本發(fā)明涉及藥物制備方法領(lǐng)域，具體是指一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉的制備方法。

背景技術(shù)：

單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉，系自豬腦中提取制得的對(duì)神經(jīng)細(xì)胞功能損傷具有作用的物質(zhì)?，F(xiàn)有技術(shù)對(duì)于單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉的提取都立足于提高產(chǎn)品純度、收率，降低產(chǎn)品成本，減少毒害有機(jī)溶劑( 特別是氯仿) 的使用量等方面進(jìn)行了大量的研究，并且市場(chǎng)已有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉注射液、注射用單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉等多種產(chǎn)品在銷售使用。然而，由于來(lái)源于生物原料豬腦，單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉的不良反應(yīng)比較多，特別是與藥物中的雜質(zhì)、污染物、添加劑、病毒或特殊代謝產(chǎn)物形成有關(guān)的過(guò)敏反應(yīng)，而且目前的提取技術(shù)也不夠精細(xì)，提取的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉中還會(huì)含有微量的有害物質(zhì)和雜質(zhì)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種提取純度高、雜質(zhì)少、步驟簡(jiǎn)單、安全性高的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉的制備方法。

本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉的制備方法，包括以下步驟:

（1）以鮮豬腦為原料進(jìn)行攪拌，得到鮮豬腦的濃縮液；

（2）對(duì)制備的濃縮液進(jìn)行樹脂層析，并抽濾干燥得到濃縮粉：

（3）硅膠粗純化步驟：將濃縮粉溶于由甲醇、三氯和純水制備的流動(dòng)相，然后進(jìn)行硅膠層析，沉淀干燥得到粗品濃縮粉；

（4）硅膠精純化步驟：將粗品濃縮粉溶于由甲醇、三氯和純水制備的層析緩沖液中，然后進(jìn)行硅膠層析，沉淀干燥得到精品濃縮粉。

進(jìn)一步地，所述步驟（1）包括：豬腦的解凍、分揀雜質(zhì)、攪拌、壓濾、分層、分解，得到鮮豬腦濃縮液。

進(jìn)一步地，步驟（2）包括：新樹脂的制備以及樹脂強(qiáng)化再生、樹脂的吸附清洗以及甲醇脫洗、樹脂及鮮豬腦濃縮液的濃縮、丙酮沉淀、抽濾干燥，得到濃縮粉。

進(jìn)一步地，新樹脂的制備以及樹脂強(qiáng)化再生的具體步驟為：

（2.1）新樹脂用飲用水清洗2BV；樹脂強(qiáng)化再生用飲用水層析2BV，放出樹脂；

（2.2）放出后的樹脂用20%鹽酸溶液50L浸泡1.5-2.5小時(shí)；

（2.3）浸泡后用飲用水清洗2-4遍，瀝干后，用3%-5%氫氧化鈉溶液60-100L浸泡1.5-2.5小時(shí)；

（2.4）將浸泡后的樹脂飲用水清洗至pH=6-8，瀝干，然后按樹脂：水（v/v）=1:1加入飲用水，裝柱備用；

（2.5）樹脂每柱洗脫10批，然后按 （2.1）-（2.4）步驟強(qiáng)化再生樹脂一次。

進(jìn)一步地，流動(dòng)相按照甲醇：三氯：純水=30:80:8（V:V:V）的比例進(jìn)行配比。

進(jìn)一步地，層析緩沖液按照甲醇：三氯：純水=40:70:5（V:V:V）的比例進(jìn)行配比。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)及有益效果：

（1）本發(fā)明在純化步驟中分為粗純化步驟和精純化步驟，與現(xiàn)有技術(shù)相比，單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉制備的純度更高；

（2）本發(fā)明在樹脂層析步驟中使用的樹脂，采用特定的酸堿處理以及清洗過(guò)程，而且對(duì)樹脂層析柱進(jìn)行強(qiáng)化再生處理，使得樹脂層析的效果更好。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的目的、工藝條件及優(yōu)點(diǎn)作用更加清楚明白，結(jié)合以下實(shí)施實(shí)例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。此處所描述的具體實(shí)施實(shí)例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例1：

一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉的制備方法，包括以下步驟:

（1）以鮮豬腦為原料進(jìn)行攪拌，得到鮮豬腦的濃縮液；

（2）對(duì)制備的濃縮液進(jìn)行樹脂層析，并抽濾干燥得到濃縮粉：

（3）硅膠粗純化步驟：將濃縮粉溶于由甲醇、三氯和純水制備的流動(dòng)相，然后進(jìn)行硅膠層析，沉淀干燥得到粗品濃縮粉；

（4）硅膠精純化步驟：將粗品濃縮粉溶于由甲醇、三氯和純水制備的層析緩沖液中，然后進(jìn)行硅膠層析，沉淀干燥得到精品濃縮粉。

其中，步驟（3）中溶樣（濃縮粉溶于流動(dòng)相）按每柱2.0kg上樣量在溶解在溶樣桶中，按1:5（W/V）比例加入流動(dòng)相浸泡不不低于12小時(shí)；開啟攪拌至溶解完全，徹底溶解樣品，樣品溶解后性狀為黃色透明液體，密封備用；流動(dòng)相按照甲醇：三氯：純水=30:80:8（V:V:V）的比例進(jìn)行配比；層析緩沖液按照甲醇：三氯：純水=40:70:5（V:V:V）的比例進(jìn)行配比；

硅膠層析的步驟為：

層析柱的裝柱：每柱裝柱硅膠量為18kg, 100-200目硅膠；準(zhǔn)確稱取18kg，100-200目硅膠于懸浮專用圓桶中，加入54L流動(dòng)相充分?jǐn)嚢钁腋?，將硅膠一次性沿內(nèi)壁裝入層析柱上部，即完成裝柱；開啟流動(dòng)相，每柱平衡50L，流速5L/小時(shí)，待上樣；

上樣的步驟為：

將提前溶解的樣品緩慢勻速泵入層析柱內(nèi)，上樣完畢后開始層析；

層析的步驟為：

每柱以5L/小時(shí)流速層析，用20L/桶收集，直至樣品收集完全；取樣檢測(cè)，收集合格產(chǎn)品層析結(jié)束。

實(shí)施例2：

本實(shí)施例在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，所述步驟（1）包括：豬腦的解凍、分揀雜質(zhì)、攪拌、壓濾、分層、分解，得到鮮豬腦濃縮液。從冷庫(kù)領(lǐng)出200kg/釜豬腦；豬腦解凍后去除解凍槽中的血水，挑揀出雜物，將解凍槽中已經(jīng)解凍的豬腦舀到絞肉機(jī)料斗里，腦漿用收集槽接收；清場(chǎng)并清洗所有設(shè)備、工器具。

本實(shí)施例的其他部分與實(shí)施例1相同，不再贅述。

實(shí)施例3：

本實(shí)施例在上述實(shí)施例的基礎(chǔ)上，所述步驟（2）包括：新樹脂的制備以及樹脂強(qiáng)化再生、樹脂的吸附清洗以及甲醇脫洗、樹脂及鮮豬腦濃縮液的濃縮、丙酮沉淀、抽濾干燥，得到濃縮粉。

本實(shí)施例的其他部分與上述實(shí)施例相同，不再贅述。

實(shí)施例4：

本實(shí)施例在上述實(shí)施例的基礎(chǔ)上，所述新樹脂的制備以及樹脂強(qiáng)化再生的具體步驟為：

（2.1）新樹脂用飲用水清洗2BV；樹脂強(qiáng)化再生用飲用水層析2BV，放出樹脂；

（2.2）放出后的樹脂用10%鹽酸溶液80L浸泡2小時(shí)；

（2.3）浸泡后用飲用水清洗3遍，瀝干后，用4%氫氧化鈉溶液80L浸泡2小時(shí)；

（2.4）將浸泡后的樹脂飲用水清洗至pH=7，瀝干，然后按樹脂：水（v/v）=1:1加入飲用水，裝柱備用；

（2.5）樹脂每柱洗脫3批，然后按 （2.1）-（2.4）步驟強(qiáng)化再生樹脂一次。

由大量的測(cè)量數(shù)據(jù)得出，通過(guò)本制備方法制備的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉平均純度高于99.5%，通過(guò)對(duì)50名使用者的跟蹤統(tǒng)計(jì)，發(fā)生不良反應(yīng)的概率降低了58%。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解：在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。