專利名稱：利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒的制作方法
利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生態(tài)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒，及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，環(huán)境雌激素對(duì)野生動(dòng)物和人類生殖系統(tǒng)的影響受到了廣泛關(guān)注。為了減少環(huán)境雌激素對(duì)生物體及人類的危害，建立快捷有效的篩選方法，從環(huán)境污染物中篩選出具有環(huán)境雌激素效應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)，已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。美國(guó)、歐盟和日本相繼建立起以魚類為模式生物的環(huán)境雌激素篩選評(píng)價(jià)體系，其中卵黃原蛋白(Vitellogenin, Vtg)作為重要的生物篩選指標(biāo)，已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。
卵黃原蛋白是卵黃蛋白的前體，是一種大分子量的糖磷脂蛋白。卵黃形成期，卵黃原蛋白在雌激素的刺激下由肝臟產(chǎn)生，隨血液循環(huán)進(jìn)入卵巢，被卵巢吸收后，在組織蛋白酶 D的作用下，分解成卵黃脂磷蛋白、卵黃高磷蛋白和β 組分，大量?jī)?chǔ)存于卵巢中，為卵細(xì)胞和早期胚胎的發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)與免疫保護(hù)。通常，卵黃原蛋白只能在卵黃形成期的雌魚體內(nèi)檢測(cè)到，但是，雄魚和幼魚體內(nèi)也含有卵黃原蛋白基因，在環(huán)境雌激素的誘導(dǎo)下，也能合成和分泌卵黃原蛋白。因此，卵黃原蛋白是環(huán)境雌激素篩選的特異性生物標(biāo)志物，通過(guò)檢測(cè)雄魚體內(nèi)卵黃原蛋白的含量可以評(píng)價(jià)環(huán)境化學(xué)物的雌激素作用。
卵黃原蛋白的分離純化是制備多克隆抗血清、定性定量檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的基礎(chǔ)。目前已經(jīng)純化獲得了多種魚類的卵黃原蛋白，并且利用其抗體用于環(huán)境雌激素類物質(zhì)的檢測(cè)。但研究證明，魚類卵黃原蛋白在分離純化過(guò)程中容易降解，且溫度對(duì)降解的影響最為顯著，甚至可能導(dǎo)致卵黃原蛋白喪失生物學(xué)活性；樣品反復(fù)凍融也會(huì)增加卵黃原蛋白降解程度。此外，卵黃原蛋白的降解會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響，因?yàn)槁腰S原蛋白的降解產(chǎn)物會(huì)比卵黃原蛋白表現(xiàn)出更多的免疫原性，故卵黃原蛋白的不穩(wěn)定性使得其不適合用于定量測(cè)定中的標(biāo)準(zhǔn)蛋白。而卵黃原蛋白在卵中的主要酶解產(chǎn)物——卵黃脂磷蛋白 (lipovitel I in, Lv),對(duì)溫度相對(duì)穩(wěn)定,并且與卵黃原蛋白具有相同的免疫原性，可用于卵黃原蛋白的檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)證實(shí)金魚卵黃脂磷蛋白多抗可以與種緣關(guān)系較遠(yuǎn)的美國(guó)紅魚、石碟的卵黃原蛋白具有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)，其檢測(cè)效果不亞于對(duì)鯉科魚類的檢測(cè)。因此可以利用卵黃脂磷蛋白代替卵黃原蛋白，制備多克隆抗血清，用于環(huán)境雌激素的檢測(cè)。
目前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)建立了多種魚類卵黃原蛋白的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒和放射性免疫試劑盒，但這些試劑盒對(duì)儀器的要求較高，并且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中影響因素較多；在不同物種之間，卵黃原蛋白的免疫學(xué)和結(jié)構(gòu)特性具有較大的差異，即使種屬關(guān)系相近的魚類Vtg也具有較強(qiáng) 的異質(zhì)性，通常卵黃原蛋白抗體只能用于特定魚種卵黃原蛋白的檢測(cè)，而與其它魚種沒(méi)有或僅有非常弱的交叉反應(yīng)性，這就意味著需要開發(fā)種特異性的抗體；并且由于魚類地理分布的差異較大，需要制備使用方便、對(duì)儀器要求不高，能夠克服種間差異性，應(yīng)用范圍較廣的魚類卵黃原蛋白的檢測(cè)試劑盒。因此，開發(fā)出一種利用卵黃脂磷蛋白多克隆抗體檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒，將具有廣泛的應(yīng)用前景和科學(xué)價(jià)值。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述試劑盒的制備方法及其應(yīng)用，以克服目前檢測(cè)魚類卵黃原蛋白技術(shù)的不足。
一種利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒，包括一個(gè)盒體， 該盒體內(nèi)裝有1)PVDF膜2張；2)陰性對(duì)照血漿I支；3)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗I支；4)封閉液、洗滌液、顯色液各I支，所述的洗滌液為TBST ;封閉液為含5%脫脂奶粉的TBST ;顯色液為含0.06%(m/V)3’ - 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)的IOmM Tris-HCl ;其特征在于它還裝有5)金魚卵黃脂磷蛋白純品I支；6)鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體I支。
上述金魚卵黃脂憐蛋白純品為100 μ g/ml的金魚卵黃脂憐蛋白溶液。
上述定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒制備方法，包括以下步驟1)制備金魚卵黃脂磷蛋白純品；2)利用步驟I)得到的金魚卵黃脂磷蛋白純品制備鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體；3)將步驟I)得到的金魚卵黃脂磷蛋白純品I支、步驟2)得到的鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗血清I支、PVDF膜2張，以及封閉液、洗滌液、顯色液、陰性對(duì)照血漿和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗I支共同裝入盒體，得到魚類卵黃原蛋白定性檢測(cè)的試劑盒。
上述試劑盒在環(huán)境雌激素類化合物的篩選，以及在水環(huán)境受雌激素類物質(zhì)污染狀況檢測(cè)中的應(yīng)用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明的試劑盒利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合能力，能夠靈敏、方便地定性檢測(cè)不同魚類血液、整體勻漿體、體表粘液、肝臟組織及肝細(xì)胞培養(yǎng)液中的卵黃原蛋白。
與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)現(xiàn)有兩大優(yōu)勢(shì)。首先，卵黃脂磷蛋白克服了卵黃原蛋白易降解的性質(zhì)，卵黃原蛋白在純化和保存過(guò)程中的易降解性已經(jīng)被廣泛證實(shí)，即使在低溫純化過(guò)程中加入抑制蛋白降解的蛋白酶抑制劑(如抑酶肽、PMSF)的情況下，卵黃原蛋白的降解仍難以避免。此外，本發(fā)明的有益效果是顯著地?cái)U(kuò)大了抗體的應(yīng)用范圍。以卵黃原蛋白為抗原制備的抗體通常只能用于本魚種卵黃原蛋白的檢測(cè)，這就需要花費(fèi)大量的人力、財(cái)力去純化各種魚類的卵黃原蛋白，并制備種特異性的抗體，而本發(fā)明以卵黃脂磷蛋白為抗原免疫動(dòng)物，其抗體除用于金魚卵黃原蛋白的檢測(cè)外，還可以擴(kuò)大到鯉科魚類卵黃原蛋白的檢測(cè)，甚至對(duì)美國(guó)紅魚、石碟等種緣關(guān)系很遠(yuǎn)的魚類卵黃原蛋白仍有很高的檢測(cè)敏感度(對(duì)它們的最低檢出限同為100ng/ml)。綜上，本試劑盒以穩(wěn)定性較好的金魚卵黃脂磷蛋白代替卵黃原蛋白，避免了因卵黃原蛋白降解而造成的檢測(cè)結(jié)果偏差，并且擴(kuò)大了抗體的應(yīng)用范圍。


圖1為本發(fā)明的金魚卵黃原蛋白純品與卵黃脂磷蛋白純品的電泳圖譜；
圖2為本發(fā)明的金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體對(duì)金魚卵黃原蛋白的定性檢測(cè)結(jié)果;
圖3為本發(fā)明的金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體對(duì)鯉魚卵黃原蛋白的定性檢測(cè)結(jié)
果;
圖4為本發(fā)明的金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體對(duì)鯽魚卵黃原蛋白的定性檢測(cè)結(jié)
果;
圖5為本發(fā)明的金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體對(duì)斑馬魚勻漿液的定性檢測(cè)結(jié)果；
圖 6為本發(fā)明的金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體對(duì)美國(guó)紅魚卵黃原蛋白的定性檢
測(cè)；
圖7為本發(fā)明的金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體對(duì)石鰈卵黃原蛋白的定性檢測(cè)結(jié)果O
具體實(shí)施例方式
一種利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒，包括一個(gè)盒體， 該盒體內(nèi)裝有1)PVDF膜2張；2)陰性對(duì)照血漿I支；3)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗I支；4)封閉液、洗滌液、顯色液各I支，所述的洗滌液為TBST ;封閉液為含5%脫脂奶粉的TBST ;顯色液為含O. 06%(m/V)3’ - 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)的IOmM Tris-HCl ;其特征在于它還裝有5)金魚卵黃脂磷蛋白純品I支；6)鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體I支。
上述金魚卵黃脂磷蛋白純品為100 μ g/ml的金魚卵黃脂磷蛋白溶液。
上述試劑盒中的5)金魚卵黃脂磷蛋白純品，是以如下方法制備的
取卵黃形成后期的雌性金魚卵巢組織，去除結(jié)締組織，收集魚卵，加入3倍體積 4°C預(yù)冷的勻漿緩沖液(25mM Tris-HCl,內(nèi)含 70mM NaCl, IOmM EDTA和 ImM PMSF，pH7. 5)混合，在冰浴條件下用玻璃勻漿器勻漿，40C，IOOOOg離心20分鐘，收集上清液；向上清液中緩緩加入(NH4)2SO4粉末至70%的飽和度，鹽析過(guò)液；10小時(shí)后，在4C下，以8000g離心10分鐘，棄去上清，將沉淀重新溶解于25mM Tris-HCl (內(nèi)含O. 07M NaCl，pH7. 5)，獲得卵勻漿提取液；
取Iml卵勻漿提取液加入S印hacryl S-300層析柱，用含O. 07M NaCl的 25mM Tris-HCl (pH7. 5)洗脫，收集含有金魚卵黃脂磷蛋白的樣品用于離子交換層析 (DEAE-Sepharose Fast Flow)，用分別含 O. 07Μ、0· 1Μ、0· 2Μ、0· 3Μ和1. OM NaCl 的 Tris-HCl 緩沖液(25mM，pH7. 5)進(jìn)行不連續(xù)洗脫，收集O. 2M脫組分，簽定為金魚卵黃脂磷蛋白純品，_80°C保存。
上述試劑盒中的6)鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體，是以如下方法制備的
采用腹腔注射雄性小鼠的方式，每只小鼠注射純化的金魚卵黃脂磷蛋白 50 μ g(等體積抗原與弗氏完全佐劑充分混勻)；此后，在第14、21、28、35、38天分別注射， 注射劑量為50 μ g (等體積抗原與弗氏不完全佐劑充分混勻)；第40天采血，采血前一天停食。采用眼眶取血法取血，獲得抗血清用于制備鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體；
采用硫酸銨沉淀的方法制備鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體。首先將鼠抗血清與陰性對(duì)照血漿2:1混合，4C搖晃過(guò)夜，離心去除非特異性的抗體，然后加入(NH4) 2S04粉末至20%的飽和度，4°C搖晃2個(gè)小時(shí)，離心除去纖維蛋白；加50%的飽和硫酸銨，4C搖晃2個(gè)小時(shí)，離心除去白蛋白；加33%的飽和硫酸銨，4°C搖晃2個(gè)小時(shí)；4°C,8000g離心10分鐘， 即獲得鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體，_80°C保存。
經(jīng)過(guò)以上操作，得到的定性檢測(cè)鯉科魚類卵黃脂磷蛋白的試劑盒具體組成如下
I) PVDF膜2張;
2)金魚卵黃脂磷蛋白純品I支，使用前用PBS稀釋至I μ g/ml ；
3)陰性對(duì)照血漿I支，使用前用PBS按1:100倍的體積比稀釋；
4)鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體I支，使用前用封閉液按1:300的體積比稀釋；
5)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗I支，使用前用封閉液按1:500的體積比稀釋；
6)封閉液、洗滌液、顯色液各I支，所述的洗滌液為TBST (IOOmM Tris-HCl、 150mMNaCl、0. 05%Tween_20, ρΗ7· 5);封閉液為含5%脫脂奶粉的TBST ;顯色液為含0.06%(m/V)3’ - 二氨基聯(lián)苯胺(DAB)的IOmM Tris-HCl，使用前向顯色液中加入O. 05%(v/ v)雙氧水。
本發(fā)明的試劑盒可用于環(huán)境雌激素類物質(zhì)的篩選，以及水環(huán)境受環(huán)境雌激素污染狀況的檢測(cè)。
以本發(fā)明的試劑盒定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的方法，具體包括以下步驟
I)將試劑盒中的金魚卵黃脂磷蛋白純品、陰性對(duì)照血漿和待測(cè)的雄魚樣品(樣品包括血漿、勻漿液、體表黏液、肝臟組織及肝細(xì)胞培養(yǎng)液等)稀釋后進(jìn)行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳；
2)把電流凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)印到PVDF膜；
3)用封閉液封閉PVDF膜的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，4°C孵育過(guò)夜，棄去封閉液；
4)加入用封閉液按1: 300的體積比稀釋的鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體， 室溫下震蕩孵育4小時(shí)，棄去溶液，用洗滌液洗滌PVDF膜3次；
5)加入用封閉液按1: 500的體積比稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗， 室溫下震蕩孵育4小時(shí)，棄去溶液，用洗滌液洗滌PVDF膜3次；
6)加入顯色液，待蛋白質(zhì)條帶清晰后，棄去顯色液，用蒸餾水終止顯色反應(yīng)，PVDF 膜拍照后于避光處保存；
7)在雄魚樣品中發(fā)現(xiàn)有顯色條帶，表明該魚生活的水域受到了環(huán)境雌激素類物質(zhì)的污染。
如附圖1所示，本發(fā)明的金魚卵黃原蛋白純品與卵黃脂磷蛋白純品的電泳圖譜， 可見金魚卵黃脂磷蛋白的穩(wěn)定性要優(yōu)于卵黃原蛋白。
如附圖2-7所示，其結(jié)果依次為圖2對(duì)金魚卵黃原蛋白的定性檢測(cè)結(jié)果；圖3對(duì)鯉魚卵黃原蛋白的定性檢測(cè)結(jié)果；圖4對(duì)鯽魚卵黃原蛋白的定性檢測(cè)結(jié)果；圖5對(duì)雌性斑馬魚勻漿液的定性檢測(cè)結(jié)果；圖6對(duì)美國(guó)紅魚卵黃原蛋白的定性檢測(cè)；圖7對(duì)石鰈卵黃原蛋白的定性檢測(cè)結(jié)果?？梢钥吹皆赑VDF膜上均出現(xiàn)了明顯的條帶，即本發(fā)明的試劑盒及其檢測(cè)方法在定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白方面有很好的應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒，包括一個(gè)盒體，該盒體內(nèi)裝有1)PVDF膜2張；2)陰性對(duì)照血漿I支；3)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗I支；4)封閉液、洗滌液、顯色液各I支，所述的洗滌液為TBST ;封閉液為含5%脫脂奶粉的TBST ;顯色液為含0.06%(m/V) 3’-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)的IOmM Tris-HCl ;其特征在于它還裝有5)金魚卵黃脂磷蛋白純品I支；6)鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體I支。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的金魚卵黃脂磷蛋白純品為100 u g/ml的金魚卵黃脂磷蛋白溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒，其特征在于所述的金魚卵黃脂磷蛋白純品的制備方法如下 取卵黃形成后期的雌性金魚卵巢組織，去除結(jié)締組織，收集魚卵，加入3倍體積4°C預(yù)冷的勻漿緩沖液混合，在冰浴條件下用玻璃勻漿器勻漿，4°C，IOOOOg離心20分鐘，收集上清液；向上清液中緩緩加入(NH4)2SO4粉末至70%的飽和度，鹽析過(guò)液；10小時(shí)后，在4°C下，以8000g離心10分鐘，棄去上清，將沉淀重新溶解于25mM Tris-HCl (內(nèi)含0. 07M NaCl,PH7. 5)，獲得卵勻漿提取液； 取Iml卵勻漿提取液加入S^hacryl S-300層析柱，用含0. 07M NaCl的25mM Tris-HCl (pH7. 5)洗脫，收集含有金魚卵黃脂磷蛋白的樣品用于離子交換層析(DEAE-Sepharose Fast Flow)，用分別含 0. 07M、0. 1M、0. 2M、0. 3M和1. OM NaCl 的 Tris-HCl緩沖液(25mM，pH7. 5)進(jìn)行不連續(xù)洗脫，收集0. 2M脫組分，簽定為金魚卵黃脂磷蛋白純品。
4.如權(quán)利要求3所述的利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒，其特征在于所述的鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體的制備方法如下 采用腹腔注射雄性小鼠的方式，每只小鼠注射純化的金魚卵黃脂磷蛋白50y g，注射前將等體積抗原與弗氏完全佐劑充分混勻；此后，在第14、21、28、35、38天分別注射，注射劑量為50 y g，注射前將等體積抗原與弗氏不完全佐劑充分混勻；第40天采血，采血前一天停食；采用眼眶取血法取血，獲得抗血清用于制備鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體； 采用硫酸銨沉淀的方法制備鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體首先將鼠抗血清與陰性對(duì)照血漿2:1混合，4°C搖晃過(guò)夜，離心去除非特異性的抗體，然后加入(NH4)2SO4粉末至20%的飽和度，4°C搖晃2個(gè)小時(shí)，離心除去纖維蛋白；加50%的飽和硫酸銨，4°C搖晃2個(gè)小時(shí)，離心除去白蛋白；加33%的飽和硫酸銨，4°C搖晃2個(gè)小時(shí)；4°C，8000g離心10分鐘，即獲得鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體。
5.權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒在環(huán)境雌激素類化合物的篩選，以及在水環(huán)境受雌激素類物質(zhì)污染狀況檢測(cè)中的應(yīng)用。
6.利用權(quán)利要求1所述的的試劑盒定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的方法，其特征在于包括以下步驟 1)將試劑盒中的金魚卵黃脂磷蛋白純品、陰性對(duì)照血漿和待測(cè)的雄魚樣品稀釋后進(jìn)行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，所述的待測(cè)的雄魚樣品包括血漿、勻漿液、體表黏液、肝臟組織及肝細(xì)胞培養(yǎng)液； 2)把電流凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)印到PVDF膜； 3)用封閉液封閉PVDF膜的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，4°C孵育過(guò)夜，棄去封閉液； 4)加入用封閉液按1:300的體積比稀釋的鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體，室溫下震蕩孵育4小時(shí)，棄去溶液，用洗滌液洗滌PVDF膜3次； 5)加入用封閉液按1:500的體積比稀釋的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗，室溫下震蕩孵育4小時(shí)，棄去溶液，用洗滌液洗滌PVDF膜3次； 6)加入顯色液，待蛋白質(zhì)條帶清晰后，棄去顯色液，用蒸餾水終止顯色反應(yīng)，PVDF膜拍照后于避光處保存； 7)在雄魚樣品中發(fā)現(xiàn)有顯色條帶，表明該魚生活的水域受到了環(huán)境雌激素類物質(zhì)的污染。
全文摘要
利用卵黃脂磷蛋白抗體定性檢測(cè)魚類卵黃原蛋白的試劑盒。其試劑盒含有金魚卵黃脂磷蛋白純品與鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體。其制備方法為首先純化出金魚卵黃脂磷蛋白，通過(guò)免疫小鼠制備鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗血清，進(jìn)一步純化獲得鼠抗金魚卵黃脂磷蛋白多克隆抗體。本發(fā)明的試劑盒可以用于環(huán)境雌激素類物質(zhì)的篩選以及水環(huán)境受環(huán)境雌激素污染狀況的檢測(cè)，能夠靈敏、方便的定性檢測(cè)魚類血液、整體勻漿液、體表粘液、肝臟組織及肝細(xì)胞培養(yǎng)液中的卵黃原蛋白，該試劑盒不僅可以用于鯉科魚類卵黃原蛋白定性檢測(cè)，對(duì)種緣關(guān)系較遠(yuǎn)的魚類卵黃原蛋白具有同樣的檢測(cè)敏感度。因?yàn)樵撛噭┖凶畲蟮膬?yōu)勢(shì)在于具有非常廣泛的應(yīng)用范圍，并且最低檢出限可達(dá)100ng/ml。
文檔編號(hào)G01N33/531GK103033631SQ20121055959
公開日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月20日
發(fā)明者汝少國(guó), 王軍, 王蔚, 田華 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)