本發(fā)明屬于天然藥物研究開(kāi)發(fā)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種天然產(chǎn)物藥物的高效集群式化學(xué)修飾合成方法。

背景技術(shù)：

藥理活性和成藥性是新藥創(chuàng)制的兩大要素，成藥性是由分子的物理化學(xué)性質(zhì)、生物化學(xué)性質(zhì)、藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和安全性所支撐。以來(lái)源于動(dòng)物、植物、海洋生物、礦物等天然藥物化學(xué)成分為先導(dǎo)物的新藥研究是藥物研究的重要途徑。天然藥物具有多樣性和復(fù)雜性結(jié)構(gòu)。天然活性物質(zhì)是良好的先導(dǎo)物, 但未必能滿足成藥性要求, 因此需要對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和優(yōu)化。天然產(chǎn)物作為藥物研究的先導(dǎo)化合物有其無(wú)法替代的獨(dú)特性質(zhì), 比如紫杉醇、紅霉素和利福霉素等天然產(chǎn)物不僅具有各自獨(dú)特的生物學(xué)活性，而且還可以幫助科學(xué)家們理解重要的生物過(guò)程。組合化學(xué)技術(shù)興起之后，藥物研發(fā)的重心曾從天然產(chǎn)物轉(zhuǎn)向了化學(xué)全合成。盡管這些技術(shù)在提供篩選樣品數(shù)量、優(yōu)化結(jié)構(gòu)方面相當(dāng)成功，大量的化合物庫(kù)已經(jīng)建立起來(lái)，但30年來(lái)獲批的完全基于組合化學(xué)技術(shù)的創(chuàng)新藥物卻很少。根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，現(xiàn)在已經(jīng)上市的藥物中70％以上的藥物與天然產(chǎn)物有關(guān)。因此，天然產(chǎn)物是新的藥物結(jié)構(gòu)、新藥研發(fā)的重要來(lái)源。

天然產(chǎn)物具有顯著的生理學(xué)活性，可作為大多數(shù)藥物研發(fā)的先導(dǎo)化合物。但是很多天然產(chǎn)物中的有效單體實(shí)際上可能是藥物的前體，而且有些單體在體內(nèi)難于轉(zhuǎn)化成高活性結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)為治療效果較差。另有研究發(fā)現(xiàn)，天然產(chǎn)物中多含氧原子，如羥基，羰基以及雙鍵等官能團(tuán)結(jié)構(gòu)。臨床應(yīng)用的藥物的結(jié)構(gòu)中卻多含氮原子，鹵素原子，硫原子等。因此，僅僅采取直接從天然產(chǎn)物中分離獲得有效單體來(lái)進(jìn)行藥物篩選評(píng)價(jià)的研究思路難以獲得高療效的藥物，而基于對(duì)天然產(chǎn)物中成分結(jié)構(gòu)進(jìn)行有目的修飾才可以達(dá)到提高藥物活性，治療專一性，同時(shí)降低毒副作用的目的。

綜上所述，以天然產(chǎn)物的基本骨架為基礎(chǔ)進(jìn)行有目的的結(jié)構(gòu)改造和修飾是獲得結(jié)構(gòu)和性質(zhì)多樣性的藥物新型化合物的重要途徑。

然而，由于天然產(chǎn)物來(lái)源有限、所以導(dǎo)致其價(jià)格昂貴，并且通過(guò)傳統(tǒng)的分離、提取方法得到的成份或組分含量很低，如果在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行后續(xù)的結(jié)構(gòu)修飾，會(huì)使產(chǎn)率進(jìn)一步降低，成本進(jìn)一步升高，所以傳統(tǒng)的天然產(chǎn)物分離提純?nèi)缓笤龠M(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾改造的技術(shù)路線越來(lái)越不能滿足高通量藥物篩選的需求，極大地阻礙了藥物的研發(fā)速度，提高了最終藥物的銷售成本，影響了人類健康生活水平的提高。因此，發(fā)展新的更加高效的化合物的結(jié)構(gòu)改造和修飾技術(shù)，對(duì)于滿足新藥篩選所需的新化合物需求，加速新藥的研發(fā)和上市速度，提高人類生活衛(wèi)生健康水平，促進(jìn)人類醫(yī)學(xué)藥學(xué)研究水平的提升具有重要意義。

現(xiàn)有的天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)修飾方法可以分為兩大類。經(jīng)典的修飾方法就是經(jīng)過(guò)一系列分離提取技術(shù)得到單一的化合物單體，然后將單體經(jīng)過(guò)一系列合成、分離提純步驟之后得到相應(yīng)的目標(biāo)產(chǎn)物。這種修飾方法優(yōu)點(diǎn)是每一步的反應(yīng)物明確單一，但是具有高生物活性的成分往往在天然產(chǎn)物中的含量較低，經(jīng)過(guò)一系列合成反應(yīng)、分離提純步驟之后很難得到足夠量的產(chǎn)物用于結(jié)構(gòu)修飾，更不適合量少化合物的結(jié)構(gòu)修飾，同時(shí)提高了藥物篩選的成本，因此不能夠滿足目前藥物行業(yè)研究中高通量藥物篩選的需求。

除經(jīng)典的修飾方法以外，通過(guò)組合修飾的方法也能得到一系列先導(dǎo)化合物。這種修飾方法多數(shù)是通過(guò)分離提純后的單體化合物與多種試劑進(jìn)行同時(shí)組合反應(yīng)，分離提純后可以同時(shí)得到一系列取代基不同的類似物。國(guó)內(nèi)外的研究者利用固相或液相合成對(duì)糖類、脂肪酸類、黃酮類等天然產(chǎn)物進(jìn)行組合修飾，得到類天然產(chǎn)物化合物庫(kù)，但是此類方法對(duì)于反應(yīng)物的條件要求比較苛刻，需要先經(jīng)過(guò)分離提純天然產(chǎn)物得到單體成分，并要求提純的成分必須具備羥基等基團(tuán)、必須要可以與樹(shù)脂發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，連接在樹(shù)脂上才可行。該類方法對(duì)于天然產(chǎn)物本身結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和含量要求較為苛刻，因此并不能適用于通用性構(gòu)建天然產(chǎn)物化合物庫(kù)。

我們分析中藥有效成分的物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)現(xiàn)，其主要的化學(xué)組成成份中具有高度的結(jié)構(gòu)集群（相同或相似結(jié)構(gòu)化合物的集合）特點(diǎn)。例如：傳統(tǒng)中藥當(dāng)歸、川穹等天然植物分離產(chǎn)物中含有多種相似結(jié)構(gòu)的苯肽內(nèi)酯類化合物，它們結(jié)構(gòu)中都含有苯并內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，只是在苯環(huán)和內(nèi)酯環(huán)上的取代基位置或種類不同、或者立體結(jié)構(gòu)不同。黑香豆、野香莢蘭、蘭花中含有多種香豆素類化合物，包括簡(jiǎn)單香豆素類，呋喃香豆素類，吡喃香豆素類等多種衍生物，它們的結(jié)構(gòu)中都含有相同結(jié)構(gòu)：苯并吡喃環(huán)。很多中藥含有多種黃酮類、多糖類、醌類、皂苷類、萜類結(jié)構(gòu)物質(zhì)的集群。這些高度的結(jié)構(gòu)集群往往官能團(tuán)相同、性質(zhì)類似，極性相近，可以通過(guò)簡(jiǎn)單的溶劑粗提等方式進(jìn)行組分富集。簡(jiǎn)單粗提富集后的混合組份中有很多官能團(tuán)相同、性質(zhì)類似，極性相近的化合物，如果對(duì)這些化合物集群不像傳統(tǒng)那樣進(jìn)行一個(gè)個(gè)的單獨(dú)分離提純后再進(jìn)行分別單獨(dú)修飾改造，而是將粗提的混合物集群與相同的試劑進(jìn)行集群反應(yīng)修飾改造，這樣可以一步同時(shí)得到很多結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似的新的化合物集群，然后再進(jìn)行修飾化合物群的分離，這樣就可以一步分離同時(shí)得到新的化合物單體庫(kù)。這種新的化合物修飾改造方法不僅可以大大提高天然化合物的修飾改造效率，顯著縮減了修飾改造、分離提純的工藝步驟，極大地降低化合物修飾改造過(guò)程中原料和溶劑等耗材的用量，同時(shí)也能提高天然產(chǎn)物的利用效率，降低藥物修飾改造的成本，此外更是一種低碳環(huán)保的藥物修飾改造技術(shù)方法，基于新藥研發(fā)需求提出該研究課題，具有廣闊應(yīng)用前景。新藥創(chuàng)新重在篩選先導(dǎo)化合物的源頭創(chuàng)新。因此，本發(fā)明公布了一種天然產(chǎn)物藥物高效率集群式化學(xué)修飾合成方法，旨在建立通用性的快速構(gòu)建新型類天然化合物庫(kù)的技術(shù)，可以快速提供大量的、多樣性的新型化合物，滿足新藥篩選對(duì)于化合物結(jié)構(gòu)多樣性和高通量的要求。對(duì)于拓展醫(yī)藥行業(yè)研究領(lǐng)域的研究思路，提升藥物研究開(kāi)發(fā)的速度，促進(jìn)人類醫(yī)藥健康事業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是提供一種天然產(chǎn)物藥物的一種高效集群式化學(xué)修飾合成方法。

本發(fā)明的另一目的就是通過(guò)實(shí)施例介紹這種天然產(chǎn)物藥物的高效集群式化學(xué)修飾合成方法的運(yùn)用。

本發(fā)明所述的一種天然產(chǎn)物藥物的集群修飾合成方法包括以下步驟：先對(duì)天然生物藥物中的成份進(jìn)行提取，然后針對(duì)天然藥物提取化合物混合物中的某一類反應(yīng)官能團(tuán)添加一種或多種反應(yīng)物進(jìn)行修飾合成反應(yīng)，待反應(yīng)物與天然產(chǎn)物提取混合物進(jìn)行充分反應(yīng)之后再對(duì)合成得到的修飾化合物混合物進(jìn)行分離純化，結(jié)構(gòu)鑒定和藥物功能研究。

本發(fā)明所述的天然生物藥物中的成份提取方法主要是指超臨界/超聲波/微波輔助的溶劑萃取，或者采用溶劑蒸汽蒸餾提取，或者采用溶劑浸泡后機(jī)械壓榨提取等工藝。

本發(fā)明所述的提取化合物混合物是指從天然生物藥物中提取出來(lái)的化合物母核結(jié)構(gòu)類似，具有同種類型反應(yīng)官能團(tuán)的多個(gè)化合物組成的集群，用通式表示如下：C1-G，C2-G，C3-G，C4-G，......，Cx-G 。其中C1，C2，C3，C4，......，Cx表示提取出的混合物集群中各個(gè)類似化合物結(jié)構(gòu)中的母核，G表示與化合物集群中各個(gè)化合物母核結(jié)構(gòu)相連的相同反應(yīng)基團(tuán)。

本發(fā)明所述的相同反應(yīng)基團(tuán)G主要是指碳碳雙鍵/三鍵，或者芳香環(huán)，或者羥基，或者羰基，或者羧酸/羧酯/羧酰胺基，或者鹵原子，或者活潑α氫原子，或者氨基/胺基，或者磺酸/磺酸酯/磺酰胺基，或者酮/醛基團(tuán)，或者環(huán)氧基，或者巰基/硫醇，或者醚/硫醚鍵，或者磷酸/磷酯/磷酰胺等具有反應(yīng)活性的基團(tuán)。

本發(fā)明所述得到的修飾化合物混合物的分離純化方法主要是指柱色譜分離純化、分餾精餾純化、膜分離純化、分級(jí)沉淀分離純化等工藝。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

天然生物藥物經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的粗提得到的混合物集群不經(jīng)分離純化同時(shí)與相同的試劑進(jìn)行集群式化學(xué)反應(yīng)修飾改造，這樣可以一步同時(shí)得到很多結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似的新的化合物集群，然后再進(jìn)行修飾化合物群的分離，這樣就可以一步分離同時(shí)得到新的化合物單體庫(kù)。這種新的天然產(chǎn)物藥物化合物修飾改造方法不僅可以大大提高天然化合物的修飾改造效率，顯著縮減了修飾改造、分離提純的工藝步驟，極大地降低化合物修飾改造過(guò)程中原料和溶劑等耗材的用量，同時(shí)也能提高低含量天然產(chǎn)物的利用效率，降低藥物修飾改造的成本，此外更是一種低碳環(huán)保的、通用型的、可以快速構(gòu)建新型類天然化合物庫(kù)的藥物修飾改造技術(shù)，有利于滿足新藥篩選對(duì)于化合物結(jié)構(gòu)多樣性和高通量的需求。對(duì)于拓展醫(yī)藥行業(yè)研究領(lǐng)域的研究思路，提升藥物研究開(kāi)發(fā)的速度，促進(jìn)人類醫(yī)藥健康事業(yè)的發(fā)展具有重要的意義和廣闊的應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

圖1是茶葉中提取的多酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu)圖。

圖2是四種苦豆子生物堿類化合物結(jié)構(gòu)圖，分別是1羽扇豆堿，2苦參堿，3鷹爪豆堿，4金雀花堿。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)具體的實(shí)施例詳細(xì)介紹本發(fā)明中一種天然產(chǎn)物藥物的高效集群式化學(xué)修飾合成方法的運(yùn)用。

實(shí)施例一

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究結(jié)果表明,山藥具有多種生物活性,如調(diào)節(jié)和提高機(jī)體免疫力、延緩衰老、抗腫瘤、抗氧化、抗突變和降血糖等多方面的功能,其主要功效成分是山藥多糖(Common Yam Rhizome polysaccharide, 簡(jiǎn)寫(xiě)為：CYRP)。多糖硫酸酯或稱硫酸酯化多糖是指含有硫酸基團(tuán)的天然及其半合成的酸性多糖,為聚陰離子化合物,具有抗病毒、抗腫瘤、抗凝血和增強(qiáng)免疫等生物學(xué)活性。為了提高中藥多糖的生物活性,可通過(guò)硫酸化修飾等方法對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造,獲取更多的多糖硫酸酯。本實(shí)施例主要列舉了山藥多糖的粗提富集、集群式硫酸化修飾和分離純化。

山藥多糖(CYRP)的提?。?/p>

用水煮-醇沉淀法。取淮山藥飲片,粉碎后用80%乙醇浸泡過(guò)夜,用80%乙醇回

流脫脂,棄去乙醇,取藥澄置于鍋中,并加8倍水60℃煮4h,四層紗布過(guò)濾,藥渣同法再煎1次,兩次濾液合并。先減壓濃縮再水浴濃縮至含生藥0.5 g/mL,離心得上清液。緩緩向上清液中加入3%的三氯乙酸,至無(wú)沉淀生成,靜置1h后,離心得上清液。取部分上清液加95%乙醇使醇濃度達(dá)到80%,靜置過(guò)夜,取出沉淀干燥,得不同分子量的山藥總多糖(CYRPt)。

多糖的集群式硫酸酯化修飾：

將帶有攪拌和冷凝裝置的三頸燒瓶置鹽水-冰浴中,氯橫酸與吡啶的體積比為1:4,先加入預(yù)冷的無(wú)水吡啶25 mL,劇烈攪拌,使之充分冷卻,再將氯磺酸40min內(nèi)逐滴加入,見(jiàn)燒瓶中出現(xiàn)大量淡黃色固體,停止反應(yīng),制備得到酯化試劑。精密稱取山藥總多糖(CYRPt) 300 mg,加入磺化試劑,70℃反應(yīng)3h。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫,反應(yīng)液加入預(yù)冷的100 mL冰水,邊攪拌邊加入NaOH中和至pH為7。加入3倍體積的無(wú)水乙醇,靜置24 h,取沉淀用超純水水透析3天,透析液冷凍干燥得硫酸化山藥多糖(sCYRPt)。

硫酸化山藥多糖(sCYRPt)的分離純化：

用Sephadex G-100 柱層析分離：取直徑16 mm,長(zhǎng)800 mm的玻璃層析柱,垂直固定在鐵架臺(tái)上,柱底留1-3cm的蒸餾水,把溶脹好的填料倒入柱中,自然沉降,不可有斷層,不可含氣泡。用0.1 mol/L氯化鈉溶液洗脫液洗脫,平衡過(guò)夜。將sCYRPt配制為50 mg/ml的水溶液,取10 mL用滴管緩慢加入柱內(nèi),打開(kāi)出口,使樣品完全滲入凝膠后,加入約5 cm柱高的洗脫液,然后接上恒壓洗脫瓶開(kāi)始洗脫,調(diào)節(jié)柱中洗脫液流速0.33 mL/min,每14min收集一管。用苯酚-硫酸法檢測(cè),以洗脫體積為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制洗脫曲線,按出峰收集組分,透析,濃縮,干燥,得純化的不同分子量級(jí)別的硫酸酯化山藥多糖sCYRP1、sCYRP2、sCYRP3、sCYRP4、sCYRP5、sCYRP6、sCYRP7、sCYRP8、sCYRP9。

實(shí)施例二

茶多酚是從綠葉茶中提取出的多酚類物質(zhì)，具有高效的抗氧化、抗癌、輔助治療心血管疾病、精神疾病、肺損傷、關(guān)鍵炎等多種藥理保健功效。茶多酚中的兒茶素ECG和EGC及其氧化產(chǎn)物等,有助于抵制斑塊增生,降低纖維蛋白原,使血凝變清,從而抑制動(dòng)脈粥樣硬化。茶多酚具有潛在的殺傷癌細(xì)胞和提高機(jī)體免疫力,并能有效的抑制亞硝酸鹽等致癌物質(zhì)的合成。另外,茶葉中的兒茶素類化合物對(duì)多種癌癥的預(yù)防和輔助治療,都有很好的效果。但是茶多酚氧化穩(wěn)定性和脂溶性差，需要進(jìn)行修飾改性。

茶多酚的提取：

稱取茶葉原料粉碎至20目左右,料液比1:12的去離子水于80℃提取2次,每次30min,過(guò)濾合并濾液。在浸提液中加入茶多酚與鋅摩爾比為2.5：1的氯化鋒溶液,碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH=6,沉淀30分鐘后過(guò)濾得到茶多酸鋅配合物,去離子水洗涂至無(wú)氯離子檢出,得到茶多酚鋅浸膏。然后在2mol/L的稀硫酸、料液體積比為1:4、20℃酸解20min,茶多酚從絡(luò)合物里游離出來(lái),直至沉淀被酸解完全,1-2倍體積醋酸乙酯萃取2次,醋酸乙酯層旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),50℃左右真空濃縮干燥,得黃色粉末或結(jié)晶茶多酚產(chǎn)品。茶葉中提取的多酚類物質(zhì)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1所示。

茶多酚的乙?；揎椄男裕?/p>

在10ml乙酸乙酯中加入1g茶多酚，攪拌溶解后加入8ml乙酸酐和0.32g吡啶做催化劑，在75℃下攪拌回流3h。結(jié)束反應(yīng)后用少量去離子水洗滌、靜置分層、乙酸乙酯層減壓蒸餾，真空干燥后得乙?；揎椀牟瓒喾踊旌袭a(chǎn)物。

茶多酚乙酸酯的分離純化：

色譜柱:C18,(3.9x150mm)，檢測(cè)器:雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng):278nm，

流動(dòng)相A:分別將90mL乙酸乙酯、20mL乙酸、2mLEDTA(lOmg/mL)加入lOOOmL容量瓶中用重蒸水定容。溶液需過(guò)0.45um的膜。流動(dòng)相B:分別將800mL乙酸乙酯、20mL乙酸、2mLEDTA(lOmg/mL)，加入lOOOmL容量瓶中定容至刻度。溶液需過(guò)0.45um膜。流速:1.0mL/min;AUFS=2.000。柱溫:35℃。先用流動(dòng)相A洗脫，然后用流動(dòng)相B洗脫。每10分鐘接收1管，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，干燥，得不同組份的乙?；瓒喾印?/p>

實(shí)施例三

苦豆子是我國(guó)西北地區(qū)十分常見(jiàn)的野生植物資源，資源相當(dāng)豐富，其有效成分—生物堿的含量較高，如地上部分含總堿約 6.11%～8.03%，成熟種子含約 8.11%。生物堿是苦豆子中目前研究得較多的一類物質(zhì)，主要作為一種藥物原料來(lái)開(kāi)發(fā)，研究發(fā)現(xiàn)苦豆子生物堿在抗腫瘤、抗菌、抗心率失常、抗乙肝、免役等方面具有重要的藥理活性和應(yīng)用前景。目前用來(lái)治療慢性乙型肝炎的特色新藥“苦參素”的主要成分氧化苦參堿就是苦豆子生物堿的一種，此外，利用苦豆子生物堿抗菌、殺菌、抗病毒的生物活性，可以用來(lái)生產(chǎn)農(nóng)藥、消毒類產(chǎn)品。

生物堿由于其水溶性和吸收性差，所以需要進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾。圖2示出四種苦豆子生物堿類化合物結(jié)構(gòu)，由于苦豆子中生物堿的種類多，有的生物堿結(jié)構(gòu)和性質(zhì)接近，如果直接分離純化帶來(lái)了一定困難，現(xiàn)階段較系統(tǒng)地提取、分離、純化苦豆子生物堿的生產(chǎn)實(shí)用技術(shù)、工藝還很不成熟。因此本實(shí)施例直接對(duì)分離富集的苦豆子堿進(jìn)行集群式化學(xué)修飾合成，然后再進(jìn)行分離純化，這樣相比傳統(tǒng)方法可以降低生產(chǎn)成本、提高經(jīng)濟(jì)效益。

苦豆子生物總堿的提?。?/p>

將苦豆子粉研磨至60目以下，稱取250g加入到燒杯中，然后按照液料比20：1（V/W）的比例加入PH0.4的稀鹽酸水溶液，在室溫進(jìn)行攪拌提取18h，然后就行離心固液分離，連續(xù)提取2次，將離心分離得到的液相收集在一起進(jìn)行低溫減壓濃縮，低溫干燥的苦豆子生物總堿。

苦豆子生物總堿的乙酸化修飾：

將苦豆子生物堿、氯乙酸鈉按照胺基堿量摩爾比例1:1加入到DMF溶劑中，攪拌溶解，然后在60℃反應(yīng)20h,用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH為5.6，重結(jié)晶分離，低溫干燥。

乙酸化苦豆子生物堿單體的分離純化：

樣品制備:將乙酸化苦豆子生物堿溶解在乙醇和水混合溶劑中,再加入適量的經(jīng)過(guò)處理的柱層析硅膠,充分?jǐn)嚢韬?揮干溶劑,等待上柱。

濕法裝柱:將玻璃層析柱(5Omm x 600mm),洗凈,晾干,在柱底部鋪上一層玻璃纖維或脫脂棉,用乙醇作洗脫劑,將硅膠拌成糊狀,攪拌,使其中的氣泡全部溢出"打開(kāi)色譜柱下端活塞,將少量糊狀物傾入柱中,并用吸耳球輕輕敲打玻璃柱使硅膠均勻沉降"應(yīng)當(dāng)注意的是,容積表面始終不能低于硅膠的表面,好的柱子填料應(yīng)當(dāng)適度緊密，均勻,并且不能有氣泡存在,否則會(huì)影響分離效果。

上樣及洗脫:將下面的活塞打開(kāi),待溶劑層下降至硅膠面時(shí),將制備好的樣品均

勻撒于硅膠上,再加少量的乙醇,然后再打開(kāi)活塞,如此兩三次后,用不同比例的乙醇/水梯度洗脫,每50mL/瓶收集洗脫液,同時(shí)注意用TLC監(jiān)測(cè)，對(duì)于同一單體收集液進(jìn)行合并，最后對(duì)各個(gè)單體收集液進(jìn)行減壓濃縮，低溫真空干燥。

由以上3中不同天然產(chǎn)物藥物的集群式修飾實(shí)施例可以看出，天然產(chǎn)物藥物的集群式修飾技術(shù)路線相比傳統(tǒng)的修飾技術(shù)路線，不僅步驟少，天然產(chǎn)物藥物的利用率高，而且在得到相同的修飾化合物的同時(shí)可以節(jié)約很多的反應(yīng)和分離純化用溶劑。特別是對(duì)于含量很低的天然產(chǎn)物藥物組份的修飾更是一種優(yōu)選的修飾技術(shù)路線，有利于加速和促進(jìn)天然產(chǎn)物藥物的研究和開(kāi)發(fā)。

天然產(chǎn)物傳統(tǒng)修飾技術(shù)路線是：天然動(dòng)植物——粗提物——分離純化——單體——化學(xué)修飾——單體修飾后的分離純化——修飾單體（一種）。

天然產(chǎn)物集群式修飾技術(shù)路線是：天然動(dòng)植物——粗提物——集群式化學(xué)修飾——天修飾混合物的分離純化——修飾單體（多個(gè)）。