1.一種使用同一脂肪細(xì)胞聯(lián)合分析細(xì)胞增殖和沉脂能力的方法,其特征在于,它采用同一脂肪細(xì)胞,先MTT法檢測細(xì)胞增殖,然后用油紅O染色檢測細(xì)胞沉脂能力。
2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,該方法的具體步驟如下:
(1)棄去6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中前脂肪細(xì)胞或脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)基,PBS漂洗3遍,加入體積比10%的MTT工作液2mL,于二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育0.5-2h至細(xì)胞染色完全,完全棄去MTT工作液;
(2)加入0.5-1mL的DMSO于搖床輕微振蕩混勻10min,顯微鏡下觀察至細(xì)胞染色褪去,然后取96孔酶標(biāo)板,每孔加入150μL混勻后的液體,酶標(biāo)儀490nm波長讀取OD值;
(3)完全棄去6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中DMSO萃取的液體,PBS清洗細(xì)胞2-3次;1mL4%多聚甲醛固定細(xì)胞0.5h;PBS清洗細(xì)胞2-3次;加入0.5%油紅O染液0.5-1mL,室溫染色0.5-2h;
(4)棄去油紅O染液,PBS清洗細(xì)胞3次,倒置顯微鏡拍照;加入1mL異丙醇,搖床輕微振蕩混勻10min;取96孔酶標(biāo)板,每孔加入150μL混勻后的液體,酶標(biāo)儀510nm波長讀取OD值。
3.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,步驟(1)中將MTT染色的細(xì)胞于二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育時間為1h。
4.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,步驟(2)中加入的DMSO為1mL。
5.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,步驟(2)中加入DMSO完全萃取MTT染料,至細(xì)胞變?yōu)闊o色。
6.如權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,步驟(3)中加入的0.5%油紅O染液為0.5mL。
7.如權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,步驟(3)中加入0.5%油紅O 染液后室溫染色時間為1h。
8.如權(quán)利要求2-7任一所述的方法,其特征在于,步驟(1)中檢測的前脂肪細(xì)胞或脂肪細(xì)胞,可以是不同物種、不同組織來源、不同生長時期的前體脂肪細(xì)胞或脂肪細(xì)胞。
9.權(quán)利要求1-7任一所述的方法在針對體外研究不同物種、不同組織部位來源的前體脂肪細(xì)胞分化、脂肪細(xì)胞沉脂能力及相關(guān)的分子調(diào)控機理,以及相關(guān)營養(yǎng)素或藥物的篩選研發(fā)中應(yīng)用。