專利名稱：用作組蛋白去乙?；敢种苿┑漠惲u肟酸類化合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用作組蛋白去乙酰化酶抑制劑的異羥肟酸類化合物及其用途。
背景技術(shù)：
包括腫瘤在內(nèi)許多疾病的形成是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的過(guò)程，涉及到各種基因如何響應(yīng)內(nèi)外環(huán)境的變化，從而實(shí)現(xiàn)在時(shí)間和空間上表達(dá)的調(diào)控。近年來(lái)遺傳學(xué)中興起的一個(gè)前沿領(lǐng)域——表觀遺傳學(xué)(Epigenetics)為解答這些問(wèn)題提供了新思路。表觀遺傳的分子基礎(chǔ)主要涉及到兩個(gè)方面 一個(gè)是針對(duì)DNA的甲基化修飾，另一個(gè)是針對(duì)染色質(zhì)組蛋白的乙酰化修飾。除了DNA序列作為遺傳編碼外，表觀基因機(jī)制是基因表達(dá)和隨后的蛋白質(zhì)合成的最基本的調(diào)節(jié)因素。在真核細(xì)胞中，在G0相，DNA被核小體緊密填充，以致于DNA不能接近轉(zhuǎn)錄元件。組蛋白乙?；磻?yīng)是一個(gè)決定性的表觀基因過(guò)程，可以重塑轉(zhuǎn)錄元件與DNA的接近能力，從而引發(fā)基因表達(dá)。現(xiàn)在有大量的證據(jù)表明，包圍DNA的染色質(zhì)蛋白重建是基因調(diào)控表觀遺傳學(xué)的根本機(jī)制，這包括組蛋白尾部可逆的轉(zhuǎn)錄后修飾，如賴氨酸殘基乙酰化、賴氨酸殘基和精氨酸殘基的甲基化、絲氨酸殘基的磷酸化、賴氨酸殘基的泛素化和類泛素化。其中，組蛋白的乙酰化修飾最為普遍。組蛋白的乙?；揎椩诨虮磉_(dá)調(diào)控中發(fā)揮作用。組蛋白在體內(nèi)的乙?；饔冒l(fā)生在蛋白質(zhì)N端遺傳保守的賴氨酸氨基上，但組蛋白H3和H4的乙?；揎棻菻2A和H2B更具廣泛性。組蛋白H3乙?；闹匾稽c(diǎn)是Lys9和Lysl4,組蛋白H4的乙?；稽c(diǎn)是Lys5、 Lys8、 Lysl2和Lysl6。
組蛋白去乙?；?Histone deacetylase， HDAC)和組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(histone aceyl transferase, HAT)決定組蛋白的乙?；：诵慕M蛋白的乙?；绞荋DACs和HATs共同調(diào)控的結(jié)果。HDAC是多蛋白質(zhì)復(fù)合物的催化亞單位，參與組蛋白和非組蛋白的蛋白質(zhì)去乙酰化。HDAC介導(dǎo)核小體結(jié)構(gòu)改變和調(diào)節(jié)基因表達(dá)，參與細(xì)胞周期進(jìn)程和分化，并且與多種疾病如癌癥、急性髓性白血病、病毒和感染等的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)。 一般情況下，組蛋
4白乙?；皆鰪?qiáng)與基因轉(zhuǎn)錄活性的增強(qiáng)有關(guān)，而乙?；竭^(guò)低與基因表達(dá)抑制有關(guān)。
通過(guò)對(duì)組蛋白的化學(xué)修飾，能夠使核小體的構(gòu)型改變。對(duì)組蛋白的修飾作用發(fā)生在蛋白質(zhì)N端遺傳保守的賴氨酸氨基上。這些賴氨酸殘基在生理pH條件下帶正電荷，帶正電荷的賴氨酸殘基與DNA磷酸根骨架的氧負(fù)離子相互作用，使得DNA被組蛋白包圍得更緊密。HAT將乙酰輔酶A(乙酰CoA)乙酰基部分轉(zhuǎn)移到核心組蛋白氨基末端上特定Lys殘基的s-氨基基團(tuán)。氨基上的正電荷被消除，這時(shí)DNA分子本身所帶有的負(fù)電荷有利于DNA構(gòu)象的展開，核小體的結(jié)構(gòu)變得松弛。這種松弛的結(jié)構(gòu)促進(jìn)了轉(zhuǎn)錄因子和協(xié)同轉(zhuǎn)錄因子與DNA分子的接觸，因此組蛋白乙酰化可以激活特定基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程。HDAC則移去組蛋白Lys殘基上的乙?；?，恢復(fù)組蛋白的正電性，帶正電荷的Lys殘基與DNA分子的電性相反，增加了 DNA與組蛋白之間的吸引力，使啟動(dòng)子不易接近轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件，從而抑制轉(zhuǎn)錄。
HDAC和HAT都不直接與DNA結(jié)合。HAT與其他組蛋白乙?；负娃D(zhuǎn)錄因子形成復(fù)合物，而HDAC是作為與其它轉(zhuǎn)錄共抑制物的復(fù)合物被募集的。組蛋白的活性是通過(guò)轉(zhuǎn)錄后修飾來(lái)調(diào)控的。HDAC1和HDAC2的磷酸化反應(yīng)導(dǎo)致HDAC活性增加。HDAC不但使組蛋白發(fā)生去乙酰作用，而且可以使非組蛋白發(fā)生去乙酰作用，如p53和GATA-l。乙?；膒53顯示其與靶序列有較強(qiáng)的親和力。
許多研究已證實(shí)了組蛋白髙/低乙?；谀[瘤發(fā)生中起重要作用。 一方面，人們發(fā)現(xiàn)，組蛋白乙?；兔撘阴；淖兓c腫瘤細(xì)胞的形態(tài)變化有關(guān)；另一方面，HAT (例如p300/CBP、 pCAF、 ACTR等)或HDAC可與一些癌基因和抑癌基因(如參與細(xì)胞周期調(diào)控的有P53、 Rb、 p16、 p21、 p27等抑癌基因)產(chǎn)物相互作用，從而修飾或介導(dǎo)這些產(chǎn)物對(duì)與細(xì)胞分化和細(xì)胞增殖有關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄的作用。通過(guò)對(duì)去乙?；囊种谱饔?，可以導(dǎo)致染色質(zhì)過(guò)乙酰化，促進(jìn)癌細(xì)胞的基因活化，從而導(dǎo)致細(xì)胞分化或死亡。
HDAC抑制劑的抗腫瘤機(jī)制有賴于基因表達(dá)的調(diào)控，大量體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)其抗腫瘤機(jī)制有以下幾點(diǎn)。
HDAC抑制劑可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，其治療作用在于可以選擇性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，大量的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果和臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，HDAC抑制劑可以在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間實(shí)現(xiàn)選擇性。劑量極限毒性包括，血小板 損傷、惡心、使疲勞等癥狀，但在很多情況下，這些副作用在臨床上是可以 控制的。體外實(shí)驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)于HDAC抑制劑的反應(yīng)主要由細(xì)胞的 類型決定，而不是由HDAC抑制劑的結(jié)構(gòu)和濃度決定。HDAC抑制劑對(duì)增 生和停滯的腫瘤細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性，而正常細(xì)胞可以抵抗HDAC抑制劑 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)HDAC抑制劑會(huì)產(chǎn)生不同表型改變，包括G1 期停滯、終末分化、線粒體介導(dǎo)的caspase依賴的調(diào)亡等。在正常細(xì)胞和轉(zhuǎn) 化細(xì)胞中都存在組蛋白乙?；?，所以出現(xiàn)在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的細(xì)胞毒性并不是因 為HDAC抑制劑在它們中的活性不同所致。但是對(duì)于不同的轉(zhuǎn)化細(xì)胞， HDAC抑制劑誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的機(jī)制是不同的。
HDAC抑制劑還可以阻滯細(xì)胞周期和促進(jìn)細(xì)胞分化。HDAC抑制劑最初 是由于其具有誘導(dǎo)細(xì)胞分化而被發(fā)現(xiàn)的，這種作用與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白
(pRb)和相關(guān)蛋白介導(dǎo)的在Gl/S邊界的細(xì)胞周期停滯緊密相關(guān)。HDAC 抑制劑通過(guò)CDKNlA(p21wafl/cipl)的上調(diào)或者通過(guò)細(xì)胞周期蛋白的下調(diào)， 從而在Gl/S邊界誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯，HDAC抑制劑介導(dǎo)的生長(zhǎng)停滯通過(guò)直 接影響染色質(zhì)發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，導(dǎo)致特定位點(diǎn)基因表達(dá)。盡管受影響的基因不 足基因總數(shù)的2%，但卻具有特殊的功效。
HDAC抑制劑還可以通過(guò)激活G2相關(guān)卡以介導(dǎo)G2/M相停滯。在特定 的條件下，G2相關(guān)卡的丟失可以用來(lái)確定腫瘤細(xì)胞對(duì)HDAC抑制劑的凋亡 敏感程度。與HDAC抑制劑相關(guān)的G2關(guān)卡可能與臂間的異染色質(zhì)的的髙度 乙?；嘘P(guān)，G2關(guān)卡的喪失能夠?qū)е氯旧w的分離和核的片斷化。此外， 在抑癌基因Rb介導(dǎo)的反應(yīng)中，HDAC抑制劑也起重要作用。
大量實(shí)驗(yàn)表明，不同的腫瘤壞死因子受體超家族成員與其配基在HDAC 抑制劑處理后均被活化。研究證明，HDAC抑制劑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與誘導(dǎo)一 個(gè)或多個(gè)死亡受體和/或配基有關(guān)。然而通過(guò)死亡受體的信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于HDAC 抑制劑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是否是必須，當(dāng)前仍然存在爭(zhēng)議。
一些獨(dú)立的研究結(jié)果強(qiáng)烈支持線粒體凋亡通路在HDAC抑制劑介導(dǎo)的 腫瘤細(xì)胞死亡的重要作用。他們認(rèn)為BCL2或者BCL-X1阻斷了凋亡通路， 抑制了不同的HDAC抑制劑介導(dǎo)的凋亡。但是HDAC抑制劑究竟如何激發(fā) 內(nèi)部細(xì)胞凋亡的機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究。目前認(rèn)為激發(fā)機(jī)制與選擇性激活或誘導(dǎo)BH3-only蛋白和調(diào)控活性氧自由基(ROS)有關(guān)。
HDAC抑制劑可抑制腫瘤血管生成，這與促血管生成基因表達(dá)程度降低 有關(guān)。大多數(shù)HDAC抑制劑能夠下調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成 纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、缺氧誘導(dǎo)因子-la (HIFla)、血管生成素、內(nèi) 膜內(nèi)皮激酶-2 (TIE2)和內(nèi)皮一氧化氮合酶合成酶(eNOS)。 HDAC抑制劑 可以下調(diào)趨化因子受體4 (C-X-C motif CXCR4)的表達(dá)，趨化因子受體對(duì) 于骨髓前體細(xì)胞的歸巢和內(nèi)皮細(xì)胞循環(huán)至新血管生成位點(diǎn)是非常重要的，這 兩種情形在非轉(zhuǎn)化內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞系中均存在。此外，HDAC抑制劑可 以抑制內(nèi)皮祖細(xì)胞的分化。以上研究結(jié)果表明，HDAC抑制劑能夠通過(guò)改變 血管生成基因，從而抑制血管的生成，特別是對(duì)于早期腫瘤，可以阻斷營(yíng)養(yǎng) 供給，抑制腫瘤的擴(kuò)散。
越來(lái)越多地證據(jù)表明，HDAC抑制劑可以通過(guò)直接作用于惡性細(xì)胞，或 者提髙免疫細(xì)胞的活性從而增強(qiáng)抗腫瘤免疫能力。HDAC抑制劑通過(guò)上調(diào)主 要組織相容性復(fù)合物(MHC)的I和H類蛋白、共促進(jìn)黏著分子(如CD40、 CD80、 CD86)和細(xì)胞間粘著分子1 (ICAM1)的表達(dá)來(lái)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免 疫原性。最近的研究結(jié)果表明，HDAC抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表面的MHC第 I類鏈相關(guān)分子MICA和MICB表達(dá)。SAHA可以通過(guò)抑制促免疫因子，如 腫瘤壞死因-a (TNFa)、白(細(xì)胞)介素-1 (IL-1)和干擾素-y (IFNy)，誘 導(dǎo)急性移植物抗宿主病(GVHD)。 HDAC抑制劑對(duì)多種細(xì)胞因子有調(diào)節(jié)作 用，有可能作為新型免疫制劑治療自身免疫性疾病和組織器官移植的免疫排 斥作用。
此外，HDAC抑制劑對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療作用和放射增敏作用。 HDAC是目前最具有發(fā)展前景的一類非激酶抗癌靶標(biāo)。HDAC是轉(zhuǎn)錄過(guò) 程中主要的調(diào)控子，而且在其它細(xì)胞過(guò)程中也起著重要的作用。HDAC抑制 劑是目前已經(jīng)驗(yàn)證的治療人類癌癥的新策略。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種結(jié)構(gòu)類型 的組蛋白去乙酰化酶抑制劑，包括(1)短鏈脂肪酸及其鹽，如丁酸和異戊 酸鈉；(2)異羥膀酸，如SAHA (Vorinostat)和LBH-589 ( Panobinostat);
(3)苯甲酰胺，如MS-275 (Entinostat)和MGCD0103; (4)環(huán)四肽，如 trapoxin和FK-228;還有乙酮、三氟甲基酮、酮酰胺、2-氨基苯胺、硫醇及 其乙?；苌锏茸鳛樗幮F(tuán)的組蛋白去乙?；敢种苿?。
7然而這些備選藥物大部分還停留在臨床前研究狀態(tài)， 一部分已進(jìn)入臨床 研究。其中SAHA結(jié)構(gòu)如式Vfl所示，已經(jīng)于2006年獲得FDA批準(zhǔn)上市，僅 被批準(zhǔn)用于治療皮膚T-細(xì)胞淋巴瘤——治療一種罕見(jiàn)的癌癥。
(vn)
然而，到目前為止，SAHA藥物能較好治療實(shí)體瘤的臨床證據(jù)還比較少， 人們尚不詳細(xì)和充分了解SAHA藥物及其治療的深層機(jī)理以及對(duì)不同腫瘤 的作用異常，因此該藥物在應(yīng)用領(lǐng)域還只能停留在經(jīng)驗(yàn)和有限的區(qū)域內(nèi)。另 外，SAHA藥物具有心臟方面的副反應(yīng)。而且通過(guò)X射線晶體衍射結(jié)構(gòu)分 析及構(gòu)效關(guān)系表明SAHA具有3個(gè)區(qū)域金屬結(jié)合區(qū)(metal binding),與酶 活性位點(diǎn)的氨基酸殘基形成氫鍵，并與Z^+螯合;連接鏈區(qū)(linker)，占有酶 的狹窄通道，其鏈的長(zhǎng)度決定金屬結(jié)合區(qū)與Zn"的結(jié)合狀況；表面識(shí)別區(qū) (surface recognition),與酶活性位點(diǎn)外側(cè)的氨基酸殘基結(jié)合，決定抑制劑分 子對(duì)酶的識(shí)別及結(jié)合程度，輔助金屬結(jié)合區(qū)與Zi^+螯合。由于直接作用于鋅 離子，使其存在一定的毒性作用。
MS-275如式麗所示，是一種苯甲酰胺的衍生物，是有效的組蛋白去乙 ?；敢种苿谂R床前研究中表現(xiàn)出抗腫瘤活性。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，能夠有效 地抑制晚期急性髓系白血病患者體內(nèi)的組蛋白去乙?；傅幕钚?，而沒(méi)有顯 著的心臟毒性。
(vm)
而當(dāng)前腫瘤發(fā)病率越來(lái)越高，迫切需要了一種具有較低毒性的治療腫瘤 藥物，也需要更多可供選擇的組蛋白去乙?；敢种苿┧幬?。本發(fā)明由此而 來(lái)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種新型組蛋白去乙酰酶抑制劑，解決了現(xiàn)有技術(shù) 中治療腫瘤以及白血病等藥物組蛋白去乙酰酶抑制劑種類較少、療效不夠確 切以及毒性較大等問(wèn)題。
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是-
一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，<formula>formula see original document page 9</formula>
其中，Ar為芳基或雜環(huán)基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取 代Cl-8烷基、Cl-8垸氧基、鹵素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8烷基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8鹵代烷基、Cl-8鹵代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或雜環(huán) 基；Ri選自氫或Cl-8烷基。
優(yōu)選的，2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述的芳基為 苯基。
優(yōu)選的，所述的雜環(huán)基選自吡啶、噻吩、呋喃、吡咯或咪唑。
優(yōu)選的，所述的芳基或雜環(huán)基任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取 代Cl-8烷基、鹵素、硝基或Cl-8鹵代烷基。
優(yōu)選的，所述的芳基或雜環(huán)基任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取 代- Cl-4的垸基、鹵素、硝基或Cl-4的鹵代烷基。
優(yōu)選的，Rl為氫。
本發(fā)明中的各基團(tuán)一般具有如下意義
術(shù)語(yǔ)"垸基"指直鏈或支鏈；Cl-n烷基則表示個(gè)碳原子的飽和的 脂烴基，包括直鏈和支鏈基團(tuán)(例如"Cl-20烷基"，是指該基團(tuán)為烷基，且 烷基的碳鏈碳原子數(shù)量在1 20之間，即含l個(gè)碳原子、2個(gè)碳原子、3個(gè) 碳原子等，直至包括20個(gè)碳原子的垸基。而該1-20的限制并不包括烷基上 的取代的碳原子數(shù)，如取代烷氨基中的"烷基"，當(dāng)沒(méi)有特別限制其碳原子 數(shù)時(shí)，僅指其中指明的垸基部分的碳原子數(shù)為1-20，而并不包括垸基上的取代基的碳原子數(shù)以及氨基上的其他取代基的碳原子數(shù)。而釆用"Cl-8垸基" 的表述則表示該烷基中含有1 8個(gè)碳原子的烷基。)
術(shù)語(yǔ)"垸氧基"為通過(guò)氧原子連接的烷基；如Cl-8垸氧基包括甲氧基、 乙氧基、丙氧基；Cl-8垸氧基，是指垸氧基中的垸基的碳原子數(shù)為1 8。
鹵代烷基，表示鹵素原子取代的烷基，該取代包括單取代和多取代，其 中烷基的概念如上所述。Cl 8鹵代垸基，是指鹵代垸基中的烷基的碳原子 數(shù)為1 8。鹵代烷基指垸基上H原子被鹵素原子取代的基團(tuán)；如全氟垸基 是指垸基上的H全部被F取代的基團(tuán)。
烷基氨基的結(jié)構(gòu)為烷基-NH-。氨基烷基的結(jié)構(gòu)為NH2-烷基-。硫代 烷基是指具有硫原子取代的垸基。
雜環(huán)基，是指含有N、 O、 S等雜原子的由3到8個(gè)環(huán)原子的環(huán)狀基團(tuán)， 在該基團(tuán)中，雜原子可以只含有N原子，也可以含有O或S原子。其中雜 原子的數(shù)目可以為一個(gè)，也可以為多個(gè)。該雜環(huán)可以為飽和的類環(huán)烷結(jié)構(gòu)， 也可以為不飽和的芳環(huán)類結(jié)構(gòu)。更具體地，該術(shù)語(yǔ)含氮雜環(huán)基包括但不限于 吡咯基、四氫吡咯基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、哌嗪基、嘧啶基、咪唑基 等。
應(yīng)清楚的是，某些式(I)化合物可呈現(xiàn)互變異構(gòu)現(xiàn)象。式(I)化合物 可以以未溶劑化的形式存在，也可以以溶劑化的形式存在。甚至，本發(fā)明某 些式(I)化合物可以存在多晶現(xiàn)象。
式(I)化合物的適合的藥學(xué)上可接受的鹽可以是式(I)化合物的酸加 成鹽，可以是如以下無(wú)機(jī)或有機(jī)酸所生成的酸-加成鹽鹽酸、氫溴酸、硫 酸、三氟乙酸、檸檬酸或馬來(lái)酸；可以是具有足夠酸性的式(I)化合物的 鹽，如堿金屬鹽或堿土金屬鹽(鈣鹽、鎂鹽或銨鹽等)。式(I)化合物的另 一種適合的藥學(xué)上可接受的鹽可以是在給予式(I)化合物后在人或動(dòng)物體 內(nèi)形成的鹽。
本發(fā)明的又一目的在于提供一種式(II)的化合物中間體，
10<formula>formula see original document page 11</formula>(II)
其中，Ar為芳基或雜環(huán)基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取 代Cl-8垸基、Cl-8烷氧基、鹵素、硝基、Cl-8氨基垸基、Cl-8烷基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8鹵代烷基、Cl-8鹵代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或雜環(huán) 基；Ri選自氫或Cl-8烷基。
本發(fā)明的又一目的在于提供一種藥物組合物，其特征在于所述藥物組合 物包括該化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
可將本發(fā)明的化合物以前藥的形式給藥。前藥是指經(jīng)過(guò)生物體內(nèi)轉(zhuǎn)化后 才具有藥理作用的化合物。可使用前藥改變本發(fā)明化合物的物理化學(xué)性質(zhì)或
藥物動(dòng)力學(xué)方面性質(zhì)。當(dāng)本發(fā)明的化合物含有可連接改變性質(zhì)基團(tuán)的適當(dāng)基 團(tuán)或取代基團(tuán)時(shí)，可形成前藥。
本發(fā)明的又一目的在于提供該化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥 物方面的應(yīng)用，其特征在于所述藥物用于治療與細(xì)胞分化或增殖相關(guān)的實(shí)體 瘤或白血病。
本發(fā)明的又一目的在于提供一種制備該化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟
(1)使式(IV)的化合物
<formula>formula see original document page 11</formula>(V)
(2)使步驟(1)中式(V)的化合物與式(VI)的化合物Ar、 X 、
0々、(VI)
反應(yīng)得到式(n)的化合物；
(3)式(n)的化合物水解酸化后在適當(dāng)?shù)幕罨噭┲信c羥胺反應(yīng)得
到式(I)的化合物；
其中Ar為芳基或雜環(huán)基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代 Cl-8垸基、Cl-8烷氧基、鹵素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8垸基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8鹵代垸基、Cl-8鹵代垸氧基、Cl-8酯基、苯基或雜環(huán) 基；Ri選自氫或Cl-8垸基；X選自鹵素。
更為優(yōu)選的，采用3-(5-硝基苯并bl噻吩-2-基)烯丙酸乙酯IV經(jīng)鐵粉還原 可得到中間體V,然后與不同取代的磺酰氯反應(yīng)，得到中間體II。將得到的
乙酯水解、酸化，制得中間體羧酸m;然后以氯甲酸乙酯為活化試劑，制得
中間體混合酸酐，將酸酐的四氫呋喃溶液滴加至羥胺的甲醇溶液中，室溫?cái)?拌；反應(yīng)完畢，蒸除溶劑，以乙酸乙酯溶解，用飽和氯化銨溶液分配；有機(jī) 層用無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸去溶劑，即可以得到通式為(I)的目標(biāo)化合物。
(I )
為制備相應(yīng)的藥物組合物，除了至少一種本發(fā)明的活性物質(zhì)外，還使用 載體材料、填料、溶劑、稀釋劑、著色劑或粘結(jié)劑。助劑的選擇及其用量取 決于該藥物的給藥途徑，如口服、靜脈注射、腹腔注射、皮內(nèi)、肌肉、鼻內(nèi) 或局部使用。片劑、包衣片、膠囊、顆粒劑、滴劑、液體劑型以及糖漿劑等 形式的制劑適于口服，而溶液、懸浮劑、噴霧劑等適用于非腸道、局部和吸 入給藥。給患者或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物給藥劑量根據(jù)患者或動(dòng)物的體重、施用方式、指 癥和病癥情況給藥。
12本發(fā)明的化合物經(jīng)藥物活性研究證實(shí)，該化合物具有與陽(yáng)性藥物SAHA 和MS-275類似的活性，可以應(yīng)用于治療與細(xì)胞分化或增殖相關(guān)的實(shí)體瘤或 白血病的藥物方面。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)上述方案做進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例是 用于說(shuō)明本發(fā)明而不限于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以 根據(jù)具體廠家的條件做進(jìn)一步調(diào)整，未注明的實(shí)施條件通常為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的 條件。
實(shí)施例13-(5-硝基苯并[bl噻吩-2-基)烯丙酸乙酯1的合成
將5.2 g (0.025 mol)5-硝基苯并[b]噻吩-2-甲醛和13.06 g(0.0375 mol) 三苯基乙氧羰基次甲基膦烷置于三頸瓶中，加入150 ml甲苯，回流反應(yīng)12 h。 反應(yīng)完畢，蒸去甲苯。混合物經(jīng)柱層析分離得到類白色固體。
Mp: 145-146 *C 。 1H-畫R(300 Hz，CDC13) S: 8.66 (d， J=2.2 Hz， 1H)， 8.22(dd， Jl=2.2 Hz， J2-8.9 Hz， 1H)， 7.84-7.93 (m， 2H)， 7.59 (s, 1H)， 6.37(d， J=15.7 Hz， 1H)， 4.29(q， J-7.1 Hz， 2H)， 1.36(t， J-7.1 Hz， 2H)。
5-硝基苯并[b噻吩-2-甲醛的合成
在IO "C， 30 min內(nèi)將三乙胺(106.3 g， 1.05 mol)滴加到2-氯5-硝基苯 甲醛(93.0 g， 0.5 mol)和二噻烷(39.9 g， 0.26 mol)的乙醇溶液中，然后反應(yīng)混 合物在35 t:反應(yīng)8h。將混合物冷卻至o r,依次固體過(guò)濾，水洗，干燥。 將粗產(chǎn)物溶于THF,經(jīng)活性炭脫色，減壓蒸去溶劑，得到5-硝基苯并bl噻 吩-2-甲醛(90.1 g， 87%)。產(chǎn)物以乙酸重結(jié)晶得到黃色固體。
Mp: 201-203 " 。 ^-NMR: 6 10.19 (s，lH)， 9.05 (d，lH,J = 2.2 Hz)， 8.60 (s，lH), 8.36 (d，lH，J = 9 Hz)， 8.32 (d*d, Jl = 2.2 Hz ，J2 = 9 Hz)。 Anal. Calcd for C9H5N03S: C, 52.17; H， 2.43; N， 6.76. Found: C, 52.23; H, 2.50; N，
6.73e三苯基乙氧羰基次甲基膦垸的合成
Ph、
Ph—P=CHC02Et Ph
將52.4 g (0.2 mol)的三苯基膦溶于500 ml無(wú)水苯中，機(jī)械攪拌下滴 入40 g(0.24 mol)溴乙酸乙酯，加熱回流5h。冷卻后過(guò)濾，固體用3x20 ml 苯洗滌。干燥后得溴代乙氧羰基亞甲基三苯基鱗。產(chǎn)品為白色粉末狀固體 84.0 g，收率為97.8%。 Mp. 151-153 "。在2L的燒杯中，將42.0 g溴代 乙氧羰基亞甲基三苯基鱗溶于1 L水中(濾去不溶物)，滴加氫氧化鈉溶液 至酚酞試紙呈堿性，下層有粘稠有機(jī)物生成。以二氯甲烷萃取(2x200 ml), 無(wú)水硫酸鎂干燥，蒸去溶劑得白色固體。用乙酸乙酯-石油醚重結(jié)晶，得到 無(wú)色片狀結(jié)晶24.0g,收率69.03%, mp. 116-117 C 。
實(shí)施例23-(5-氨基苯并[b噻吩-2-基)烯丙酸乙酯2的合成
向三頸瓶中加入8.4 g鐵粉，lOml冰乙酸，0.5 g氯化銨和50 ml乙醇， 在攪拌下批量加入4.2 g (0.015 mol) 3-(5-硝基苯并b噻吩-2-基)烯丙酸乙 酯，回流反應(yīng)至反應(yīng)完全。冷卻過(guò)濾，用乙醇洗滌鐵泥。加入碳酸鉀水溶液 至反應(yīng)呈堿性，乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鎂干燥，得黃色固體。
Mp: 99-101 t: 。 tH-謹(jǐn)R(500 Hz，CDCI3) S: 7.82 (dd， Jl=0.5 Hz， J2-15.6 Hz， IH)， 7.54 (d， J-8.6 Hz， IH)， 7.28 (s， IH)， 7.03(d, J-2.2 Hz, IH)， 6.81 (dd， Jl=2.3 Hz, J2=8.5 Hz， IH)， 6.26 (d, J=15.6 Hz， IH)， 4.26 (q， J-7.1 Hz， 2H)， 3.72(br s， 2H)， 1.34 (t， J=7.1 Hz， 2H)。
實(shí)施例3 (E)-3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[b噻吩基)烯丙酸乙 酯的合成
將3-(5-氨基苯并[bl噻吩-2-基)烯丙酸乙酯15 mmol溶于無(wú)水四氫呋喃
1450mL，加入三乙胺18mmo1，在室溫滴加的對(duì)甲苯磺酰氯(18 mmol)的四氫 呋喃溶液。2h后反應(yīng)完全，蒸去溶劑，殘余物用乙酸乙酯溶解，用1M的 氫氧化鈉水溶液，飽和食鹽水洗滌，干燥，蒸去溶劑即得目標(biāo)產(chǎn)物。
Mp: 154-157 "C。 ^-醒R(500 Hz，CDC13) &: 7.82 (dd， Jl=0.5 Hz， J2-15.6 Hz， 1H)， 7.65(d， J=8.3 Hz， 2H)， 7.62 (d, J=8.6 Hz, 1H)， 7.34 (s， 1H), 7.21 (d， J=8.4 Hz， 2H)， 7.07(dd， J1-2.1 Hz， J2-8.4 Hz， 1H)， 6.76(s， 1H) 6.28 (d， J-15.6 Hz， 1H)， 4.26 (q， J=7.1 Hz， 2H)， 2.36 (s， 3H)， 1.33 (t， J=7.1 Hz， 3H)。
實(shí)施例4(E)-3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[b噻吩-2-基)烯丙酸的
合成
將15 mmol的(E) 3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[b噻吩J-基)烯丙酸乙 酯溶于30 mL的四氫呋喃，加入0.6 M的氫氧化鋰水溶液30 mL，室溫?cái)嚢?過(guò)夜。加入150mL水，乙酸乙酯萃取，棄去有機(jī)層，下層水溶液酸化至pH 等于3，乙酸乙酯萃取(3x50 mL)，合并有機(jī)層，飽和食鹽水洗，無(wú)水硫酸 鎂干燥，減壓蒸去溶劑，即得到相應(yīng)3-(5-取代苯基磺胺基苯并bl噻吩-2-基) 烯丙酸，收率為95%。
實(shí)施例5 (E)-N-羥基-3-(5-苯基磺胺基苯并[bl噻吩-2-基)烯丙酰胺 (化合物l)的制備
在OTC條件下，將鹽酸羥胺(l g， 15 mmol)的甲醇(10mL)溶液滴加到 氫氧化鉀(0.84 g， 15 mmol)的甲醇(4mL)溶液中?；旌衔飻嚢?5min， 然后過(guò)濾生成的氯化鉀，濾液用于下面步驟。
在0 C將氯甲酸乙酯(1.3 g， 12mmo1)的四氫呋喃溶液滴加到 (E)-3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[b噻吩-2-基)烯丙酸(3.73 g， 10 mmol)和N-甲基嗎啉(1.3 g， 13 mmol)的四氫呋喃溶液中，混合物反應(yīng)30min。 過(guò)濾除去生成的鹽，將濾液滴加到上述制備的羥胺的甲醇溶液中，反應(yīng)混合 物室溫?cái)嚢?0 min。將溶劑蒸出，加入乙酸乙酯和飽和氯化銨溶液進(jìn)行分配， 有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，蒸除溶劑，得到黃色固體。
Mp: 265-267 'C 。 'H-顏R(500 Hz，DMSO-d6) S: 12.56(s， NHOH)， 10.32(s， NHOH)， 7.82 (dd， Jl=0.5 Hz， J2-15.6 Hz， 1H)， 7.65(d， J=8.3 Hz， 2H), 7.62 (d， J=8.6 Hz， 1H)， 7.34 (s， 1H)， 7.21 (d， J-8.4 Hz， 2H)， 7.07(dd， Jl=2.1 Hz， J2-8.4 Hz， 1H)， 6.76(s， 1H) 6.28 (d， J=15.6 Hz， 1H)， 2.36 (s， 3H)。 HRMS Found: m/z 389.0624 (M+H)+; Calcd forC15H"N403S: M， 388.4606c
實(shí)施例6 (E)-N-羥基-3-(5-(4-甲基苯基)磺胺基苯并[bl噻吩-2-基)烯 丙酰胺(混合物2)的制備
制備方法將實(shí)施例3中的對(duì)甲苯磺酰氯用苯磺酰氯替換，其它制備方 法同實(shí)施3、 4和5。
Mp: 234 236 " 。 ^-歴R(500 Hz，DMSO隱d6) " 12.56(s， NHOH)， 10.32(s， NHOH), 7.82 (d， J-8.5 Hz， 1H)， 7.79 (d， J=15.6 Hz， 1H)， 7.74 (s， 1H)， 7.66(s， 1H)， 7.63(s， 1H)， 7.56 (d， J=2.0 Hz， 1H)， 7.32 (d， J=8.5 Hz， 3H)， 7.16(dd， J1-2. Hz， J2=8.7 Hz， 1H)， 6.20 (d， J-15.6 Hz， 1H)。 HRMS Found: m/z 375.0468 (M+H)+; Calcd for C17H"N204S2: M， 374.0395。
實(shí)施例7 (E)-N-羥基-S-(S-(^叔丁基)苯基)磺胺基苯并bl噻吩-:2-基H 烯丙酰胺(化合物3)的制備
HN一OHHN一OH
制備方法將實(shí)施例3中的對(duì)甲苯磺酰氯用對(duì)叔丁基苯磺酰氯替換，其 它制備方法同實(shí)施3、 4和5。
Mp: 177-179 " 。 ^-畫R(500 Hz,DMSO-d6) S: 12.56(s， NHOH)， 10.32(s， NHOH)， 7.82 (dd， Jl=0.5 Hz， J2=15.6 Hz， 1H)， 7.65(d， J=8.3 Hz， 2H)， 7.62 (d， J=8.6 Hz， 1H)， 7.34 (s， 1H)， 7.21 (d， J-8.4 Hz， 2H)， 7.07(dd， Jl=2.1 Hz， J2=8.4 Hz， 1H), 6.76(s， 1H) 6.28 (d， J=15.6 Hz， 1H), 1.33 (s， 9H)。 HRMS Found: m/z 429.0948 (M-H)-， 453.0913 (M+Na)+; Calcd for C21H22I\204S2: M， "0.1021。
實(shí)施例8 (￡)-^羥基-3-{5-(2，4，6-三甲基苯基)磺胺基苯并[1>1噻吩-2-基M烯丙酰胺(化合物4)的制備
制備方法將實(shí)施例3中的對(duì)甲苯磺酰氯用2，4，6-三甲基苯磺酰氯替換， 其它制備方法同實(shí)施3、 4和5。
Mp: 218-219 t: 。 iH-NMR(500 Hz，DMSO-d6) S: 12.56(s， NHOH)， 10.32(s， NHOH)， 7.82 (dd, Jl=0.5 Hz， J2-15.6 Hz， 1H), 7.62 (d， J=8.6 Hz， 1H)， 7.34 (s， 1H)， 7.20 (s， 2H)， 7.07(dd， Jl=2.1 Hz， J2=8.4 Hz, 1H), 6.76(s， 1H) 6.28 (d， J=15.6 Hz， 1H)， 2.64 (s， 6H)， 2.36(s， 3H)。 HRMS Found: m/z 415.0792 (M-H) ， "7.0937 (M+H)+; Calcd for C20H20N2O4S2: M, 416.0864。
實(shí)施例9生物活性研究
以上述實(shí)施例獲得的不同濃度本發(fā)明藥物作用于人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì) 胞株(A549)和人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞(NCI-H661) 72 h后，WST-8法檢測(cè)藥 物對(duì)細(xì)胞增殖的影響。
HN一OH
17藥物陽(yáng)性性藥物SAHA和MS-275為本實(shí)驗(yàn)室合成，結(jié)構(gòu)見(jiàn)

圖1和圖
2c
試劑與儀器HyQR改良型RPMI 1640培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基、WST-8 (Sigma)、電子耦合試劑l-Methoxy PMS (Sigma)、胰酶。C02培養(yǎng)箱、 無(wú)菌操作臺(tái)、酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液槍、移液管、離心管和96孔板等。 方法
1) 腫瘤細(xì)胞株培養(yǎng)
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞(NCI-H661):用含10%胎牛血清的RPMI 1640培 養(yǎng)基，于37'C、5。/。C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549): 用10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，于37"、 5°/。C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2) 細(xì)胞活力測(cè)定
取處于指數(shù)生長(zhǎng)期，狀態(tài)良好的細(xì)胞，加入適量胰酶消化細(xì)胞，收集細(xì) 胞離心，棄上清。用含血清的培養(yǎng)液重新混懸細(xì)胞，然后計(jì)數(shù)，并將細(xì)胞密 度稀釋至2x104個(gè)/ml密度。
取細(xì)胞懸液接種于96孔板上，100fil/孔(含腫瘤細(xì)胞5000個(gè)/孔)。將 培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入恒溫C02培養(yǎng)箱中，在37", 5%C02及飽和濕度條件下培養(yǎng) 24小時(shí)。
受試化合物先用DMSO配制成0.1M的儲(chǔ)存液，再根據(jù)需要稀釋樣品(單 位nM)。加入受試化合物50 jil/孔，培養(yǎng)72小時(shí)，每組設(shè)3個(gè)平行孔，并 重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
化合物作用72小時(shí)后，去掉細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液，將WST-8加入96孔板 中，10 ^L/孔，置于培養(yǎng)箱中在37T孵育1.5小時(shí)，酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng) 處檢測(cè)每孔的吸光度(650 nm波長(zhǎng)處校正)。
(1)細(xì)胞的存活率將各測(cè)試孔的OD值減去本底OD值(完全培養(yǎng) 基+WST-8，無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD值(完全培養(yǎng)基+不同稀釋度的受試 藥物+WST-8，無(wú)細(xì)胞)，各重復(fù)孔的OD值取均數(shù)iSD。
細(xì)胞的存活率以T/C。/。表示，T為加藥細(xì)胞的OD值，C為對(duì)照細(xì)胞的 OD值。
細(xì)胞存活率％ =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD) xl00
(2)求出T/C-50。/。時(shí)的藥物濃度(IC50)。抑制率高于50%的化合物，用GraphPad Prism 5.0軟件計(jì)算IC50值。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
生物活性測(cè)試結(jié)果表明，本發(fā)明化合物對(duì)A549和NCI-H119的增殖均 有不同程度的抑制作用，部分化合物的活性與MS-275相當(dāng)，其中化合物2 優(yōu)于SAHA和MS-275。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
表l本發(fā)明化合物對(duì)A549和NCI-H661增殖的抑制作用
化合物編號(hào)IC50(pM)
A549NCI-H661
1>100>100
21.6261.383
33.1222.193
43.9824.516
SAHA1.6460.1326
MS-2755.4122.187
上述實(shí)例只為說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技 術(shù)的人是能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù) 范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
19
權(quán)利要求
1.一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，Ar為芳基或雜環(huán)基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代C1-8烷基、C1-8烷氧基、鹵素、硝基、C1-8氨基烷基、C1-8烷基氨基、C1-8硫代烷基、C1-8鹵代烷基、C1-8鹵代烷氧基、C1-8酯基、苯基或雜環(huán)基；R1選自氫或C1-8烷基。
1.其中，Ar為芳基或雜環(huán)基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取 代Cl-8垸基、Cl-8垸氧基、鹵素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8垸基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8鹵代烷基、Cl-8鹵代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或雜環(huán) 基；Ri選自氫或Cl-8烷基。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述的芳基為苯基。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的化合物，其特征在于所述的雜環(huán)基選自吡啶、 噻吩、呋喃、吡咯或咪唑。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述的芳基或雜環(huán)基任 選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代Cl-8烷基、鹵素、硝基或Cl-8鹵 代烷基。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物，其特征在于所述的芳基或雜環(huán)基任 選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代Cl-4的烷基、鹵素、硝基或Cl-4 的鹵代烷基。
6、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的化合物，其特征在于R1為氫。
7、 一種式(II)的化合物中間體，其中，Ar為芳基或雜環(huán)基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取 代Cl-8烷基、Cl-8烷氧基、鹵素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8垸基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8鹵代烷基、Cl-8鹵代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或雜環(huán) 基；Rt選自氫或Cl-8垸基。
8、 一種藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物包括權(quán)利要求1 6中 任意一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
9、 權(quán)利要求1 6任意一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備 藥物方面的應(yīng)用，其特征在于所述藥物用于治療與細(xì)胞分化或增殖相關(guān)的實(shí) 體瘤或白血病。
10、 一種制備權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法， 其特征在于所述方法包括以下步驟(1)使式(IV)的化合物<formula>formula see original document page 3</formula>(V)(2) 使步驟(1)中式(V)的化合物與式(VI)的化合物 Ar、 ，X<formula>formula see original document page 3</formula> (VI)反應(yīng)得到式(II)的化合物；(3) 式(II)的化合物水解酸化后在適當(dāng)?shù)幕罨噭┲信c羥胺反應(yīng)得 到式(I)的化合物；其中Ar為芳基或雜環(huán)基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代 Cl-8烷基、Cl-8垸氧基、鹵素、硝基、Cl-8氨基烷基、Cl-8垸基氨基、 Cl-8硫代烷基、Cl-8鹵代烷基、Cl-8鹵代烷氧基、Cl-8酯基、苯基或雜環(huán) 基；Rt選自氫或Cl-8垸基；X選自鹵素。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，Ar為芳基或雜環(huán)基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自下列的基團(tuán)所取代C1-8烷基、C1-8烷氧基、鹵素、硝基、C1-8氨基烷基、C1-8烷基氨基、C1-8硫代烷基、C1-8鹵代烷基、C1-8鹵代烷氧基、C1-8酯基、苯基或雜環(huán)基；R₁選自氫或C1-8烷基。該化合物制備的藥物可用于治療與細(xì)胞分化或增殖相關(guān)的實(shí)體瘤或白血病。
文檔編號(hào)C07D333/60GK101648940SQ20091003413
公開日2010年2月17日 申請(qǐng)日期2009年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月20日
發(fā)明者民 吉, 吳曉晴, 魏紅濤 申請(qǐng)人:蘇州東南藥物研發(fā)有限責(zé)任公司