trp-¹³c11-oh4.37g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物8.84g，收率87.5％，純度98.6％，豐度99.1atom％¹³c。

10、h-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh210.1g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物6.67g，收率84.6％，純度98.7％，豐度99.1atom％¹³c。

11、fmoc-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh27.89g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-leu-¹³c6-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物9.74g，收率86.2％，純度98.9％，豐度99.1atom％¹³c。

12、h-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh211.3g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物7.94g，收率87.4％，純度98.6％，豐度99.1atom％¹³c。

13、fmoc-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh29.09g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-ala-¹³c3-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物10.6g，收率88.0％，純度98.4％，豐度99.1atom％¹³c。

14、h-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh212.0g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物8.51g，收率86.5％，純度98.6％，豐度99.1atom％¹³c。

15、fmoc-his-¹³c6-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh29.84g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-his-¹³c6-oh3.83g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物12.07g，收率89.5％，純度98.9％，豐度99.1atom％¹³c。

16、h-his-¹³c6-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-his-¹³c6-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh212.0g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物9.78g，收率86.7％，純度98.6％，豐度99.1atom％¹³c。

17、fmoc-lys-¹³c6-his-¹³c6-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

將h-his-¹³c6-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh211.28g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-lys-¹³c6-oh3.74g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物12.98g，收率87.5％，純度98.9％，豐度99.1atom％¹³c。

18、h-lys-¹³c6-his-¹³c6-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh2的合成

取fmoc-lys-¹³c6-his-¹³c6-ala-¹³c3-leu-¹³c6-trp-¹³c11-tyr-¹³c9-asn-¹³c4-ile-¹³c6-gly-¹³c2-val-¹³c5-nh214.84g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物10.8g，收率85.5％，純度98.7％，豐度99.1atom％¹³c。

實施例2

穩(wěn)定同位素標記h-lys-¹⁵n2-his-¹⁵n3-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

1、fmoc-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-val-¹⁵n-nh21.17g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-gly-¹⁵n-oh3.0g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物3.48g，收率87.7％，純度98.9％，豐度99.5atom％¹⁵n。

2、h-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh24.00g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物1.53g，收率88.2％，純度98.5％，豐度99.5atom％¹⁵n。

3、fmoc-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh21.74g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-ile-¹⁵n-oh3.53g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物4.30g，收率84.3％，純度99.0％，豐度99.5atom％¹⁵n。

4、h-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh25.10g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物2.57g，收率89.0％，純度98.7％，豐度99.5atom％¹⁵n。

5、fmoc-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh22.87g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-asn-¹⁵n-oh3.54g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物5.35g，收率85.9％，純度98.3％，豐度99.5atom％¹⁵n。

6、h-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh26.23g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物3.42g，收率85.3％，純度98.6％，豐度99.5atom％¹⁵n。

7、fmoc-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh24.01g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-tyr-¹⁵n-oh4.12g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物6.68g，收率84.9％，純度98.4％，豐度99.5atom％¹⁵n。

8、h-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh27.87g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物4.92g，收率87.2％，純度98.8％，豐度99.5atom％¹⁵n。

9、fmoc-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh25.65g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-trp-¹⁵n2-oh4.37g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物8.39g，收率86.1％，純度98.2％，豐度99.5atom％¹⁵n。

10、h-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh29.74g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物6.46g，收率85.9％，純度97.7％，豐度99.5atom％¹⁵n。

11、fmoc-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh27.51g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-leu-¹⁵n-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物9.27g，收率85.3％，純度98.9％，豐度99.5atom％¹⁵n。

12、h-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh210.87g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物7.42g，收率85.8％，純度98.4％，豐度99.5atom％¹⁵n。

13、fmoc-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh28.65g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-ala-¹⁵n-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物10.07g，收率87.0％，純度97.7％，豐度99.5atom％¹⁵n。

14、h-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2-nh211.58g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物9.17g，收率86.9％，純度98.3％，豐度99.5atom％¹⁵n。

15、fmoc-his-¹⁵n3-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh210.56g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-his-¹⁵n3-oh3.83g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物12.55g，收率88.5％，純度96.9％，豐度99.5atom％¹⁵n。

16、h-his-¹⁵n3-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-his-¹⁵n3-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh214.18g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物10.21g，收率85.4％，純度97.6％，豐度99.5atom％¹⁵n。

17、fmoc-lys-¹⁵n2-his-¹⁵n3-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

將h-his-¹⁵n3-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh211.96g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-lys-¹⁵n-oh3.74g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物13.53g，收率87.5％，純度98.0％，豐度99.5atom％¹⁵n。

18、h-lys-¹⁵n2-his-¹⁵n3-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh2的合成

取fmoc-lys-¹⁵n2-his-¹⁵n3-ala-¹⁵n-leu-¹⁵n-trp-¹⁵n2-tyr-¹⁵n-asn-¹⁵n-ile-¹⁵n-gly-¹⁵n-val-¹⁵n-nh215.46g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物11.40g，收率86.1％，純度97.9％，豐度99.5atom％¹⁵n。

實施例3

穩(wěn)定同位素標記h-lys-d2-his-d2-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

1、fmoc-gly-d2-val-d6-nh2的合成

將h-val-d6-nh21.23g(0.01mol)溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-gly-d2-oh3.0g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物3.46g，收率86.0％，純度99.0％，豐度98.5atom％d。

2、h-gly-d2-val-d6-nh2的合成

取fmoc-gly-d2-val-d6-nh24.0g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物1.55g，收率85.5％，純度98.5％，豐度98.5atom％d。

3、fmoc-ile-d6-gly-d2-val-¹³d6-nh2的合成

將h-gly-d2-val-¹³d6-nh21.82g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-ile-d6-oh3.53g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物4.45g，收率86.2％，純度98.8％，豐度98.5atom％d。

4、h-ile-d6-gly-d2-val-¹³d6-nh2的合成

取fmoc-ile-d6-gly-d2-val-¹³d6-nh25.17g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物2.50g，收率85.0％，純度98.5％，豐度98.5atom％d。

5、fmoc-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

將h-ile-d6-gly-d2-val-¹³d6-nh22.95g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-asn-d2-oh3.56g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物5.72g，收率88.1％，純度98.6％，豐度98.5atom％d。

6、h-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

取fmoc-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh26.49g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物3.62g，收率85.0％，純度98.5％，豐度98.5atom％d。

7、fmoc-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

將h-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh24.26g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-tyr-d2-oh4.05g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物7.0g，收率86.0％，純度98.8％，豐度98.5atom％d。

8、h-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

取fmoc-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh28.14g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物5.03g，收率85.0％，純度98.5％，豐度98.5atom％d。

9、fmoc-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

將h-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh25.92g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-trp-d2-oh4.28g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物8.62g，收率86.0％，純度98.6％，豐度98.5atom％d。

10、h-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

取fmoc-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh210.0g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物6.68g，收率85.6％，純度98.7％，豐度98.5atom％d。

11、fmoc-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

將h-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh27.80g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-leu-d6-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物9.69g，收率86.5％，純度98.9％，豐度98.5atom％d。

12、h-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

取fmoc-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh211.2g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物7.82g，收率87.0％，純度98.6％，豐度98.5atom％d。

13、fmoc-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

將h-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh28.99g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-ala-^d3-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物11.0g，收率89.0％，純度98.4％，豐度98.5atom％d。

14、h-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

取fmoc-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh212.4g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物8.75g，收率86.0％，純度98.6％，豐度98.5atom％d。

15、fmoc-his-d2-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

將h-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh210.2g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-his-d2-oh3.79g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物11.95g，收率86.6％，純度98.9％，豐度98.5atom％d。

16、h-his-d2-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

取fmoc-his-d2-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh213.8g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物9.90g，收率85.5％，純度98.6％，豐度98.5atom％d。

17、fmoc-lys-d2-his-d2-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

將h-his-d2-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh211.57g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-lys-d2-oh3.70g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物11.69g，收率88.0％，純度98.9％，豐度98.5atom％d。

18、h-lys-d2-his-d2-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh2的合成

取fmoc-lys-d2-his-d2-ala-d3-leu-d6-trp-d2-tyr-d2-asn-d2-ile-d6-gly-d2-val-d6-nh215.09g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物11.2g，收率86.6％，純度98.7％，豐度98.5atom％d。

實施例4

穩(wěn)定同位素標記h-lys-his-ala-leu-¹³c6-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2合成

1、fmoc-leu-¹³c6-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2的合成

將h-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh27.51g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-leu-¹³c6-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物9.45g，收率86.5％，純度98.6％，豐度99.1atom％¹³c。

2、h-leu-¹³c6-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2的合成

取fmoc-leu-¹³c6-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh210.92g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物7.5g，收率86.2％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹³c。

3、fmoc-lys-his-ala-leu-¹³c6-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2的合成

將h-leu-¹³c6-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh28.71g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoclys-his-ala-oh3.53g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物12.08g，收率84.5％，純度98.8％，豐度99.1atom％¹³c。

4、h-lys-his-ala-leu-¹³c6-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh2的合成

取fmoc-lys-his-ala-leu-¹³c6-trp-tyr-asn-ile-gly-val-nh214.29g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物10.44g，收率86.4％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹³c。

實施例5

穩(wěn)定同位素標記h-lys-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh2的合成

1、fmoc-ile-d8-gly-val-nh2的合成

將h-gly-val-nh21.74g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-ile-d8-oh3.61g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物4.56g，收率88.2％，純度98.8％，豐度99.1atom％d。

2、h-ile-d8-gly-val-nh2的合成

取fmoc-ile-d8-gly-val-nh25.18g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物2.59g，收率87.5％，純度98.5％，豐度99.1atom％d。

3、fmoc-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh2的合成

將h-ile-d8-gly-val-nh22.96g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-trp-tyr-asn-oh7.39g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物9.08g，收率89.2％，純度98.5％，豐度99.1atom％d。

4、h-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh2的合成

取fmoc-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh210.18g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物6.74g，收率84.7％，純度98.5％，豐度99.1atom％d。

5、fmoc-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh2的合成

將h-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh27.96g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-leu-d6-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物9.86g，收率86.7％，純度98.5％，豐度99.1atom％d。

6、h-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh2的合成

取fmoc-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh211.37g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物7.80g，收率85.3％，純度98.7％，豐度99.1atom％d。

7、fmoc-lys-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh2的合成

將h-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh29.15g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-lys-his-ala-oh6.12g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物13.15g，收率87.1％，純度98.5％，豐度99.1atom％d。

8、h-lys-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh2的合成

取fmoc-lys-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-d8-gly-val-nh215.09g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物11.47g，收率89.0％，純度98.5％，豐度99.1atom％d。

實施例6

穩(wěn)定同位素標記h-lys-¹³c6-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

1、fmoc-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

將h-gly-val-nh21.74g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-ile-¹⁵n1-oh3.54g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物4.41g，收率86.4％，純度98.6％，豐度99.1atom％¹⁵n。

2、h-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

取fmoc-ile-¹⁵n1-gly-val-nh25.10g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及二乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物4.37g，收率85.6％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹⁵n。

3、fmoc-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

將h-ile-¹⁵n1-gly-val-nh22.89g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-trp-tyr-asn-oh7.39g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物8.84g，收率87.5％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹⁵n。

4、h-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

取fmoc-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh210.10g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物6.82g，收率86.4％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹⁵n。

5、fmoc-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

將h-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh27.89g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-leu-d6-oh3.59g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物10.04g，收率88.8％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹⁵n,d。

6、h-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

取fmoc-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh211.31g溶于50ml氯仿中，加入二乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物7.98g，收率87.7％，純度98.7％，豐度99.1atom％¹⁵n,d。

7、fmoc-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

將h-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh29.10g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-his-ala-oh4.66g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物11.48g，收率84.5％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹⁵n,d。

8、h-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

取fmoc-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh213.58g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物9.86g，收率86.7％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹⁵n,d。

9、fmoc-lys-¹³c6-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

將h-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh211.37g溶于10ml三氯甲烷中，攪拌下加入diea1.29g，溶解，待用；稱取fmoc-lys-¹³c6-oh3.74g和hoct3.0g溶于15ml三氯甲烷中，攪拌下滴加dic1.5g，反應10分鐘，然后將此溶液加入開始的混合液中，室溫反應3小時，薄層色譜檢測反應完全，反應液過濾后用碳酸氫鈉溶液、鹽酸、飽和食鹽水依次洗滌，然后用無水氯化鎂干燥，減壓濃縮，加入乙醚析晶得到白色固體即為目標產物13.02g，收率87.2％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹³c,¹⁵n,d。

10、h-lys-¹³c6-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh2的合成

取fmoc-lys-¹³c6-his-ala-leu-d6-trp-tyr-asn-ile-¹⁵n1-gly-val-nh214.93g溶于50ml氯仿中，加入三乙胺5ml，反應4小時，薄層色譜監(jiān)控反應完全后，減壓去除溶劑及三乙胺，用二氯甲烷溶解，依次用稀鹽酸、碳酸鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，制備色譜分離得到白色固體即為目標產物10.98g，收率86.3％，純度98.5％，豐度99.1atom％¹³c,¹⁵n,d。

以上對本發(fā)明的具體實施例進行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實施方式，本領域技術人員可以在權利要求的范圍內做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實質內容。