專利名稱：一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸
的組合物，以及該組合物在制備用于治療血管性或外傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和帕金森氏病 的藥物中的用途。
2背景技術(shù)：
神經(jīng)節(jié)苷脂(Gangliosides)是含唾液酸的糖神經(jīng)鞘脂，存在于哺乳類動物細胞 膜，神經(jīng)系統(tǒng)中含量尤其豐富,是神經(jīng)細胞膜的組成成分，在神經(jīng)發(fā)生、生長、分化過程中起 必不可少的作用，對于損傷后的神經(jīng)修復也非常重要，具有促進神經(jīng)再生、神經(jīng)軸突生長和 突觸形成、恢復神經(jīng)支配功能；改善神經(jīng)傳導、促進腦電活動及其它神經(jīng)電生理指標的恢 復；保護細胞膜、促進細胞膜各種酶活性恢復等作用。 單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)是重要的神經(jīng)節(jié)苷脂之一，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)病 變的治療中起重要作用。GM1除具有上述神經(jīng)節(jié)苷脂的共同作用外，還可以通過維持中樞神 經(jīng)細胞膜上的Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性，起到維持細胞內(nèi)外離子平衡、減輕 神經(jīng)細胞水腫、防止細胞內(nèi)Ca"積聚的作用;GM1可以對抗興奮性氨基酸的神經(jīng)毒性作用， 減少自由基對神經(jīng)細胞的損害等。因此,單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)能促進各種原 因引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的神經(jīng)重塑與功能恢復，對血管性或外傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損 傷及帕金森氏病等具有較好的療效。 神經(jīng)節(jié)苷脂分子親水端與疏水端長度相近、極易在水中形成穩(wěn)定的膠束狀態(tài)，不 利于注射制劑的制備。專利W09317691是將單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂制成鈉鹽,注射液 制劑用磷酸鹽做緩沖液,氯化鈉做等滲調(diào)節(jié)劑，有效的解決了單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂 在水中形成膠束狀狀態(tài)、藥品制劑困難的問題。然而該處方的鈉鹽影響單唾液酸四己糖神 經(jīng)節(jié)苷脂生物膜及血腦屏障通透性，從而腦部血藥濃度低，并且無法長時間維持在治療濃 度以上，大大降低了臨床使用療效。因此急需尋找一種新的、能夠提高單唾液酸四己糖神經(jīng) 節(jié)苷脂鈉過生物膜及血腦屏障率、臨床使用療效高的方法。 谷氨酸作為腦組織唯-能被氧化的氨基酸，其體內(nèi)的產(chǎn)物谷酰胺可作為腦組織的 能量物質(zhì)，改善維持大腦機能。谷氨酸作為神經(jīng)中樞及大腦皮質(zhì)的補劑，對于治療腦震蕩或 神經(jīng)損傷、癲癇以及對弱智兒童均有一定療效。因此我們選用單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂 鈉與谷氨酸制備組合物進行研究，大量實驗結(jié)果顯示，在一定配比下，組合物中谷氨酸除了 含有上述作用外，還顯示出增加GM1腦靶向性的作用，有效地促進了單唾液酸四己糖神經(jīng) 節(jié)苷脂鈉的血腦屏障通透性；同時，谷氨酸還起到使GM1穩(wěn)定的作用。
3
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有良好的血腦屏障通透性和臨床療效的單唾液酸四 己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物。 本發(fā)明的另一目的是提供一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物的制備方法。 本發(fā)明的還一目的是提供本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合 物在制備用于治療血管性或外傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和帕金森氏病的藥物中的用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下--種含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，其特征在于，單唾液
酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉和谷氨酸之間的重量比在5 : i到60 : i之間。
所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物,其特征在于，單唾
液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉和谷氨酸之間的重量比在io : i到4() : i之間。 所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，其特征在于，單唾
液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉和谷氨酸之間的重量比在15 : i到30 : i之間。 所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物,其特征在于，單唾
液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉和谷氨酸之間的重量比為2() : i。 所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，其特征在于，所述 的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物為注射液制劑。 所述的注射液，其中輔料為等滲調(diào)節(jié)劑或pH調(diào)節(jié)劑,常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯 化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋 酸_醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸_枸櫞酸鈉、磷酸二氫鈉_磷酸氫二鈉等，優(yōu)選磷酸二氫鈉_磷酸 氫二鈉。 所述的注射液，其特征在于，所述的pH調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和氫氧 化鈉。 所述的注射液，其特征在于，所述的pH范圍在7. 0 8. 0之間。 所述的注射液制劑的制備方法，其特征在于，按處方精密稱定單唾液酸四己糖神
經(jīng)節(jié)苷脂鈉、谷氨酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉，取注射用水,加入稱好的單唾液酸
四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉，緩慢攪拌至全溶，然后依次加入稱好的谷氨酸、磷酸氫二鈉、磷酸二
氫鈉、氯化鈉，攪拌，此時藥液的pH值在7. 0 8. 0之間，定容,用0. 22 u m微孔濾膜過濾，
灌裝，熔封，滅菌，冷卻，貼簽，包裝，即得單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物
注射液。 本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，藥物組分的配比是經(jīng)過 發(fā)明人進行大量摸索總結(jié)得出的，各組分配比都具有較好療效。 1、單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，具有更好的生物過膜及血腦 屏障通透速率，極大的提高了使用療效。 2、單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物的注射液制劑穩(wěn)定性更好。
3、單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物在組織中具有長效作用，其注 射液制劑可以減少給藥次數(shù)。 以下通過藥理研究實驗例進一步闡述本發(fā)明的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物的有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與
谷氨酸的組合物僅具有下列有益效果。 敘合縣'發(fā)日月會日雄 力綱應(yīng) 供試品單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物的注射液制劑(2()mg/ 支)， 自制，制備方法見實施例。 對照品施捷因注射液(20mg/支)，市購，TRB藥廠生產(chǎn)。 [國](一)腦脊液中藥物濃度的測定 取新西蘭家兔35只，體重約2. 5kg，雌雄不限，隨機分成7組，即施捷因注射液組 (簡稱A組)和本發(fā)明的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物注射液組(簡稱 B組)。靜脈注射給藥，于給藥后不同時間抽取0. 2mL腦脊液進行實驗，取樣時間分別為注 射藥物后的3()niin、lh、2h、4h、8h。取腦脊液0. 1mL加適量溶劑混懸15niin，以10()()()r/min 離心lmin，取上層清液20u L進樣，用高效液相色譜測定。結(jié)果見表1。
表1腦脊液中藥物濃度的測定
組別組合物配比 (GMl:谷氨酸)30 mki1 h濃度(幽) 2h4h8h
A組——0.2340.3460.7380.8320.521
10: 1.0.2280.4480.7410.8390.769
15: 10.336,0.451*0.756'0.851*0.837*
B組20: 10.443*0.657*0.868*1.159*0.989*
25: 1.0.238*0.453'0.761*0.947*0.741'
30: 10.438*0.353*0.657*0.852*0.653*
40: 1.0.2260.3880.7490.8480.539 注與A組相比較*p < 0. 01 。 實驗結(jié)果和結(jié)論由表1實驗結(jié)果可見，本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與 谷氨酸的組合物注射液制劑通過血腦屏障的藥物量比施捷因注射液制劑有明顯提高,說明 本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物注射液制劑透過血腦屏障的藥物 量明顯增加,提高了腦組織中的血藥濃度，因而提高了治療效果；實驗數(shù)據(jù)還表明，本發(fā)明 單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物注射液制劑給藥后，耙組織的藥物濃度升 高快速且穩(wěn)定,在組織中具有長效作用，因而本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨 酸的組合物注射液制劑可以減少給藥次數(shù)。同時，相同給藥劑量下,GM1與谷氨酸重量配比
在io : l到40 : l范圍內(nèi)的腦部藥物量高于施捷因，并且GMi與谷氨酸重量配比在i5 : i 到30 : l的范圍內(nèi)的效果均明顯(p〈0.01)的優(yōu)于施捷因。(二)穩(wěn)定性考察 將施捷因注射液制劑(簡稱A組)和本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷 氨酸的組合物注射液制劑(簡稱B組)分別置于小瓶內(nèi)，密封。于冰箱(3 5°C )、室溫 (20 25°C )和37°C (RH 75% )的環(huán)境中放置，于0、3、6和12個月觀察藥物的外觀。結(jié) 果見表2。 表2穩(wěn)定性實驗結(jié)果
時間(月)
放置條件 觀測 0 3 6 12
指標A組 B組 A組 B組 A組 B組 A組 B組 實驗結(jié)果與討論在各種溫度和時間下，本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與 谷氨酸的組合物顏色未見顯著變化，不同條件下的物質(zhì)再分散性保持良好,無聚合現(xiàn)象發(fā) 生，說明本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物的穩(wěn)定性很好,相對于施 捷因制劑更加穩(wěn)定，更適合長期儲存，更適應(yīng)于工業(yè)大生產(chǎn)。
(三)對帕金森氏癥(PD)的治療作用
1 、選擇性偏側(cè)大鼠PD模型制備 (1)手術(shù)準備成熟健康Wist.ar大白鼠，雌雄不限，體重150 200g。動物在室 溫下籠中常規(guī)喂養(yǎng)，術(shù)前不禁食。6-羥多巴胺(6-0HDA， Sigma chemical Co.產(chǎn)品)溶于 0.02%的抗壞血酸液中配成0.2%的溶液，低溫(-20°C )冰箱中密封避光保存?zhèn)溆谩０?嗎啡(AP()，Sig-chemical Co.產(chǎn)品)用雙蒸水配成0. 01 %溶液備用，以上溶液要求嚴格無 菌。 (2)模型制作動物用0. 3%戊巴比妥鈉10mL/kg腹腔注射麻醉后，固定在立體定 位儀上(江灣I型C)。無菌條件下，正中切開大鼠顱頂部皮膚,剝離骨膜，暴露前囟(十字 縫)、人字縫。用鼠顱骨鉆于手術(shù)要求部位鉆一直徑為5mra的顱骨孔，確定右側(cè)黑質(zhì)部坐標 位置。用10 i！ L微量進樣器(上海計量儀器廠生產(chǎn))分兩次將6-0HM按下列坐標位置注 入右側(cè)黑質(zhì)部，建立右側(cè)選擇性大鼠PD動物模型。B坐標系統(tǒng)外耳道連線(耳桿尖中心連 線)低于上門齒板上緣5mm,即水平0平面。第一次注射4iiL，針尖斜面朝嘴側(cè),坐標為，前 図后(Posterior bregma, P:B) 3. ()mra，正中線右側(cè)(Median right lateral.亂)2. 5mra，硬腦 膜腹側(cè)(Ventral dural， VD) 8. 6mm。第二次注射3 y L，針尖斜面朝尾側(cè)，坐標為PB2. 4mm， MRL 2. 7mm， VD8. 6mm。注射速度1 u l/min,每次注射完畢留針10min，然后以1. 0mm/min速 度緩慢拔針(約10min)。手術(shù)完畢,用醫(yī)用明膠海綿堵塞顱骨孔，縫合切口，放回籠中喂養(yǎng)。
(3) AP()誘發(fā)動物旋轉(zhuǎn)行為觀察造模術(shù)后14d，動物腹腔注射0. 01 % A:P() l(ML/kg 誘發(fā)大鼠旋轉(zhuǎn)行為(逆時針方向)，驗證6-0HDA對中腦黑質(zhì)M能神經(jīng)元的損傷效應(yīng)。旋轉(zhuǎn) 速度達到6r/min (①35cm/r)視為成功PD選擇性偏側(cè)模型，注射APO lOmin開始記錄，共記 錄30min。 2、動物分組及處理 實驗動物分為正常對照組、PD組、單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合 物注射液制劑治療組(簡稱C組)，每組16只。按實驗設(shè)計要求，于實驗完畢時，記錄APO 誘發(fā)的旋轉(zhuǎn)行為變化后，斷頭處死動物,快速取腦，在冰盤中分離右側(cè)紋狀體。測MCa (線粒 體鈣)的標本加入0. 5N鹽酸硝化24h，離心后取上清液0. 2mL，加入1 % La-C130. 8mL混勻，
3~5 'C
20-25 。C
37 。C (RH 75%)
透 透 透
fe明！s明fe明
無無無
色明色明有濁
無透無透略渾
色明色明色明
無透無透無透
色明色明有濁
無透無透略渾
色明色明色明
無透無透無透
色明色明色明
無透無透無透
色明色明色明
無透無透無透
色明色明色明
無透無透無透
色 色 色
顏顏 顏
6用PE-503型原子吸光光度計測鈣濃度；另一份測定CaM(鈣調(diào)素)的標本先稱濕重，然后用 EDTA(乙二胺四乙酸)緩沖液(10mg/mg)勻漿，測定。正常對照組除不行手術(shù)外，其余處理 方法同上。 實驗結(jié)果與討論 表3正常對照組、PD組和C組右側(cè)紋狀體MCa、 CaM的含量
n正常對照組 PD組C組
MCa《嗎/mg Pr) 87.26 15.23 9.32*B
CaMOimol/kg wt) 822.29 40.31 29.46*#注與正常對照組比較*P < 0. 01;與PD組比較，< 0. 01。由表3實驗結(jié)果可見，本發(fā)明單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物注射液制劑大大降低了 PD組右側(cè)紋狀體MCa、 CaM的含量,對PD具有明顯的治療作用。具體實施例方式以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。實施例本發(fā)明單唾液酸四R糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氡酸的織合物許射液制劑的制備1、處方處方1單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉iog谷氨酸lg磷酸氫二鈉0. 94g磷酸二氫鈉0. 15g氯化鈉6. 8g0. lraol/L氫氧化鈉適量注射用水加至lOOOmL共制備500支處方2單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉10g谷氨酸0. 5g
磷酸&二鈉1. 12g磷酸二氫鈉0. 18g氯化鈉7. Og0. lmol/L氫氧化鈉適JiC注射用水加至lOOOmL
共制備500支處方3單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉20g谷氨酸3g磷酸氫二鈉2. 38g磷酸二氫鈉0. 38g氯化鈉16. 0g() lraol/L氫氧化鈉適量注射用水加至2000mL 共制備 處方4 單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉 谷氨酸 磷酸氫二鈉 磷酸二氫鈉 氯化鈉 0. lmol/L氫氧化鈉 注射用水加至 _ 共制備 處方5 單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉 谷氨酸 磷酸氫二鈉磷酸二氫鈉 氯化鈉 0. 1nio:l/'L氫氧化鈉 注射用水加至共制備1000支處方6單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉10g谷氨酸0.6g磷酸氫二鈉1. 52g磷酸二氫鈉() 25g氯化鈉8. 0g0. lmol/L氫氧化鈉適量注射用水加至lOOOmL
1000支
10. 0g
0. 8g
1. 18g 0. 18g 8. 0g 適量 lOOOmL
500支
20g 4g
2. 18g 0. 35g 20. Og
適量 2000mL











共制備 處方7
單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉
谷氨酸
磷酸氫二鈉
磷酸二氫鈉
氯化鈉
0. lmol,ZL氫氧化鈉 注射用水加至
共制備
2()g 0. 5g
3. 14g 0. 57g 25. ()g
適量
500支
2000mL
1000支 2、制備工藝 1)按處方精密稱定單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉、谷氨酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫 鈉、氯化鈉； 2)取60°C (±5°C )注射用水約l-80()mL，加入稱好的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂 鈉，緩慢攪拌至全溶； 3)依次加入稱好的谷氨酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉，攪拌溶解。此時藥液 的pH值約7. 5 ; 4)放至室溫，再用注射用水定容至2()(X)mL ;
5)用0. 22 " m微孔濾膜過濾，
6)檢測透明度；
7)檢測含量； 8)在通過GMP認證的水針灌裝車間取上述溶液灌裝于2mL的安瓿中；
9)熔封； 10) 12(TC流通蒸氣滅菌30分鐘； 11)檢漏； 12)燈檢； 13)成品全檢； 14)貼簽; 15)包裝入庫。
權(quán)利要求
一種含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，其特征在于，單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉和谷氨酸之間的重量比在5∶1到60∶1之間。
2. 如權(quán)利要求i所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，其特征在于，單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉和谷氨酸之間的重量比在io : i到40 : i之間。
3. 如權(quán)利要求2所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，其特征在于，單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉和谷氨酸之間的重量比在15 : l到30 : i之間。
4. 如權(quán)利要求3所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，其特征在于，單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉和谷氨酸之間的重量比為20 : i。
5. 如權(quán)利要求1 4所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，其特征在于，所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物為注射液制劑。
6. 如權(quán)利要求5所述的注射液，其中輔料為等滲調(diào)節(jié)劑或pH調(diào)節(jié)劑。
7. 如權(quán)利要求6所述的注射液,其特征在于，所述的pH調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和氫氧化鈉。
8. 如權(quán)利要求6所述的注射液，其特征在于，所述的pH范圍在7. 0 8. 0之間。
9. 如權(quán)利要求5所述注射液制劑的制備方法，其特征在于，按處方精密稱定單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉、谷氨酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉，取注射用水,加入稱好的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉，緩慢攪拌至全溶，然后依次加入稱好的谷氨酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉，攪拌，此時藥液的PH值在7. 0 8. 0之間，定容，用0. 22"m微孔濾膜過濾，灌裝，熔封，滅菌，冷卻，貼簽，包裝，即得單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物注射液。
10. 如權(quán)利要求1 4任意一項權(quán)利要求所述的含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，在制備治療血管性或外傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和帕金森氏病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉與谷氨酸的組合物，還提供了該組合物注射液制劑的制備方法，以及在制備用于治療血管性或外傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和帕金森氏病的藥物中的用途。
文檔編號A61P25/16GK101732331SQ20091000847
公開日2010年6月16日 申請日期2009年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月20日
發(fā)明者孟憲慧, 賈中新, 車馮升, 郭維城, 霍彩霞 申請人:北京四環(huán)制藥有限公司;海南四環(huán)醫(yī)藥有限公司