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一種用于提高肝炎患者免疫力的小分子β?1,3?葡聚糖的制備方法與流程

文檔序號:12777013閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種高純度小分子β-1,3-葡聚糖產(chǎn)品的制備方法,其特征是,包括以下步驟:

(1)以不溶性大分子β-1,3-葡聚糖可得然膠為原料,將其堿溶后進行微波加熱,然后利用超聲波降解β-1,3-葡聚糖溶液;

其中,所述微波加熱的工藝參數(shù)為:微波頻率900~2000MHz,處理2~5次,間隔3~5min,每次25~45s;超聲波降解的工藝參數(shù)為:超聲波工作頻率范圍45~200KHz,處理時間為15~30min。

(2)將上述步驟(1)中β-1,3-葡聚糖溶液中和后進行凝膠色譜分級純化,獲得水溶性小分子β-1,3-葡聚糖溶液,分離得到的大分子β-1,3-葡聚糖溶液回到步驟(1)再次降解;

(3)利用納濾膜過濾步驟(2)所得目的小分子β-1,3-葡聚糖溶液,濃縮脫鹽;

(4)乙醇沉淀,向步驟(3)中所得濃縮液中加入1~3倍體積的乙醇,沉淀可溶性小分子β-1,3-葡聚糖,過濾或離心得沉淀后再用1~3倍體積的乙醇洗滌兩次,再次通過過濾或離心得到的沉淀即為目標產(chǎn)物;

(5)將步驟(4)中所得沉淀干燥,干燥條件為60~80℃,時間2~4h,干燥后所得固體即為高純度可溶性小分子β-1,3-葡聚糖。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征是:步驟(1)中,所選原料的純度為85%以上;

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征是:步驟(1)中,微波頻率為950~1800MHz,處理2~3次,間隔3~5min,每次15~30s。

4.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征是:步驟(2)中,分級純化體系為葡聚糖凝膠色譜分級體系,采用水作為流動相,進行洗脫,獲得不同的分子量的β-1,3-葡聚糖溶液,收集目的分子量的β-1,3-葡聚糖溶液,并將大分子量的β-1,3-葡聚糖溶液返回超聲波降解步驟重復降解。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征是:流動相流速范圍是0.025-0.200m/h。

6.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征是:步驟(3)中,采用納濾膜進行脫鹽濃縮,納濾膜截留分子量范圍是150~500Da,并控制溫度在35℃以下。

7.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征是:步驟(3)中,采用目的分子量β-1,3-葡聚糖溶液體積2~4倍體積的蒸餾水對納濾濃縮的β-1,3-葡聚糖溶液稀釋后再濃縮,達到脫鹽的目的,控制過程溫度在35℃以下。

8.如權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征是:步驟(4)中,乙醇溶液的體積分數(shù)為75~85%(v/v),沉淀30~60min,5000~8000g離心5-15min后,得沉淀再采用體積分數(shù)為85~95%(v/v)乙醇溶液洗滌兩次,5000~8000g離心5-10min后所得沉淀即為目標小分子β-1,3-葡聚糖。

9.采用權(quán)利要求1~8中任一項所述的方法制備得到的高純度小分子β-1,3-葡聚糖產(chǎn)品,其特征是:所述β-1,3-葡聚糖的重均分子量為8000~12000Da,其分子均一度高,分子量變化范圍在500Da以內(nèi)。

10.權(quán)利要求9所述的β-1,3-葡聚糖產(chǎn)品在制備具有提高生物體免疫活性、抗炎活性或抗腫瘤活性功效的藥物或食品中的應用。

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