1.一種彈涂魚卵黃蛋白原,其特征在于,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,或如SEQ ID NO.4所示,或如SEQ ID NO.6所示。
2.一種編碼如權(quán)利要求1所述的彈涂魚卵黃蛋白原的彈涂魚卵黃蛋白原基因,其特征在于,所述基因包括編碼氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的彈涂魚卵黃蛋白原的彈涂魚VtgAa基因,或編碼氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的彈涂魚卵黃蛋白原的彈涂魚VtgAb基因,或編碼氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的彈涂魚卵黃蛋白原的彈涂魚VtgC基因。
3.如權(quán)利要求2所述的彈涂魚卵黃蛋白原基因,其特征在于,彈涂魚VtgAa基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1中第3位~第5000位所示;彈涂魚VtgAb基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3中第3位~第5048位所示;彈涂魚VtgC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5中第7位~第3732位所示。
4.一種如權(quán)利要求1所述的彈涂魚卵黃蛋白原在作為判斷性別和雌魚成熟度的指示蛋白中的用途。
5.一種彈涂魚三型Vtg基因全長(zhǎng)CDS序列,其特征在于,所述CDS序列包括如SEQ ID NO.1中第3位~第5000位,如SEQ ID NO.3中第3位~第5048位和如SEQ ID NO.5中第7位~第3732位。
6.一種克隆彈涂魚Vtg三型基因全長(zhǎng)序列的方法,其特征在于,所述Vtg三型基因包括VtgAa基因、VtgAb基因和VtgC基因;所述方法包括如下步驟:
S1、從性成熟期彈涂魚雌魚的肝臟組織中提取總RNA,進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增;
S2、分別設(shè)計(jì)Vtg的簡(jiǎn)并引物進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),獲得VtgAa基因、VtgAb基因和VtgC基因片段;
S3、以彈涂魚總RNA為模板根據(jù)RACE法分別制備VtgAa基因、VtgAb基因和VtgC基因3’端和5’端cDNA序列;
S4、分別設(shè)計(jì)特異性全長(zhǎng)引物,擴(kuò)增獲得Vtg三型基因全長(zhǎng)序列。
7.如權(quán)利要求67所述的克隆彈涂魚Vtg三型基因全長(zhǎng)序列的方法,其特征在于,步驟S2中,VtgAa基因?qū)?yīng)的簡(jiǎn)并引物為如SEQ ID NO.7所示的vtgAa-degenerate-F1和如SEQ ID NO.8所示的vtgAa-degenerate-R1;VtgAb基因?qū)?yīng)的簡(jiǎn)并引物為如SEQ ID NO.9所示的vtgAb-degenerate-F1和如SEQ ID NO.10所示的vtgAb-degenerate-R1;VtgC基因?qū)?yīng)的簡(jiǎn)并引物為如SEQ ID NO.11所示的vtgC-degenerate-F1和如SEQ ID NO.12所示的vtgC-degenerate-R1。
8.如權(quán)利要求6所述的克隆彈涂魚Vtg三型基因全長(zhǎng)序列的方法,其特征在于,步驟S3中,VtgAa基因?qū)?yīng)的RACE引物為如SEQ ID NO.13所示的vtgAa-5′RACE-GSP1和如SEQ ID NO.14所示的vtgAa-3′RACE-GSP2;VtgAb基因?qū)?yīng)的RACE引物為如SEQ ID NO.15所示的vtgAb-5′RACE-GSP1和如SEQ ID NO.16所示的vtgAb-3′RACE-GSP2;VtgC基因?qū)?yīng)的RACE引物為如SEQ ID NO.17所示的vtgC-5′RACE-GSP1和如SEQ ID NO.18所示的vtgC-3′RACE-GSP2。
9.如權(quán)利要求6所述的克隆彈涂魚Vtg三型基因全長(zhǎng)序列的方法,其特征在于,步驟S4中,VtgAa基因?qū)?yīng)的特異性全長(zhǎng)引物為如SEQ ID NO.19所示的vtgAa-full primer-F1和如SEQ ID NO.20所示的vtgAa-full primer-R1;VtgAb基因?qū)?yīng)的特異性全長(zhǎng)引物為如SEQ ID NO.21所示的vtgAb-full primer-F1和如SEQ ID NO.22所示的vtgAb-full primer-R1;VtgC基因?qū)?yīng)的特異性全長(zhǎng)引物為如SEQ ID NO.23所示的vtgC-full primer-F1和如SEQ ID NO.24所示的vtgC-full primer-R1。