本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種具有dna甲基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去乙?；敢种苹钚缘漠惲u肟酸衍生物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥是當(dāng)今引起人類死亡的第一病因，研發(fā)高效低毒的抗腫瘤藥物迫在眉睫。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展既與基因異常密切相關(guān)，也與表觀遺傳改變有著緊密的關(guān)系。與基因異常(如癌基因或抑癌基因的擴增、易位、刪除及點突變)不同，表觀遺傳的改變不涉及dna序列的變化，能在細胞分裂中保持親本的遺傳信息，但一定條件下可以發(fā)生逆轉(zhuǎn)，使惡性細胞群體轉(zhuǎn)變?yōu)檎５募毎?。因此在表觀遺傳中起調(diào)控作用的酶被認為是抗腫瘤藥物研發(fā)的新一代靶點。

dna甲基轉(zhuǎn)移酶(dnamethyltransferases,dnmts)和組蛋白去乙?；?histonedeacetylases,hdacs)分別催化dna的甲基化和組蛋白的去乙?；?，是表觀遺傳的重要調(diào)控方式。dnmts和hdacs在細胞中高表達能沉默抑癌基因，促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。大量的dnmts抑制劑和hdacs抑制劑被研發(fā)出來以治療腫瘤，一些dnmts抑制劑和hdacs抑制劑在臨床中表現(xiàn)出良好的抗腫瘤效果，目前已有兩個dnmts抑制劑(阿扎胞苷，地西他濱)和五個hdacs抑制劑(vorinostat,romidepsin,belinostat,panobinostat,chidamide)上市。

dna甲基化、組蛋白去乙?；腿旧|(zhì)重塑在生理功能上具有緊密的聯(lián)系，一起影響抑癌基因的表達。dnmts和hdacs也能通過直接或間接的方式相互影響。一方面，研究發(fā)現(xiàn)單用dnmts或hdacs的抑制劑時，另一個酶的高表達仍能導(dǎo)致腫瘤抑癌基因的沉默，這樣的代償機制使得腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性，降低了治療效果。另一方面，臨床研究表明低劑量的dnmt抑制劑和hdac抑制劑聯(lián)合用藥具有明顯的協(xié)同效應(yīng)。因此同時靶向dnmts和hdacs的抑制劑可能能更有效地使沉默的抑癌基因重新表達，且使腫瘤細胞更難以產(chǎn)生耐藥性，但目前還沒有這方面的報導(dǎo)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一是提供一類具有dnmts和hdacs抑制活性的異羥肟酸類多靶點抑制劑及其制備方法。

本發(fā)明所提供的異羥肟酸類多靶點抑制劑，其結(jié)構(gòu)式如式ⅰ所示。

上述式i中，ar為芳香基團，所述芳香基團選自取代的或非取代的苯環(huán)、取代的或非取代的芳香雜環(huán)、取代的或非取代的苯并雜環(huán)、取代的或非取代的芳香雜環(huán)并雜環(huán)；

優(yōu)選地，所述芳雜環(huán)選自4元、5元、6元或7元芳雜環(huán)，雜環(huán)上包含1、2或3個雜原子，雜原子獨立地選自n、s、o；

所述芳雜環(huán)選自吡啶基、吡啶基-n-氧化物、嘧啶基、噠嗪基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡喃基、吡咯；

所述苯并雜環(huán)選自喹啉、異喹啉基、嘌呤基、吲哚基、苯并咪唑、吡咯并吡啶、二氫苯并二噁英、苯并間二氧雜環(huán)戊烯；

芳香基團上的取代基為1-5個，優(yōu)選為1、2、3、4或5個；取代基選自c1-c6的烷基、c1-c6的烯基、c1-c6的炔基、羥基、硝基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、丙烯酰胺基、氰基、氟基、氯基、溴基、碘基；

優(yōu)選地，所述芳香基團選自

n＝1、2、3、4、5或6；

l1的連接位置為苯環(huán)的鄰位，間位或?qū)ξ?；l1為碳鍵或烷基鏈，包括但不限于亞甲基，乙撐基，乙烯基，乙炔基。

上述式i所示化合物藥學(xué)上可接受的鹽也屬于本發(fā)明的保護范圍。

其中，所述藥學(xué)上可接受的鹽為無機酸鹽或有機酸鹽。

所述無機酸鹽選自下述任意一種無機酸形成的鹽：鹽酸、硫酸或磷酸。

所述有機酸鹽選自下述任意一種有機酸形成的鹽：乙酸、三氟乙酸、丙二酸、檸檬酸和對甲苯磺酸。

上述式i所示的異羥肟酸衍生物優(yōu)選為下述任意一種：

上述式i所示的異羥肟酸類化合物是按照包括下述步驟的方法制備得到的；

1)在縮合劑作用下，將式ii所示的化合物與式iii所示的化合物進行反應(yīng)得到式iv所示的化合物；或?qū)⑹絠i所示的化合物與氯化亞砜、草酰氯或三氯氧磷制備成相應(yīng)的酰氯衍生物后與式iii所示的化合物進行反應(yīng)得到式iv所示的化合物；

式ii、iii或iv中的ar、n或l1與式i中對應(yīng)的ar、n或l1的定義相同；

式iii中，r為c1-c4的烷基。

2)將式ⅳ所示化合物與羥胺或鹽酸羥胺在堿性溶液中反應(yīng)，得到式i所示化合物。

上述方法步驟1)中，所述縮合劑選自下述至少一種：苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯n,n'-羰基二咪唑、二環(huán)已基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺等。

所述步驟1)的反應(yīng)在有機溶劑中進行，所述有機溶劑選自二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、氯仿、二氯甲烷、丙酮、四氫呋喃、乙腈等中的一種或多種。

步驟1)所述縮合劑與式ii所示的化合物、式iii所示的化合物的摩爾比可以依次為1-4:1-2:1-4，具體可為1.5:1:1.1。

所述步驟1)的反應(yīng)的反應(yīng)溫度為20-80℃，反應(yīng)時間為3-12小時。

上述方法步驟2)中，所述堿選自氨水、三乙胺、二異丙基乙基胺、氫氧化鈉、氫氧化鉀、甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀等中的一種或多種。

所述步驟2)的反應(yīng)在水溶液或有機溶劑中進行，有機溶劑選自二甲基甲酰胺、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃、乙腈等中的一種或多種。

式ⅳ所示化合物與羥胺或鹽酸羥胺、堿反應(yīng)的摩爾比為1:1-10:1-20，具體可為1:5:5。

所述步驟2)反應(yīng)的反應(yīng)溫度為20-80℃，反應(yīng)時間為0.5-10小時；

本發(fā)明制備的化合物經(jīng)過高分辨質(zhì)譜，核磁共振，熔點等測試，證明所制備的化合物正確無誤，為通式ⅰ所示化合物。

本發(fā)明的再一個目的是提供式ⅰ所示化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的應(yīng)用。

本發(fā)明式ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的的用途是其在下述方面的應(yīng)用：

1)在制備dna甲基轉(zhuǎn)移酶和/或組蛋白去乙?；敢种苿┲械膽?yīng)用；

2)在制備真核生物腫瘤細胞增殖抑制劑中的應(yīng)用；

3)在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。

所述dna甲基轉(zhuǎn)移酶(dnmts)包括在哺乳動物細胞中已知的亞型(dnmt1，dnmt3a，dnmt3b)；所述組蛋白去乙?；?hdacs)包括在哺乳動物細胞中已知的亞型，主要包括但不限于hdac1，hdac2，hdac3，hdac8，hdac4，hdac5，hdac7，hdac9，hdac6，hdac10，hdac11。

所述真核生物為哺乳動物；所述腫瘤細胞為癌細胞；所述癌細胞為白血病癌細胞、乳腺癌細胞、肝癌細胞、胰腺癌細胞、肺癌細胞、腦癌細胞、卵巢癌細胞、子宮癌細胞、睪丸癌細胞、皮膚癌細胞、胃癌細胞、鼻咽癌細胞、結(jié)腸癌細胞、膀胱癌細胞或直腸癌細胞；優(yōu)選為為人慢性髓原白血病細胞和人組織細胞淋巴瘤細胞。

所述白血病癌細胞具體為人慢性粒細胞白血病(cml)細胞系k562，所述淋巴瘤細胞具體為人組織細胞淋巴瘤細胞u937，所述肺癌細胞具體為人肺癌細胞nci-h520，所述人腦膠質(zhì)瘤細胞具體為u251，所述黑色素癌細胞具體為a375，所述膠質(zhì)母細胞瘤細胞具體為人膠質(zhì)母細胞瘤細胞a172和人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞u-118mg，所述宮頸癌細胞具體為人宮頸癌細胞系hela，所述鼻咽癌細胞具體為鼻咽癌細胞株cne-2，所述肝癌細胞具體為人肝癌細胞株hepg2，所述乳腺癌細胞具體為人乳腺癌細胞mcf-7和mda-mb-231。

所述腫瘤為癌；所述癌為白血病、淋巴瘤、肺癌、黑色素癌、膠質(zhì)母細胞瘤、宮頸癌、鼻咽癌、肝癌、乳腺癌、腦癌、胰腺癌、卵巢癌、子宮癌、睪丸癌、皮膚癌、胃癌、結(jié)腸癌、膀胱癌或直腸癌。

本發(fā)明式ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽也可用于制備預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物。

以式ⅰ所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽為有效成分制備的預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物，也屬于本發(fā)明的保護范圍。

用式ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽制備的dna甲基轉(zhuǎn)移酶和/或組蛋白去乙?；敢种苿?、真核生物腫瘤細胞增殖抑制劑以及預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學(xué)介導(dǎo)的方法導(dǎo)入機體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導(dǎo)入機體。

需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。

用式ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽制備的預(yù)防和/或治療腫瘤藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。

本發(fā)明提供的化合物經(jīng)過多種腫瘤細胞系測試(包括白血病細胞、淋巴瘤細胞等)以及dna甲基轉(zhuǎn)移酶，組蛋白去乙酰化酶抑制活性測試，證明式ⅰ所示化合物是一種潛在的對dna甲基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去乙酰化酶有抑制活性的抗腫瘤藥物。本發(fā)明提供的化合物原料易得，制備方法簡單，實驗證明其有良好的抗癌效果，在抗腫瘤藥物設(shè)計研發(fā)領(lǐng)域有著良好的應(yīng)用前景。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明的范圍并不限定于此。

下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為有機合成的常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無特殊說明，均從商業(yè)途徑獲得。

實施例1

5-氯-n-(4-(3-(羥胺基)-3-丙酰)苯乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺(化合物1)

實施例1a

叔丁基(4-溴苯乙基)氨基甲酸酯

將4-溴苯乙胺(10g，50mmol)溶于250毫升二氯甲烷中，加入二碳酸二叔丁酯(12g，55mmol)，室溫下攪拌3小時，依次以飽和氯化銨水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、水、飽和食鹽水洗滌反應(yīng)液，有機相經(jīng)無水硫酸鎂干燥后旋干得粗品。乙醚中結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(白色固體，14.70g，98％產(chǎn)率)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.42(d,j＝8.4hz,2h),7.07(d,j＝8.3hz,2h),4.51(s,1h),3.35(br,2h),2.75(t,j＝7.0hz,2h),1.43(s,9h).

實施例1b

(e)-3-(4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

將實施例1a(3.0g,10mmol)、無水碳酸鉀(2.764g，20mmol)，催化量二三苯基膦二氯化鈀置于50ml圓底燒瓶中，加入二甲基甲酰胺(dmf)30ml，真空除氧并以氮氣置換后加入丙烯酸甲酯(1.8ml，20mmol)。于120～130℃反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后加入水并以乙酸乙酯萃取。有機相經(jīng)無水硫酸鎂干燥后旋干，并以去離子水洗滌后得到標(biāo)題化合物(白色固體，2.53g，83％產(chǎn)率)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.68(d,j＝16.0hz,1h),7.47(d,j＝7.8hz,2h),7.22(d,j＝7.8hz,2h),6.42(d,j＝16.1hz,1h),4.59(s,1h),3.81(s,3h),3.43–3.31(m,2h),2.82(t,j＝7.0hz,2h),1.34(s,9h).

實施例1c

3-(4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)苯基)丙酸甲酯

將實施例1b(3.05g，10mmol)溶于200ml甲醇中，加入300mg10％質(zhì)量分數(shù)的鈀碳，在2個大氣壓的氫氣下于高壓反應(yīng)釜中回流3h。之后過濾，旋除濾液后得到標(biāo)題化合物(白色固體，3.00g，98％得率)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.24–6.96(m,4h),4.54(s,1h),3.67(s,3h),3.36(d,j＝6.3hz,2h),2.93(t,j＝7.8hz,2h),2.76(t,j＝7.0hz,2h),2.70–2.55(m,2h),1.43(s,9h).

實施例1d

3-(4-(2-氨乙基)苯基)丙酸甲酯

將實施例1c(2.54g，8.28mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，冰浴下滴加三氟乙酸(12ml,165mmol)，之后室溫反應(yīng)3h。以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋除液體，加入碳酸氫鈉水溶液并以乙酸乙酯萃取。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后除去乙酸乙酯，粗品在乙醚中重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(淡黃色固體，1.42g，83％得率)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.16–7.08(m,4h),3.67(s,3h),2.99–2.88(m,4h),2.72(t,j＝6.9hz,2h),2.64–2.60(m,2h).

實施例1e

3-(4-(2-(5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)苯基)丙酸甲酯

將實施例1d(621mg，3mmol)、2-甲氧基-5-氯-苯甲酸(839mg，4.5mmol)、縮合劑hbtu(2.56g，6.75mmol)以及dmap(73mg，0.6mmol)溶于dmf中，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后硅膠柱色譜分離得標(biāo)題化合物(白色固體，844mg，75％得率)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.17(d,j＝2.8hz,1h),7.81(s,1h),7.36(dd,j＝8.8,2.8hz,1h),7.18(s,4h),6.85(d,j＝8.8hz,1h),3.75(s,3h),3.72(t,j＝6.8hz,3h),3.67(s,3h),2.95(t,j＝7.8hz,2h),2.89(t,j＝6.8hz,2h),2.63(t,j＝7.8hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ172.71,163.27,155.35,138.12,136.56,131.60,131.40,128.46,127.91,126.15,122.42,112.19,55.49,51.06,40.34,35.11,34.54,29.94.

實施例1f

5-氯-n-(4-(3-(羥胺基)-3-丙酰)苯乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺

將實施例1e(100mg，0.26mmol)加入到甲醇(2ml)中，接著加入鹽酸羥胺(180mg，2.6mmol)和叔丁醇鈉(375mg，3.9mmol)，室溫下反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后除去反應(yīng)溶劑并柱色譜分離得標(biāo)題化合物(淡黃色固體，31mg，32％得率)。熔點170～172℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.36(s,1h),8.70(s,1h),8.23(t,j＝5.6hz,1h),7.66(d,j＝2.8hz,1h),7.50(dd,j＝8.9,2.8hz,1h),7.20–7.11(m,5h),3.81(s,3h),3.48(q,j＝6.8hz,2h),2.78(t,j＝7.5hz,4h),2.25(t,j＝7.7hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ168.15,163.33,155.63,138.77,136.79,131.42,129.48,128.51,128.14,124.61,124.24,114.09,56.18,40.67,34.40,33.76,30.36.hrms(esi)m/z計算值[m-h]-375.1112,實測值375.1122.

實施例2

(e)-5-氯-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺(化合物2)

實施例2a

(e)-3-(4-(2-氨乙基)苯基)丙烯酸甲酯

將實施例1b(2.53g，8.28mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，冰浴下滴加三氟乙酸(12ml,165mmol)，之后室溫反應(yīng)3h。以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋除液體，加入碳酸氫鈉水溶液并以乙酸乙酯萃取。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后除去乙酸乙酯，粗品在乙醚中重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(淡黃色固體，1.15g，67％得率)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.75(br,2h),7.74–7.60(m,3h),7.32(d,j＝8.0hz,2h),6.64(d,j＝16.0hz,1h),3.73(s,3h),3.06(t,j＝7.8hz,1h),2.88(t,j＝7.9hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.57,144.11,139.98,132.49,129.19,128.52,117.37,51.34,33.12,33.05.

實施例2b

(e)-3-(4-(2-(5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

將實施例2a(615mg，3mmol)、2-甲氧基-5-氯-苯甲酸(839mg，4.5mmol)、縮合劑hbtu(2.56g，6.75mmol)以及dmap(73mg，0.6mmol)溶于dmf中，室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后硅膠柱色譜分離得標(biāo)題化合物(白色固體，908mg，81％得率)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.26(t,j＝5.6hz,1h),7.73–7.57(m,4h),7.50(dd,j＝8.8,2.8hz,1h),7.32(d,j＝8.0hz,2h),7.15(d,j＝8.9hz,1h),6.62(d,j＝16.1hz,1h),3.81(s,3h),3.72(s,3h),3.52(dt,j＝5.6,7.1hz,2h),2.87(t,j＝7.1hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.62,163.44,155.61,144.31,142.20,131.96,131.37,129.43,129.22,128.32,124.73,124.24,117.01,114.08,56.17,51.29,40.29,34.65.

實施例2c

(e)-5-氯-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺

將實施例1e(100mg，0.27mmol)加入到甲醇(2ml)中，接著加入鹽酸羥胺(180mg，2.6mmol)和叔丁醇鈉(375mg，3.9mmol)，室溫下反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后除去反應(yīng)溶劑并柱色譜分離得標(biāo)題化合物(淡黃色固體，37mg，37％得率)。熔點158～160℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.74(s,1h),9.04(s,1h),8.26(t,j＝5.6hz,1h),7.63(d,j＝2.8hz,1h),7.56–7.48(m,3h),7.44(d,j＝15.7hz,1h),7.30(d,j＝7.8hz,2h),7.15(d,j＝8.9hz,1h),6.43(d,j＝15.8hz,1h),3.82(s,3h),3.51(q,j＝6.7hz,2h),2.85(t,j＝7.1hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ163.43,155.62,140.93,132.82,131.37,129.44,129.19,127.41,124.77,124.26,118.37,114.11,56.18,40.36,34.61.hrms(esi)m/z計算值[m+h]+375.1112,實測值375.1122.

實施例3

(e)-5-氯-n-(3-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺(化合物3)

實施例3a

叔丁基(3-溴苯乙基)氨基甲酸酯

以間溴苯乙胺為原料，制備方法同實施例1a。得率為97％。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.36(dd,j＝7.5,1.4hz,2h),7.21–7.15(m,1h),7.12(d,j＝7.7hz,1h),4.55(s,1h),3.36(q,j＝6.8hz,2h),2.77(t,j＝7.1hz,2h),1.44(s,9h).

實施例3b

(e)-3-(3-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以實施例3a為原料，制備方法同實施例1b。得率為86％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.64(d,j＝16.1hz,1h),7.58–7.48(m,2h),7.34(t,j＝7.8hz,1h),7.26(d,j＝7.6hz,1h),6.92(t,j＝5.6hz,1h),6.63(d,j＝16.0hz,1h),3.73(s,3h),3.26–3.04(m,2h),2.72(t,j＝7.3hz,2h),1.36(s,9h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.54,155.41,144.55,140.14,133.84,130.83,128.72,128.34,126.10,117.56,77.38,54.78,51.34,40.97,34.99,28.13.

實施例3c

(e)-3-(3-(2-氨乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以實施例3b為原料，制備方法同實施例2a。得率為72％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.98(br,2h),7.72–7.56(m,3h),7.39(t,j＝7.6hz,1h),7.33(d,j＝7.6hz,1h),6.68(d,j＝16.1hz,1h),3.73(s,1h),3.07(t,j＝7.9hz,1h),2.91(br,1h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.52,144.31,138.12,134.19,130.78,129.07,128.39,126.74,117.94,51.39,32.84.

實施例3d

(e)-3-(3-(2-(5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以實施例3c為原料，制備方法同實施例2b。得率為77％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.26(t,j＝5.7hz,1h),7.69–7.56(m,4h),7.50(dd,j＝8.8,2.8hz,1h),7.38(t,j＝7.5hz,1h),7.33(t,j＝7.6hz,1h),7.15(d,j＝8.9hz,1h),6.65(d,j＝16.0hz,1h),3.79(s,3h),3.73(s,3h),3.54(dt,j＝5.7,7.1hz,2h),2.86(t,j＝7.1hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.54,163.49,155.56,144.48,140.10,133.94,131.32,130.88,129.36,128.84,128.45,126.28,124.88,124.22,117.67,114.05,56.14,51.36,40.23,34.45.

實施例3e

(e)-5-氯-n-(3-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺

以實施例3d為原料，制備方法同實施例2c。得率為35％。熔點124～126℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.27(t,j＝5.6hz,1h),7.63(d,j＝2.8hz,1h),7.50(dd,j＝8.8,2.8hz,1h),7.48–7.38(m,3h),7.36(t,j＝7.5hz,1h),7.27(d,j＝7.5hz,1h),7.15(d,j＝8.9hz,1h),6.47(d,j＝15.8hz,1h),3.80(s,3h),3.53(q,j＝6.7hz,2h),2.85(t,j＝7.1hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ163.45,162.59,155.59,139.98,137.80,134.92,131.36,129.71,129.41,128.85,127.56,125.38,124.76,124.24,119.25,114.07,56.15,40.44,34.63.hrms(esi)m/z計算值[m-h]-373.0955,實測值373.0954.

實施例4

(e)-2-氯-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(化

合物4)

實施例4a

(e)-3-(4-(2-(2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酰胺基)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以2-氯-5-(三氟甲基)苯甲酸和實施例2a為原料，制備方法同實施例2b。得率為65％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(t,j＝5.6hz,1h),7.81(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),7.74(d,j＝8.4hz,1h),7.70–7.56(m,4h),7.33(d,j＝7.9hz,2h),6.61(d,j＝16.1hz,1h),3.72(s,3h),3.51(td,j＝5.6,7.1hz,2h),2.88(t,j＝7.1hz,2h)；¹⁹fnmr(376mhz,dmso)δ-61.17；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.61,164.75,144.30,142.00,137.68,134.33,131.98,130.73,129.30,128.25,127.74,127.22,125.49,124.77,116.98,51.30,40.05,34.49.

實施例4b

(e)-2-氯-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺

以實施例4a為原料，制備方法同實施例2c。得率為29％。熔點162～163℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.72(s,1h),9.03(s,1h),8.69(t,j＝5.6hz,1h),7.81(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),7.74(d,j＝8.4hz,1h),7.63(d,j＝2.2hz,1h),7.50(d,j＝7.8hz,2h),7.43(d,j＝15.7hz,1h),7.31(d,j＝7.8hz,2h),6.43(d,j＝15.8hz,1h),3.50(q,j＝6.7hz,2h),2.87(t,j＝7.2hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ164.74,140.73,137.98,137.70,134.32,132.82,130.72,129.28,127.75,127.42,127.33,125.50,125.46,124.78,122.07,118.31,39.15,38.97,34.45.hrms(esi)m/z計算值[m-h]^-411.0723,實測值411.0717.

實施例5

(e)-4-羥基-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物5)

實施例5a

(e)-3-(4-(2-(4-羥基-3-甲氧基苯甲酰胺基)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以4-羥基-3-甲氧基苯甲酸和實施例2a為原料，制備方法同實施例2b。得率為69％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.56(s,1h),8.36(t,j＝5.6hz,1h),7.77–7.55(m,3h),7.47–7.21(m,4h),6.80(d,j＝8.3hz,1h),6.61(d,j＝16.0hz,1h),3.80(s,3h),3.72(s,3h),3.47(dt,j＝5.6,7.3hz,2h),2.87(t,j＝7.3hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.63,165.76,149.28,146.98,144.35,142.48,131.84,129.17,128.31,125.50,120.47,116.90,114.67,111.18,55.54,51.30,40.40,35.01.

實施例5b

(e)-4-羥基-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-3-甲氧基苯甲酰胺

以實施例5a為原料，制備方法同實施例2c。得率為34％。熔點150～152℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.33(s,1h),7.46(d,j＝7.8hz,2h),7.42–7.13(m,5h),6.78(d,j＝8.2hz,1h),6.39(d,j＝15.8hz,1h),3.79(s,3h),3.50–3.41(m,2h),2.83(t,j＝7.4hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ165.82,162.81,149.88,147.10,140.93,137.03,132.94,129.11,127.27,125.09,120.54,119.00,114.75,111.22,55.54,40.51,35.01.hrms(esi)m/z計算值[m-h]^-355.1294,實測值355.1303.

實施例6

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)苯并[d][1,3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-甲酰胺(化合物6)

實施例6a

(e)-3-(4-(2-(苯并[d][1,3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-甲酰胺)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以胡椒酸和實施例2a為原料，制備方法同實施例2b。得率為73％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.39(t,j＝5.6hz,1h),7.75–7.54(m,3h),7.40(dd,j＝8.2,1.7hz,1h),7.34(d,j＝1.7hz,1h),7.28(d,j＝7.9hz,2h),6.97(d,j＝8.1hz,1h),6.60(d,j＝16.1hz,1h),6.08(s,2h),3.72(s,3h),3.47(td,j＝5.6,7.2hz,2h),2.86(t,j＝7.2hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.64,165.14,149.46,147.15,144.35,142.40,131.85,129.17,128.43,128.31,121.92,116.91,107.70,107.08,101.50,51.31,40.45,34.84.

實施例6b

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)苯并[d][1,3]間二氧雜環(huán)二烯-5-

甲酰胺

以實施例6a為原料，制備方法同實施例2c。得率為41％。熔點186～187℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.72(s,1h),9.02(s,1h),8.40(t,j＝5.6hz,1h),7.52–7.37(m,4h),7.35(d,j＝1.7hz,1h),7.27(d,j＝7.8hz,2h),6.97(d,j＝8.1hz,1h),6.41(d,j＝15.8hz,1h),6.09(s,2h),3.46(q,j＝6.7hz,2h),2.84(t,j＝7.3hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ165.16,162.76,149.45,147.16,141.15,138.08,132.68,129.14,128.50,127.39,121.92,118.29,107.69,107.09,101.49,40.53,34.82.hrms(esi)m/z計算值[m-h]^-353.1137,實測值353.1129.

實施例7

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二噁英-6-甲酰胺(化合物7)

實施例7a

(e)-3-(4-(2-(2,3-二氫苯并[b][1,4]二噁英-6-甲酰胺)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以2,3-二氫-1,4-苯并二烷-6-羧酸和實施例2a為原料，制備方法同實施例2b。得率為69％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.37(t,j＝5.6hz,1h),7.76–7.56(m,3h),7.46–7.18(m,4h),6.90(d,j＝8.1hz,1h),6.59(d,j＝16.1hz,1h),4.40–4.13(m,4h),3.72(s,3h),3.46(td,j＝5.6,7.2hz,2h),2.85(t,j＝7.2hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.62,165.21,145.79,144.33,142.76,142.43,131.85,129.16,128.28,127.52,120.42,116.93,116.56,116.02,64.21,63.90,51.28,40.36,34.85.

實施例7b

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二噁英-6-

甲酰胺

以實施例7a為原料，制備方法同實施例2c。得率為35％。熔點187～189℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.39(t,j＝5.6hz,1h),7.48(d,j＝7.9hz,2h),7.42(d,j＝15.7hz,1h),7.37–7.30(m,2h),7.26(d,j＝7.9hz,2h),6.90(d,j＝8.1hz,1h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),4.32–4.23(m,4h),3.45(q,j＝6.7hz,2h),2.84(t,j＝7.3hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ165.20,162.68,145.78,142.76,141.15,137.96,132.69,129.13,127.53,127.37,120.42,118.32,116.56,116.02,64.21,63.90,40.45,34.82.hrms(esi)m/z計算值[m-h]^-367.1294,實測值367.1302.

實施例8

(e)-5-氟-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)煙酰胺(化合物8)

實施例8a

(e)-3-(4-(2-(5-氟代煙酰胺)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以5-氟煙酸和實施例2a為原料，制備方法同實施例2b。得率為65％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.87(t,j＝5.6hz,1h),8.84(t,j＝1.8hz,1h),8.74(d,j＝2.8hz,1h),8.03(ddd,j＝9.6,2.9,1.7hz,1h),7.76–7.54(m,3h),7.31(d,j＝8.1hz,2h),6.61(d,j＝16.0hz,1h),3.72(s,3h),3.53(dt,j＝5.6,7.2hz,2h),2.89(t,j＝7.2hz,2h)；¹⁹fnmr(376mhz,dmso)δ-126.86；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ167.18,163.86,160.49,157.96,145.00,144.96,144.87,142.65,140.69,140.47,132.52,132.09,132.06,129.76,128.91,122.23,122.03,117.56,51.87,41.08,35.19.

實施例8b

(e)-5-氟-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)煙酰胺

以實施例8a為原料，制備方法同實施例2c。得率為33％。熔點189～190℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.74(s,1h),9.07(s,1h),8.88(t,j＝5.6hz,1h),8.85(s,1h),8.74(d,j＝2.8hz,1h),8.04(d,j＝9.4hz,1h),7.50(d,j＝7.8hz,2h),7.43(d,j＝15.8hz,1h),7.29(d,j＝7.8hz,2h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),3.52(q,j＝6.8hz,2h),2.88(t,j＝7.2hz,2h).¹⁹fnmr(376mhz,dmso)δ-126.86；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ163.28,162.66,159.93,157.39,144.44,144.40,140.82,140.12,139.90,137.98,132.78,131.54,131.51,129.18,127.42,121.67,121.48,118.34,40.60,34.59.hrms(esi)m/z計算值[m+h]⁺330.1254,實測值330.1261.

實施例9

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)喹啉-6-甲酰胺(化合物9)

實施例9a

(e)-3-(4-(2-(喹啉-6-甲酰胺)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以喹啉-6-羧酸和實施例2a為原料，制備方法同實施例2b。得率為71％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.99(dd,j＝4.2,1.7hz,1h),8.85(t,j＝5.5hz,1h),8.47(td,j＝4.2,1.7hz,2h),8.14(dd,j＝8.8,2.0hz,1h),8.08(d,j＝8.8hz,1h),7.71–7.57(m,4h),7.33(d,j＝8.1hz,2h),6.61(d,j＝16.1hz,1h),3.72(s,3h),3.57(td,j＝5.5,7.2hz,2h),2.93(t,j＝7.2hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ166.63,165.63,151.88,148.52,144.34,142.32,136.94,132.28,131.91,129.20,128.87,128.35,127.67,127.54,126.98,122.04,116.95,51.30,40.58,34.82.

實施例9b

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)喹啉-6-甲酰胺

以實施例9a為原料，制備方法同實施例2c。得率為38％。熔點186～188℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.98(dd,j＝4.2,1.7hz,1h),8.83(t,j＝5.6hz,1h),8.51–8.43(m,2h),8.15(dd,j＝8.8,1.9hz,1h),8.07(d,j＝8.8hz,1h),7.61(dd,j＝8.3,4.2hz,1h),7.50(d,j＝7.8hz,2h),7.43(d,j＝15.8hz,1h),7.32(d,j＝7.8hz,2h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),3.62–3.52(m,2h),2.92(t,j＝7.3hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ165.64,162.70,151.86,148.53,141.05,137.98,136.92,132.76,132.33,129.18,128.86,127.66,127.55,127.42,126.99,122.03,118.35,40.66,34.80.hrms(esi)m/z計算值[m-h]^-360.1348,實測值360.1350.

實施例10

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺(化合物10)

實施例10a

(e)-3-(4-(2-(1h-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺基)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以1h-苯并咪唑-5-羧酸和實施例2a為原料，制備方法同實施例2b。得率為76％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.71(s,1h),8.54(t,j＝5.6hz,1h),8.33(s,1h),8.20–8.07(m,1h),7.75–7.56(m,5h),7.32(d,j＝7.9hz,2h),6.60(d,j＝16.1hz,1h),3.72(s,3h),3.53(q,j＝6.8hz,2h),2.95–2.87(m,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ167.75,166.62,166.58,144.34,143.62,142.52,131.84,129.18,128.29,127.07,124.31,121.18,118.99,116.92,109.53,51.27,40.50,34.93.

實施例10b

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺

以實施例10a為原料，制備方法同實施例2c。得率為32％。熔點179～181℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.68(s,1h),10.74(s,1h),9.03(s,1h),8.54(t,j＝5.5hz,1h),8.32(s,1h),8.14(s,1h),7.72(br,1h),7.62(br,1h),7.49(d,j＝7.8hz,2h),7.42(d,j＝15.8hz,1h),7.30(d,j＝7.8hz,2h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),3.57–3.47(m,2h),2.89(t,j＝7.3hz,2h)；hrms(esi)m/z計算值[m-h]^-349.1301,實測值349.1306.

實施例11

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰

胺(化合物11)

實施例11a

(e)-3-(4-(2-(1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰胺基)乙基)苯基)丙烯酸甲酯

以7-氮雜吲哚-3-羧酸和實施例2a為原料，制備方法同實施例2b。得率為61％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.13(s,1h),8.47(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),8.29(d,j＝4.7hz,1h),8.18(t,j＝5.7hz,1h),8.14(d,j＝2.5hz,1h),7.68–7.61(m,3h),7.32(d,j＝8.1hz,2h),7.19(dd,j＝7.9,4.7hz,1h),6.60(d,j＝16.1hz,1h),3.72(s,3h),3.54–3.49(m,2h),2.90(t,j＝7.3hz,2h).

實施例11b

(e)-n-(4-(3-(羥氨基)-3-氧代丙基-1-烯基)苯乙基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-甲酰

胺

以實施例11a為原料，制備方法同實施例2c。得率為27％。熔點196～198℃，¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.06(s,1h),10.73(s,1h),9.04(s,1h),8.43(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),8.26(dd,j＝4.7,1.7hz,1h),8.15–8.08(m,2h),7.49(d,j＝7.7hz,2h),7.42(d,j＝15.8hz,1h),7.30(d,j＝7.7hz,2h),7.16(dd,j＝7.9,4.7hz,1h),6.42(d,j＝15.8hz,1h),3.49(q,j＝6.8hz,2h),2.87(t,j＝7.3hz,2h)；¹³cnmr(101mhz,dmso)δ163.79,162.69,148.27,143.29,141.27,137.99,132.69,129.16,129.07,127.72,127.40,118.31,116.68,109.48,35.26.hrms(esi)m/z計算值[m-h]^-349.1301,實測值349.1293.

實施例12、mtt法細胞增殖抑制活性測試

體外細胞增殖抑制實驗采用mtt法，采用以下兩種細胞系：人慢性粒細胞白血病(cml)細胞系k562，人組織細胞淋巴瘤細胞u937。

k562和u937為懸浮細胞，用含體積分數(shù)為10％胎牛血清的rpim-1640培養(yǎng)液，在37℃、體積分數(shù)為5％的co2條件下常規(guī)培養(yǎng)。

具體操作如下：

首先，將實施例1-26制備獲得的化合物(即樣品)分別配制成化合物濃度為5mm/l的dmso(二甲基亞砜)溶液，然后將獲得的溶液經(jīng)梯度稀釋，得到一系列濃度梯度的樣品溶液。

接著，取對數(shù)生長期的k562細胞或者u937細胞，以1.5×10⁵個/ml的的細胞密度接種于96孔板中，99μl/孔，接著每孔加入樣品溶液1μl，使樣品作用終濃度分別為0.01，0.05，0.1，0.5，1，5，10，25，50μm。每種樣品、每個濃度設(shè)三個復(fù)孔，并且設(shè)置陽性對照組、陰性對照組和空白對照組，其中，陽性對照組分別加入陽性對照藥物組蛋白去乙?；敢种苿﹕aha和dna甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑sgi-027，陰性對照組加入與樣品溶液同濃度的dmso，空白對照組不加細胞。作用72h后加入mtt溶液，10μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后，于2000rpm、4℃下離心5分鐘，吸去上清后加入二甲基亞砜(dmso)，100μl/孔，于37℃保溫約10分鐘，然后用微量振蕩器振蕩約5分鐘，使結(jié)晶溶解完全，用酶標(biāo)儀于490nm處測量od值。

細胞增殖抑制率(inhibitionrate，ir％)按如下公式計算：

ir％＝(陰性對照od－樣品od)/(陰性對照od-空白對照od)×100％，

經(jīng)過計算，得到本發(fā)明所制備的化合物的體外細胞增殖抑制活性，結(jié)果見表1。其中，ic50大于50μm以“-”表示，ic50大于10μm并小于50μm以“+”表示，ic50大于5μm并小于10μm以“++”表示，ic50大于1μm小于5μm以“+++”表示，ic50小于1μm以“++++”表示。測試結(jié)果表明，大部分化合物顯示出良好的抗k562和u937增殖效果，其中，化合物2，3，6對u937增殖抑制的ic50小于1μm。

表1實施例1～11制備的化合物的體外腫瘤細胞增殖抑制活性

注：ic50表示半數(shù)抑制濃度。

實施例13、dna甲基轉(zhuǎn)移酶抑制活性試驗

使用同位素標(biāo)記的s-腺苷甲硫氨酸(³h-sam)測試化合物在100mm時對dna甲基轉(zhuǎn)移酶(dnmt1，dnmt3a，dnmt3b)的抑制活性,并以文獻報導(dǎo)的dna甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑nsc319745做對照。預(yù)先將化合物和相應(yīng)的一定量的dna甲基轉(zhuǎn)移酶亞型混合，室溫下孵育15min后，加入人工合成的生物素標(biāo)記的寡核苷酸底物和³h-sam并于室溫下反應(yīng)4h。接著將反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移到鏈霉親和素包被的高通量孔板中，室溫反應(yīng)1h。放射性活性通過液體閃爍計數(shù)法得到。通過和陰性對照組(無抑制劑組)比較得到化合物對酶的抑制活性。化合物對不同亞型dna甲基轉(zhuǎn)移酶酶的抑制百分率(％inhibition)結(jié)果如表2所示。測試結(jié)果表明化合物對dna甲基轉(zhuǎn)移酶具有一定的抑制活性，且對不同亞型抑制能力不同。大部分化合物對dnmt1的抑制活性與nsc319745活性相當(dāng)，而dnmt3a/3b抑制活性較弱。化合物9對dnmt3b的抑制活性好于對dnmt1/3a的抑制活性?；衔?0對三個亞型的抑制率均大于30％，且對dnmt3b的抑制活性與化合物nsc319745相似?；衔?在所列出的化合物中表現(xiàn)出最強的dnmt1抑制活性(抑制率大于60％)，且對dnmt3b抑制率將近50％，而對dnmt3a抑制活性較弱(抑制率23％)。

表2實施例1～11制備的化合物的dna甲基轉(zhuǎn)移酶抑制活性

實施例14、組蛋白去乙?；敢种苹钚栽囼?/p>

以組蛋白去乙?；讣易宓膬蓚€亞型hdac1和hdac6為研究對象，測試化合物對組蛋白去乙酰化酶的抑制活性，每個化合物設(shè)十個濃度梯度，三個復(fù)孔，并以已上市的hdac抑制劑saha做對照。首先將化合物溶解到反應(yīng)緩沖液中，之后加入一定體積的含組蛋白去乙?；傅木彌_溶液，室溫孵育15分鐘后加入胰蛋白酶和乙?；碾木彌_溶液作為反應(yīng)底物以啟動脫乙酰化反應(yīng)，同時使化合物濃度和酶含量達到設(shè)定值，輕輕混合60秒后室溫孵育，記錄1個小時內(nèi)一定激發(fā)光和發(fā)射光波長下反應(yīng)的動力參數(shù)。通過和陰性對照組(無抑制劑組)比較得到化合物對酶的抑制活性，并計算得到化合物對組蛋白去乙?；傅陌霐?shù)抑制濃度(ic50)，結(jié)果如表3所示，其中，ic50大于10nm且小于100nm以“+”表示，ic50小于10nm以“++”表示。測試結(jié)果表明所有化合物對hdac1/6的半數(shù)抑制濃度(ic50)小于100nm，表現(xiàn)出具有良好的hdac1/6抑制活性?；衔?,6,7,9,10對hdac1/6的ic50小于10nm，與saha的抑制活性相當(dāng)。

表3實施例1～11制備的化合物的組蛋白去乙酰化酶抑制活性