本申請(qǐng)是國(guó)際申請(qǐng)日為2011年07月29日的申請(qǐng)?zhí)枮?01180047508.1的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)“嵌合il-1受體i型激動(dòng)劑和拮抗劑”的分案申請(qǐng)。交叉引用和優(yōu)先權(quán)申明本申請(qǐng)要求以下美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)：2010年7月29日提交的序列號(hào)61/368,799、2011年1月25日提交的序列號(hào)61/436,178、2011年1月25日提交的序列號(hào)61/436,184、2011年6月6日提交的序列號(hào)61/493,966以及2011年6月6日提交的序列號(hào)61/493,967，并且對(duì)于美國(guó)專利申請(qǐng)以引用的方式并入2010年7月29日提交的序列號(hào)61/368,799、2011年1月25日提交的序列號(hào)61/436,184以及2011年6月6日提交的序列號(hào)61/493,967的內(nèi)容。發(fā)明背景白介素-1α(il-1α)和β(il-1β)是免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子家族的原型成員，并在免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)中具有多種重要的作用。il-1α和il-1β與白介素-1受體i(il-1ri)結(jié)合，從而導(dǎo)致第二受體即白介素-1受體輔助蛋白(il-1racp)的接合。由il-1α和il-1β激動(dòng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致放大的t細(xì)胞應(yīng)答，包括初始t細(xì)胞的增殖和存活以及th17細(xì)胞的發(fā)育。發(fā)明概述本文的特征在于非天然存在的細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域，其尤其可用于調(diào)節(jié)響應(yīng)白介素-1受體i(il-1ri)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，用于治療疾病，以及用于檢測(cè)細(xì)胞受體和/或與細(xì)胞受體結(jié)合，以及其他藥劑。在一個(gè)方面，本公開的特征在于包含細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的分離的蛋白質(zhì)，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域含有來自至少兩個(gè)親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的氨基酸殘基，例如，來自至少兩個(gè)親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的受體結(jié)合特征、表面特征、β鏈和環(huán)。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與il-1ri結(jié)合并包含來自不同親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的受體結(jié)合特征，例如，來自受體激動(dòng)劑和受體拮抗劑(諸如il-1β和il-1ra，或il-1α和il-1ra)、來自il-1β和il-1α或來自il-1ra、il-1α和il-1ra所有三者。這些受體結(jié)合特征可對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)a和b中的殘基、片段或區(qū)域。至于在il-1(il-1β、il-1α和il-1ra)的情況下對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)a和b的此類殘基、片段和區(qū)域，詳見下文的定義。至于位點(diǎn)a，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可具有：(a)(i)與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少60、70、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的位點(diǎn)a殘基；(a)(ii)與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少60、70、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的擴(kuò)展位點(diǎn)a殘基；(a)(iii)與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的位點(diǎn)a片段a1和a2；和/或(a)(iv)與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的位點(diǎn)a區(qū)域。至于位點(diǎn)b，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可具有：(b)(i)與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少60、70、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的位點(diǎn)b殘基；(b)(ii)與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少60、70、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的擴(kuò)展位點(diǎn)b殘基；(b)(iii)與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的位點(diǎn)b片段b1、b2和b3；和/或(b)(iv)與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的位點(diǎn)b區(qū)域。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含以下特征：(a)(i)和b(i)、(a)(ii)和b(ii)、(a)(iii)和(b)(iii)或(a)(iv)和(b)(iv)，例如，其中各特征進(jìn)一步通過80、85、88、90、92、95或100％的同一性所限定。例如，第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以為il-1β，以及第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以為il-1ra。例如，第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以為il-1α，以及第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以為il-1ra。細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域還可以在該結(jié)構(gòu)域的一個(gè)或多個(gè)位置包含來自第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的氨基酸，它們減弱與細(xì)胞因子第二受體(例如，il-1racp)的相互作用。例如，第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域?yàn)閕l-1ra。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含來自il-1ra的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)c和/或d片段(例如，c1、d1、d2、d3、d4和/或d5)，或與此類片段具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的序列。例如，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含(i)與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少60、70、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的位點(diǎn)c殘基，(ii)與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少60、70、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的位點(diǎn)d殘基，(iii)與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少70、75、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的c1片段，或(iv)在至少3、4或5個(gè)殘基與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基相同的d2片段。該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可包含特征(i)和(ii)或(ii)和(iii)，例如，其中各特征進(jìn)一步通過80、85、88、90、92、95或100％的同一性而限定，或(iii)和(iv)。該結(jié)構(gòu)域可包含來自至少兩個(gè)不同的人il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的區(qū)域，其中所述區(qū)域選自a區(qū)域(具有a1和a2片段)、b區(qū)域(具有b1、b2和b3片段)、c區(qū)域以及d區(qū)域(具有d1、d2、d3、d4和d5片段)。該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可包含來自不同細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的位點(diǎn)a區(qū)域和位點(diǎn)b區(qū)域。位點(diǎn)a區(qū)域可來自天然存在的受體激動(dòng)劑或拮抗劑；位點(diǎn)b可來自天然存在的受體激動(dòng)劑。它可包含來自天然存在的受體拮抗劑的位點(diǎn)c區(qū)域和/或來自天然存在的受體拮抗劑的位點(diǎn)d區(qū)域。例如，該結(jié)構(gòu)域可以是具有以下片段的嵌合結(jié)構(gòu)域，所述片段長(zhǎng)度為至少5、6、10、15、20或25個(gè)氨基酸并與來自至少兩個(gè)不同親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域諸如第一和第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)片段具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性。親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以為il-1ri結(jié)合細(xì)胞因子，諸如il-1β、il-1α和il-1ra。在一些實(shí)施方案中，不在來自第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的片段中的氨基酸來自兩個(gè)或更多個(gè)其他親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含長(zhǎng)度為至少5、6、10、15、20或25個(gè)氨基酸的與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)片段具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的至少兩個(gè)片段，并且不在此類片段中的氨基酸大部分(例如，至少50、60、70、80、85、88、90、92、95或100％)與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基相同。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含(i)長(zhǎng)度為至少5、6、10、15、20或25個(gè)氨基酸的與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)片段具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的至少兩個(gè)片段，以及(ii)例如長(zhǎng)度為至少5、6、7、8、10或15個(gè)氨基酸的與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域相同的至少一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)片段。例如，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可包含20-50、25-50、30-45或30-40個(gè)(例如，29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個(gè))氨基酸的第一片段，和20-45、20-40、25-40或25-35個(gè)(例如，25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35個(gè))氨基酸的第二片段，每一個(gè)均與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域(例如，il-1ra)相同(或具有至少80、85、88、90、92、95或98％同一性)，以及與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域(例如，il-1β或il-1α)相同(或具有至少80、85、88、90、92、95或98％同一性)的第三片段。例如，第三片段長(zhǎng)度可以為55-90、60-90、60-85或70-85個(gè)氨基酸，例如，75、76、77、78、79、80、81、82、83、84或85個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施方案中：第一片段可以為與wdvnqktfylrnnqlvagylqgpnv(seqidno:9，本文也稱為a1片段，并對(duì)應(yīng)于seqidno:3的第16-40位殘基以及根據(jù)il-1β編號(hào)的第11-36位殘基)具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的片段。第二片段可以為與seqidno:3(il-1ra)的第120-140或120-141位殘基具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性，對(duì)應(yīng)于第121-139或121-140位殘基(根據(jù)il-1β編號(hào))的片段。第三片段可以與來自il-1β(seqidno:1)的第45-100或42-120位殘基具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性。在一些情況下，第一片段可以為與seqidno:3的第14-45位殘基(對(duì)應(yīng)于根據(jù)il-1β編號(hào)的第9-41位殘基)具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的片段。第二片段可以為與seqidno:3的第120-145位殘基(對(duì)應(yīng)于根據(jù)il-1β編號(hào)的第121-145位殘基)或seqidno:3的第120-147位殘基(對(duì)應(yīng)于根據(jù)il-1β編號(hào)的第121-147位殘基)具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的片段。在一些實(shí)施方案中，至少第11-41和120-147位殘基(根據(jù)il-1β編號(hào))共同地與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性。在一些實(shí)施方案中，第一il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的片段之一的末端位于seqidno:1的第41位氨基酸的五個(gè)、四個(gè)、三個(gè)、兩個(gè)或一個(gè)氨基酸內(nèi)，以及第一il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的片段之一的末端位于seqidno:1的第121位氨基酸的五個(gè)、四個(gè)、三個(gè)、兩個(gè)或一個(gè)氨基酸內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，該結(jié)構(gòu)域包含：具有seqidno:1第42位氨基酸的五個(gè)、四個(gè)、三個(gè)、兩個(gè)或一個(gè)氨基酸內(nèi)某一位置處的n端以及seqidno:1第120位氨基酸的五個(gè)、四個(gè)、三個(gè)、兩個(gè)或一個(gè)氨基酸內(nèi)的c端的片段，和/或具有seqidno:1第121位氨基酸的五個(gè)、四個(gè)、三個(gè)、兩個(gè)或一個(gè)氨基酸內(nèi)某一位置處的n端以及seqidno:1的第145位氨基酸的五個(gè)、四個(gè)、三個(gè)、兩個(gè)或一個(gè)氨基酸內(nèi)的c端的片段。在一些實(shí)施方案中，該結(jié)構(gòu)域中在對(duì)應(yīng)于11-41和120-147(根據(jù)il-1β編號(hào))的位置處的殘基共同地與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性。該結(jié)構(gòu)域還可基于來自il-1細(xì)胞因子家族成員的序列，例如，在與前述位置相似的位置。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含以下序列中的一者、兩者、三者或更多者：wdvnqktfylrnnqlvagylqgpnv(seqidno:9)；nleek(seqidno:10)；riwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleek(seqidno:11)；ameadqp(seqidno:12)；flctameadqpvsltnmpdegvmvtkfy(seqidno:13)；和/或與前述序列具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含以下序列中的一者、兩者、三者或更多者：vqgeesndki(seqidno:14)；kkkmekrf(seqidno:15)和fsmsfvqgeesndkipvalglkeknlylscvlkddkptlqlesvdpknypkkkmekrfvfnkieinnklefes(seqidno:16)；和/或與前述序列具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，β1β2、β2β3、β8β9和β10β11環(huán)的一者或多者或全部與il-1拮抗劑(如，il-1ra)的對(duì)應(yīng)環(huán)具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性。在一些實(shí)施方案中，β4β5、β5β6、β6β7和β7β8環(huán)的一者或多者或全部與來自不同于與β1β2、β2β3、β8β9和β10β11環(huán)最相似的人親本細(xì)胞因子的il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的相應(yīng)環(huán)具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性。例如，β4β5、β5β6、β6β7和β7β8環(huán)的一者或多者或全部與來自il-1激動(dòng)劑諸如il-1β的此類環(huán)具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性。在一些實(shí)施方案中，β11β12環(huán)與來自il-1拮抗劑例如il-1ra的對(duì)應(yīng)環(huán)具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與il-1ra的β鏈β2、β3、β10和β11中的一者、兩者、三者或全部具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與il-1β的β4、β6、β7和β8或與il-1β的β4、β5、β6、β7和β8的一者、兩者、三者或全部具有至少80、85、88、90、92、95或100％同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域不含與seqidno:3的氨基酸i46-g59、a55-g59、a55-v83、i60-v83、n84-d95、i46-s110、v49-s110或i46-g118具有大于80、85、90、95或100％同一性的片段。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域不含與seqidno:1的氨基酸n7-v41、r11-m36、n102-d145或y121-d145具有大于80、85、90、95或100％同一性的片段。一般來講，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域不是天然存在的。它不同于人il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域。例如，它與il-1ra(seqidno:3)、il-1β(seqidno:1)和/或il-1α(seqidno:2)具有小于98、95、90、85、80、75、70、65、60或55％的同一性。該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域也可以與此類細(xì)胞因子具有至少30、40、45、50、55、60、65、70％同一性。例如，該嵌合結(jié)構(gòu)域可以與il-1ra、il-1β和il-1α具有30-95％、40-90％或45-85％同一性。例如，該嵌合結(jié)構(gòu)域可以與il-1β具有40-90％同一性以及與il-1ra具有35-85％同一性；與il-1β具有40-80％同一性以及與il-1ra具有45-80％同一性；與il-1β具有45-72％同一性以及與il-1ra具有45-80％同一性；與il-1β具有45-72％同一性以及與il-1ra具有53-80％同一性；與il-1β具有50-72％同一性以及與il-1ra具有53-70％同一性；與il-1β具有60-72％同一性以及與il-1ra具有53-68％同一性；與il-1β具有65-72％同一性以及與il-1ra具有54-60％同一性；或與il-1β具有68-72％同一性以及與il-1ra具有54-57％同一性。例如，該嵌合結(jié)構(gòu)域可以與il-1α具有40-90％同一性以及與il-1ra具有35-85％同一性；與il-1α具有40-80％同一性以及與il-1ra具有45-80％同一性；與il-1α具有45-72％同一性以及與il-1ra具有45-80％同一性；與il-1α具有45-72％同一性以及與il-1ra具有53-80％同一性；與il-1α具有50-72％同一性以及與il-1ra具有53-70％同一性；與il-1α具有60-72％同一性以及與il-1ra具有53-68％同一性；與il-1α具有65-72％同一性以及與il-1ra具有54-60％同一性；或與il-1α具有68-72％同一性以及與il-1ra具有54-57％同一性。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域不同于il-1ra，并與受體結(jié)合，同時(shí)包含天然存在的受體拮抗劑(諸如il-1ra)特有的位點(diǎn)c和/或位點(diǎn)d。例如，該結(jié)構(gòu)域與人il-1β和/il-1ra具有小于98、95、92、90、85和80％的同一性。例如，該結(jié)構(gòu)域與il-1ra具有40-95％、40-90％或45-85％同一性。該結(jié)構(gòu)域也可以與il-1家族細(xì)胞因子激動(dòng)劑諸如il-1α或il-1β具有40-95％、40-90％或45-85％同一性。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含：來自作為細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激動(dòng)劑的第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的至少40、45、50、55、60、65、70、75、80或85％的氨基酸。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與受體激動(dòng)劑(諸如il-1β或il-1α)具有比與受體拮抗劑(il-1ra)更高的氨基酸同一性(例如，至少高5、10、15或20％)，但作為il-1ri的拮抗劑發(fā)揮作用。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域?yàn)橥耆逗系模?，該結(jié)構(gòu)域中的每個(gè)氨基酸來自親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域之一，例如，兩個(gè)親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域之一或者三個(gè)或更多個(gè)親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域之一。例如，該親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域?yàn)槿思?xì)胞因子結(jié)構(gòu)域或非人靈長(zhǎng)類細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域?yàn)椴糠智逗系模?，該結(jié)構(gòu)域中并非所有氨基酸都來自親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域之一。例如，該分離的蛋白質(zhì)與il-1ri結(jié)合并調(diào)節(jié)受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，例如，激動(dòng)或拮抗il-1ri受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性。在一些實(shí)施方案中，該蛋白質(zhì)在接觸il-1β反應(yīng)性人細(xì)胞時(shí)不實(shí)質(zhì)上誘導(dǎo)il-6的產(chǎn)生，和/或不實(shí)質(zhì)上誘導(dǎo)il-1β反應(yīng)性報(bào)告基因的產(chǎn)生，例如，以10μg/ml、100μg/ml或1mg/ml的濃度。一般來講，該蛋白質(zhì)以小于100、50、20、10或5nm的ic50抑制il-1β(例如，諸如在本文所述的細(xì)胞測(cè)定中以0.1ng/ml的濃度)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。該蛋白質(zhì)可以小于il-1ra的ic50值的ic50(例如，小至少10、20或50％)抑制il-1β的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域例如以相比于親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域之一相同的或更高的親和力結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域以小于100、50、20、10、5或1nm或小于500、400、100或50pm的kd與il-1ri結(jié)合。例如，締合常數(shù)可大于1×104、3×104、1×105或1×106m-1s-1，而解離常數(shù)可小于1×10-3、1×10-4、6×10-4或6×10-5s-1。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域以相比于il-1β或il-1ra更高的親和力(例如，更低的kd)和/或更慢的解離速率與il-1ri結(jié)合。例如，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以小于或等于il-1ra的解離常數(shù)的解離常數(shù)和/或以大于或等于il-1β的締合常數(shù)的締合常數(shù)與il-1ri結(jié)合。該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的長(zhǎng)度可介于約120-180、140-170或148-160或150-156個(gè)氨基酸之間。在一些實(shí)施方案中，該結(jié)構(gòu)域的長(zhǎng)度為152或153個(gè)氨基酸。通常，該結(jié)構(gòu)域包含至少10、11或12條β鏈，并穩(wěn)定折疊。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域具有至少38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62或64℃的tm，如本文所述。它可具有介于51-61、51-66、56-61或56-66℃之間的tm。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域直到至少48、50、51、55、57、58或59℃才開始解折疊。例如，在生理緩沖液中，它具有至少在il-1ra和/或il-1β的tm的10℃或5℃內(nèi)的tm。在一些實(shí)施方案中，它在生理緩沖液中比il-1ra和/或il-1β更加熱穩(wěn)定。例如，該結(jié)構(gòu)域在生理緩沖液中可具有比il-1ra和/或il-1β的tm高至少2、4、6、7或8℃的tm，例如，在約0.5mg/ml的濃度下比il-1ra和/或il-1β的tm高約5-12、5-10或7-10℃。該蛋白質(zhì)可包含本文所述的其他特征。在另一方面，本公開的特征在于包含嵌合il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的分離的蛋白質(zhì)。il-1細(xì)胞因子家族成員的實(shí)例包括il-1α、il-1β、il-1ra、il-18、il-1f5、il-1f6、il-1f7、il-1f8、il-1f9、il-1f10和il-33。該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可包含前述細(xì)胞因子之一的受體結(jié)合區(qū)或包含一種或多種此類細(xì)胞因子的元件的蛋白質(zhì)序列。例如，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可包含兩種或更多種il-1細(xì)胞因子家族成員的嵌合體。在一個(gè)實(shí)施方案中，該嵌合結(jié)構(gòu)域包含：長(zhǎng)度為至少5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70個(gè)氨基酸并與第一il-1家族細(xì)胞因子具有氨基酸同一性(或至少80、82、85、87、90、92、94、95、96、97、98或99％的同一性)的至少一個(gè)片段，以及長(zhǎng)度為至少5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35或40個(gè)氨基酸并與第二il-1家族細(xì)胞因子具有氨基酸同一性(或至少80、82、85、87、90、92、94、95、96、97、98或99％的同一性)的另一片段。該嵌合結(jié)構(gòu)域與第一和第二il-1家族細(xì)胞因子之一或兩者具有可小于90、85、80或75％的同一性。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一和第二il-1家族細(xì)胞因子選自il-1β、il-1α和il-1ra。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一和第二il-1家族細(xì)胞因子選自il-1f5、il-1f6、il-1f7和il-1f8。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第一il-1家族細(xì)胞因子選自激動(dòng)劑，而第二il-1家族細(xì)胞因子選自拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，該嵌合結(jié)構(gòu)域包含少于120、110、100、90或80個(gè)來自相同親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的鄰接氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，該嵌合結(jié)構(gòu)域在至少50、60、70、80、90、100、110或120個(gè)位置與第一il-1家族細(xì)胞因子相同，以及在至少50、60、70、80、90、100、110或120個(gè)位置與第二il-1家族細(xì)胞因子相同(包括可以單獨(dú)地與這兩種細(xì)胞因子均相同的位置)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該嵌合結(jié)構(gòu)域包含至少兩個(gè)、三個(gè)或四個(gè)不連續(xù)片段，每一個(gè)的長(zhǎng)度為至少5、6、7、8、9、10、15或20個(gè)氨基酸并與第一il-1家族細(xì)胞因子的對(duì)應(yīng)片段具有氨基酸同一性(或至少80、82、85、87、90、92、94、95、96、97、98或99％的同一性)以及在其余的位置包含大部分來自第二il-1家族細(xì)胞因子的氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，該嵌合結(jié)構(gòu)域包含4、5、6或7個(gè)片段，其中相鄰的片段來自不同的親本il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域。例如，該結(jié)構(gòu)域中的每個(gè)氨基酸位于來自天然存在的人il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的長(zhǎng)度為至少5或6個(gè)氨基酸的肽內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該嵌合結(jié)構(gòu)域包含以下至少一者、兩者或三者：(i)來自il-1β的長(zhǎng)度為至少50、60、65、70或75個(gè)氨基酸的片段；(ii)來自il-1ra的長(zhǎng)度為至少15、20、25個(gè)氨基酸的片段；以及(iii)來自il-1ra的長(zhǎng)度為至少15、20、25個(gè)氨基酸的另一片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)il-1β中此類位置的編號(hào)，該不連續(xù)片段包含(i)第1-6和45-61位，(ii)第1-6和86-95位，(iii)第45-61和86-95位，(iv)第1-6和148-153位，(v)第45-61和148-153位或(vi)第86-95和148-153位殘基。根據(jù)il-1β中此類位置的編號(hào)，來自第一il-1家族細(xì)胞因子的該三個(gè)不連續(xù)片段可包含(例如)第1-8、42-120和141-153位殘基，第1-10、37-125和131-153位殘基或第1-6、45-61、86-95和148-153位殘基。該嵌合結(jié)構(gòu)域在其余的位置可以與第二il-1家族細(xì)胞因子具有至少80、82、85、87、90、92、94、95、96、97、98、99或100％同一性。在一個(gè)實(shí)施方案中，該不連續(xù)片段的邊界的一個(gè)或多個(gè)位于其中第一和第二il-1家族細(xì)胞因子為相同的或保守的位置處。該蛋白質(zhì)可具有本文所述的其他特征。在另一方面，本公開的特征在于包含與il-1ri結(jié)合的il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的分離的il-1抑制劑。例如，該il-1抑制劑包含上文或本文其他地方所述的一種或多種特征。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含：(a)在以下位置與il-1ra相同的氨基酸：arg11、ser13、gln14、gln15、glu25、lys27、leu29、his30、leu31、gln32、gly33、gln34、asp35、met36、gln38、gln39、ala127、glu128、asn129、met130和gln141(根據(jù)il-1β的編號(hào))；以及(b)在以下位置與il-1β相同的氨基酸：ala1、pro2、val3、arg4、leu6、phe46、gln48、glu51、ser52、asn53、lys55、ile56、pro57、lys92、lys93、lys94、lys103、glu105、asn108、gln149、phe150和ser152。在一些實(shí)施方案中，位點(diǎn)a片段a1和a2與il-1ra的對(duì)應(yīng)片段具有至少80％同一性(共同地)。在一些實(shí)施方案中，位點(diǎn)b片段b1、b2和b3與il-1β的對(duì)應(yīng)片段具有至少80％同一性(共同地)。例如，位點(diǎn)a片段a1和a2與il-1ra的對(duì)應(yīng)片段具有至少90％同一性(共同地)；而位點(diǎn)b片段b1、b2和b3與il-1β的對(duì)應(yīng)片段具有至少90％同一性(共同地)。例如，位點(diǎn)a片段a1和a2與il-1ra的對(duì)應(yīng)片段相同；而位點(diǎn)b片段b1、b2和b3與il-1β的對(duì)應(yīng)片段相同。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與il-1ra的β鏈β2、β3、β10和β11具有至少80％同一性(共同地)的序列以及與il-1β的β鏈β4、β6、β7和β8具有至少80％同一性(共同地)的序列。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與il-1ra的β鏈β2、β3、β10和β11相同的序列以及與il-1β的β鏈β4、β6、β7和β8相同的序列。在一些實(shí)施方案中，得自il-1β的上文確定的片段和特征衍生自il-1α，或il-1β或il-1α的組合。在一些實(shí)施方案中，該il-1抑制劑包含以下性質(zhì)的一種或多種(例如，至少2、3、4、5、6或7種)：(i)與il-1β、il-1α或il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少60、70、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的位點(diǎn)a或位點(diǎn)b殘基(和/或擴(kuò)展位點(diǎn)a和擴(kuò)展位點(diǎn)b殘基)；(ii)與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基共同地具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的a1和a2片段；(iii)與il-1β或il-1α中的對(duì)應(yīng)殘基共同地具有至少80％同一性的b1、b2和b3片段；(iv)與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的位點(diǎn)a區(qū)域；(v)與il-1β或il-1α中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的位點(diǎn)b區(qū)域；(vi)與il-1ra或il36ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少50、60、70、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的位點(diǎn)c和/或位點(diǎn)d殘基；(vii)與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少70、75、80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的c1片段；(viii)在至少3、4或5個(gè)殘基與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基相同的d2片段。該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域不同于il-1ra，例如，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與il-1ra具有小于99、98、95、90、85、80、75、70、65、60％的同一性，和/或與il-1ra具有至少30、40、45、50、55、60、65、70％同一性，例如，與il-1ra具有40-95％、40-90％或45-85％同一性。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域不含與seqidno:3的氨基酸i46-g59、a55-g59、a55-v83、i60-v83、n84-d95、i46-s110、v49-s110或i46-g118具有大于80、85、90、95或100％的同一性的片段。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域不含與seqidno:1的氨基酸n7-v41、r11-m37、n102-d144或y121-d144具有大于80、85、90、95或100％的同一性的片段。在一些實(shí)施方案中，該抑制劑以小于100、50、20、10、5或1nm的kd與il-1ri結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，該抑制劑以相比于il-1β或il-1ra更高的親和力(例如，更低的kd)和/或更慢的解離速率與il-1ri結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，該抑制劑在接觸il-1β反應(yīng)性人細(xì)胞時(shí)不實(shí)質(zhì)上誘導(dǎo)il-6表達(dá)。一般來講，該抑制劑以小于100、50、20、10或5nm的ic50抑制il-1β的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含以下序列中的一者、兩者、三者或更多者：wdvnqktfylrnnqlvagylqgpnv(seqidno:9)；nleek(seqidno:10)；riwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleek(seqidno:11)；ameadqp(seqidno:12)；flctameadqpvsltnmpdegvmvtkfy(seqidno:13)；和/或與前述序列具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含以下序列中的一者、兩者、三者或更多者：vqgeesndki(seqidno:14)；kkkmekrf(seqidno:15)和fsmsfvqgeesndkipvalglkeknlylscvlkddkptlqlesvdpknypkkkmekrfvfnkieinnklefes(seqidno:16)；和/或與前述序列具有至少80、85、88、90、92、95、98或100％同一性的序列。該抑制劑可包含本文所述的其他特征。在另一方面，本公開提供分離的蛋白質(zhì)，其包含與本文所公開的序列具有至少80、82、85、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99％或100％同一性的氨基酸序列，例如，表4和實(shí)施例1中所列的序列，例如，p01、p02、p03、p04、p05、p06或p07的氨基酸序列，或?qū)嵤├?、5、6或本文其他地方的序列。在一些實(shí)施方案中，該氨基酸序列包含至少一個(gè)取代、插入或缺失。該氨基酸序列可包含少于15、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2個(gè)非保守取代或少于15、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2個(gè)總?cè)〈?。該氨基酸序列可包含至?、2、3、4或5個(gè)取代，例如保守取代。本發(fā)明還提供包含n端甲硫氨酸到p01、p02、p03、p04、p05、p06或p07的氨基酸序列或?qū)嵤├?、5、6或本文其他地方的序列的分離蛋白質(zhì)，以及包含p01、p02、p03、p04、p05、p06或p07的氨基酸序列或?qū)嵤├?、5、6或本文其他地方的序列(其中不存在n端丙氨酸)的分離蛋白質(zhì)。前述序列可包含本文所公開的其他特征。例如，該序列可進(jìn)一步包含標(biāo)記，諸如六組氨酸序列，例如，在相對(duì)于il-1ri結(jié)合序列的n或c端。該序列可進(jìn)一步包含改變il-1ri結(jié)合序列的穩(wěn)定性或藥動(dòng)學(xué)的部分。對(duì)于該序列而言，可進(jìn)一步包含血清白蛋白和/或fc結(jié)構(gòu)域，或其一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)域，例如，一個(gè)或多個(gè)免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域或一個(gè)或多個(gè)白蛋白結(jié)構(gòu)域。該蛋白質(zhì)可具有本文所述的其他特征。在一些實(shí)施方案中，該分離的蛋白質(zhì)由本文所公開的序列或嵌合結(jié)構(gòu)域組成或基本上由其組成。在另一方面，本公開提供分離的蛋白質(zhì)，其包含的結(jié)構(gòu)域具有本文所述的細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的循環(huán)排列形式，例如，表4中所列的細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域和/或包含seqidno:3的結(jié)構(gòu)域。該蛋白質(zhì)可進(jìn)一步在該排列形式的n或c端包含異源序列(諸如fc結(jié)構(gòu)域或白蛋白)，其任選地通過接頭隔開。該蛋白質(zhì)可具有本文所述的其他特征。本公開的特征還在于包含本文所述的一種或多種受體結(jié)合劑(諸如包含嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì))的藥物組合物。該組合物可以為眼科藥物組合物、局部用組合物或用于腸胃外施用的組合物。在另一方面，本公開的特征在于調(diào)節(jié)受試者免疫或炎性反應(yīng)的方法。該方法可包括以有效調(diào)節(jié)受試者免疫或炎性反應(yīng)的量向該受試者施用包含本文所述的受體結(jié)合劑的組合物。在另一方面，本公開的特征在于治療受試者的il-1介導(dǎo)的疾病的方法。該方法包括向受試者施用包含可與il-1ri結(jié)合的蛋白質(zhì)(例如本文所述的受體結(jié)合劑)的組合物。例如，該疾病可以是自身免疫疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或幼年型慢性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、舍格倫綜合征(sjogren'ssyndrome)、強(qiáng)直性脊柱炎、白塞氏綜合征(behcet’ssyndrome)、炎性腸病、哮喘、血管炎或牛皮癬。該疾病可以是與聚集體形成相關(guān)的疾病，例如高尿酸血癥、痛風(fēng)、糖尿病(包括非胰島素依賴型糖尿病)、阿爾茨海默病(alzheimer’sdisease)、繼發(fā)型反應(yīng)性淀粉樣變性、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)、亨丁頓舞蹈癥或帕金森病。該疾病還可以是caps(cias1相關(guān)周期綜合征)疾病或本文所述的其他疾病。在另一方面，本公開的特征在于治療受試者的il-1介導(dǎo)的眼部疾病的方法。該方法可包括向受試者施用包含可與il-1ri結(jié)合的蛋白質(zhì)(例如本文所述的受體結(jié)合劑)的組合物。例如，該組合物是局部施用到受試者眼睛或周圍區(qū)域的眼科組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該疾病是干眼病。在一些實(shí)施方案中，該受試者無全身性自身免疫疾病的表現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，該受試者患有舍格倫綜合征。在一些實(shí)施方案中，該受試者患有移植物抗宿主病(gvhd)。在其他實(shí)施方案中，該疾病為葡萄膜炎。在另一方面，本公開的特征在于抑制il-1活性的方法。該方法包括使可與il-1ri結(jié)合的受體結(jié)合劑接觸對(duì)il-1有反應(yīng)的細(xì)胞或接觸受試者。一般而言，該蛋白質(zhì)以有效抑制與細(xì)胞相關(guān)的或受試者中的il-1活性的量提供?？墒乖摰鞍踪|(zhì)在體外接觸來自受試者的細(xì)胞。在另一方面，本公開的特征在于分離的核酸，其包含編碼本文所述的蛋白質(zhì)的一個(gè)或多個(gè)序列或本文所公開的核酸(例如，見表5)，與此類核酸雜交或與此類核酸具有80、82、85、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99％或100％同一性的序列。示例性雜交序列的長(zhǎng)度可為至少200、300、400、420或450個(gè)核苷酸，例如，長(zhǎng)度為420-480個(gè)核苷酸。該核酸還可以包含本文所公開的其他特征。本發(fā)明的特征還在于重組宿主細(xì)胞，其包含的核酸包含編碼本文所述的蛋白質(zhì)及其多肽鏈的一個(gè)或多個(gè)序列?？梢酝ㄟ^以下方法產(chǎn)生受體結(jié)合劑，該方法包括：將宿主細(xì)胞維持在允許受體結(jié)合劑表達(dá)的條件下，以及任選地(例如)從細(xì)胞或與宿主細(xì)胞相關(guān)的培養(yǎng)基中回收受體結(jié)合劑。例如，受體結(jié)合劑可從細(xì)胞裂解物中純化。純化的受體結(jié)合劑可(例如)與賦形劑、穩(wěn)定劑和緩沖劑的一者或多者一起配制。本發(fā)明的特征還在于提供嵌合蛋白結(jié)構(gòu)域的方法。該方法包括：鑒定具有共同折疊的至少兩種親本蛋白(例如，第一親本蛋白和第二親本蛋白)，定位第一親本蛋白內(nèi)的至少兩個(gè)片段，以及構(gòu)建核酸，該核酸具有編碼嵌合氨基酸序列的序列，該嵌合氨基酸序列包含來自第一親本蛋白的兩個(gè)片段以及在其余位置大部分來自第二親本蛋白的殘基。該結(jié)構(gòu)域可以為主要由β折疊組成的結(jié)構(gòu)域，或主要由α螺旋組成的結(jié)構(gòu)域，或具有此類元件的組合的結(jié)構(gòu)域。例如，該結(jié)構(gòu)域可具有細(xì)胞因子的折疊。該第一和第二親本蛋白可通過同源性而相關(guān)，例如10-40％的氨基酸同一性。在一些實(shí)施方案中，來自第一蛋白的所述片段位于單個(gè)折疊蛋白結(jié)構(gòu)域內(nèi)，并且所述嵌合氨基酸序列包含與第一和第二親本蛋白中的對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)域不同的折疊蛋白結(jié)構(gòu)域的一種形式。在一些實(shí)施方案中，所述兩種親本蛋白具有不同的功能特性，并且所述嵌合結(jié)構(gòu)域可具有所述親本蛋白的一者或兩者的特性。在一些實(shí)施方案中，所述嵌合結(jié)構(gòu)域具有一個(gè)來自第一親本蛋白的結(jié)合界面以及另一個(gè)來自第二親本蛋白的結(jié)合界面。本文提及了il-1家族細(xì)胞因子中關(guān)于位點(diǎn)a、b、c和d的各種區(qū)域、片段和殘基。此類殘基、片段和區(qū)域在人il-1β(seqidno:1)序列中的定位以及對(duì)應(yīng)位置在下文和圖1中提供：位點(diǎn)a.il-1β中的位點(diǎn)a殘基包括：arg11、ser13、gln14、gln15、ser21、glu25、lys27、leu29、his30、leu31、gln32、gly33、gln34、asp35、met36、glu128、asn129和met130以及其他il1細(xì)胞因子家族成員的對(duì)應(yīng)殘基(本文稱為“位點(diǎn)a殘基”)。在某些情況下，尤其是與il-1β有關(guān)，提及了包括位點(diǎn)a殘基以及gln149與phe150和其他il1細(xì)胞因子家族成員的對(duì)應(yīng)殘基的“擴(kuò)展位點(diǎn)a殘基”。此外，可以定義如圖4所示的“位點(diǎn)a區(qū)域”，包括(例如)a1片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第11-36位)和a2片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第125-131位)以及其他il1細(xì)胞因子家族成員中的對(duì)應(yīng)片段。位點(diǎn)b.il-1β中的位點(diǎn)b殘基包括：ala1、pro2、arg4、gln48、glu51、asn53、ile56、lys92、lys93、lys94、lys103、glu105和asn108，以及其他il1細(xì)胞因子家族成員的對(duì)應(yīng)殘基(本文稱為“位點(diǎn)b殘基”)。在某些情況下，尤其是與il-1β有關(guān)，提及了包括位點(diǎn)b殘基以及在圖4位點(diǎn)b區(qū)域之外的phe46和ser152的“擴(kuò)展位點(diǎn)b殘基”。此外，可以定義如圖4所示的“位點(diǎn)b區(qū)域”，包括(例如)b1片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第1-5位)、b2片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第48-56位)和b3片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第92-98位)以及其他il1細(xì)胞因子家族成員中的對(duì)應(yīng)片段。位點(diǎn)c.il-1β中的位點(diǎn)c殘基包括：ile104、ile106、asn107、lys109、glu111、thr137、lys138、gly139、gly140、gln141、thr144和asp145以及其他il1細(xì)胞因子家族成員的對(duì)應(yīng)殘基(本文稱為“位點(diǎn)c殘基”)。此外，可以定義如圖4所示的“位點(diǎn)c區(qū)域”，包括(例如)c1片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第136-145位)以及其他il1細(xì)胞因子家族成員中的對(duì)應(yīng)片段。位點(diǎn)d.il-1β中的位點(diǎn)d殘基包括：leu6、thr9、lys63、glu64、lys65和asn66及其他il1細(xì)胞因子家族成員的對(duì)應(yīng)殘基(本文稱為“位點(diǎn)d殘基”)。此外，可以定義如圖4所示的“位點(diǎn)d區(qū)域”，包括(例如)d1片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第6-9位)、d2片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第37-41位)和d3片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第63-66位)、d4片段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第86-91位)和d5段(在il-1β中對(duì)應(yīng)于seqidno：1的第150-153位)以及其他il1細(xì)胞因子家族成員中對(duì)應(yīng)片段?？赏ㄟ^將所考慮的細(xì)胞因子與圖4所示的序列進(jìn)行比對(duì)來獲得對(duì)位點(diǎn)a、b、c與d的殘基和區(qū)域的定位的進(jìn)一步鑒定。如本文所提及的il-1β(人)的氨基酸序列為：apvrslnctlrdsqqkslvmsgpyelkalhlqgqdmeqqvvfsmsfvqgeesndkipvalglkeknlylscvlkddkptlqlesvdpknypkkkmekrfvfnkieinnklefesaqfpnwyistsqaenmpvflggtkggqditdftmqfvss(seqidno：1)。如本文所提及的il-1α(人)的氨基酸序列為：sapfsflsnvkynfmriikyefilndalnqsiirandqyltaaalhnldeavkfdmgayksskddakitvilrisktqlyvtaqdedqpvllkempeipktitgsetnllffwethgtknyftsvahpnlfiatkqdywvclaggppsitdfqilenqa(seqidno：2)。如本文所提及的il-1ra(人)的氨基酸序列為：rpsgrksskmqafriwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleekidvvpiephalflgihggkmclscvksgdetrlqleavnitdlsenrkqdkrfafirsdsgpttsfesaacpgwflctameadqpvsltnmpdegvmvtkfyfqed(seqidno：3)。如本文所用的術(shù)語il-1β、il-1α和il-1ra是指各自的成熟蛋白質(zhì)。本文提及的以及如圖4所示的β折疊是指以下序列：表1兩序列之間的“同源性”或“序列同一性”(這些術(shù)語在本文可互換使用)的計(jì)算按如下方式進(jìn)行。序列根據(jù)本文提供的比對(duì)法加以比對(duì)，或者在沒有適當(dāng)?shù)谋葘?duì)法的情況下，將最佳比對(duì)確定為使用needleman和wunsch算法所得的最高分，如以空位罰分10和空位延伸罰分1使用blosum62評(píng)分矩陣在emboss軟件包的needle算法中執(zhí)行。參見needleman，s.b.和wunsch，c.d.(1970)j.mol.biol.48,443-453；kruskal，j.b.(1983)anoverviewofsequencecomparisonind.sankoffandj.b.kruskal，(編著)，timewarps，stringeditsandmacromolecules：thetheoryandpracticeofsequencecomparison，1-44頁(yè)addisonwesleytools；以及可得自europeanbioinformaticsinstitute(cambridgeuk)的工具emboss：theeuropeanmolecularbiologyopensoftwaresuite(2000)(rice，p.等，a.，trendsingenetics16，(6)276-277頁(yè))并可通過http://www.ebi.ac.uk/tools/emboss/align/index.htmlandhttp://emboss.open-bio.org/wiki/appdoc:needle在線獲得。然后將對(duì)應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸殘基或核苷酸進(jìn)行比較。當(dāng)?shù)谝恍蛄兄械哪骋晃恢帽慌c第二序列中的對(duì)應(yīng)位置相同的氨基酸殘基或核苷酸占據(jù)時(shí)，則所述分子在該位置相同(如本文所用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。兩序列之間的百分比同一性是所述序列共享的相同位置數(shù)的函數(shù)。要確定所關(guān)注的一個(gè)序列與參考序列組的集體同一性，如果某一位置與所述參考序列組任何一個(gè)或多個(gè)序列中對(duì)應(yīng)位置處的至少一個(gè)氨基酸相同，則將該位置視為相同的。至于片段、特征或區(qū)域的列表，可以共同地計(jì)算此列表所有成員的同一性，以得到總體百分比同一性。本文提供與本文所公開的序列具有至少80、82、85、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％同一性的序列。如本文所用，術(shù)語“對(duì)應(yīng)于”用于表示氨基酸殘基在所關(guān)注的多肽中相對(duì)于參考多肽的位置。一般來講，該位置為通過本文所提供的比對(duì)法(例如，圖4)指示的位置。如本文所用，術(shù)語“在高嚴(yán)格條件下雜交”描述用于雜交和洗滌的條件。進(jìn)行雜交反應(yīng)的指導(dǎo)可見于currentprotocolsinmolecularbiology,johnwiley&sons,n.y.(1989),6.3.1-6.3.6，該文獻(xiàn)以引用方式并入。含水和不含水的方法在該參考文獻(xiàn)中有所描述，并且任一者均可使用。高嚴(yán)格雜交條件包括于約45℃下在6xssc中雜交，然后于65℃下在0.2xssc，0.1％sds中進(jìn)行一次或多次洗滌，或基本上類似的條件。本文提供分離的核酸，它們包含的序列在高嚴(yán)格條件下與編碼本文所公開的氨基酸序列的核酸雜交以及與本文所公開的核酸雜交，例如，實(shí)施例1中。本文提及的天然存在的蛋白質(zhì)特別包括此類蛋白質(zhì)的人源形式，也包括來源于其他哺乳動(dòng)物物種的形式。本文所引用的所有專利、已公布的專利申請(qǐng)和發(fā)表的參考文獻(xiàn)以引用方式并入用于所有目的。具體地，本發(fā)明涉及以下方面：1.一種包含嵌合白介素-1(il-1)家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的分離的蛋白質(zhì)，其中所述結(jié)構(gòu)域的至少第一片段的長(zhǎng)度為至少20個(gè)氨基酸并與第一il-1家族細(xì)胞因子的對(duì)應(yīng)片段具有至少80％氨基酸同一性，以及所述結(jié)構(gòu)域的至少第二片段的長(zhǎng)度為至少20個(gè)氨基酸并與第二il-1家族細(xì)胞因子的對(duì)應(yīng)片段具有至少80％的氨基酸同一性。2.根據(jù)項(xiàng)1所述的蛋白質(zhì)，其中所述第一和第二il-1家族細(xì)胞因子選自il-1β、il-1α和il-1ra。3.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述第一il-1家族細(xì)胞因子為il-1β，以及所述第二il-1家族細(xì)胞因子為il-1ra。4.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)與il1受體i結(jié)合并抑制il-1受體i活性。5.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的所述第一片段具有至少20或30個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度并與il-1β的對(duì)應(yīng)片段相同。6.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性的位點(diǎn)a殘基以及與il-1β中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性的位點(diǎn)b殘基。7.根據(jù)項(xiàng)3所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含(a)在以下位置與il-1ra相同的氨基酸：arg11、ser13、gln14、gln15、glu25、lys27、leu29、his30、leu31、gln32、gly33、gln34、asp35、met36、gln38、gln39、ala127、glu128、asn129、met130和gln141(根據(jù)il-1β的編號(hào))，以及(b)在以下位置與il-1β相同的氨基酸：ala1、pro2、val3、arg4、leu6、phe46、gln48、glu51、ser52、asn53、lys55、ile56、pro57、lys92、lys93、lys94、lys103、glu105、asn108、gln149、phe150和ser152(根據(jù)il-1β的編號(hào))。8.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與il-1ra的β鏈β2、β3、β10和β11相同的序列以及與il-1β的β鏈β4、β6、β7和β8相同的序列。9.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述β1β2、β2β3、β8β9、β10β11和β11β12環(huán)的一者或多者與il-1ra的對(duì)應(yīng)環(huán)具有至少90％同一性。10.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含長(zhǎng)度為至少20個(gè)氨基酸的至少兩個(gè)不連續(xù)片段，它們與il-1β的各自對(duì)應(yīng)片段具有至少90％同一性。11.根據(jù)項(xiàng)10所述的蛋白質(zhì)，其中所述兩個(gè)不連續(xù)片段與il-1β的各自對(duì)應(yīng)片段相同。12.根據(jù)項(xiàng)10所述的蛋白質(zhì)，其中所述兩個(gè)不連續(xù)片段的長(zhǎng)度為25至40個(gè)氨基酸。13.根據(jù)項(xiàng)10、11或12所述的蛋白質(zhì)，其中不在所述兩個(gè)不連續(xù)片段中的氨基酸與il-1ra具有至少90％同一性。14.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)由長(zhǎng)度為150至160個(gè)氨基酸的單條多肽鏈組成。15.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在至少50個(gè)位置與所述第一il-1家族細(xì)胞因子相同以及在至少50個(gè)位置與所述第二il-1家族細(xì)胞因子相同。16.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中至少第11-41位殘基和第120-147位殘基(根據(jù)il-1β編號(hào))總和起來與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少90％同一性。17.根據(jù)項(xiàng)3所述的蛋白質(zhì)，其中至少第1-6位、第45-61位和第148-153位殘基(根據(jù)il-1β編號(hào))總和起來與il-1β中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少90％同一性。18.根據(jù)項(xiàng)3所述的蛋白質(zhì)，其中至少第1-8位、第42-120位和第148-153位殘基(根據(jù)il-1β編號(hào))總和起來與il-1β中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少90％同一性。19.根據(jù)項(xiàng)3所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與p01、p02、p03、p04或p05具有至少80％同一性。20.根據(jù)項(xiàng)19所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與p01、p02、p03、p04或p05具有至少90％同一性。21.根據(jù)項(xiàng)20所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與p01、p02、p03、p04或p05具有至少95％同一性。22.根據(jù)項(xiàng)21所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與p01、p02或p03相同。23.根據(jù)項(xiàng)21所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與p04相同。24.根據(jù)項(xiàng)21所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與p05相同。25.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域比il-1β和il-1ra具有更高的熱穩(wěn)定性。26.根據(jù)項(xiàng)2所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域具有比il-1β和il-1ra高至少2度的tm。27.根據(jù)項(xiàng)3所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)定中對(duì)于抑制il-1β(以0.1ng/ml)具有低于10ng/ml的ic50。28.根據(jù)項(xiàng)3所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)相比于人il-1ra以較高的親和力kd、較慢的解離速率和/或較快的締合速率與il-1ri結(jié)合。29.根據(jù)項(xiàng)3所述的蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含以下一者或多者：(a)位點(diǎn)a：i.與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性的位點(diǎn)a殘基；ii.與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性的擴(kuò)展位點(diǎn)a殘基；iii.與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)片段具有至少80％同一性的位點(diǎn)a片段a1和a2；或iv.與第一親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有至少80％同一性的位點(diǎn)a區(qū)域；(b)位點(diǎn)b：i.與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性的位點(diǎn)b殘基；ii.與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性的擴(kuò)展位點(diǎn)b殘基；iii.與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)片段具有至少80％同一性的位點(diǎn)b片段b1、b2和b3；或iv.與第二親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有至少80％同一性的位點(diǎn)b區(qū)域；30.一種包含il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的分離的il-1抑制劑，所述抑制劑與il-1ri結(jié)合并包含(i)與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少70％同一性的c1片段；以及(ii)與il-1β、il-1α或il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性的位點(diǎn)a或位點(diǎn)b殘基，并且其中所述結(jié)構(gòu)域與il-1ra具有40％-90％同一性。31.根據(jù)項(xiàng)30所述的il-1抑制劑，其中所述c1片段與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性。32.根據(jù)項(xiàng)30所述的il-1抑制劑，其中所述c1片段與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基相同。33.根據(jù)項(xiàng)30所述的il-1抑制劑，其中所述d2片段與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性。34.根據(jù)項(xiàng)30所述的il-1抑制劑，其中所述a1和a2片段總和起來與il-1ra中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性。35.根據(jù)項(xiàng)30所述的il-1抑制劑，其中所述b1、b2和b3片段與il-1β中的對(duì)應(yīng)殘基具有至少80％同一性。36.根據(jù)項(xiàng)30所述的il-1抑制劑，所述抑制劑抑制il-1β的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。37.根據(jù)項(xiàng)30所述的il-1抑制劑，所述抑制劑以小于1nm的親和力與il-1ri結(jié)合。38.一種分離的受體結(jié)合蛋白，其包含：(a)在以下位置與il-1ra相同的氨基酸：arg11、ser13、gln14、gln15、glu25、lys27、leu29、his30、leu31、gln32、gly33、gln34、asp35、met36、gln38、gln39、ala127、glu128、asn129、met130和gln141(根據(jù)il-1β的編號(hào))以及(b)在以下位置與il-1β相同的氨基酸：ala1、pro2、val3、arg4、leu6、phe46、gln48、glu51、ser52、asn53、lys55、ile56、pro57、lys92、lys93、lys94、lys103、glu105、asn108、gln149、phe150和ser152(根據(jù)il-1β的編號(hào))。39.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)為il-1β和il-1ra的嵌合體。40.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)包含il-1β的gln48-asn53。41.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)與非il-1β的細(xì)胞因子具有至少50％同一性。42.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)包含在對(duì)應(yīng)于ala1、pro2、val3、arg4和leu6的位置與il-1β相同的殘基。43.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)包含在對(duì)應(yīng)于il-1β(seqidno:1)的45-61的位置與il-1β相同的至少15個(gè)殘基。44.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)包含在對(duì)應(yīng)于il-1β(seqidno:1)的86-95的位置與il-1β相同的至少8個(gè)殘基。45.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)包含在對(duì)應(yīng)于il-1β(seqidno:1)的148-153的位置與il-1β相同的至少5個(gè)殘基。46.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，其中對(duì)應(yīng)于第11-36位和第126-130位(根據(jù)seqidno:1)的氨基酸位置大部分與il-1ra相同。47.根據(jù)項(xiàng)38所述的蛋白質(zhì)，其中對(duì)應(yīng)于第9-41位和第121-140位(根據(jù)seqidno:1)的氨基酸位置大部分與il-1ra相同。48.一種藥物組合物，其包含根據(jù)項(xiàng)1-47中之一所述的蛋白質(zhì)。49.一種局部用藥物組合物，其包含根據(jù)項(xiàng)1-47中之一所述的蛋白質(zhì)。50.一種眼科藥物組合物，其包含根據(jù)項(xiàng)1-47中之一所述的蛋白質(zhì)。51.根據(jù)項(xiàng)48所述的藥物組合物，所述藥物組合物為含水的并包含濃度為0.001–5％的所述蛋白質(zhì)。52.一種根據(jù)項(xiàng)48所述的組合物用于受試者以調(diào)節(jié)受試者免疫或炎性反應(yīng)的用途。53.一種根據(jù)項(xiàng)48所述的組合物用于治療患有全身性自身免疫疾病或處于其風(fēng)險(xiǎn)之中的受試者的用途。54.一種根據(jù)項(xiàng)48所述的組合物用于治療患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或處于其風(fēng)險(xiǎn)之中的受試者的用途。55.一種根據(jù)項(xiàng)48所述的組合物用于治療患有干眼病或過敏性結(jié)膜炎或處于其風(fēng)險(xiǎn)之中的受試者的用途。56.一種分離的核酸，其包含編碼根據(jù)項(xiàng)1至47中之一所述的蛋白質(zhì)的序列。57.一種分離的核酸載體，其包含編碼根據(jù)項(xiàng)1至47中之一所述的蛋白質(zhì)的序列，其中所述序列可操作地連接至轉(zhuǎn)錄控制序列。58.一種重組宿主細(xì)胞，其包含編碼根據(jù)項(xiàng)1至47中之一所述的蛋白質(zhì)的重組核酸。59.根據(jù)項(xiàng)58所述的宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌宿主細(xì)胞。60.一種制備重組蛋白的方法，所述方法包括在允許所述重組蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)根據(jù)項(xiàng)58所述的宿主細(xì)胞；從細(xì)胞裂解物或細(xì)胞培養(yǎng)基中純化所述重組蛋白；以及配制所述重組蛋白以施用給受試者。61.一種包含嵌合il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的分離的蛋白質(zhì)，所述結(jié)構(gòu)域包含至少兩個(gè)長(zhǎng)度為至少六個(gè)氨基酸并與第一il-1家族細(xì)胞因子的對(duì)應(yīng)片段具有至少80％同一性的不連續(xù)片段，并在其余的位置包含大部分來自第二il-1家族細(xì)胞因子的氨基酸。62.根據(jù)項(xiàng)61所述的蛋白質(zhì)，其中所述不連續(xù)片段根據(jù)il-1β中此類位置的編號(hào)包含第1-6和45-61位、第1-6和86-95位、第45-61和86-95位、第1-6和148-153位、第45-61和148-153位或第86-95和148-153位殘基。63.根據(jù)項(xiàng)61所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)包含氨基酸與所述第一il1家族細(xì)胞因子對(duì)應(yīng)片段中的那些氨基酸相同的三個(gè)不連續(xù)片段，并且那些片段包含第1-8、42-120和141-153位殘基。64.根據(jù)項(xiàng)61所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)包含氨基酸與所述第一il1家族細(xì)胞因子對(duì)應(yīng)片段中的那些氨基酸相同的四個(gè)不連續(xù)片段，并且那些片段包含第1-6、45-61、86-95和148-153位殘基。65.根據(jù)項(xiàng)61所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)包含氨基酸與所述第一il1家族細(xì)胞因子對(duì)應(yīng)片段中的那些氨基酸相同的三個(gè)不連續(xù)片段，并且那些片段包含第1-10、37-125和131-153位殘基。66.根據(jù)項(xiàng)61所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)在其余的位置與所述第二il-1家族細(xì)胞因子相同。67.根據(jù)項(xiàng)61所述的蛋白質(zhì)，其中所述不連續(xù)片段的邊界的一個(gè)或多個(gè)位于其中所述第一和第二il-1家族細(xì)胞因子具有相同氨基酸的位置。68.根據(jù)項(xiàng)61所述的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)在至少50個(gè)位置與所述第一il-1家族細(xì)胞因子相同以及在至少50個(gè)位置與所述第二il-1家族細(xì)胞因子相同。69.根據(jù)項(xiàng)61所述的蛋白質(zhì)，其中所述第一和第二il-1家族細(xì)胞因子選自il-1β、il-1α和il-1ra。70.根據(jù)項(xiàng)69所述的蛋白質(zhì)，其中所述第一il-1家族細(xì)胞因子為il-1β，以及所述第二il-1家族細(xì)胞因子為il-1ra。附圖簡(jiǎn)述圖1是通過x射線晶體學(xué)數(shù)據(jù)確定的p04的結(jié)構(gòu)圖。來自il-1ra的殘基的主鏈以黑色顯示，而來自il-1β的殘基的主鏈以灰色顯示。圖2示出了與人il-1ri胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合的p05蛋白的模型的三個(gè)視圖。在p05中，il-1ra殘基以黑色示出，而il-1β殘基以白色示出。圖3示出了嵌合蛋白的模型，其中il-1ra殘基以黑色示出，而il-1β殘基以白色示出。該模型示出了以下蛋白質(zhì)：p01(圖3a)、p03(圖3b)、p04(圖3c)、p05(圖3d)、p07(圖3e)和p06(圖3f)。圖4提供以下多個(gè)人il-1家族細(xì)胞因子的比對(duì)：il-1β(seqidno:1)、il-1α(seqidno:2)、il-1ra(seqidno:3)、il-33(seqidno:4)、il-36ra(seqidno:5)、il-36α(seqidno:6)、il-36β(seqidno:7)和il-36γ(seqidno:8)。在本文的上下文中提及的片段在比對(duì)下鑒定。此外，鑒定了β折疊和此類折疊之間的環(huán)。圖5a是p01的氨基酸序列的列表(seqidno:17)。圖5b是p02的氨基酸序列的列表(seqidno:18)。圖5c是p03的氨基酸序列的列表(seqidno:19)。圖5d是p04的氨基酸序列的列表(seqidno:20)。圖5e是p05的氨基酸序列的列表(seqidno:21)。來自il-1β的片段以粗斜體顯示。另見下文的實(shí)施例1。圖6是sds-page凝膠的圖像，顯示了從表達(dá)受體結(jié)合劑的大腸桿菌(e.coli)細(xì)胞純化的蛋白質(zhì)的示例性實(shí)例。在左側(cè)指明了15和20kda分子量標(biāo)準(zhǔn)。泳道如下：分子量標(biāo)準(zhǔn)(泳道1和6)、提取物(泳道2和7)、由陽離子交換層析純化的材料(泳道3和8)、由陰離子交換層析另外純化的材料(泳道4和9)以及此類材料的還原樣本(泳道5和10)。泳道2-5為p05純化，以及泳道6-10為p04純化。另見實(shí)施例2。圖7a為表格及隨附的條形圖，顯示了p06、p07和p01蛋白相對(duì)于il-1β和陰性對(duì)照β-葡糖醛酸酶(gus)蛋白激動(dòng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力。圖7b為曲線圖，顯示了在多種il-1β濃度下p01對(duì)il-1β的拮抗作用。圖8a為曲線圖，顯示了在存在0.1ng/mlil-1β(人)的情況下p03(六組氨酸標(biāo)記的)、p04(六組氨酸標(biāo)記的)、p05(六組氨酸標(biāo)記的)和il-1ra對(duì)il-1β的拮抗作用。圖8b是曲線圖，顯示了在存在0.1ng/mlil-1β(人)的情況下含有未標(biāo)記形式的p01、p02、p03、p04和p05以及il-1ra的裂解物對(duì)il-1β的拮抗作用，并使用相應(yīng)裂解物中蛋白質(zhì)濃度的估計(jì)值。圖9包含spr數(shù)據(jù)的曲線圖，顯示了以下蛋白質(zhì)對(duì)固定化可溶il-1ri的結(jié)合動(dòng)力學(xué)：il-1β(圖9a)、il-1ra(圖9b)、p04(圖9c)和p05(圖9d)。圖10a為曲線圖，顯示了如實(shí)施例7中所述的il-1ra、il-1β、p03、p04和p05的熱變性。圖10b顯示了圖10a中的曲線圖的負(fù)一階導(dǎo)數(shù)。圖11a為條形圖，顯示了平均角膜染色評(píng)分±sem，測(cè)試方法為在小鼠干眼模型中在第0、3、7、9和11天時(shí)通過兩項(xiàng)獨(dú)立研究對(duì)每只眼的角膜進(jìn)行熒光素染色。小鼠不接受處理(n＝18)，接受10mg/mlp05(n＝19)或接受1.25×pbs即媒介物(n＝20)。星號(hào)表示p05相對(duì)于媒介物的統(tǒng)計(jì)顯著性，具體如下：*(p<0.05)和**(p<0.005)。圖11b為條形圖，代表了來自獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)，顯示了在小鼠干眼模型中在第0、3、7、9和11天時(shí)每只眼角膜的平均角膜染色評(píng)分±sem。小鼠不接受處理(n＝8)，接受1.25×pbs媒介物(n＝8)，接受10mg/ml鼠血清白蛋白(msa)(n＝8)或10mg/mlp05(n＝9)。星號(hào)表示p05相對(duì)于小鼠血清白蛋白的統(tǒng)計(jì)顯著性，具體如下：*(p<0.05)和***(p<0.0005)。圖11c為條形圖，包括在與圖11b相同的實(shí)驗(yàn)中用(0.05％環(huán)孢霉素乳液)(n＝8)處理的小鼠的數(shù)據(jù)。星號(hào)表示p05相對(duì)于的統(tǒng)計(jì)顯著性，具體如下：**(p<0.005)和***(p<0.0005)。圖12a顯示了p04的x射線晶體學(xué)結(jié)構(gòu)(黑色)重疊在其結(jié)構(gòu)的計(jì)算模型(灰色)上的結(jié)構(gòu)。圖12b示出了p04的k64與e39之間的相互作用；圖12c示出了p04的c端殘基q149和s152與k40和r9之間的相互作用。發(fā)明詳述細(xì)胞因子的il-1家族包括多個(gè)成員，它們都具有共同的由六條β鏈構(gòu)成的β三葉草折疊，這六條鏈形成β桶狀結(jié)構(gòu)，再由另外六條β鏈封端。這些細(xì)胞因子的人和其他哺乳動(dòng)物形式的一級(jí)結(jié)構(gòu)是已知的。多種人il-1家族成員的示例性結(jié)構(gòu)比對(duì)在圖1中示出。我們已特別發(fā)現(xiàn)il-1折疊為高塑性的。具體地講，來自不同成員的元件可加以結(jié)合以提供激動(dòng)或拮抗細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)的實(shí)例包括嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域，它們包含(例如)在另一細(xì)胞因子或細(xì)胞因子共有序列的情況下來自一種細(xì)胞因子的兩個(gè)或更多個(gè)片段或表面殘基，從而形成來自不同il-1家族細(xì)胞因子的受體相互作用位點(diǎn)的非天然存在的組合。il-1家族細(xì)胞因子可包含至少兩個(gè)主要受體相互作用位點(diǎn)，稱為位點(diǎn)a和位點(diǎn)b。位點(diǎn)a和b參與與主要細(xì)胞因子受體(例如，il-1ri)的接觸。就il-1ra和il-1β而言，例如，這兩種蛋白質(zhì)在位點(diǎn)a和b方面實(shí)質(zhì)上不同，使得il-1ra在位點(diǎn)b比位點(diǎn)a的受體接觸更少。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，可能構(gòu)建包含衍生自一種細(xì)胞因子的位點(diǎn)a以及衍生自另一種細(xì)胞因子的位點(diǎn)b的功能性嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域。il-1折疊的塑性允許構(gòu)建多種嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域以拮抗il-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。此外，il-1家族細(xì)胞因子可包含兩個(gè)第二受體相互作用位點(diǎn)，稱為位點(diǎn)c和位點(diǎn)d，它們參與激動(dòng)和/或拮抗作用，并可決定細(xì)胞因子與其第二細(xì)胞因子受體(例如，il-1racp)之間相互作用的能力。包含來自天然受體拮抗劑(諸如il-1ra)的位點(diǎn)c和/或位點(diǎn)d殘基可賦予拮抗特性。可以構(gòu)建包含以下部分的嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域：來自一種或多種il-1激動(dòng)劑(諸如il-1β和il-1α)和/或一種il-1受體拮抗劑(諸如il-1ra)的位點(diǎn)a和b之一或兩者，以及來自一種il-1受體拮抗劑(諸如il-1ra)的位點(diǎn)c和d之一或兩者。因此，可能產(chǎn)生拮抗信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并包含來自il-1激動(dòng)劑的位點(diǎn)b殘基的嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域。示例性組合還在下表2中提供：表2源序列可與已鑒定的細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的人序列相同或可包含相對(duì)于人序列的突變，例如，使得它們?cè)诟飨鄳?yīng)區(qū)域中與人序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高程度同一性，例如，它們可包含來自每個(gè)區(qū)域的一個(gè)或多個(gè)片段?？蛇x擇位點(diǎn)a殘基和位點(diǎn)b殘基的來源以最大化對(duì)主要受體的親和力。例如，為了結(jié)合il-1ri，位點(diǎn)a殘基可衍生自il-1ra，并且位點(diǎn)b殘基可衍生自il-1β。嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可具有以小于10-8、10-9或10-10的kd值，例如在相同條件下在天然受體配體(例如，il-1β、il-1α或il-1ra)的10倍或100倍內(nèi)的或在相同條件小于天然配體(例如，il-1β、il-1α或il-1ra)的kd值，結(jié)合il-1家族受體(例如，人il-1ri)的能力。此外，在某些實(shí)施方案中，該嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域以小于其親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的至少一者的kd值、快于其親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的至少一者的kon值或慢于其親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的至少一者的koff值結(jié)合。與il-1家族受體結(jié)合并拮抗受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可用作受體結(jié)合劑，例如，以治療如下所述由il-1家族細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)的疾病。例如，在一些實(shí)施方案中，該嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域與il-1ri結(jié)合并拮抗il-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。例如，它具有小于100、10、1、0.6或0.3nm的ic50。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以與第一il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域具有至少40、45或50％同一性，但不完全相同，例如，具有小于95、90、85或80％同一性。同時(shí)，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域也可以與第二il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域具有至少40、45或50％同一性，但不完全相同，例如，小于95、90、85或80％同一性。第一和第二il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可彼此具有小于50％的同一性。例如，第一il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以為激動(dòng)劑(例如，il-1β或il-1α)，而第二il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可以為受體拮抗劑(例如，il-1ra)。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域內(nèi)至少80、85、90、92、94、95、97、98、99或100％的位置具有以下特性，在每個(gè)這樣的位置處，存在的氨基酸與第一il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域或與第二il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域相同(或者如果第一和第二il-1家族細(xì)胞因子在該特定位置處相同，則與它們都相同)。如果細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中100％的氨基酸位置均具有該特性，則則該結(jié)構(gòu)域?yàn)閮煞N細(xì)胞因子的完整嵌合體。嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域也可由不止兩種細(xì)胞因子制成，并且還可具有相對(duì)于其親本細(xì)胞因子的突變(例如，其中存在的氨基酸不同于其親本細(xì)胞因子每一個(gè)中的對(duì)應(yīng)氨基酸的一個(gè)或多個(gè)特定位置)。細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可具有來自不同il-1細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的位點(diǎn)a、b、c和d殘基，并且同樣地可具有來自不同il-1細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的位點(diǎn)a、b、c和d區(qū)域。位點(diǎn)a.例如，在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含：在上文鑒定的位點(diǎn)a殘基的至少5、10、12、15、16、17或18個(gè)處，或上文鑒定的擴(kuò)展位點(diǎn)a殘基的至少5、10、12、15、16、17、18、19或20個(gè)處來自受體拮抗劑(例如，il-1ra)或激動(dòng)劑的殘基，或此類殘基的保守取代，或此類殘基的至少50、65、75、80、90、95或100％。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與受體拮抗劑(例如，il-1ra)或激動(dòng)劑(例如，il-1β或il-1α)中的片段a1、a2或a1+a2具有至少70、75、80、85、88、90、92、95或100％同一性的殘基。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含：在本文鑒定的位點(diǎn)a殘基的至少5、10、12、15、16、17或18個(gè)處，或上文鑒定的擴(kuò)展位點(diǎn)a殘基的至少5、10、12、15、16、17或18個(gè)處與il-1激動(dòng)劑(例如，il-1β殘基)相同的殘基，或此類殘基的保守取代，或此類殘基的至少50、65、75、80、90、95或100％。位點(diǎn)b.在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含：在本文鑒定的位點(diǎn)b殘基的至少2、3、5、8、9、10、11、12、13、14或15個(gè)處與il-1激動(dòng)劑(例如，il-1β或il-1α殘基)相同的殘基，或此類殘基的保守取代，或此類殘基的至少50、65、75、80、90、95或100％。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與il-1細(xì)胞因子激動(dòng)劑(例如，il-1β或il-1α)中的片段b1、b2、b3、b1+b2、b1+b3、b2+b3或b1+b2+b3具有至少70、75、80、85、88、90、92、95或100％同一性的殘基。位點(diǎn)c.在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含：在本文鑒定的位點(diǎn)c殘基的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)處與受體拮抗劑(例如，il-1ra殘基)相同的殘基，或此類殘基的保守取代，或此類殘基的至少50、65、75、80、90或100％。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與受體拮抗劑(例如，il-1ra)中的片段c1具有至少50、65、75、80、90或100％同一性的殘基。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可包含(例如)以下一者或多者：在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的thr137的位置處的疏水氨基酸(例如，met或ile)；在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的gln141的位置處的疏水如脂族氨基酸(例如，val或ile)；和在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的asp145的位置處的非酸性氨基酸諸如堿性氨基酸(例如，lys或arg)，以及在其他il-1細(xì)胞因子中對(duì)應(yīng)位置處的此類殘基。有證據(jù)表明，asp145對(duì)于il-1racp的募集具有重要意義，并且應(yīng)此，非酸性殘基的突變破壞激動(dòng)劑活性并可用于賦予拮抗特性。因此，在某些實(shí)施方案中，非酸性氨基酸諸如堿性氨基酸(例如，lys或arg)或疏水氨基酸位于對(duì)應(yīng)于seqidno:1的asp145的位置處。位點(diǎn)d.在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含：在本文鑒定的位點(diǎn)d殘基的至少1、2、3、4、5或6個(gè)處與受體拮抗劑(例如，il-1ra殘基)相同的殘基，或此類殘基的保守取代，或此類殘基的至少50、65、75、80、90、95或100％。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含與受體拮抗劑(例如，il-1ra)中的片段d1、d2、d3、d4、d5、d1+d2、d1+d2+d3以及它們的組合具有至少50、65、75、80、90、95或100％同一性的殘基。il-1β中的多個(gè)殘基與il-1ri接觸或靠近，例如：ala1、pro2、val3、arg4、leu6、arg11、ser13、gln14、gln15、glu25、lys27、leu29、his30、leu31、gln32、gly33、gln34、asp35、met36、gln38、gln39、phe46、gln48、glu51、ser52、asn53、lys55、ile56、pro57、lys92、lys93、lys94、lys103、glu105、asn108、ala127、glu128、asn129、met130、gln141、gln149、phe150和ser152。除了如上所述在位點(diǎn)中的命名外，還可以將這些殘基歸為兩組：第1組和第2組。il-1β中的示例性第1組殘基包括：arg11、ser13、gln14、gln15、glu25、lys27、leu29、his30、leu31、gln32、gly33、gln34、asp35、met36、gln38、gln39、ala127、glu128、asn129、met130和gln141以及其他il-1細(xì)胞因子家族成員中的對(duì)應(yīng)殘基。擴(kuò)展第1組殘基包括：相互作用第1組殘基，以及1itb結(jié)構(gòu)中前述殘基4埃內(nèi)的殘基。il-1β中的示例性第2組殘基包括：ala1、pro2、val3、arg4、leu6、phe46、gln48、glu51、ser52、asn53、lys55、ile56、pro57、lys92、lys93、lys94、lys103、glu105、asn108、gln149、phe150和ser152以及其他il-1細(xì)胞因子家族成員中的對(duì)應(yīng)殘基。擴(kuò)展第2組殘基包括：相互作用第2組殘基，以及1itb結(jié)構(gòu)中前述殘基4埃內(nèi)的殘基。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在上文鑒定的第1組殘基的至少15、16、17、18、19、20或21個(gè)處包含il-1β殘基。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在上文鑒定的第2組殘基的至少15、16、17、18、19、20、21或22個(gè)處包含il-1β殘基。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在擴(kuò)展第1組殘基的至少15、16、17、18、19、20或21個(gè)處包含il-1β殘基。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在擴(kuò)展第2組殘基的至少15、16、17、18、19、20或21個(gè)處包含il-1β殘基?？捎米魇荏w結(jié)合劑的其他變體包括具有衍生自兩種或更多種il-1細(xì)胞因子家族成員的序列的蛋白質(zhì)。此類變體的實(shí)例包括基于il-1β和il-1ra的嵌合結(jié)構(gòu)域。例如，這些變體可包含來自il-1ra的第1組的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(例如，來自il-1ra的所有第1組殘基)以及來自il-1β的第2組的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(例如，來自il-1β的所有第2組殘基)。示例性嵌合蛋白在以下氨基酸位置大部分(例如，至少50、60、70、75、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、97、98、99或100％)與il-1β相同(即，基于與il-1β中的這些位置的對(duì)應(yīng)性)：seqidno:1的第1-8、42-120和141-153位殘基；seqidno:1的第1-6、45-61、86-95和148-153位殘基；以及seqidno:1的第1-10、37-125和131-153位殘基。其余的殘基可大部分(例如，至少50、60、70、75、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、97、98、99或100％)與il-1ra相同。例如，以下氨基酸位置可大部分與il-1ra相同：seqidno:1的第9-41和121-140位殘基；seqidno:1的第7-44、62-85和96-147位殘基；以及seqidno:1的第11-36和126-130位殘基。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域除了il-1β的氨基酸位置gln48–asn53外還在至少2、4、5、10或20個(gè)位置處與il-1β相同，并且(例如)該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域大部分(例如，至少50、60、70、75、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、97、98、99或100％)與非il-1β的細(xì)胞因子相同。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第1-8位的位置處包含與il-1β相同的至少3、4、5、6、7或8個(gè)殘基。例如，它在對(duì)應(yīng)于以下3、4或所有5者的位置處包含與il-1β相同的殘基：ala1、pro2、val3、arg4和leu6。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第45-61位的位置處包含與il-1β相同的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個(gè)殘基。例如，它在對(duì)應(yīng)于以下3、4、5、6、7或8者的位置處包含與il-1β相同的殘基：phe46、gln48、glu51、ser52、asn53、lys55、ile56和pro57。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第86-95位的位置處包含與il-1β相同的至少5、6、7、8、9或10個(gè)殘基。例如，它在對(duì)應(yīng)于以下1、2或所有3者的位置處包含與il-1β相同的殘基：lys92、lys93和lys94。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第148-153位的位置處包含與il-1β相同的至少3、4、5或6個(gè)殘基。例如，它在對(duì)應(yīng)于以下1、2或所有3者的位置處包含與il-1β相同的殘基：gln149、phe150和ser152。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于il-1β中thr147的位置處不含蘇氨酸。例如，該位置可以為芳族氨基酸，諸如酪氨酸。在對(duì)應(yīng)于il-1β中thr147的位置處的芳族氨基酸可以靠著在多個(gè)實(shí)施方案中在第11位處(根據(jù)il-1β編號(hào))存在的另一芳族氨基酸(例如，色氨酸)而堆積。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于il-1β中cys8的位置處不含芳族氨基酸。例如，該位置可以為非苯丙氨酸或非芳族氨基酸的氨基酸。例如，它可以為半胱氨酸、纈氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或丙氨酸。該位置位于其他大殘基尤其是met44和met148(根據(jù)il-1β編號(hào))附近。優(yōu)選地，第8、43和148位三個(gè)位置不全是大殘基。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第30-36位的位置處包含與il-1ra相同的至少5、6或7個(gè)殘基，例如，與ylqgpnv(seqidno:43)相同的至少5、6或7個(gè)殘基。例如，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第11-36位的位置處包含與il-1ra相同的至少10、12、14、16、18、19、20、21、22、23、24、25或26個(gè)殘基。該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域還可以在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第145位的位置處包含堿性殘基。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含：(a)在對(duì)應(yīng)于il-1β的val40的位置處的谷氨酸以及在對(duì)應(yīng)于il-1β的lys65的位置處的賴氨酸；(b)在對(duì)應(yīng)于il-1β的thr9的位置處的精氨酸以及在對(duì)應(yīng)于il-1β的gln149的位置處的谷氨酰胺；和/或(c)在對(duì)應(yīng)于il-1β的v41的位置處的賴氨酸以及在對(duì)應(yīng)于il-1β的ser152的位置處的絲氨酸。該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域還可以包含在對(duì)應(yīng)于第126-132位的位置處與il-1ra相同的至少4、5、6或7個(gè)殘基，例如，與meadqpvs(seqidno:44)相同的至少4、5、6或7個(gè)殘基。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域在對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第62-85位的位置處包含與il-1β相同的至少10、12、14、16、18、19、20、21、22、23或24個(gè)殘基。在一些實(shí)施方案中，該細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域包含以下氨基酸序列的一者或多者(例如，所有四者)：rslafr(seqidno:45)、idvsfv(seqidno:46)、kkmdkr(seqidno:47)和kfymqf(seqidno:48)；以下氨基酸序列的一者或多者(例如，所有四者)：rslafr(seqidno:45)、idvsfv(seqidno:46)、nklsfe(seqidno:49)和kfymqf(seqidno:48)；以下氨基酸序列的一者或多者(例如，所有四者)：rslafr(seqidno:45)、eekfsm(seqidno:50)、rfvfir(seqidno:51)和vtkftm(seqidno:52)；以下氨基酸序列的一者或多者(例如，所有四者)：rslafr(seqidno:45)，eekfsm(seqidno:50)，fesaac(seqidno:53)和vtkftm(seqidno:54)；或以下氨基酸序列的一者或多者(例如，所有四者)：lncriw(seqidno:55)，eekfsm(seqidno:50)，pnwflc(seqidno:56)和kfymqf(seqidno:48)。嵌合蛋白可用于多種目的。例如，它們可用于提高或降低受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性，以檢測(cè)表達(dá)受體的細(xì)胞，或純化它們與之結(jié)合的細(xì)胞或蛋白質(zhì)?；趇l-1β和il-ra的嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的具體實(shí)例在下文的實(shí)施例1中提供，并包括拮抗il-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的以下示例性細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域：p01.p01結(jié)構(gòu)域包含對(duì)應(yīng)于seqidno:3的氨基酸ala12-val48、ile60-val83和asp95-tyr147的來自il-1ra的三個(gè)片段，以及來自il-1β的其余四個(gè)片段?？傮w而言，p01結(jié)構(gòu)域具有來自il-1β的153個(gè)氨基酸中的74個(gè)(約48％的同一性)以及來自il-1ra的119個(gè)氨基酸(約77％的同一性)。這些百分比加起來大于100％，這是因?yàn)閜01以及本文所公開的其他示例性蛋白質(zhì)中的大量氨基酸為在il-1β與il-1ra之間保守的氨基酸，并且并因此有助于il-1β和il-1ra兩者的百分比同一性。p02.p02結(jié)構(gòu)域包含對(duì)應(yīng)于seqidno:3的氨基酸ala12-val48、ile60-val83和ser110-tyr147的來自il-1ra的三個(gè)片段，以及來自il-1β的其余四個(gè)片段?？傮w而言，p02結(jié)構(gòu)域具有來自il-1β的153個(gè)氨基酸中的85個(gè)(約55％的同一性)以及來自il-1ra的108個(gè)氨基酸(約70％的同一性)。p03.p03結(jié)構(gòu)域包含對(duì)應(yīng)于seqidno:3的氨基酸ala12-lys45和phe100-lys145的來自il-1ra的兩個(gè)片段，以及來自il-1β的其余三個(gè)片段?？傮w而言，p03結(jié)構(gòu)域具有來自il-1β的153個(gè)氨基酸中的94個(gè)(約61％的同一性)以及來自il-1ra的91個(gè)氨基酸(約64％的同一性)。p04.p04結(jié)構(gòu)域包含對(duì)應(yīng)于seqidno:3的氨基酸ala12-lys45和ala114-lys145的來自il-1ra的兩個(gè)片段，以及來自il-1β的其余三個(gè)片段?？傮w而言，p04結(jié)構(gòu)域具有來自il-1β的153個(gè)氨基酸中的104個(gè)(約68％的同一性)以及來自il-1ra的89個(gè)氨基酸(約58％的同一性)。p05.p05結(jié)構(gòu)域包含對(duì)應(yīng)于seqidno:3的氨基酸arg14-lys45和phe120-tyr147的來自il-1ra的兩個(gè)片段，以及來自il-1β的其余三個(gè)片段?？傮w而言，p05結(jié)構(gòu)域具有來自il-1β的153個(gè)氨基酸中的108個(gè)(約70％的同一性)以及來自il-1ra的85個(gè)氨基酸(約55％的同一性)?？梢灶愃频貥?gòu)建其他嵌合蛋白。例如，可以在il-1α與il-1ra之間構(gòu)建嵌合蛋白，例如，具體地講，對(duì)于上文的各實(shí)例，包含與來自il-1α而非il-1β的對(duì)應(yīng)殘基相結(jié)合的il-1ra指定片段的結(jié)構(gòu)域。蛋白質(zhì)修飾和取代蛋白質(zhì)序列(諸如本文所述的那些)可(例如)通過產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)保守取代而變化?？僧a(chǎn)生保守取代以保持功能或使功能發(fā)生適度的變化。示例性保守取代描述于下表：表3可基于它們對(duì)以下方面的潛在影響選擇取代：(a)鄰近該取代的主鏈結(jié)構(gòu)，例如折疊或螺旋構(gòu)象，(b)在靶位點(diǎn)的分子的電荷或疏水性，或(c)側(cè)鏈的體積和支化。氨基酸殘基可基于側(cè)鏈性質(zhì)而分類：(1)疏水：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性親水性：cys、ser、thr；asn；gln；(3)酸性：asp、glu；(4)堿性：his、lys、arg；(5)影響主鏈構(gòu)象的殘基：gly、pro；以及(6)芳族殘基：trp、tyr、phe。非保守取代可包括用這些分類中的一者的成員來取代不同分類中的成員。保守取代可包括用這些分類中的一者的成員來取代同一分類的另一成員。特定殘基的重要性也可在該氨基酸親水性指數(shù)的情況下加以評(píng)估。已為各氨基酸基于其疏水性和電荷特性而指定了親水性指數(shù)：異亮氨酸(+4.5)；纈氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；蘇氨酸(-0.7)；絲氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；組氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；賴氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。有關(guān)親水氨基酸指數(shù)及其重要性的討論，參見(例如)：kyte等,1982,j.mol.biol.157:105-131。蛋白質(zhì)序列可通過任何方法而改變，包括寡核苷酸介導(dǎo)的(定點(diǎn))誘變(carter等,nucl.acidsres.,13:4331,1986；zoller等,nucl.acidsres.,10:6487,1987)、盒誘變(wells等,gene,34:315,1985)、限制性選擇誘變(wells等,philos.trans.r.soc.london,317:415,1986)和pcr誘變。另見invitromutagenesisprotocols:第三版,braman(編著),humanapress,(2010)isbn:1607616513以及pcrcloningprotocols:frommolecularcloningtogeneticengineering,chen和janes(編著),humanapress,(2002)isbn:0896039730。掃描氨基酸分析可用于沿著連續(xù)序列評(píng)價(jià)一個(gè)或多個(gè)氨基酸。該方法可涉及使某一區(qū)域中的每個(gè)或幾乎每個(gè)氨基酸突變?yōu)樘囟ò被?，例如，突變?yōu)橄鄬?duì)小的中性氨基酸，諸如丙氨酸、絲氨酸或纈氨酸。通常選擇丙氨酸，這是因?yàn)樗绿贾獾膫?cè)鏈，并且不太可能改變變體的主鏈構(gòu)象(cunningham和wells,science,244:1081-1085,1989)。它還是最常見的氨基酸，并常常存在于包埋和暴露的位置(creighton,theproteins,(w.h.freeman&co.,n.y.)；chothia,j.mol.biol.,150:1,1976)。該掃描方法也可適合于產(chǎn)生更明顯的變化，例如，可使帶電荷的殘基變?yōu)閹喾措姾傻臍埢蓪⒕哂卸虃?cè)鏈的殘基用具有大側(cè)鏈的殘基替換。例如，精氨酸掃描是一種除了丙氨酸掃描之外或代替丙氨酸掃描而可使用的方法。掃描可應(yīng)用于某一區(qū)域內(nèi)的每個(gè)殘基或應(yīng)用于具有特定性質(zhì)的殘基，例如，在蛋白質(zhì)表面處或附近的殘基，或可能在蛋白質(zhì)表面處或附近的殘基?？蓪?duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、其結(jié)構(gòu)域中的一者或涉及該蛋白質(zhì)的復(fù)合體建模，例如通過進(jìn)行基于同源性的建模、能量最小化和/或其他利用已知的已解出結(jié)構(gòu)的建模。此類方法包括：accelryssoftwareinc.,discoveryrelease3.0,sandiego:accelryssoftwareinc.,2010；ambertm建模軟件(case等(2005)j.computat.chem.26,1668-1688和case等(2010),amber11,universityofcalifornia,sanfrancisco,causa)以及charmmtm建模軟件(molecularsimulationsinc.)。另外一般可參見baker和sali,science294(5540):93-6,2001)。結(jié)構(gòu)也可直接測(cè)定，例如，使用x射線晶體學(xué)和/或nmr光譜學(xué)。描述il-1家族細(xì)胞因子的結(jié)構(gòu)的示例性pdb結(jié)構(gòu)包括：1i1b、1ilr、1ira、1itb、2i1b、2ila、2kll、4i1b、5i1b、6i1b、7i1b、8i1b、9ilb和1md6(通過rcsb-rutgers,piscatawaynj,usa的網(wǎng)站www.pdb.org獲得，以及通過nationallibraryofmedicine(bethesda,md,usa)獲得)。例如，已經(jīng)解出了僅有il-1β時(shí)以及與受體il-1ri復(fù)合時(shí)的結(jié)構(gòu)。參見(例如)finzel等(1989)j.mol.biol.209:779-791,pdb1itb和vigers等(1997)nature386:190-194。il-1ra與il-1ri一起的結(jié)構(gòu)也已解出。參見(例如)pdb1ira和chreuder等，(1997)nature386:194-200。同源性建模可通過序列的比對(duì)來協(xié)助，例如使用計(jì)算機(jī)軟件，諸如basiclocalalignmentsearchtool(blast)、psi-blast、phi-blast、wu-blast-2和/或megablast。參見altschul等，1990,j.mol.biol.215,403-410；altschul等，1996,methodsinenzymology266,460-480；和karlin等，1993,pnasusa90,5873-5787。另外的用于大分子(氨基酸序列和核酸序列)比對(duì)的算法包括fasta(pearson,1995,proteinscience4,1145-1160),clustalw(higgin等，1996,methodsenzymol.266,383-402)、dbclustal(thompson等，2000,nucl.acidsres.28,2910-2926)和molecularoperatingenvironment(chemicalcomputinggroup,montreal,quebeccanadah3a2r7)。此外，可以使用并入到gcg序列比對(duì)軟件包的align程序(2.0版)中的myers和miller算法(myers&miller,cabios4,11-17,1988)。il-1β和il-1ra的共有序列可通過將這兩個(gè)序列進(jìn)行比較并鑒定相同的或高度保守的殘基而獲得。本文所述的嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可具有此類相同殘基或高度保守殘基的至少60、70、80、90、95或100％。示例性共有序列為：dxxqkx{8-9}l-axxlqgx{18-28}lgx{7}lscvxxxdxxxlqlexvx{8-9}kxxkrfxfx{10}fesaxxpxwxxxtxxxxxxpvxlx{5-6}gxxxtxfxxq(seqidno:57)，其中x獨(dú)立地為任何氨基酸而下標(biāo)數(shù)字或范圍為出現(xiàn)次數(shù)。本文所述的嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可具有與該共有序列至少60、70、80、90、95或100％的同一性(其中x殘基不計(jì)入同一性)。其他共有序列可同樣地確定?？芍苽鋓l-1細(xì)胞因子家族成員另外的變體，并使用基于展示的系統(tǒng)或其他基于文庫(kù)的篩選進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如，可使這些蛋白質(zhì)變體展示或表達(dá)，并評(píng)估與il-1細(xì)胞因子家族成員受體結(jié)合的能力。例如，可評(píng)價(jià)本文所述的il-1β、il-1ra或細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的變體與il-1ri的可溶性胞外域結(jié)合的能力?；谡故镜南到y(tǒng)的一般性描述包括以下：對(duì)于細(xì)胞展示，chao等natprotoc.2006；1(2):755-68；colby等methodsenzymol.2004；388:348-58；boder等，methodsenzymol.2000；328:430-44)；對(duì)于噬菌體展示(例如，viti等，methodsenzymol.2000；326:480-505和smith(1985)science228:1315-1317)以及對(duì)于核糖體展示(例如，mattheakis等(1994)proc.natl.acad.sci.usa91:9022和hanes等(2000)natbiotechnol.18:1287-92；hanes等(2000)methodsenzymol.328:404-30；以及schaffitzel等(1999)jimmunolmethods.231(1-2):119-3)。雖然本文的許多實(shí)施方案使用人il-1細(xì)胞因子序列作為親本結(jié)構(gòu)域而示例性示出，但可以使用其他序列。許多其他il-1細(xì)胞因子(例如，來自其他物種)是已知的且可獲得的，并可見于公共數(shù)據(jù)庫(kù)，諸如entrez(thenationallibraryofmedicine,bethesdamd)和ebi-embl(hinxton,cambridgeuk)。得自u(píng)niprot數(shù)據(jù)庫(kù)(可得自u(píng)niprot.org并參見theuniprotconsortium,nucleicacidsres.d142-d148(2010))的此類序列的實(shí)例包括以下：本文所述的細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域還可以包含能夠與il-1ri結(jié)合的變體細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域中所存在的取代。例如，seqidno:1的第15位(對(duì)應(yīng)于seqidno:3的第20位)可以為met或asn。seqidno:1的第30位(對(duì)應(yīng)于seqidno:3的第34位)可以為gly、his、trp或met。il-1β和il-1ra另外的示例性變體包括在以下文獻(xiàn)中所述的那些：boraschi等(1996)frontiersinbioscience:ajournalandvirtuallibrary1,d270-308,evans等，j.biol.chem.,270:11477(1995)和greenfeder等,j.biol.chem.,270:22460(1995)。例如，il-1β的變體包括r11g、r11a、q15h、e105g和t147g。參見例如evans等。il-1ra的變體包括w16y、q20m、q20n、y34g、y34h、y34w、y34m、y147g、y147h、y147m、k145d、h54p、v18s、t108k、c116f、c122s、c122a、y147g、h54p、h54i以及evans等和greenfeder等,j.biol.chem.,270:22460(1995)。細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可包含在前述位置之一處與il-1ra相同的殘基。細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域還可以包含在對(duì)應(yīng)位置與前述突變之一不同的殘基。此外，il-1家族細(xì)胞因子可以包含一個(gè)或多個(gè)未配對(duì)的半胱氨酸殘基。一個(gè)或多個(gè)(例如兩個(gè)、三個(gè)或所有)此類未配對(duì)的半胱氨酸殘基可突變?yōu)榱硪话被?，例如，不帶電的氨基酸，諸如丙氨酸或絲氨酸。例如，p01在seqidno:17的第67、70、116和122位包含半胱氨酸。一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或所有四個(gè)此類半胱氨酸可被另一氨基酸取代，例如不帶電的氨基酸，諸如丙氨酸或絲氨酸。p02在seqidno:18的第67、70、116和122位包含半胱氨酸。一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或所有四個(gè)此類半胱氨酸可被另一氨基酸取代，例如，不帶電的氨基酸，諸如丙氨酸或絲氨酸。p03在seqidno:19的第70、116和122位包含半胱氨酸。一個(gè)、兩個(gè)或所有三個(gè)此類半胱氨酸可被另一氨基酸取代，例如，不帶電的氨基酸，諸如丙氨酸或絲氨酸。p04在seqidno:20的第70、116和122位包含半胱氨酸。一個(gè)、兩個(gè)或所有三個(gè)此類半胱氨酸可被另一氨基酸取代，例如，不帶電的氨基酸，諸如丙氨酸或絲氨酸。p05在seqidno:21的第8、70和122位包含半胱氨酸。一個(gè)、兩個(gè)或所有三個(gè)此類半胱氨酸可被另一氨基酸取代，例如，不帶電的氨基酸，諸如丙氨酸或絲氨酸。il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域(包括本文所述的嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域)也可以循環(huán)排列。例如，來自該結(jié)構(gòu)域的c端片段可重新定位使得其為原始n端和n端片段(通常包含切除c端片段后原始蛋白質(zhì)的剩余部分)的n端。這兩個(gè)重新定位的片段可通過接頭(例如，具有約3至10個(gè)氨基酸)分開。一般來講，在排列前的該結(jié)構(gòu)域中的所有氨基酸除了順序變化外都保留了下來。在一些實(shí)施方案中，該排列的分割點(diǎn)可以在柔性區(qū)域中，例如，柔性環(huán)，諸如β6-β7(例如，對(duì)應(yīng)于seqidno:3的第71-80位的氨基酸)或β7-β8環(huán)(例如，對(duì)應(yīng)于seqidno:3的第84-99位的氨基酸)。在一些實(shí)施方案中，本文所述的受體結(jié)合劑(例如，包含il-1家族細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的受體結(jié)合劑)具有小于30、25、22、20、19、18或約17kda的分子量。在一些實(shí)施方案中，該受體結(jié)合劑具有大于18、19、20、22、25、30、40、45或50kda的分子量。例如，該受體結(jié)合劑可包含其他多肽、聚合或非聚合組分，例如，改變?cè)撍巹┧幬飫?dòng)力學(xué)、穩(wěn)定性、免疫原性和/或分子量的組分。該蛋白質(zhì)可以包含其他修飾，例如，轉(zhuǎn)錄后修飾或合成修飾。在某些實(shí)施方案中，該受體結(jié)合劑不糖基化。在其他實(shí)施方案中，該受體結(jié)合劑包含至少一個(gè)糖基化。例如，本文所述的受體結(jié)合劑可包含另外的結(jié)構(gòu)域和特征。例如，受體結(jié)合劑可直接或間接與抗體蛋白的結(jié)構(gòu)域融合，例如，與fc結(jié)構(gòu)域融合或與一個(gè)或多個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域(例如，ch1、ch2或ch3)融合。例如，這些結(jié)構(gòu)域可以為人結(jié)構(gòu)域或人結(jié)構(gòu)域的變體。所述fc結(jié)構(gòu)域或一個(gè)或多個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域可位于受體結(jié)合劑的n段或c端。fc結(jié)構(gòu)域可獲自任何合適的免疫球蛋白獲得，例如，獲自人抗體，諸如igg1、igg2、igg3或igg4亞型，iga、ige、igd或igm的抗體。在一個(gè)實(shí)例中，該fc結(jié)構(gòu)域包含從約cys226位或從約pro230位的氨基酸殘基到fc結(jié)構(gòu)域的羧基末端的序列。fc結(jié)構(gòu)域通常包含兩個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域，即ch2結(jié)構(gòu)域和ch3結(jié)構(gòu)域以及任選地包含ch4結(jié)構(gòu)域。具有其fc結(jié)構(gòu)域中的取代以及延長(zhǎng)的血清半衰期的抗體還在以下文獻(xiàn)中有所描述：wo00/42072、wo02/060919；shields等,j.biol.chem.276:6591-6604(2001)；hinton,j.biol.chem.279:6213-6216(2004)。igg重鏈中殘基的編號(hào)為eu索引的編號(hào)，如在kabat等，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版，publichealthservice,nh1,md(1991)中，參考其中人igg1eu抗體的編號(hào)。在一個(gè)實(shí)施方案中，受體結(jié)合劑包含延長(zhǎng)體內(nèi)血清半衰期的補(bǔ)救受體結(jié)合表位，如(例如)在美國(guó)專利5,739,277和ghetie等，ann.rev.immunol.18:739-766(2000)中所述。在一些實(shí)施方案中，該表位包含在與該受體結(jié)合劑融合的fc區(qū)域中。在一個(gè)實(shí)施方案中，受體結(jié)合劑包含與fcrn受體結(jié)合的血清白蛋白序列，或這種序列的一部分，或與血清白蛋白(例如，人血清白蛋白)結(jié)合的序列。例如，某些與血清白蛋白結(jié)合的表位可與受體結(jié)合劑相關(guān)，例如，序列diclprwgclw(seqidno:22)。另見dennis等j.biol.chem.277:35035-35043(2002)。受體結(jié)合劑可進(jìn)行修飾以包含增加該藥劑的大小和穩(wěn)定性的序列，例如，在wo2008/155134或wo2009/023270中所述的序列。此類序列通?？刹痪哂猩锘钚裕?，它不調(diào)節(jié)由il-1細(xì)胞因子家族成員介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)?？梢允褂枚喾N穩(wěn)定化多肽序列，例如，富含甘氨酸和/或絲氨酸以及其他氨基酸諸如谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸或脯氨酸的序列。例如，序列可設(shè)計(jì)為具有至少30、40、50、60、70、80、90或100％的甘氨酸和/或絲氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，連接到某蛋白質(zhì)的穩(wěn)定化多肽序列的組合長(zhǎng)度可為至少20、25、35、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、250、300、350、400、500、600、700、800、900個(gè)或多于1000或2000個(gè)氨基酸。穩(wěn)定化序列可以(例如)與生物活性多肽融合，例如與所述受體結(jié)合劑的n或c端融合。穩(wěn)定化序列的融合可導(dǎo)致融合蛋白的流體力學(xué)半徑相對(duì)于未修飾的蛋白質(zhì)而明顯增大，這可通過例如超速離心、尺寸排阻色譜或光散射而檢測(cè)。在一些實(shí)施方案中，穩(wěn)定化序列包含少量的以下氨基酸或不含以下氨基酸：半胱氨酸(以避免二硫鍵形成和氧化)、甲硫氨酸(以避免氧化)、天冬酰胺和谷氨酰胺(以避免脫酰胺)以及天冬氨酸。穩(wěn)定化序列可設(shè)計(jì)為包含傾向于降低蛋白水解降解敏感性的脯氨酸殘基。結(jié)合測(cè)定受體結(jié)合劑與其靶標(biāo)的相互作用可使用任何合適的方法進(jìn)行分析，包括(例如)放射免疫測(cè)定、細(xì)胞結(jié)合測(cè)定和表面等離子體共振(spr)。示例性的使用放射性碘標(biāo)記的蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)行的細(xì)胞結(jié)合測(cè)定在boraschi,j.immunol.,155(10):4719-25(1995)中有所描述。spr或生物分子相互作用分析(bia)可實(shí)時(shí)檢測(cè)生物特異性相互作用，而不用標(biāo)記任何相互作用物。bia芯片結(jié)合表面處的質(zhì)量變化(表示發(fā)生結(jié)合事件)導(dǎo)致靠近該表面的光的折射率改變(表面等離子體共振(spr)的光學(xué)現(xiàn)象)。折射性的變化生成可檢測(cè)的信號(hào)，對(duì)其進(jìn)行測(cè)量作為生物分子之間實(shí)時(shí)反應(yīng)的指示。使用spr的方法(例如)在raether,1988,surfaceplasmonsspringerverlag；sjolander和urbaniczky,1991,anal.chem.63:2338-2345；szabo等，1995,curr.opin.struct.biol.5:699-705以及biacoreinternationalab(uppsala,sweden)提供的在線資源中有所描述。系統(tǒng)或reichertsr7000dc雙通道spr可用于在動(dòng)力學(xué)、親和力或特異性方面對(duì)相互作用進(jìn)行實(shí)時(shí)比較和排序，而不用使用標(biāo)記物。受體結(jié)合劑對(duì)細(xì)胞因子受體胞外域(例如，il-1ri的胞外域)的結(jié)合親和力可在接近生理的條件下(例如，10mmhepesph7.4、150mmnacl、3mmedta、0.005％tween-20)使用spr進(jìn)行測(cè)量。也可使用不依靠spr的其他方法，例如用于測(cè)量結(jié)合力和親和力。由結(jié)合測(cè)定得到的信息可用于提供受體結(jié)合劑與靶標(biāo)結(jié)合的平衡解離常數(shù)(kd)和動(dòng)力學(xué)參數(shù)(例如，kon和koff)準(zhǔn)確且定量的測(cè)定。此類數(shù)據(jù)可用于比較不同的蛋白質(zhì)、靶標(biāo)和條件。該信息也可用于開發(fā)構(gòu)效關(guān)系(sar)。例如，可將變體蛋白的動(dòng)力學(xué)和平衡結(jié)合參數(shù)與參考或親本蛋白的相應(yīng)參數(shù)進(jìn)行比較。可鑒定與特定結(jié)合參數(shù)(例如，高親和力和慢koff)相關(guān)聯(lián)的給定位置的變體氨基酸。該信息可與結(jié)構(gòu)建模(例如，使用同源性建模、能量最小化或通過x射線晶體學(xué)或nmr進(jìn)行的結(jié)構(gòu)測(cè)定)相結(jié)合。用于評(píng)價(jià)親和力的蛋白質(zhì)可以重組形式產(chǎn)生，并可包含適用于純化或固定化的標(biāo)記，如flag標(biāo)記、myc標(biāo)記、血凝素標(biāo)記、his標(biāo)記或fc結(jié)構(gòu)域融合。受體蛋白(諸如il-1ri和il-1racp)的胞外域可通過例如使用sf9中的桿狀病毒表達(dá)，例如在細(xì)菌或昆蟲細(xì)胞中表達(dá)而以重組形式產(chǎn)生。可溶性受體蛋白可在biacore系統(tǒng)中被固定，例如，使用包含與所述蛋白標(biāo)記結(jié)合的試劑的芯片，例如用對(duì)fc結(jié)構(gòu)域或其他標(biāo)記特異的igg包被的芯片。細(xì)胞活性測(cè)定受體結(jié)合劑作為受體拮抗劑的能力可(例如)在基于細(xì)胞的測(cè)定中進(jìn)行評(píng)估。例如，可能評(píng)價(jià)受體結(jié)合劑對(duì)il-1ri的抑制。il-1活性的多種示例性的測(cè)定在boraschi等的文獻(xiàn)中有所描述，并包括t細(xì)胞增殖測(cè)定、il-6和il-8生成測(cè)定以及鈣內(nèi)流的抑制。在一種示例性的測(cè)定中，評(píng)價(jià)受體結(jié)合劑抑制il-1β刺激的il-6從人成纖維細(xì)胞釋放的能力。對(duì)mrc5細(xì)胞中il-1β刺激的細(xì)胞因子釋放的抑制與所述藥劑體內(nèi)抑制il-1介導(dǎo)活性的能力相關(guān)聯(lián)。該測(cè)定的詳細(xì)信息在dinarello等，currentprotocolsinimmunology,ch.6.2.1-6.2.7,johnwileyandsonsinc.,2000中有所描述。簡(jiǎn)而言之，使人mrc5成纖維細(xì)胞(atcc#ccl-171,manassasva,usa)在多孔板中生長(zhǎng)至匯合。將細(xì)胞用滴定劑量的受體結(jié)合劑和對(duì)照進(jìn)行處理。隨后將細(xì)胞與100pg/ml的il-1β在存在滴定劑和/或?qū)φ盏那闆r下接觸。陰性對(duì)照細(xì)胞不用il-1β刺激。在各組處理細(xì)胞中釋放的il-6的量用il-6elisa試劑盒(例如，bdpharmingen,franklinlakes,nj,usa)測(cè)量?？梢允褂玫膶?duì)照包括僅緩沖液、il-1ra，以及il-1β的抗體。還可在體內(nèi)評(píng)價(jià)受體結(jié)合劑的功效。示例性測(cè)定在economides等，naturemed.,9:47-52(2003)中有所描述。簡(jiǎn)而言之，將小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)注射滴定劑量的受體結(jié)合劑和對(duì)照。注射后24小時(shí)，將小鼠經(jīng)皮下注射劑量為1μg/kg的重組人il-1β。注射il-1β后2小時(shí)(il-6峰值反應(yīng)時(shí)間)，將小鼠處死，并采集和處理血液以獲得血清。通過elisa測(cè)定血清il-6水平。可基于在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中檢測(cè)到的il-6與對(duì)照中檢測(cè)到il-6的比率計(jì)算抑制百分比。體內(nèi)il-1活性的其他示例性測(cè)定在boraschi等的文獻(xiàn)中有所描述，并包括厭食、低血糖和中性白細(xì)胞增多測(cè)定。制備受體結(jié)合劑可通過在重組宿主細(xì)胞中表達(dá)而制備，但也可通過其他方法諸如體外轉(zhuǎn)錄和翻譯以及化學(xué)合成而制備。對(duì)于細(xì)胞表達(dá)，可將編碼受體結(jié)合劑的一種或多種核酸(例如，cdna或基因組dna)插入用于克隆或表達(dá)的可復(fù)制載體中。多種載體可通過公眾渠道獲得。載體可以(例如)為質(zhì)粒、粘粒、病毒基因組、噬粒、噬菌體基因組或其他自主復(fù)制序列。合適的編碼核酸序列可通過多種程序插入載體。例如，可對(duì)合適的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)進(jìn)行工程化(例如，使用pcr)。然后，可將限制性消化和連接用于將所述編碼核酸序列插到合適的位置。載體組分通常包含以下一者或多者：一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)、一個(gè)或多個(gè)標(biāo)記基因、一個(gè)增強(qiáng)子元件、一個(gè)啟動(dòng)子以及一個(gè)轉(zhuǎn)錄終止序列。該受體結(jié)合劑可以分離方式但也可通過與一種或多種其他組分諸如信號(hào)序列、表位或純化部分以及標(biāo)記融合而重組地制得。該受體結(jié)合劑可包含白介素-1家族成員的前結(jié)構(gòu)域，例如，其隨后可通過蛋白分解處理而移除。對(duì)于細(xì)菌表達(dá)，該受體結(jié)合劑可制成為具有或不具有信號(hào)序列。例如，其可在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生，以使得其聚集在包涵體中或可溶性部分中。它也可(例如)通過加入原核信號(hào)序列(例如，合適的前導(dǎo)序列，諸如來自堿性磷酸酶、青霉素酶、熱穩(wěn)定性腸毒素ii)而分泌。用于表達(dá)的示例性細(xì)菌宿主細(xì)胞包括任何可轉(zhuǎn)化的大腸桿菌k-12菌株(諸如大腸桿菌bl21、c600、atcc23724；大腸桿菌hb101nrrlb-11371、atcc-33694；大腸桿菌mm294atcc-33625；大腸桿菌w3110atcc-27325)以及枯草芽孢桿菌(b.subtilis)、假單胞菌(pseudomonas)和其他桿菌菌株。在細(xì)菌系統(tǒng)中產(chǎn)生的蛋白通常將缺乏糖基化。因此，在一些實(shí)施方案中，本文所述的受體結(jié)合劑基本上不含糖基化，例如不含哺乳動(dòng)物或其他真核細(xì)胞的糖基化修飾。該受體結(jié)合劑可在酵母宿主細(xì)胞中表達(dá)，例如，釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)、漢遜酵母(hanseula)或畢赤酵母(pichiapastoris)。對(duì)于酵母表達(dá)，該受體結(jié)合劑也可在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生或通過分泌產(chǎn)生，例如，使用酵母轉(zhuǎn)化酶前導(dǎo)序列或α因子前導(dǎo)序列(包括釀酒酵母屬(saccharomyces)和克魯維酵母屬(kluyveromyces)形式)、或酸性磷酸酶前導(dǎo)序列、或白色念珠菌(c.albicans)葡萄糖淀粉酶前導(dǎo)序列(1990年4月4日公布的ep362,179)。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)中，哺乳動(dòng)物信號(hào)序列可用于蛋白質(zhì)的直接分泌，諸如來自相同或相近物種的分泌多肽的信號(hào)序列以及病毒分泌性前導(dǎo)序列。作為另外一種選擇，該受體結(jié)合劑可制備為具有白介素-1家族成員的前結(jié)構(gòu)域，例如，il-1α或il-1β前結(jié)構(gòu)域。表達(dá)和克隆載體兩者都含有使該載體能夠在一種或多種所選的宿主細(xì)胞中復(fù)制的核酸序列。此類序列對(duì)于多種細(xì)菌、酵母和病毒是熟知的。來自質(zhì)粒pbr322的復(fù)制起點(diǎn)適用于大部分革蘭氏陰性細(xì)菌；2μ質(zhì)粒起點(diǎn)適用于酵母；以及多種病毒起點(diǎn)(sv40、多瘤病毒、腺病毒、vsv或bpv)可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的克隆載體。表達(dá)和克隆載體通常包含選擇基因或標(biāo)記。典型的選擇基因編碼具有以下性質(zhì)的蛋白質(zhì)：(a)賦予對(duì)抗生素或其他毒素的抗性，例如，氨芐青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四環(huán)素；(b)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)缺陷株(諸如釀酒酵母中的ura3標(biāo)記)；或(c)供應(yīng)從復(fù)合培養(yǎng)基中無法獲得的關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)素，例如，編碼桿菌d-丙氨酸消旋酶的基因。多種標(biāo)記也可供哺乳動(dòng)物細(xì)胞使用，例如，dhfr或胸苷激酶。dhfr可與缺乏dhfr活性的細(xì)胞系(諸如cho細(xì)胞系)結(jié)合使用，其制備和繁殖如urlaub等，proc.natl.acad.sci.usa,77:4216(1980)所述。表達(dá)和克隆載體通常包含啟動(dòng)子，其可操作地連接到編碼受體結(jié)合劑的核酸序列以指導(dǎo)mrna合成。示例性的適于與原核宿主一起使用的啟動(dòng)子包括β-內(nèi)酰胺酶和乳糖啟動(dòng)子系統(tǒng)(chang等，nature,275:615(1978)；goeddel等，nature,281:544(1979))、堿性磷酸酶、色氨酸(trp)啟動(dòng)子系統(tǒng)(goeddel,nucleicacidsres.,8:4057(1980)；ep36,776)和雜合啟動(dòng)子諸如tac啟動(dòng)子(deboer等，proc.natl.acad.sci.usa,80:21-25(1983))。用于細(xì)菌系統(tǒng)的啟動(dòng)子也可包含適當(dāng)定位的shine-dalgarno序列。t7聚合酶系統(tǒng)也可用來驅(qū)動(dòng)置于該t7啟動(dòng)子控制下的核酸編碼序列的表達(dá)。參見(例如)pet載體(emdchemicals,gibbstownnj,usa)和宿主細(xì)胞，例如，如可得自emdchemicals的novagenuserprotocoltb053以及us5,693,489中所述。例如，此類載體可與bl21(de3)細(xì)胞和bl21(de3)plyss細(xì)胞結(jié)合使用以產(chǎn)生蛋白，例如，每毫升細(xì)胞培養(yǎng)物至少0.05、0.1或0.3mg。可以使用的其他細(xì)胞系包括b834、blr、hms174、novablue的de3溶原菌，包括具有plyss質(zhì)粒的細(xì)胞。與酵母細(xì)胞一起使用的示例性啟動(dòng)子包括3-磷酸甘油酸激酶(hitzeman等，j.biol.chem.,255:2073(1980))或其他糖解酶(hess等，j.adv.enzymereg.,7:149(1968)；holland,biochemistry,17:4900(1978))，諸如烯醇酶、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、己糖激酶、丙酮酸脫羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖6-磷酸異構(gòu)酶和丙酮酸激酶。其他示例性酵母啟動(dòng)子為誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，并具有轉(zhuǎn)錄受生長(zhǎng)條件控制的額外優(yōu)勢(shì)。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的實(shí)例包括用于醇脫氫酶2、異細(xì)胞色素c、酸性磷酸酶、金屬硫蛋白以及負(fù)責(zé)麥芽糖和半乳糖利用的酶的啟動(dòng)子區(qū)域。在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中由載體表達(dá)編碼受體結(jié)合劑的mrna可加以控制，例如通過得自病毒基因組的啟動(dòng)子，諸如多瘤病毒、腺病毒(諸如2型腺病毒)、牛乳頭狀瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨細(xì)胞病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、乙型肝炎病毒和猿猴病毒40(sv40)，來自異源哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子，例如，肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子或免疫球蛋白啟動(dòng)子，以及來自熱休克啟動(dòng)子。也可使用異源啟動(dòng)子系統(tǒng)，例如，對(duì)四環(huán)素有反應(yīng)的啟動(dòng)子。參見urlinger,s.,等(2000)proc.natl.acad.sci.usa97(14):7963–7968。轉(zhuǎn)錄也可通過處于順式或反式的增強(qiáng)子序列來驅(qū)動(dòng)。示例性哺乳動(dòng)物增強(qiáng)子序列包括球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α-甲胎蛋白和胰島素的那些。另外的實(shí)例包括在復(fù)制起點(diǎn)近側(cè)的sv40增強(qiáng)子(bp100-270)、巨細(xì)胞病毒早期啟動(dòng)子增強(qiáng)子、在復(fù)制起點(diǎn)近側(cè)的多瘤增強(qiáng)子和腺病毒增強(qiáng)子。增強(qiáng)子可在受體結(jié)合劑的編碼序列的5'或3'位拼接到載體中，但優(yōu)選地位于啟動(dòng)子的5'位點(diǎn)。用于真核宿主細(xì)胞(酵母、真菌、昆蟲、植物、動(dòng)物、人或來自其他多細(xì)胞生物的有核細(xì)胞)的表達(dá)載體也可包含終止轉(zhuǎn)錄以及穩(wěn)定mrna所必需的序列。此類序列一般可得自真核或病毒dna或cdna的5'端并且偶爾為3'端未翻譯區(qū)。這些區(qū)域包含在編碼受體結(jié)合劑的mrna的未翻譯部分中轉(zhuǎn)錄為多聚腺苷酸化片段的核苷酸片段。表達(dá)載體還可以包含一個(gè)或多個(gè)內(nèi)含子序列。受體結(jié)合劑還可以例如使用pfast-bactm系統(tǒng)在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)，例如，sf9或sf21細(xì)胞。另外的示例性桿狀病毒表達(dá)載體可得自invitrogen,lifetechnologies,carlsbadca,usa。受體結(jié)合劑還可以在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)。例如，還可以采用哺乳動(dòng)物源細(xì)胞系。哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的實(shí)例包括猴腎細(xì)胞cos-7細(xì)胞系(atcccrl1651)(gluzman等，cell23:175,1981)、l細(xì)胞、c127細(xì)胞、3t3細(xì)胞(atccccl163)、中國(guó)倉(cāng)鼠卵(cho)細(xì)胞、hela細(xì)胞和bhk(atcccrl10)細(xì)胞系，以及衍生自非洲綠猴腎細(xì)胞系cv1的cv1/ebna細(xì)胞系(atccccl70)，如mcmahan等(emboj.10:2821,1991)所述。用于將dna引入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的確立方法已有描述(kaufman,r.j.,largescalemammaliancellculture,1990,第1569頁(yè))。適于在重組細(xì)胞中合成受體結(jié)合劑的其他方法、載體和宿主細(xì)胞在molecularcloning:alaboratorymanual,第三版，sambrook等(編著),coldspringharborpress,(2001)(isbn:0879695773)中有所描述。在細(xì)胞中表達(dá)后，可從培養(yǎng)基、內(nèi)涵體或細(xì)胞裂解物中回收受體結(jié)合劑。細(xì)胞可通過多種物理或化學(xué)手段破壞，諸如凍融循環(huán)、超聲處理、機(jī)械破碎或細(xì)胞裂解劑(如，洗滌劑)。受體結(jié)合劑可從可存在于細(xì)胞裂解物或細(xì)胞培養(yǎng)基中的其他細(xì)胞蛋白或多肽中純化?？梢圆捎糜糜诘鞍踪|(zhì)純化的多種方法，并且此類方法在本領(lǐng)域中是已知的，并例如在deutscher,methodsinenzymology,182(1990)；和scopes,proteinpurification:principlesandpractice,springer-verlag,newyork(2010)(isbn:1441928332)中有所描述。示例性純化程序包括：通過離子交換柱分級(jí)分離；乙醇沉淀；反相hplc；硅膠或陽離子交換樹脂諸如deae層析；層析聚焦；sds-page；硫酸銨沉淀；使用例如sephadexg-75進(jìn)行凝膠過濾；蛋白a-瓊脂糖柱除去諸如igg的污染物；以及親和柱(例如，金屬螯合柱以結(jié)合蛋白質(zhì)的表位標(biāo)記形式，以及具有各種配體的柱以結(jié)合與受體結(jié)合相關(guān)的任何純化部分)。純化方法可包括兩個(gè)不同的離子交換層析步驟的組合，例如陽離子交換層析然后是陰離子交換層析，反之亦然。受體結(jié)合劑可通過包括鹽和/或ph梯度或步驟的多種方法從離子交換樹脂中洗脫出來。在一些實(shí)施方案中，該受體結(jié)合劑包含純化部分(諸如表位標(biāo)記和親和柄)。此類部分可用于親和層析，并可任選地通過蛋白水解裂解而移除。離子交換層析也可作為離子交換分離技術(shù)而使用。離子交換層析基于分子總體電荷之間的差異而對(duì)分子進(jìn)行分離，并可用于將受體結(jié)合劑的完整形式與此類蛋白質(zhì)的其他形式相分離。陰離子或陽離子取代基可連接到基質(zhì)上，以便形成用于層析的陰離子或陽離子載體。陰離子交換取代基包括二乙氨乙基(deae)、季銨乙基(qae)和季銨(q)基團(tuán)。陽離子取代基包括羧甲基(cm)、磺乙基(se)、磺丙基(sp)、磷酸根(p)和磺酸根(s)。纖維素離子交換樹脂諸如de23、de32、de52、cm-23、cm-32和cm-52可得自whatmanltd.(maidstone,kent,u.k)。sephadextm和其他交聯(lián)離子交換樹脂也是已知的。例如，deae-、qae-、cm-和sp-sephadextm以及deae-、q-、cm-和s-sepharosetm及sepharosetmfastflow可得自pharmaciaab。deae和cm衍生化乙二醇-甲基丙烯酸酯共聚物諸如toyopearldeae-650s或m以及toyopearlcm-650s或m可得自tosohaasco.(philadelphia,pa,usa)。陽離子交換表面是具有共價(jià)結(jié)合的帶負(fù)電配體的離子交換表面，其因此具有自由陽離子以與接觸該表面的溶液中的陽離子交換。示例性的表面包括陽離子交換樹脂，諸如其中共價(jià)結(jié)合基團(tuán)為羧酸根或磺酸根的那些樹脂。市售陽離子交換樹脂包括cmc-纖維素、sp-sephadextm和fasts-sepharosetm(pharmacia)。陰離子交換表面是具有共價(jià)結(jié)合的帶正電基團(tuán)諸如季銨基團(tuán)的離子交換表面。示例性陰離子交換表面為陰離子交換樹脂，諸如deae纖維素、tmae、qaesephadextm和fastqsepharosetm(pharmacia)。受體結(jié)合劑的示例性純化方案包括在裂解緩沖液中裂解大腸桿菌細(xì)胞，然后進(jìn)行深層過濾。然后將材料進(jìn)行陽離子交換層析(cex)。cex洗脫液然后在陰離子交換層析(aex)步驟中流經(jīng)陰離子交換介質(zhì)。aexft可經(jīng)歷精制步驟。然后，可將材料通過超濾/滲濾處理，例如以濃縮材料或?qū)Σ牧厦擕}。超濾/滲濾膜可基于名義分子量分割("nmwco")加以選擇，以便在滲余物中保留蛋白質(zhì)，而允許低分子量材料諸如鹽進(jìn)入濾液。例如，取決于產(chǎn)品的所需最終ph和導(dǎo)電率，在最終緩沖液交換步驟中可以使用任何緩沖溶液或無菌水。受體結(jié)合劑可保存在多種溶液中，包括水、pbs和緩沖溶液。示例性緩沖溶液包括乙酸鈉ph4.5、乙酸鈉ph4.7、乙酸鈉ph4.9、乙酸鈉ph5.1、乙酸鈉ph5.3、乙酸鈉ph5.5、琥珀酸鹽ph5.2、琥珀酸鹽ph5.4、琥珀酸鹽ph5.6、琥珀酸鹽ph5.8、組氨酸ph5.7、組氨酸ph6.0、組氨酸ph6.3、組氨酸6.6、磷酸鈉ph6.5、磷酸鈉ph6.7、磷酸鈉7.0、磷酸鈉ph7.3、磷酸鈉ph7.7、咪唑ph6.5、咪唑ph6.8、咪唑ph7.2、trisph7.0、trisph7.5、trisph7.7。緩沖劑可例如以約1-100mm、5-50mm、10-50mm或5-25mm的濃度存在。溶液可進(jìn)一步包含諸如nacl的鹽(例如，50mm、150mm或250mm和它們之間的范圍)、精氨酸(例如，以約1％、2％、3％、4％、5％、7.5％和它們之間的范圍)、蔗糖(例如，以約1％、2％、3％、4％、5％、7.5％、8.5％、10％、15％和它們之間的范圍)和/或甘油(例如，以約0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、7.5％、8.5％、10％、15％和它們之間的范圍)。受體結(jié)合劑可以至少50mg、100mg、500mg、1g、5g、10g或更多的量存在于組合物中。分析方法宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)(hcp)是指制劑中不同于受體結(jié)合劑的蛋白質(zhì)，并且例如為用來制備受體結(jié)合劑的宿主細(xì)胞內(nèi)源蛋白質(zhì)，通常為大腸桿菌蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)以低于10000、1000、900、800或700ppm(份每一百萬份)的量存在。hcp可例如通過elisa或其他檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。例如，elisa可使用hcp的多克隆抗體。示例性試劑盒可得自cygnustechnologies(cn#f410；southportncusa)。另一種示例性試劑盒使用alphascreen技術(shù)(大腸桿菌hcp試劑盒，產(chǎn)品編號(hào)al261c/f，perkinelmer,walthammausa)。含有或可能含有受體結(jié)合劑的材料可例如使用高壓液相色譜進(jìn)行評(píng)價(jià)。示例性分析技術(shù)包括：弱陽離子交換-高效液相色譜(wcex-hplc)、尺寸排阻高效液相色譜(se-hplc)、反相液相色譜、esi-ms、電噴霧(turbospray)電離質(zhì)譜、納噴霧(nanospray)電離質(zhì)譜、熱噴霧電離質(zhì)譜、聲波噴霧電離質(zhì)譜、seldi-ms和maldi-ms。在多個(gè)實(shí)施方案中，受體結(jié)合劑的n端區(qū)域包含與來自il-1βn端區(qū)域的肽相同的序列，例如肽apvrs(seqidno:58)。表達(dá)此類蛋白質(zhì)的重組細(xì)胞(尤其是大腸桿菌細(xì)胞)可產(chǎn)生完整蛋白質(zhì)以及其他亞型，包括des-ala亞型以及含有另外的甲硫氨酸(例如，在ala1的n端)的亞型。在氨基酸第2位包含脯氨酸的受體結(jié)合劑(其中n端殘基在第1位)可容易地被大腸桿菌蛋白酶裂解，諸如具有x-pro裂解特異性的氨基肽酶p。該裂解可移除n端氨基酸。例如，p03、p04和p05在第2位具有脯氨酸。p03、p04和p05的完整形式為長(zhǎng)度為153個(gè)氨基酸并以丙氨酸開始，而des-ala形式為長(zhǎng)度為152個(gè)氨基酸并以脯氨酸開始。諸如上文那些分析技術(shù)可用于區(qū)分完整形式與其他形式，例如，des-ala形式。示例性分析技術(shù)為wcex-hplc。例如，p05可使用dionexwcx-104x250mm柱(產(chǎn)品編號(hào)054993)進(jìn)行評(píng)價(jià)，如下文的實(shí)施例9中所述。wcx-hplc峰可通過c4反相(rp)-hplc在線聯(lián)用質(zhì)譜進(jìn)行評(píng)價(jià)。完整的p05具有17700.4da的理論質(zhì)量，并可檢測(cè)為17700.4da。des-ala形式可檢測(cè)為17629.4da，其比完整p05的質(zhì)量小71da。71da的質(zhì)量降低對(duì)應(yīng)于單個(gè)丙氨酸殘基的移除。藥物組合物受體結(jié)合劑可配制為藥物組合物。通常，該組合物為無菌的，并包含緩沖劑、藥學(xué)上可接受的鹽以及賦形劑或穩(wěn)定劑中的一者或多者。例如，該組合物可以為含水組合物。本文所述的受體結(jié)合劑可根據(jù)生物制劑的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行配制。參見例如gennaro(編著),remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第20版，lippincott,williams&wilkins(2000)(isbn:0683306472)；ansel等，pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems,第7版，lippincottwilliams&wilkinspublishers(1999)(isbn:0683305727)；kibbe(編著),handbookofpharmaceuticalexcipients,第3版.(2000)(isbn:091733096x)；proteinformulationanddelivery,mcnally和hastedt(編著),informahealthcare(isbn:0849379490)(2007)。用于藥物組合物的受體結(jié)合劑的純度通常為至少10、20、50、70、80、90、95、98、99或99.99％，并且通常不含人蛋白質(zhì)。它可以為組合物中的唯一蛋白質(zhì)，或組合物中的唯一活性蛋白質(zhì)。它也可以與一種或多種其他活性蛋白質(zhì)組合，例如一種或多種其他純化的活性蛋白質(zhì)，例如，相關(guān)或不相關(guān)的蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，該組合物可包含濃度介于約0.001–10％之間例如0.001–0.1％、0.01–1％或0.1％-10％的受體結(jié)合劑。因此，本文的特征還在于本文所述的藥劑的純化和分離形式。術(shù)語“分離的”是指從其原始環(huán)境(例如，從中產(chǎn)生受體結(jié)合劑的細(xì)胞或材料)中移除的材料。藥物組合物可基本上不含熱原物質(zhì)，基本上不含核酸，和/或基本上不含細(xì)胞酶和組分，諸如聚合酶、核糖體蛋白和伴侶蛋白。藥物組合物可包含藥學(xué)上可接受的載體。如本文所用，“藥學(xué)上可接受的載體”包括生理上相容的任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣料、抗菌劑及抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等?！八帉W(xué)上可接受的鹽”是指保持母體化合物的所需生物活性且不產(chǎn)生任何不利毒性作用的鹽(參見例如berge,s.m.,等(1977)j.pharm.sci.66:1-19)，例如，酸加成鹽和堿加成鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，將受體結(jié)合劑與一種或多種賦形劑一起配制，諸如氯化鈉、磷酸鹽緩沖劑(例如，磷酸氫二鈉七水合物、磷酸二氫鈉)和聚山梨醇酯。它可以例如約5-100、5-30、30-50或50-100mg/ml的濃度存在于例如緩沖溶液中，并可在2-8℃下保存。藥物組合物也可以具有多種其他形式。這些形式包括(例如)液體、半固體和固體劑型，諸如液體溶液(例如，注射用和輸注用溶液)、分散體或混懸劑以及脂質(zhì)體。優(yōu)選的形式可取決于預(yù)期的施用方式和治療應(yīng)用。本文所述的藥劑的組合物通常為注射用或輸注用溶液形式，或用于局部或眼部遞送(參見下文)。藥物組合物通常為無菌的并在生產(chǎn)和儲(chǔ)藏條件下穩(wěn)定。藥物組合物還可接受測(cè)試以確保符合施用的管理和工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。組合物可配制為溶液、微乳液、分散體、脂質(zhì)體或其他適于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。無菌注射用溶液可通過以下方法制備：將本文所述的藥劑以所需的量與上文所列成分中的一種或組合根據(jù)需要摻入合適的溶劑中，然后進(jìn)行過濾殺菌。一般來講，分散體通過以下方法制備：將本文所述的藥劑摻入無菌媒介物中，該媒介物包含基本分散介質(zhì)和上文列舉的那些中的所需其他成分。就用于制備無菌注射用溶液的無菌粉末而言，優(yōu)選的制備方法為真空干燥和冷凍干燥，其由之前通過無菌過濾的溶液產(chǎn)生本文所述的藥劑與任何另外所需成分的粉末。合適的溶液流動(dòng)性可例如通過使用包衣諸如卵磷脂、通過維持所需的粒度(就分散體而言)以及通過使用表面活性劑而維持。注射用組合物的延長(zhǎng)吸收可通過包含延遲吸收的藥劑例如單硬脂酸鹽和明膠而設(shè)計(jì)。例如，受體結(jié)合劑可以與聚合物相結(jié)合，例如，基本上無抗原性的聚合物，諸如聚氧化烯或聚氧化乙烯。在一些實(shí)施方案中，該聚合物例如直接地或間接地共價(jià)連接到受體結(jié)合劑。合適的聚合物將在重量上有很大的變化?？梢允褂镁哂屑s200至約35,000道爾頓(或約1,000至約15,000以及2,000至約12,500)范圍內(nèi)的數(shù)均分子量的聚合物。例如，受體結(jié)合劑可連接到水溶性聚合物，例如，親水性聚乙烯基聚合物，如聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮。此類聚合物的非限制性列表包括：聚氧化烯均聚物諸如聚乙二醇(peg)或聚丙二醇類，聚氧乙烯多元醇類，它們的共聚物以及它們的嵌段共聚物，前提是保持嵌段共聚物的水溶性。另外有用的聚合物包括：聚氧化烯類諸如聚氧乙烯、聚氧丙烯以及聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物(pluronics)；聚甲基丙烯酸酯類；卡波姆(carbomer)；含有糖類單體d-甘露糖、d-與l-半乳糖、巖藻糖、果糖、d-木糖、l-阿拉伯糖、d-葡糖醛酸、唾液酸、d-半乳糖醛酸、d-甘露糖醛酸(例如聚甘露糖醛酸或藻酸)、d-葡糖胺、d-半乳糖胺、d-葡萄糖和神經(jīng)氨酸的支鏈或非支鏈多糖，包括同多糖和雜多糖，諸如乳糖、支鏈淀粉、淀粉、羥乙基淀粉、直鏈淀粉、硫酸葡聚糖、葡聚糖、糊精、糖原或酸性粘多糖的多糖亞基，如透明質(zhì)酸；糖醇的聚合物，諸如聚山梨糖醇和聚甘露糖醇；肝素或類肝素。在某些實(shí)施方案中，受體結(jié)合劑可與將防止該化合物快速釋放的載體一起制備。它可以作為控釋制劑遞送，通過植入物或微囊化遞送系統(tǒng)遞送?？梢允褂每缮锝到獾纳锵嗳菪跃酆衔?，諸如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。一般可參見例如sustainedandcontrolledreleasedrugdeliverysystems,j.r.robinson,編著,marceldekker,inc.,newyork,1978。施用受體結(jié)合劑可通過多種方法施用給受試者，例如，人類受試者，所述多種方法諸如靜脈推注，或經(jīng)過一段時(shí)間連續(xù)輸注，通過肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、滑膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜外注射、胸骨內(nèi)注射和輸注。還有其他施用方式包括局部(例如，表皮或粘膜)或吸入(例如，鼻內(nèi)或肺內(nèi))途徑。對(duì)于許多應(yīng)用，施用途徑為以下之一：靜脈內(nèi)注射或輸注、皮下注射或肌內(nèi)注射。受體結(jié)合劑可按固定劑量或以mg/kg的劑量施用。它可以通過靜脈內(nèi)(iv)或皮下(sc)施用。受體結(jié)合劑可例如每天、每隔一天、每隔兩天、每隔三天或四天、每周、每三至五周，例如，每隔三周或每月施用。藥物組合物可包含“治療有效量”的本文所述的藥劑。藥劑的治療有效量可根據(jù)以下因素而變化，諸如個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重，以及化合物在個(gè)體內(nèi)引起所需反應(yīng)的能力，例如改善至少一種疾病參數(shù)或改善至少一種疾病癥狀(以及任選地，所施用的任何其他藥劑的影響)。治療有效量也可以是其中組合物的任何毒性或有害作用被治療有益效果超過的量。受體結(jié)合劑通常以治療有效量施用。藥物組合物可使用醫(yī)療裝置施用，例如，植入物、輸注泵、皮下注射針和無針皮下注射裝置。該裝置可以包括(例如)一個(gè)或多個(gè)用于儲(chǔ)存藥物組合物的殼體，并可被構(gòu)造為遞送單位劑量的受體結(jié)合劑以及任選地第二種藥劑。劑量可以為固定劑量，即，適合作為單劑量用于待治療的受試者的物理不連續(xù)單位；每個(gè)單位可包含預(yù)定量的受體結(jié)合劑，該量計(jì)算為與藥物載體相結(jié)合以及任選地與另一種藥劑相結(jié)合產(chǎn)生所需的治療效果。在一些實(shí)施方案中，為了治療本文所述的疾病，可將受體結(jié)合劑以一定的量施用給患有該疾病的受試者，并持續(xù)一段足以引起反映疾病嚴(yán)重性的至少一個(gè)指標(biāo)的持續(xù)改善的時(shí)間。如果該受試者在相隔一至四周的至少兩次中呈現(xiàn)改善，則將此改善視為“持續(xù)的”。改善程度可根據(jù)體征或癥狀確定，并且也可采用提供給受害者的問卷諸如生活質(zhì)量文件?？蓪?duì)反映疾病程度的多種指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估，以確定治療的量及時(shí)間是否足夠。所選的一個(gè)或多個(gè)指標(biāo)的基線值通過在施用受體結(jié)合劑的第一劑量前對(duì)受試者進(jìn)行檢查而確立。優(yōu)選地，基線檢查在施用第一劑量的約60天內(nèi)完成。改善可通過以下方式引起：重復(fù)施用一定劑量的受體結(jié)合劑，直到受試者顯現(xiàn)出相對(duì)于所選一個(gè)或多個(gè)指標(biāo)的基線的改善。在治療慢性病癥時(shí)，改善程度可通過在至少一個(gè)月或多個(gè)月的時(shí)間內(nèi)(例如，一個(gè)月、兩個(gè)月或三個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間或無限長(zhǎng)時(shí)間內(nèi))重復(fù)施用而獲得。在治療急性病癥時(shí)，藥劑可施用一至六周的時(shí)間或甚至單劑量即可。雖然在治療后疾病的程度可能根據(jù)一個(gè)或多個(gè)指標(biāo)出現(xiàn)改善，但是治療可能需要以相同的水平或以降低的劑量或頻率無限期繼續(xù)。治療也可以例如在癥狀改善或消失后停止。一旦減少或停止治療，如果癥狀再次出現(xiàn)可以恢復(fù)治療。治療受體結(jié)合劑諸如與il-1ri結(jié)合并拮抗il-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的受體結(jié)合劑可用于治療“il-1介導(dǎo)的疾病”，其包括具有以下特點(diǎn)的任何疾病或醫(yī)療狀況：(i)至少部分地由il-1激動(dòng)引起；(ii)與升高的il-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分(諸如il-1α、il-1β或il-1ri)水平或活性或加強(qiáng)的il-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)；和/或(iii)通過降低il-1活性而得以改善。il-1介導(dǎo)的疾病包括急性和慢性疾病，包括自身免疫疾病和炎性疾病。il-1介導(dǎo)的疾病包括全身性和非全身性疾病。已公認(rèn)的是，il-1α和il-1β是感染性反應(yīng)以及炎性疾病(包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)中涉及到的強(qiáng)效促炎性細(xì)胞因子。在患有多種自身免疫疾病、缺血和多種癌癥的患者中已觀察到了il-1的產(chǎn)生增多，從而表明il-1存在于這些疾病及相關(guān)疾病中。一般還可參見sims和smith,theil-1family:regulatorsofimmunity,naturereviewsimmunology,doi:10.1038/nri2691(2010)。術(shù)語“治療”是指以有效改善與疾病(例如，本文所述的疾病)相關(guān)的病癥、癥狀或參數(shù)或防止疾病進(jìn)展以達(dá)到統(tǒng)計(jì)顯著性程度或本領(lǐng)域技術(shù)人員可以發(fā)現(xiàn)的程度的量、方式和/或模式向受試者(例如，患者)施用本文所述的藥劑。治療可旨在治愈、愈合、減輕、緩和、改變、糾正、改良、減緩、改善或影響疾病、疾病癥狀或患病傾向。有效量、方式或模式可根據(jù)受試者而變化并可根據(jù)受試者定制。示例性受試者包括人、靈長(zhǎng)類和其他非人哺乳動(dòng)物。受體結(jié)合劑可預(yù)防性地給予，以減少疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)或其癥狀。il-1介導(dǎo)的疾病可以為自身免疫疾病。il-1介導(dǎo)的自身免疫疾病的實(shí)例包括：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、白塞氏綜合征(behcet’ssyndrome)、炎性腸病(包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎)、哮喘、牛皮癬、i型糖尿病以及本文確定的其他疾病。本文所述的受體結(jié)合劑可施用給患有此類il-1介導(dǎo)的自身免疫疾病或處于其風(fēng)險(xiǎn)中的受試者。il-1介導(dǎo)的疾病可以為諸如下文所述的炎性疾病。本文所述的受體結(jié)合劑可施用給患有此類il-1介導(dǎo)的炎性疾病或處于其風(fēng)險(xiǎn)中的受試者。示例性il-1介導(dǎo)的疾病包括：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和相關(guān)關(guān)節(jié)炎。受體結(jié)合劑可用于治療患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或處于其風(fēng)險(xiǎn)中的受試者。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(ra)是影響關(guān)節(jié)滑膜并破壞關(guān)節(jié)軟骨的慢性全身性自身免疫炎性疾病。ra的發(fā)病為t淋巴細(xì)胞依賴性的并可包括產(chǎn)生稱為類風(fēng)濕因子的自身抗體。類風(fēng)濕因子和抗原的復(fù)合體可在關(guān)節(jié)液和血液中形成和聚集，從而引起淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)到滑膜中。關(guān)節(jié)通常以對(duì)稱形式受累，但關(guān)節(jié)外的疾病也可發(fā)生，例如，導(dǎo)致肺纖維化、血管炎和皮膚潰瘍，或表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞減少、血小板減少和脾腫大的費(fèi)爾蒂綜合征(felty’ssyndrome)?；颊咭部稍谑芾坳P(guān)節(jié)、心包炎、胸膜炎、冠狀動(dòng)脈炎和伴有肺纖維化的間質(zhì)性肺炎的區(qū)域中呈現(xiàn)出類風(fēng)濕結(jié)節(jié)。一種形式的il-1ra的指示中度至重度活動(dòng)性ra。參見例如cohen,s.等arthritis&rheumatism46,614-24(2002)；fleischmann,r.m.等arthritis&rheumatism48,927-34(2003)；nuki,g.,等arthritis&rheumatism46,2838-46(2002)；schiff,m.h.等arthritis&rheumatism50,1752-60(2004)。活動(dòng)性ra的癥狀包括疲乏、食欲不振、低燒、肌肉和關(guān)節(jié)痛以及僵直。肌肉和關(guān)節(jié)僵直通常在早晨和不活動(dòng)期后最明顯。在發(fā)作期間，關(guān)節(jié)常會(huì)變得發(fā)紅、腫脹、疼痛和觸痛，一般而言是因滑膜炎所致。可用于評(píng)估ra和ra癥狀的量表包括：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重性量表(rass；bardwell等,(2002)rheumatology41(1):38-45)；sf-36關(guān)節(jié)炎專用健康指數(shù)(ashi；ware等，(1999)med.care.37(增刊5):ms40-50)；關(guān)節(jié)炎影響量表或關(guān)節(jié)炎影響量表2(aims或aims2；meenan等(1992)arthritisrheum.35(1):1-10)；斯坦福健康評(píng)估問卷(haq)、haqii或改良haq(參見例如，pincus等(1983)arthritisrheum.26(11):1346-53)。本文所述的受體結(jié)合劑可施用給患有ra或處于其風(fēng)險(xiǎn)之中的受試者，以延遲發(fā)作和/或改善前述體征和癥狀中的一種或多種。受試者可患有中度至重度活動(dòng)性ra。受試者可以為對(duì)tnf抑制劑治療(如，通過(依那西普)、(阿達(dá)木單抗)或(英夫利西單抗)治療)無反應(yīng)者；受試者可以之前已施用過tnf抑制劑；或者受試者也可繼續(xù)接受tnf抑制劑(以及起反應(yīng)或不起反應(yīng))。也可向受試者施用甲氨蝶呤?？上蚴茉囌呤┯靡环N或多種其他dmards(改變病情抗風(fēng)濕藥)、皮質(zhì)類固醇和/或非甾體抗炎藥。可與受體結(jié)合劑共同施用的其他藥物包括cd28抑制劑(例如，ctla4-ig)、rankl抑制劑、ifnγ、il-6、il-8和il-17。抑制劑包括此類介質(zhì)的抗體、此類介質(zhì)的特異性可溶受體和/或此類介質(zhì)的受體的抗體。幼年型慢性關(guān)節(jié)炎.受體結(jié)合劑可用于治療幼年型慢性關(guān)節(jié)炎，例如，在年齡低于21、18、17、16、15或14歲的受試者中。幼年型慢性關(guān)節(jié)炎在多個(gè)方面與ra相似。受試者可以為類風(fēng)濕因子陽性者。受試者可以具有疾病的少關(guān)節(jié)、多關(guān)節(jié)或全身性形式。關(guān)節(jié)炎可造成關(guān)節(jié)強(qiáng)直和生長(zhǎng)停滯，并且還可導(dǎo)致慢性前葡萄膜炎和系統(tǒng)性淀粉樣變性。受體結(jié)合劑可用于延遲一種或多種此類癥狀的發(fā)作或改善一種或多種此類癥狀。受體結(jié)合劑可用于治療幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎，包括全身發(fā)作性幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(so-jia)。受試者可能已對(duì)先前的皮質(zhì)類固醇治療失敗或需要以每天等于或超過0.3mg/kg的劑量的皮質(zhì)類固醇治療。參見例如quartier等(2011)annrheumdis.70(5):747-54。其他風(fēng)濕性疾病.本文所述的受體結(jié)合劑也可用于治療其他風(fēng)濕性疾病，包括硬皮病、全身性紅斑狼瘡、痛風(fēng)、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性多肌痛、牛皮癬關(guān)節(jié)炎和慢性萊姆關(guān)節(jié)炎、隨意肌和其他肌肉炎癥(包括皮肌炎、包涵體肌炎、多肌炎)、淋巴管肌瘤病、化膿性關(guān)節(jié)炎綜合征、小兒肉芽腫性關(guān)節(jié)炎(pga)/blau綜合征以及本文討論的其他風(fēng)濕性疾病。受體結(jié)合劑可用于治療代謝性風(fēng)濕疾病，例如，與高尿酸血癥相關(guān)的疾病，例如，包括慢、急性痛風(fēng)的痛風(fēng)，以及其他結(jié)晶介導(dǎo)的關(guān)節(jié)病。該藥劑可用于治療藥物引起的痛風(fēng)相關(guān)發(fā)作，包括(例如)由黃嘌呤氧化酶抑制劑、尿酸氧化酶或排尿酸劑引起的發(fā)作。在痛風(fēng)中，尿酸晶體可激活炎性體并觸發(fā)il-1β的釋放。脊柱關(guān)節(jié)病.受體結(jié)合劑可用于治療脊柱關(guān)節(jié)病，這包括諸如強(qiáng)直性脊柱炎、賴特綜合征(reiter’ssyndrome)、炎性腸病相關(guān)關(guān)節(jié)炎、牛皮癬相關(guān)脊柱炎、幼年型脊柱關(guān)節(jié)病和未分化脊柱關(guān)節(jié)病的疾病。脊柱關(guān)節(jié)病通常與hla-b27基因相關(guān)。受試者可能缺乏類風(fēng)濕因子，并可表現(xiàn)出伴有或沒有脊柱炎和炎性非對(duì)稱性關(guān)節(jié)炎的骶髂關(guān)節(jié)炎。受試者也可能患有眼部炎癥(參見下文)。硬皮病.受體結(jié)合劑可用于治療硬皮病或系統(tǒng)性硬化。硬皮病的特征在于可為局部的或全身性的皮膚硬化。還可存在微脈管系統(tǒng)中的血管病變和內(nèi)皮細(xì)胞損傷。受試者可表現(xiàn)出皮膚病變處的單核細(xì)胞浸潤(rùn)，并具有抗核抗體。表現(xiàn)出發(fā)病的其他器官可包括：可具有平滑肌萎縮和纖維化從而導(dǎo)致異常蠕動(dòng)/活動(dòng)的胃腸道；可具有同心內(nèi)皮下內(nèi)膜增生從而影響小弓形和小葉間動(dòng)脈致使腎皮質(zhì)血流降低并且可導(dǎo)致蛋白尿、氮血癥和高血壓的腎臟；可涉及萎縮、間質(zhì)性纖維化、炎癥、肺、間質(zhì)性肺炎和間質(zhì)性纖維化的骨骼?。灰约翱杀憩F(xiàn)出(例如)收縮帶壞死和結(jié)疤/纖維化的心臟。本文所述的受體結(jié)合劑可施用給患有硬皮病或處于其風(fēng)險(xiǎn)之中的受試者，以改善前述體征和癥狀中的一種或多種。舍格倫綜合征.受體結(jié)合劑可用于治療舍格倫綜合征。舍格倫綜合征的特征在于免疫介導(dǎo)的炎癥以及隨后淚腺和唾腺的功能性破壞。該疾病可與炎性結(jié)締組織疾病相關(guān)或伴隨炎性結(jié)締組織疾病。該疾病與針對(duì)ro和la抗原產(chǎn)生自身抗體有關(guān)，這兩種抗原都是小rna-蛋白復(fù)合體。病變可導(dǎo)致干燥性角結(jié)膜炎、口腔干燥，伴隨其他包括膽汁性肝硬變、周圍或感覺神經(jīng)病變和可觸性紫癜的表現(xiàn)或關(guān)聯(lián)。與舍格倫綜合征相關(guān)的眼部疾病的治療也在下文進(jìn)行了討論。甲狀腺疾病.受體結(jié)合劑可用于治療甲狀腺疾病。示例性甲狀腺疾病包括格雷夫斯病、橋本氏甲狀腺炎、幼年型淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎和萎縮性甲狀腺炎，并為針對(duì)甲狀腺抗原的自體免疫反應(yīng)的結(jié)果，其產(chǎn)生與存在于甲狀腺中并通常為甲狀腺特異性的蛋白發(fā)生反應(yīng)的抗體。可用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ桶ㄗ园l(fā)性模型：大鼠(buf和bb大鼠)和雞(obese雞品系)，以及通過甲狀腺球蛋白或甲狀腺微粒體抗原(甲狀腺過氧化物酶)對(duì)動(dòng)物免疫而建立的可誘導(dǎo)模型。糖尿病和代謝疾病.受體結(jié)合劑可用于治療糖尿病，諸如幼年型糖尿病(包括自身免疫糖尿病和胰島素依賴型糖尿病)和成年型糖尿病(包括非胰島素依賴型糖尿病和肥胖相關(guān)性糖尿病)、i型糖尿病和ii型糖尿病。例如，i型糖尿病或胰島素依賴型糖尿病與由自身抗體和自身反應(yīng)性t細(xì)胞所導(dǎo)致的胰島細(xì)胞自身免疫性破壞有關(guān)。此外，降低il-1β活性可改善血糖控制和β細(xì)胞功能，并可用于治療ii型糖尿病。參見例如owyang等endocrinology.2010；151(6):2515-27。例如，在一些實(shí)施方案中，本文所述的受體結(jié)合劑可施用給未在施用胰島素的受試者，例如非胰島素依賴型受試者。例如，該受試者可處于糖尿病前期。受試者可以為葡萄糖耐受性受損或空腹血糖耐受性受損。受試者可以為肥胖受試者或具有高于23、25、30、35或40kg/m2的身體質(zhì)量指數(shù)。受試者可以為胰島素抗性的，和/或特征在于高血糖或高胰島素血癥。受試者可以處于發(fā)展到ii型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)中。另見larsen,等(2007)nejm356:1517-26和larsen,等(2009).diabetescare32:1663-8。在一些實(shí)施方案中，受試者的空腹血糖高于6.1、6.5、7或8mmol/l。在一些實(shí)施方案中，受試者的a1c水平高于5.5、5.7、6、6.4、7、7.5或8％。在一些實(shí)施方案中，受試者還在施用胰島素促分泌素，例如，刺激胰島素分泌的磺酰脲(例如，氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋磺己脲、甲苯磺丁脲、格列本脲、格列美脲、格列吡嗪)和/或氯茴苯酸類(例如，瑞格列奈、那格列奈)。受試者還可施用雙胍(例如，二甲雙胍)?？墒┯盟鍪荏w結(jié)合劑以減少胰腺β細(xì)胞的損失和/或?qū)σ认佴录?xì)胞的損傷。在一些實(shí)施方案中，該受試者對(duì)于位于基因il1rn5’附近的rs4251961的c等位基因而言是雜合的或純合的。用受體結(jié)合劑治療包括改善與糖尿病相關(guān)的繼發(fā)性病癥或防止其惡化，諸如糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病患者中的腎臟移植排斥、肥胖介導(dǎo)的胰島素抗性和腎衰竭，其本身可與蛋白尿和高血壓相關(guān)。胃腸疾病.本文所述的受體結(jié)合劑可用于治療炎性胃腸疾病，包括(例如)乳糜瀉、克隆氏病(crohn’sdisease)、潰瘍性結(jié)腸炎、包括慢性胰腺炎的特發(fā)性胃輕癱胰腺炎、急性胰腺炎、炎性腸病以及包括胃和十二指腸潰瘍的潰瘍。肺病.受體結(jié)合劑可用于治療il-1介導(dǎo)的肺病?？芍委煹氖纠苑尾“ǎ郝宰枞苑尾?例如肺氣腫和慢性支氣管炎)、肺泡蛋白沉積癥、博來霉素誘導(dǎo)肺病和纖維化、肺纖維化(包括特發(fā)性肺纖維化和放射誘導(dǎo)的肺纖維化)、肺結(jié)節(jié)病、囊性纖維化、肺膠原聚集、ards、支氣管肺發(fā)育不良(bpd)、早產(chǎn)兒慢性阻塞性肺病和慢性纖維化肺病。此外，本文所述的受體結(jié)合劑可用于治療職業(yè)肺病，包括石棉肺、煤礦工人塵肺癥、硅肺病或與長(zhǎng)期暴露在細(xì)微粒下相關(guān)的相似病癥。包括嗜酸性粒細(xì)胞肺炎、特發(fā)性肺纖維化和過敏性肺炎的炎性和纖維化肺病可涉及可用受體結(jié)合劑治療的失調(diào)免疫炎性反應(yīng)。類肉瘤病是一種病因不明的病癥，其特征在于在全身的幾乎任何組織中都存在上皮樣肉芽；牽涉肺部是最常見的。發(fā)病機(jī)制涉及在疾病位置持續(xù)存在活化的巨噬細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞，隨后由這些細(xì)胞類型所釋放的活性產(chǎn)物的局部和全身性釋放所造成的慢性后遺癥。心血管疾病.本文所述的受體結(jié)合劑可用于治療心血管疾病或損傷，諸如主動(dòng)脈瘤、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、動(dòng)脈炎、血管阻塞(包括腦動(dòng)脈梗塞)、冠狀動(dòng)脈旁路手術(shù)并發(fā)癥、缺血/再灌注損傷、心臟病(包括動(dòng)脈粥樣硬化心臟病)、心肌炎(包括慢性自身免疫性心肌炎和病毒性心肌炎)、心力衰竭(包括慢性心力衰竭、充血性心力衰竭)、心肌梗塞、在心臟手術(shù)后或在頸動(dòng)脈球囊血管成形術(shù)后的再狹窄和/或動(dòng)脈粥樣硬化、無癥狀性心肌缺血、左室泵血功能減退、左心室輔助裝置植入后并發(fā)癥、雷諾現(xiàn)象(raynaud’sphenomena)、血栓性靜脈炎、血管炎(包括川崎血管炎(kawasaki’svasculitis))、靜脈閉塞癥、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、韋格納肉芽腫和亨-舍二氏紫癜。還可以預(yù)防性地提供受體結(jié)合劑，例如以降低此類心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí)施方案中，將受體結(jié)合劑施用給患者以治療動(dòng)脈粥樣硬化或降低其風(fēng)險(xiǎn)。il-1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通過急性心肌梗塞而激活，并可引發(fā)梗死周圍心肌細(xì)胞中的凋亡細(xì)胞死亡，從而擴(kuò)大梗死區(qū)。可施用本文所述的受體結(jié)合劑以減少心肌梗塞所致的損害。例如，可將受體結(jié)合劑施用給處于心肌梗塞風(fēng)險(xiǎn)中的受試者，或施用給已經(jīng)歷心肌梗塞的受試者，尤其是急性心肌梗塞，例如，在最近2、4、6、12、24、或48小時(shí)內(nèi)。該藥劑可結(jié)合其他藥劑施用，包括(例如)肝素和阿司匹林。受體結(jié)合劑還可用于治療中風(fēng)、蛛網(wǎng)膜下出血、頭部外傷或腦損傷和/或心血管疾病相關(guān)炎癥。例如，升高的il-1β水平與中風(fēng)和腦損傷相關(guān)的神經(jīng)炎癥有牽連(rothwell,n.j.,等,tins23(12):618-625,2000)。可施用受體結(jié)合劑以減少此類炎癥和與缺血和/或低氧相關(guān)的其他炎癥。此外，還可預(yù)防性地提供受體結(jié)合劑，例如，以降低此類疾病的風(fēng)險(xiǎn)和/或與此類疾病相關(guān)的炎癥。例如，可將受體結(jié)合劑施用給處于中風(fēng)、缺血事件、其他心血管事件或出血事件(諸如蛛網(wǎng)膜下出血)風(fēng)險(xiǎn)中的受試者，或施用給已經(jīng)歷中風(fēng)、缺血事件、其他心血管事件或出血事件(諸如蛛網(wǎng)膜下出血)的受試者，例如在最近2、4、6、12、24或48小時(shí)內(nèi)。泌尿生殖系統(tǒng)疾病和腎病.泌尿生殖系統(tǒng)的疾病也可用本文所述的受體結(jié)合劑治療。此類疾病包括腎小球性腎炎，包括自身免疫腎小球性腎炎、由于暴露于毒素所引發(fā)的腎小球性腎炎或被溶血性鏈球菌或其他感染原感染后繼發(fā)的腎小球性腎炎。免疫介導(dǎo)的腎病(包括腎小球性腎炎和腎小管間質(zhì)性腎炎)是抗體或t淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)腎臟組織的損傷的結(jié)果，直接原因是對(duì)抗腎抗原的自身反應(yīng)性抗體或t細(xì)胞的產(chǎn)生，或間接原因是對(duì)其他非腎抗原具有反應(yīng)性的抗體和/或免疫復(fù)合體在腎臟中的沉積。因此，其他造成免疫復(fù)合體形成的免疫介導(dǎo)的疾病也可作為間接后遺癥誘導(dǎo)免疫介導(dǎo)的腎病。直接和間接免疫機(jī)制兩者都會(huì)導(dǎo)致炎性反應(yīng)，其產(chǎn)生/誘導(dǎo)腎臟組織中的病變發(fā)展，致使器官功能損害以及在一些情況下進(jìn)展為腎衰竭。體液和細(xì)胞免疫機(jī)制兩者都涉及在病變的發(fā)病機(jī)制中。受體結(jié)合劑也可用于治療尿毒綜合征及其臨床并發(fā)癥(例如，腎衰竭、貧血和肥厚性心肌病)，包括與暴露于環(huán)境毒素、藥物或其他原因有關(guān)的尿毒綜合征。由于膽囊壁發(fā)炎所引起的造成吸收功能改變的并發(fā)癥也可治療。此類并發(fā)癥包括膽石癥(膽結(jié)石)和膽管結(jié)石癥(膽管結(jié)石)以及膽石癥和膽管結(jié)石癥的復(fù)發(fā)?？芍委煹钠渌“Y為血液透析的并發(fā)癥；前列腺病癥，包括良性前列腺肥大、非細(xì)菌性前列腺炎和慢性前列腺炎；以及血液透析的并發(fā)癥。受體結(jié)合劑也可用于治療慢性疼痛病癥，諸如慢性骨盆病，包括慢性前列腺炎/骨盆病綜合征，以及皰疹后疼痛。血液和腫瘤疾病.本文所述的受體結(jié)合劑可用于治療多種形式的癌癥，包括急性骨髓性白血病，慢性骨髓性白血病，eb(epstein-barr)病毒陽性鼻咽癌，膠質(zhì)瘤，結(jié)腸、胃、前列腺、腎細(xì)胞、子宮頸和卵巢癌，肺癌(sclc和nsclc)，包括與癌癥相關(guān)的惡病質(zhì)、疲乏、無力、惡病質(zhì)副腫瘤綜合征以及高鈣血癥。參見例如，voronov等(2003)pnas100:2645-2650。包括肉瘤、骨肉瘤和上皮細(xì)胞癌(諸如腺癌(例如，乳腺癌)和鱗狀上皮細(xì)胞癌)的實(shí)體瘤也是可治療的。關(guān)于il-1β在某些腫瘤中的作用，參見例如，krelin等(2007)cancerres.67:1062-1071。其他癌癥包括食道癌、胃癌、膽囊癌、白血病，包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨髓性白血病、慢性或急性淋巴細(xì)胞性白血病和毛細(xì)胞白血病。其他具有侵入性轉(zhuǎn)移可能的惡性腫瘤(包括多發(fā)性骨髓瘤)可用所述受體結(jié)合劑治療。參見例如，lust等(2009)mayoclinproc84(2):114-122。受體結(jié)合劑也可用于治療貧血和血液疾病，包括慢性特發(fā)性中性粒細(xì)胞減少癥、慢性疾病的貧血、再生障礙性貧血，包括范科尼再生障礙性貧血(fanconi’saplasticanemia)；特發(fā)性血小板減少性紫癜(itp)；血栓性血小板減少性紫癜、骨髓增生異常綜合征(包括難治性貧血、環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞性難治性貧血、原始細(xì)胞過多性難治性貧血(refractoryanemiawithexcessblasts)、轉(zhuǎn)化型難治性貧血伴原始細(xì)胞增多(refractoryanemiawithexcessblastsintransformation))；骨髓纖維化/髓樣化生；以及鐮狀細(xì)胞血管阻塞危機(jī)。自身免疫性溶血性貧血、免疫性全血細(xì)胞減少和陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿可因與在紅細(xì)胞(并在一些情況下，也有其他血細(xì)胞，包括血小板)表面上表達(dá)的抗原發(fā)生反應(yīng)的抗體的產(chǎn)生所致，并且是通過補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解和/或adcc/fc受體介導(dǎo)的機(jī)制來移除那些受抗體包被的細(xì)胞的結(jié)果。在自身免疫性血小板減少(包括血小板減少性紫癜)以及在其他臨床背景下的免疫介導(dǎo)的血小板減少中，血小板的破壞/移除因?yàn)榭贵w或補(bǔ)體貼附到血小板并隨后通過補(bǔ)體裂解、adcc或fc受體介導(dǎo)的機(jī)制移除而發(fā)生。也可將受體結(jié)合劑施用給患有各種淋巴增生疾病或處于其風(fēng)險(xiǎn)之中的受試者，包括自身免疫性淋巴增生綜合征(alps)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、毛細(xì)胞白血病、慢性淋巴性白血病、外周t細(xì)胞淋巴瘤、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、濾胞性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(burkitt’slymphoma)、eb病毒陽性t細(xì)胞淋巴瘤、組織細(xì)胞性淋巴瘤、何杰金氏病(hodgkin’sdisease)、彌漫侵襲性淋巴瘤、急性淋巴性白血病、t-γ淋巴組織增生性疾病、皮膚b細(xì)胞淋巴瘤、皮膚t細(xì)胞淋巴瘤(即，蕈樣肉芽腫)和西澤里綜合征(sezarysyndrome)。肝病.本文所公開的受體結(jié)合劑也可用于治療肝臟病癥，諸如肝炎，包括急性酒精性肝炎、急性藥物性或病毒性感性、甲肝、乙肝、丙肝、硬化性膽管炎、肝竇上皮以及由未知原因所致的肝臟炎癥。聽力疾病.受體結(jié)合劑還可用于治療涉及聽力損失并與異常il-1表達(dá)相關(guān)的疾病。此類疾病包括與耳蝸神經(jīng)相關(guān)的被認(rèn)為是因自身免疫過程所致的聽力損失，例如，自身免疫聽力損失、美尼爾氏綜合征(meniere’ssyndrome)和膽脂瘤，一種通常與聽力損失相關(guān)的中耳疾病。骨病.骨骼和關(guān)節(jié)的非關(guān)節(jié)炎疾病也可用本文所述的受體結(jié)合劑治療。這涵蓋骨骼或關(guān)節(jié)的炎性疾病，導(dǎo)致骨質(zhì)流失的破骨細(xì)胞疾病，諸如但不限于骨質(zhì)疏松癥(包括停經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥)、骨關(guān)節(jié)炎、造成牙齒松脫或掉齒的牙周炎，以及在關(guān)節(jié)置換術(shù)后的假體松動(dòng)(通常與磨耗碎片的炎性反應(yīng)有關(guān))，例如，骨科植入物骨質(zhì)溶解。淀粉樣疾病.進(jìn)一步地，本文所述的受體結(jié)合劑可用于治療特征在于多種病癥的原發(fā)性淀粉樣變性和繼發(fā)性淀粉樣變性，包括阿爾茨海默病、繼發(fā)型反應(yīng)性淀粉樣變性；唐氏綜合征；以及透析相關(guān)淀粉樣變性。此外，受體結(jié)合劑可用于治療肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)、亨丁頓舞蹈癥和帕金森病。這些疾病還可涉及可觸發(fā)炎性反應(yīng)的聚集體和淀粉樣蛋白的形成。神經(jīng)疾病.受體結(jié)合劑也可用于治療中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)炎癥和脫髓鞘病，包括多發(fā)性硬化；特發(fā)性脫髓鞘性多神經(jīng)病或格林-巴利綜合征(guillain-barresyndrome)；以及慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病。據(jù)信，這些疾病具有自身免疫基礎(chǔ)，并因?qū)ι偻患?xì)胞或直接對(duì)髓鞘引起的損害而導(dǎo)致神經(jīng)脫髓鞘。在多發(fā)性硬化中，疾病的誘發(fā)涉及t淋巴細(xì)胞。多發(fā)性硬化具有復(fù)發(fā)緩解型病程或慢性進(jìn)行性病程。病變含有主要為t淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤(rùn)性巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)；cd4+t淋巴細(xì)胞是在病變處的主要細(xì)胞類型。少突細(xì)胞的細(xì)胞死亡以及隨后的脫髓鞘作用的機(jī)制仍不清楚，但有可能是t淋巴細(xì)胞所驅(qū)動(dòng)的。肌肉疾病.受體結(jié)合劑可用于治療與炎癥和自身免疫相關(guān)的肌肉疾病。包括皮肌炎、多肌炎等的特發(fā)性炎性肌肉疾病是病因不明的造成肌肉無力的慢性肌肉炎性疾病。肌肉損傷/炎癥通常為全身性的和進(jìn)展性的。自身抗體與大多數(shù)形式相關(guān)。這些肌炎特異性抗體針對(duì)并抑制蛋白質(zhì)以及蛋白質(zhì)合成中涉及到rna等組分的功能。血管炎疾病.本文所述的受體結(jié)合劑可用于治療血管炎疾病，例如，系統(tǒng)性血管炎。系統(tǒng)性血管炎包括這樣的疾病，其中原發(fā)性病變?yōu)檠装Y以及后續(xù)對(duì)血管的損傷，其導(dǎo)致由受累血管供血的組織缺血/壞死/退化，并在一些情況下最終導(dǎo)致終末器官功能障礙。血管炎也可作為其他免疫炎性介導(dǎo)疾病諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化等的繼發(fā)病變或后遺癥而發(fā)生，尤其是在也和免疫復(fù)合體的形成相關(guān)的疾病中。在原發(fā)性系統(tǒng)性血管炎群組中的疾病包括：系統(tǒng)性壞死性血管炎；結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、變應(yīng)性血管炎和肉芽腫、多血管炎；韋格納肉芽腫(wegener’sgranulomatosis)；淋巴瘤樣肉芽腫；以及巨細(xì)胞動(dòng)脈炎。其他血管病變包括：黏膜皮膚淋巴結(jié)綜合征(mlns或川崎病)、孤立性cns血管炎、白塞氏病(behcet’sdisease)、血栓閉塞性脈管炎(伯格氏病(buerger’sdisease))和皮膚壞死性小靜脈炎。據(jù)信，這些血管炎疾病的致病機(jī)制主要是因?yàn)槊庖咔虻鞍讖?fù)合體在血管壁中沉積，隨后通過adcc、補(bǔ)體活化或這兩者而引起炎性反應(yīng)。caps.受體結(jié)合劑可用于治療caps疾病，即cias1相關(guān)周期綜合征。caps包括三種遺傳性綜合征：新生兒發(fā)病多系統(tǒng)炎癥性疾病(nomid)、穆-韋二氏綜合征(mws)和家族性寒冷性自身炎性綜合征(fcas)。(hoffman等2001naure29:301-305；feldmann等2002amjhumgenet71:198-203；aksentijevich等2002arthritisrheum46:3340-3348)。caps可以偶發(fā)性或家族性模式而以常染色體顯性方式遺傳。cias1編碼“炎性體”的蛋白質(zhì)組分nalp3，而炎性體則是一種調(diào)節(jié)半胱天冬酶1的活性的亞細(xì)胞酶復(fù)合體。cias1中的突變導(dǎo)致il-1的產(chǎn)生增多以及許多病理性結(jié)果(aksentijevich等2002同上)。il-1強(qiáng)力誘導(dǎo)肝臟中急性期反應(yīng)物的產(chǎn)生，諸如c反應(yīng)性蛋白(crp)和血清淀粉樣蛋白a(saa)。caps疾病具有共同的臨床特征并表現(xiàn)出一系列臨床嚴(yán)重度。nomid造成的失能最嚴(yán)重，mws稍低，并且fcas最輕。caps疾病具有多種重疊的特征，而個(gè)體可具有體征和癥狀的特有組合。所有這些病癥的共同特征包括發(fā)熱、蕁麻疹樣皮疹、關(guān)節(jié)炎或關(guān)節(jié)痛、肌痛、不適和結(jié)膜炎。在nomid中，慢性無菌性腦膜炎可導(dǎo)致智力遲鈍，并且這些患者還可能造成毀容并在骺和髕骨處使骨骼不能過度生長(zhǎng)。這些患者還可能因顱內(nèi)壓升高導(dǎo)致的視神經(jīng)萎縮而造成失明。mws和nomid通常與可包括聽覺系統(tǒng)、腦膜和關(guān)節(jié)的嚴(yán)重炎癥有關(guān)。這些患者可能患有每日高熱以及分布和強(qiáng)度經(jīng)常變化的慢性皮疹。患者可能出現(xiàn)聽力損失或失聰。經(jīng)常會(huì)觀察到結(jié)膜炎和視神經(jīng)乳頭水腫。淀粉樣變性可能發(fā)展并由于慢性炎癥以及急性期反應(yīng)物(尤其是sm)的過度產(chǎn)生而導(dǎo)致腎衰竭?？蓪⑹荏w結(jié)合劑施用給患有nomid、mws或fcas或診斷為具有與nomid、mws或fcas相關(guān)的基因型的受試者。此外，可將受體結(jié)合劑施用給患有traps的受試者(tnf受體相關(guān)性周期綜合征)。皮膚疾病.受體結(jié)合劑可用于治療皮膚疾病，諸如炎性皮膚疾病或自身免疫或免疫介導(dǎo)的皮膚病。示例性疾病為牛皮癬。包括大皰性皮膚病、多形性紅斑和接觸性皮炎的另外的自身免疫或免疫介導(dǎo)的皮膚病由自身抗體介導(dǎo)，其發(fā)生為t淋巴細(xì)胞依賴性的。牛皮癬是一種t淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的炎性疾病。病變包含t淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞以及一些中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)。可治療的其他皮膚或黏膜疾病包括皮膚棘層松解性疾病，包括darier病、毛囊角化病和尋常天皰瘡。進(jìn)一步的其他疾病包括：痤瘡、紅斑痤瘡、斑禿癥、口瘡性口炎、大皰性類天皰瘡、燒傷、濕疹、紅斑(包括多形性紅斑和水皰性多形紅斑(史蒂文斯—約翰遜綜合征(stevens-johnsonsyndrome)))、皮膚炎癥、扁平苔癬、線狀iga大皰病(兒童慢性大皰性皮膚病)、皮膚失去彈性、粘膜表面潰瘍(包括胃潰瘍)、嗜中性皮炎(sweet綜合征)、皮肌炎、毛發(fā)紅糠疹、牛皮癬、壞疽性膿皮病、多中心網(wǎng)狀組織細(xì)胞增生癥和中毒性表皮壞死松解癥。可通過受體結(jié)合劑治療的其他皮膚相關(guān)病癥包括皰疹樣皮炎(杜林病(duhring’sdisease))、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎和蕁麻疹(包括慢性特發(fā)性蕁麻疹)。過敏性疾病.受體結(jié)合劑可用于治療過敏性疾病，諸如哮喘、過敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、食物過敏、過敏性結(jié)膜炎(另見下文)和蕁麻疹。這些疾病通常通過t淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)的炎癥、ige介導(dǎo)的炎癥或這兩者而介導(dǎo)。哮喘是一種涉及呼吸系統(tǒng)的慢性病癥，其中氣道偶爾會(huì)收縮、發(fā)炎，并且內(nèi)襯有過量的黏液，通常是對(duì)一種或多種觸發(fā)物的反應(yīng)所致。發(fā)作可因暴露于環(huán)境刺激物(或過敏原)諸如冷空氣、暖空氣、濕空氣、鍛煉或運(yùn)動(dòng)、情緒壓力和病毒性疾病等而觸發(fā)。氣道狹窄導(dǎo)致諸如喘鳴、呼吸短促、胸悶和咳嗽的癥狀。受體結(jié)合劑可用于治療哮喘并可配制成局部或肺部遞送以用于此類治療或可不經(jīng)腸道遞送。移植.可將受體結(jié)合劑施用給即將接受移植、正在接受移植或正從移植中恢復(fù)的受試者。移植相關(guān)疾病(包括移植物排斥和移植物抗宿主病(gvhd))是t淋巴細(xì)胞依賴性的；抑制t淋巴細(xì)胞功能可起到改善效果。角膜移植可與血管新生相關(guān)，這可通過受體結(jié)合劑的治療而改善。受體結(jié)合劑也可用于治療由實(shí)體器官移植(諸如心臟、肝臟、皮膚、腎臟、肺(肺移植呼吸道閉塞))或其他移植(包括骨髓移植)所造成的并發(fā)癥。感染性疾病.本文所述的受體結(jié)合劑可用于治療原蟲病(包括瘧疾和血吸蟲病)以及治療麻風(fēng)結(jié)節(jié)性紅斑；細(xì)菌性或病毒性腦膜炎；結(jié)核病，包括肺結(jié)核；以及在細(xì)菌或病毒感染(包括流行性感冒感染和傳染性單核細(xì)胞增多癥)后繼發(fā)的肺炎。也可用受體結(jié)合劑治療的為遺傳周期性發(fā)熱綜合征(包括家族性地中海熱)、高免疫球蛋白d綜合征、周期性發(fā)熱綜合征、tnf受體相關(guān)性周期綜合征(traps)、成人斯蒂爾病(adult-onsetstill’sdisease)、施尼茨勒綜合征(schnitzler’ssyndrome)和纖維性肺泡炎。在一些實(shí)施方案中，將受體結(jié)合劑施用給受試者以降低受試者中il-6的活性或表達(dá)。例如，該受試者可具有與il-6有關(guān)或至少部分地由il-6介導(dǎo)的疾病。眼部疾病和眼部遞送本文所述的受體結(jié)合劑可用于治療眼部疾病，包括影響眼睛表面的眼部疾病、炎性眼部疾病以及至少部分地由自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的眼部疾病。在一些實(shí)施方案中，眼部疾病是影響眼睛表面的干眼癥。所述疾病包括也也稱為干燥性角結(jié)膜炎、干燥性角膜炎、干燥綜合征、干眼病、淚膜疾病、淚液產(chǎn)生減少、淚水不足以及瞼腺功能障礙的病癥。干眼癥可包括與舍格倫綜合征(ss)相關(guān)的形式，例如舍格倫綜合征相關(guān)干燥性角結(jié)膜炎，但也可包括與舍格倫綜合征(ss)無關(guān)的形式，例如非舍格倫綜合征相關(guān)干燥性角結(jié)膜炎?；颊呖梢跃哂谢蚩梢圆痪哂邢到y(tǒng)性自身免疫疾病的其他表現(xiàn)。il-1牽涉在干眼癥的發(fā)病中。參見例如，enriquezdesalamanca等(2010),mol.vis.16:862-873?；加懈裳劬C合征的受試者可呈現(xiàn)眼睛干燥性發(fā)炎，并可出現(xiàn)瘙癢(scratchy)、刺痛(stingy)、發(fā)癢、灼熱或受壓感、刺激性、疼痛和發(fā)紅。干眼可與過量流淚和相反地淚液產(chǎn)生不足兩者有關(guān)?？蓪⑹荏w結(jié)合劑施用給此類受試者以改善或防止一種或多種此類癥狀的發(fā)生或惡化。受體結(jié)合劑也可用于正在經(jīng)歷諸如因神經(jīng)炎癥所致的疼痛(如眼痛)的受試者，以緩解此類疼痛。在一些實(shí)施方案中，眼部疾病為與系統(tǒng)性自身免疫疾病(諸如舍格倫綜合征和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)相關(guān)或者與il-1或另一種il-1細(xì)胞因子家族成員相關(guān)性疾病相關(guān)的眼部疾病。患者可以具有或可以不具有系統(tǒng)性自身免疫疾病或系統(tǒng)性自身免疫疾病的其他表現(xiàn)。受體結(jié)合劑也可用于治療其他影響眼睛表面(諸如角膜)的疾病。此類疾病包括角膜性眼表面炎性病癥、角膜血管新生、角膜炎，包括邊緣潰瘍性角膜炎和細(xì)菌性角膜炎。受體結(jié)合劑可用于治療正在發(fā)生角膜傷口愈合的受試者(例如，具有角膜傷口的受試者)?？蓪⑹荏w結(jié)合劑施用給即將接受眼睛相關(guān)手術(shù)、正在接受眼睛相關(guān)手術(shù)或正從眼睛相關(guān)手術(shù)中恢復(fù)的受試者，例如，角膜移植/角膜成形術(shù)、人工角膜移植手術(shù)、角膜板層移植、選擇性內(nèi)皮細(xì)胞移植。參見例如，dana(2007)transamophthalmolsoc105:330-43；dekaris等(1999)curreyeres19(5):456-9；以及dana等(1997)transplantation63:1501-7。受體結(jié)合劑可用于治療影響結(jié)膜的疾病，包括結(jié)膜瘢痕疾病和結(jié)膜炎。受體結(jié)合劑可用于治療其他疾病，諸如類天皰瘡綜合征和史蒂文斯—約翰遜綜合征。可將本文所述的受體結(jié)合劑施用給受試者以調(diào)節(jié)眼睛中或眼睛周圍的血管新生。參見例如，dana(2007)transamophthalmolsoc105:330-43?？蓪⑹荏w結(jié)合劑施用給患有影響眼睛的過敏反應(yīng)的受試者，例如，經(jīng)歷嚴(yán)重過敏(特應(yīng)性)眼病諸如過敏性結(jié)膜炎的受試者。例如，受體結(jié)合劑可局部施用。另見例如，keane-myersam等(1999)investophthalmolvissci,40(12):3041-6。可將受體結(jié)合劑施用給影響眼睛的自身免疫疾病的受試者。示例性自身免疫眼部疾病包括交感性眼炎、vogt-小柳原田(vogt-koyanagiharada)(vkh)綜合征、鳥槍彈樣視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病變、眼瘢痕性類天皰瘡、fuchs異色虹膜睫狀體炎和各種形式的葡萄膜炎。可將受體結(jié)合劑施用給受試者以治療前述疾病中的任何一種。可將受體結(jié)合劑施用給患有糖尿病性視網(wǎng)膜病或處于其風(fēng)險(xiǎn)之中的受試者。參見例如，demircan等(2006)eye20:1366-1369和doganay等(2006)eye,16:163-170。葡萄膜炎包括急性和慢性形式，并包括虹膜、睫狀體和脈絡(luò)膜中一者或多種的炎癥。慢性形式可與系統(tǒng)性自身免疫疾病相關(guān)，例如，白塞氏綜合征、強(qiáng)直性脊柱炎、幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、賴特綜合征(reiter’ssyndrome)和炎性腸病。在前葡萄膜炎中，炎癥主要在虹膜中(即虹膜炎)。前葡萄膜炎可影響患有系統(tǒng)性自身免疫疾病的受試者，也可影響無全身性自身免疫疾病的受試者。中間葡萄膜炎涉及前玻璃體、周邊視網(wǎng)膜和睫狀體的炎癥，通常只有很少的前或脈絡(luò)視網(wǎng)膜炎癥。睫狀體平坦部炎因虹膜與脈絡(luò)膜之間的平坦部發(fā)炎所致。后葡萄膜炎涉及葡萄膜并且主要是脈絡(luò)膜，并且也稱為脈絡(luò)膜炎。后葡萄膜炎可與全身性感染或自身免疫疾病相關(guān)。它可以持續(xù)數(shù)月甚至數(shù)年。可將受體結(jié)合劑施用給受試者以治療葡萄膜炎的前述形式中的任何一種。另見例如，tsai等(2009)molvis15:1542-1552和trittibachp等(2008)genether.15(22):1478-88。在一些實(shí)施方案中，受體結(jié)合劑用于治療患有老年性黃斑變性(amd)或處于其風(fēng)險(xiǎn)之中的受試者。受體結(jié)合劑可局部施加給眼睛、注射(例如，玻璃體內(nèi))或全身性提供。參見例如，olson等(2009)oculimmunolinflamm17(3):195-200。本文所述的受體結(jié)合劑可通過任何方式施用以治療眼部疾病。該藥劑可以非腸道方式遞送。作為另外一種選擇或除此之外，該藥劑可直接遞送到眼睛或眼睛附近。例如，蛋白質(zhì)可局部或眼內(nèi)施用，例如如下所述。制劑和眼部遞送方法可遞送包含受體結(jié)合劑的眼科制劑以局部施用，例如，作為液滴或軟膏施用，或用于植入，例如植入眼睛前房或結(jié)膜囊。液滴可使用滴眼管遞送。當(dāng)配制成供眼部遞送時(shí)，受體結(jié)合劑可以0.0001-0.1％、0.001-5％例如，0.005-0.5％、0.05-0.5％、0.01-5％、0.1-2％或1％-5％的濃度存在。很多情況下，將眼科制劑直接施加到眼睛，包括局部施加到眼瞼或滴注到眼球與眼瞼之間的空間(陷凹)中。眼科制劑可設(shè)計(jì)為與淚液容易地混合，并在角膜和結(jié)膜表面上散開。通過常見的施用技術(shù)，藥物的大部分沉積到下穹隆中。毛細(xì)作用、擴(kuò)散力和眨眼反射促使藥物結(jié)合在角膜前膜中，自角膜前膜處藥物進(jìn)入并透過角膜。眼科制劑還可以包含一種或多種其他藥劑，例如，抗炎甾體諸如利美索龍、氯替潑諾、甲羥松和氫化可的松，或非甾體抗炎藥。例如，甾體可以0.001至1％的濃度存在。在一些實(shí)施方案中，不存在甾體。例如，受體結(jié)合劑是制劑中的唯一活性藥劑。制劑還可以包含以下組分中的一種或多種：表面活性劑、張力劑、緩沖劑、防腐劑、共溶劑和粘度助劑。張力劑可用于調(diào)節(jié)組合物的張力，例如調(diào)節(jié)到天然淚液的張力。例如，可以添加氯化鉀、氯化鈉、氯化鎂、氯化鈣、右旋糖和/或甘露糖醇以達(dá)到合適的張力，例如，生理張力。張力劑可按足以提供約150-450mosm或250-350mosm的滲透壓度的量添加。制劑還可以包含適合眼科遞送的緩沖劑。緩沖劑可包含一種或多種緩沖組分(例如，磷酸鈉、醋酸鈉、檸檬酸鈉、硼酸鈉或硼酸)以特別是在儲(chǔ)藏條件下緩沖ph的變化。例如，可選擇緩沖劑以提供在ph6.0-7.5(例如，6.5-7.5)范圍內(nèi)的目標(biāo)ph。制劑可包含水性或磷脂載體。尤其是對(duì)于治療干眼病，制劑可包含提供短期緩解的藥劑，例如，潤(rùn)滑眼睛并有助于淚液形成的化合物。例如，磷脂載體(其可包含一種或多種磷脂)可用于提供短期緩解。可用作人造淚液載體的實(shí)例或人造淚液組合物包括商業(yè)產(chǎn)品諸如tearsnaturaletm(alconlabs,inc.,txusa)。例如，每毫升制劑可包含：1mg葡聚糖70和3mg羥丙基甲基纖維素和任選的防腐劑諸如(聚季銨鹽-1)0.001％(m/v)。磷脂載體制劑的實(shí)例包括在us4,804,539、us4,883,658、us5,075,104、us5,278,151和us5,578,586中公開的那些。制劑還可以包含用作潤(rùn)滑劑或潤(rùn)濕劑的其他化合物。這些包括粘性劑，諸如：?jiǎn)误w多元醇，諸如甘油、丙二醇、乙二醇；聚合多元醇，諸如聚乙二醇；纖維素家族的各種聚合物：羥丙基甲基纖維素(“hpmc”)、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素(“hpc”)；葡聚糖類，諸如葡聚糖70；水溶性蛋白質(zhì)，諸如明膠；和乙烯基聚合物，諸如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚維酮；以及卡波姆，諸如卡波姆934p、卡波姆941、卡波姆940、卡波姆974p。其他實(shí)例包括多糖，諸如透明質(zhì)酸及其鹽和硫酸軟骨素及其鹽，以及丙烯酸聚合物。在某些實(shí)施方案中，制劑具有1至400cp的粘度。制劑可包裝成作為單次或多次劑量使用，例如，包裝在具有相連滴管的瓶子中或包裝成一組單次使用的滴管。制劑可包含一種或多種防腐劑，例如，以在使用期間避免微生物和真菌污染。示例性防腐劑包括：苯扎氯銨、氯丁醇、苯扎溴銨、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、苯乙醇、依地酸二鈉、山梨酸和聚季銨鹽-1，并且可以0.001至1.0％w/v的濃度包含在內(nèi)。還可能提供包含受體結(jié)合劑的無菌但不含防腐劑的制劑。制劑可制備成供單次使用應(yīng)用。眼科包可用于使眼科制劑與眼睛的接觸時(shí)間延長(zhǎng)。使棉拭子飽含制劑，然后將其插入上或下穹隆。受體結(jié)合劑也可通過離子電滲療法施用。該手術(shù)在具有電極的洗眼杯中使溶液與角膜保持接觸。藥物的擴(kuò)散通過電勢(shì)差實(shí)現(xiàn)。受體結(jié)合劑也可通過注射施用，例如結(jié)膜下注射?？蓪⒅苿┳⑸湓诮Y(jié)膜之下，從而通過單純擴(kuò)散促使其穿過鞏膜進(jìn)入眼睛。也可將制劑注射在結(jié)膜下以及下面的眼睛更后部中的tenon囊之下，以將藥劑遞送至睫狀體、脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜。制劑也可通過眼球后注射而施用。關(guān)于干眼和其他表面疾病，可使用以下方法中的一種或多種來評(píng)估受試者：眼表疾病指數(shù)(osdi)、角膜和結(jié)膜染色以及希爾默試驗(yàn)(schirmertest)。眼表疾病指數(shù)(osdi)是包含12個(gè)項(xiàng)目的調(diào)查問卷，其提供與眼表炎性疾病(包括des)一致的眼睛刺激癥狀以及它們對(duì)視力相關(guān)功能的影響的快速評(píng)價(jià)。參見例如oculimmunolinflamm.2007年9月至10月；15(5):389-93。osdi調(diào)查問卷的12個(gè)項(xiàng)目按0至4的量表評(píng)級(jí)。評(píng)分基于反應(yīng)而得出，以提供0到100分級(jí)的osdi評(píng)分，評(píng)分越高表示殘疾度越大。相對(duì)于基線的負(fù)向變化表示視力相關(guān)功能和眼部炎性疾病的改善。角膜和結(jié)膜染色：角膜染色是一種對(duì)上皮性疾病或眼表上皮屏障破裂(通?？梢娪谥T如干眼癥的眼表炎性疾病)的度量。如果存在嚴(yán)重的眼瞼疾病(諸如后瞼緣炎)，即使沒有臨床上明顯的干眼癥，角膜染色也可存在。角膜染色在許多患者(盡管不是全部患者)中與眼部不適高度相關(guān)；如上所述，一般而言角膜染色與osdi的高分相關(guān)。對(duì)于角膜熒光素染色，可使用鹽水潤(rùn)濕的熒光素條或1％熒光素鈉溶液來染色淚液膜。然后，使用裂隙燈評(píng)估以黃色阻擋濾光片(#12wratten)和鈷藍(lán)照明對(duì)整個(gè)角膜進(jìn)行檢查。根據(jù)oxfordschema對(duì)染色評(píng)級(jí)。結(jié)膜染色同樣也是一種對(duì)上皮性疾病或眼表上皮屏障破裂的度量。結(jié)膜染色利用麗絲胺綠在裂隙燈下進(jìn)行。將鹽水潤(rùn)濕的條或1％麗絲胺綠溶液用于染色淚膜，并且隨后在超過30秒但短于2分鐘時(shí)對(duì)瞼間結(jié)膜染色進(jìn)行評(píng)價(jià)。使用中等強(qiáng)度的白光，通過oxfordschema僅對(duì)鼻側(cè)和顳側(cè)結(jié)膜染色的瞼間區(qū)域進(jìn)行評(píng)級(jí)。希爾默試驗(yàn)：希爾默試驗(yàn)在存在和不存在麻醉下通過在下陷凹中放置窄濾紙條(whatman#41濾紙的5×35mm條)而進(jìn)行。該試驗(yàn)在光線昏暗的房間中進(jìn)行。患者輕輕閉上眼睛持續(xù)五分鐘，然后移除紙條。由于將紙條從眼睛移除后淚液前沿將繼續(xù)前進(jìn)數(shù)毫米，因此在準(zhǔn)確的第五分鐘時(shí)用圓珠筆標(biāo)記淚液前沿。通過在5分鐘內(nèi)紙條浸濕的毫米長(zhǎng)度來測(cè)量淚水的產(chǎn)生。在沒有麻醉的情況下希爾默試驗(yàn)的結(jié)果為10mm或更少以及在有麻醉的情況下希爾默試驗(yàn)的結(jié)果為5mm或更少被視為異常。相對(duì)于基線的正向變化表示本文所述的眼部炎性疾病中的一種或多種癥狀的改善。制劑和肺部遞送方法可將受體結(jié)合劑配制成用于吸入性或其他模式的肺部遞送，例如，以將該藥劑施用至呼吸道(例如，上呼吸道和下呼吸道)的組織。三種可用于將藥劑局部遞送至肺部氣道的常用系統(tǒng)包括干粉吸入器(dpi)、計(jì)量吸入器(mdi)和噴霧器。mdi可用于以溶解形式或作為分散體遞送受體結(jié)合劑。通常，mdi裝有氟利昂或其他相對(duì)高蒸氣壓的推進(jìn)劑，其在啟動(dòng)裝置時(shí)推動(dòng)霧化藥品進(jìn)入呼吸道。相比之下，dpi通常依賴患者的吸氣用力以將干粉形式的藥物引入肺中。噴霧器通過將能量傳給液態(tài)溶液而形成將被吸入的藥物氣溶膠。藥劑可以凍干形式(例如，在室溫下)儲(chǔ)藏，并在吸入前在溶液中復(fù)溶。在液體通氣或肺灌洗期間使用含氟化合物介質(zhì)進(jìn)行藥物的直接肺部遞送也是可能的遞送模式。這些和其他方法可用于遞送受體結(jié)合劑。例如，藥劑以每次噴出至少約0.02、0.1、0.5、1、1.5、2、5、10、20、40或50mg或更多的劑量單位形式遞送。受體結(jié)合劑可通過使用合適的推進(jìn)劑(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、dielilorotetrafluoroctliane、二氧化碳或其他合適的氣體)便利地從加壓包或噴霧器中以氣溶膠噴霧的呈現(xiàn)形式遞送。就加壓氣溶膠而言，劑量單位可通過提供閥門來遞送計(jì)量的量而決定。用于吸入器或吹入器的膠囊和藥筒可制成包含受體結(jié)合劑和合適粉末基料(諸如乳糖或淀粉)的粉末混合物(如果顆粒是配方顆粒)。除了配方或非配方受體結(jié)合劑外，其他材料(諸如100％dppc或其他表面活性劑)也可一起混合，以促進(jìn)配方或非配方受體結(jié)合劑的遞送和分散。粒度也可以變化以控制是遞送到下呼吸道還是上呼吸道。例如，1-5微米或10-50微米大小范圍內(nèi)的粒度可分別用于下呼吸道和上呼吸道。諸如表面活性劑的遞送增強(qiáng)劑可用于進(jìn)一步增強(qiáng)肺部遞送。表面活性劑一般而言是具有親水性和親脂性部分的化合物，其通過與兩不混溶相之間的界面發(fā)生相互作用而促進(jìn)藥物的吸收。表面活性劑可因多種原因用于干燥的顆粒，例如，減少顆粒聚集以及減弱巨噬細(xì)胞吞噬。表面活性劑在本領(lǐng)域中是熟知的并包括：磷酸甘油酯類，例如，磷脂酰膽堿類、l-α-二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)和二磷脂酰甘油(dppg)；十六醇；脂肪酸類；聚乙二醇(peg)；聚氧乙烯-9-；月桂醇醚；棕櫚酸；油酸；脫水山梨糖醇三油酸酯(span85)；甘氨膽酸鹽；表面活性素；泊洛沙姆；脫水山梨糖醇脂肪酸酯；脫水山梨糖醇三油酸酯；泰洛沙泊；和磷脂類。本文的特征還在于特異性識(shí)別本文所述的嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域的抗體。例如，此類抗體相對(duì)于任何親本細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域優(yōu)先地與嵌合結(jié)構(gòu)域結(jié)合。例如，特異性抗體可與包含位于第一親本細(xì)胞因子片段與第二親本細(xì)胞因子之間的接合部的表位結(jié)合。核酸遞送可通過遞送編碼受體結(jié)合劑并可表達(dá)該受體結(jié)合劑的核酸而向受試者提供受體結(jié)合劑。例如，可將編碼受體結(jié)合劑的核酸序列置于轉(zhuǎn)錄控制序列的控制之下并設(shè)置在核酸載體中以進(jìn)行基因遞送，所述核酸載體例如病毒載體。示例性病毒載體包括腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒或腺相關(guān)病毒載體。載體可以為質(zhì)粒或線性分子的形式，例如，線性雙鏈dna。遞送的核酸可設(shè)計(jì)為結(jié)合到靶細(xì)胞的基因組中，例如，整合到靶細(xì)胞的基因組中。作為另外一種選擇，遞送的核酸可設(shè)計(jì)為使得在遞送后其自主存在于細(xì)胞中?？蓪?duì)轉(zhuǎn)錄控制序列進(jìn)行工程化處理以提供瞬時(shí)或組成型表達(dá)。瞬時(shí)控制可包括通過外源性物質(zhì)調(diào)節(jié)的控制，例如，通過使用響應(yīng)外源性物質(zhì)(例如，甾體激素或fk506)或環(huán)境信號(hào)的轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)元件。在所遞送的核酸上提供的基因的表達(dá)可例如通過檢測(cè)由該基因編碼的蛋白質(zhì)(例如，使用抗體)或通過檢測(cè)mrna(例如，使用pcr或northern雜交)進(jìn)行評(píng)價(jià)。通常對(duì)遞送的核酸進(jìn)行工程化處理，以使得轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控dna相對(duì)于受體結(jié)合劑的編碼序列被適當(dāng)定位，繼而使得轉(zhuǎn)錄得以引發(fā)并且蛋白質(zhì)通過所產(chǎn)生的消息進(jìn)行翻譯。核酸可包含來自哺乳動(dòng)物細(xì)胞尤其是人的轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控核酸序列。此類序列包括(例如)啟動(dòng)子序列、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄起始和終止序列、翻譯起始和終止序列以及增強(qiáng)子或激活子序列。此外，表達(dá)載體可以包含另外的元件。例如，對(duì)于整合表達(dá)載體，該表達(dá)載體可包含與宿主細(xì)胞基因組同源的至少一個(gè)或兩個(gè)序列，例如，位于表達(dá)構(gòu)建體的側(cè)翼?？赏ㄟ^選擇包含在載體中的合適的同源序列，將整合載體導(dǎo)向宿主細(xì)胞中的特定基因座。整合載體的構(gòu)建體在本領(lǐng)中是熟知的。示例性腺病毒載體包括諸如ad2或ad5的人腺病毒的修飾形式，其中移除了病毒在體內(nèi)復(fù)制所必需的遺傳元件。例如，e1區(qū)域可以被移除，并且基因組可進(jìn)一步被修飾以接受編碼受體結(jié)合劑的表達(dá)盒。示例性逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包括lnl6、lxsn、lncx和慢病毒載體。特定的慢病毒載體在pawliuk等(2001)science294:2368和imren等(2002)pnas99:14380中進(jìn)行了描述，并包括限于人免疫缺陷病毒(例如，hiv-1、hiv-2)、貓免疫缺陷病毒(fiv)、猴免疫缺陷病毒(siv)、牛免疫缺損病毒(biv)和馬傳染性貧血病毒(eiav)。這些載體可以構(gòu)建并工程化為安全的，例如，通過將必需基因(例如，gag和pol)分離到單獨(dú)的載體上并使得成為逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制缺陷型的。然后采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)通過使用輔助病毒或包裝細(xì)胞系將復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝成病毒粒子。用于產(chǎn)生重組逆轉(zhuǎn)錄病毒以及用于通過此類比病毒在體外或體內(nèi)感染細(xì)胞的方案可見于currentprotocolsinmolecularbiology,ausubel,f.m.等(編著)greenepublishingassociates,(1989),sections9.10-9.14以及其他標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體除了包含表達(dá)受體結(jié)合劑的序列外還可以包含：左側(cè)(5')逆轉(zhuǎn)錄病毒ltr；逆轉(zhuǎn)錄病毒導(dǎo)出元件，任選地逆向反應(yīng)元件(reverseresponseelement,rre)；啟動(dòng)子和基因座控制區(qū)(lcr)或其他轉(zhuǎn)錄絕緣子序列(transcriptionalinsulatorsequence)以及右側(cè)(3')逆轉(zhuǎn)錄病毒ltr。逆轉(zhuǎn)錄病毒可進(jìn)一步包含中心多嘌呤管道(cppt)或dna側(cè)翼以提高病毒滴度和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。包含編碼受體結(jié)合劑的序列的核酸可遞送到任何合適的靶細(xì)胞，例如，在體外或體內(nèi)。示例性靶細(xì)胞包括滑膜細(xì)胞、造血細(xì)胞、真皮細(xì)胞等。核酸可遞送到與眼睛相關(guān)的靶細(xì)胞，例如，角膜上皮細(xì)胞。遞送可包括清創(chuàng)或刮除角膜上皮以暴露上皮基底層。然后添加用于遞送的核酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將核酸遞送到角膜內(nèi)皮細(xì)胞、角膜周邊之下的小梁網(wǎng)細(xì)胞、眼睛脈絡(luò)膜層細(xì)胞、視網(wǎng)膜，鞏膜或睫狀體細(xì)胞、視網(wǎng)膜或眼部脈管細(xì)胞或玻璃體細(xì)胞或晶狀體細(xì)胞，例如晶狀體上皮細(xì)胞。遞送方法包括(例如)逆轉(zhuǎn)錄病毒感染、腺病毒感染、用質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、用含外源核酸的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)化、生物彈道核酸遞送(例如，將核酸加載到金或其他金屬粒子上，然后射擊或注射進(jìn)細(xì)胞)、腺相關(guān)病毒感染和eb病毒感染。遞送可借助包括針注射、無痛皮下噴射、電穿孔或基因槍的任何方法進(jìn)入細(xì)胞或組織。用于基因遞送的其他方法可見于例如：kay,m.a.(1997)chest111(增刊6):138s-142s；ferry,n.和heard,j.m.(1998)hum.genether.9:1975-81；shiratory,y.等(1999)liver19:265-74；oka,k.等(2000)curr.opin.lipidol.11:179-86；thule,p.m.和liu,j.m.(2000)genether.7:1744-52；yang,n.s.(1992)crit.rev.biotechnol.12:335-56；alt,m.(1995)j.hepatol.23:746-58；brody,s.l.和crystal,r.g.(1994)ann.n.y.acad.sci.716:90-101；strayer,d.s.(1999)expertopin.investig.drugs8:2159-2172；smith-arica,j.r.和bartlett,j.s.(2001)curr.cardiol.rep.3:43-49以及l(fā)ee,h.c.等(2000)nature408:483-8。示例性第二藥劑本文所述的受體結(jié)合劑可與第二藥劑施用。兩種藥劑可(例如)使用不同的方案共施用或單獨(dú)施用。示例性的第二藥劑包括抗炎劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二藥劑為il-17拮抗劑(涵蓋所有il-17家族成員的拮抗劑，例如，il-17a、il-17f、il-17b、il-17c、il-17d和il-17e的拮抗劑)。示例性的il-17拮抗劑包括：與il-17(包括il-17a、il-17f、il-17b、il-17c、il-17d和il-17e)結(jié)合并拮抗il-17介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；與一種或多種il-17諸如il-17ra和il-17rc的受體結(jié)合并拮抗il-17介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；與包含il-17和至少一個(gè)受體亞單位的復(fù)合體例如il-17和il-17ra或il-17、il-17ra和il-17rc結(jié)合并拮抗il-17介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；以及諸如包含il-17ra和il-17rc的可溶性胞外域中的一個(gè)或多個(gè)并拮抗il-17介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的可溶性受體的藥劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二藥劑為il-12拮抗劑。示例性il-12拮抗劑包括：與il-12(包括p35和p40)結(jié)合并拮抗il-12介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；與一種或多種il-12諸如il-12rβ1或il-12rβ2的受體結(jié)合并拮抗il-12介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；與包含p35、p40和至少一個(gè)受體亞單位例如il-12rβ1或il-12rβ2的復(fù)合體結(jié)合并拮抗il-12介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；以及諸如包含l-12rβ1或il-12rβ2的可溶性胞外域中的一個(gè)或多個(gè)并拮抗il-12介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的可溶性受體的藥劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，第二藥劑為il-23拮抗劑。示例性il-23拮抗劑包括：與il-23(包括p19和p40)結(jié)合并拮抗il-23介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；與一種或多種il-23諸如il-12rβ1或il-23r的受體結(jié)合并拮抗il-23介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；與包含p19、p40和至少一個(gè)受體亞單位例如il-12rβ1或il-23r的復(fù)合體結(jié)合并拮抗il-23介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑(諸如抗體和其他結(jié)合蛋白)；以及諸如包含il-12rβ1或il-23r的可溶性胞外域中的一個(gè)或多個(gè)并拮抗il-23介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥劑。示例性il-23抗體已有描述。參見例如beyer等,j.mol.biol.(2008),doi:10.1016/j.jmb.2008.08.001。動(dòng)物模型受體結(jié)合劑可在人類疾病的動(dòng)物模型中進(jìn)行評(píng)價(jià)，例如，人自身免疫和/或人炎性疾病。藥劑可具有針對(duì)動(dòng)物中相應(yīng)靶蛋白的特異性。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型.受體結(jié)合劑可在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，例如膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎(cia)模型中進(jìn)行評(píng)價(jià)。參見例如，mcindoe等,1999,proc.natl.acad.sci.usa,96:2210-2214；issekutz,a.c.等,immunology(1996)88:569；以及currentprotocolsinimmunology,15.5單元,coligan等(編著),johnwiley&sons,inc。該模型通過用天然ii型膠原對(duì)大鼠/小鼠的敏感品系進(jìn)行免疫而建立。將膠原在完全弗氏佐劑(cfa)中乳化并在尾巴根部進(jìn)行皮內(nèi)注射(100μg膠原:100μgcfa/小鼠)。向?qū)φ招∈笃?nèi)注射0.05ml蒸餾水/cfa乳液。在初次免疫后21天，給予溶于不完全佐劑中的膠原的加強(qiáng)注射。疾病由通過膠原進(jìn)行免疫而誘導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)所致。使用限定的量表，對(duì)關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)炎、炎癥、血管翳、軟骨損傷和骨吸收進(jìn)行評(píng)分。例如，關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重性可如下評(píng)分：0＝?jīng)]有可見的關(guān)節(jié)炎效應(yīng)；1＝一根足趾或關(guān)節(jié)出現(xiàn)浮腫和紅斑；2＝兩個(gè)關(guān)節(jié)出現(xiàn)浮腫和紅斑；3＝多于兩個(gè)關(guān)節(jié)出現(xiàn)浮腫和紅斑；4＝整只爪子和足趾發(fā)生嚴(yán)重關(guān)節(jié)炎，伴隨足踝的關(guān)節(jié)僵硬和肢體的變形?？蓪?duì)各肢體的評(píng)分求和，并記錄為各個(gè)動(dòng)物的關(guān)節(jié)炎指數(shù)(ai)。其他評(píng)分方案也可用于這些及其他標(biāo)準(zhǔn)。多發(fā)性硬化.實(shí)驗(yàn)性過敏性腦脊髓炎(eae)是多發(fā)性硬化的一種有用的鼠模型。受體結(jié)合劑可在eae模型中進(jìn)行評(píng)價(jià)。eae為一種t細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病，特征在于t細(xì)胞和單核細(xì)胞炎癥以及隨后在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的軸突發(fā)生脫髓鞘。(參見例如，bolton,c.,1995,multiplesclerosis,143)。示例性方案可見于currentprotocolsinimmunology,15.1和15.2單元；coligan等(編著),johnwiley&sons,inc.。髓鞘疾病也有相應(yīng)的模型，在該模型中將少突細(xì)胞或許旺細(xì)胞(schwanncell)移植到中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，例如，如duncan等,1997,molec.med.today,554-561中所述。同種異體移植.受體結(jié)合劑可在皮膚同種異體移植排斥的動(dòng)物模型中進(jìn)行評(píng)估，例如使用鼠尾部皮膚移植。皮膚異體移植排斥由t細(xì)胞、輔助t細(xì)胞和殺傷效應(yīng)t細(xì)胞介導(dǎo)。參見例如，currentprotocolsinimmunology,4.4單元；coligan等(編著),1995,johnwiley&sons,inc.。其他移植排斥模型也可使用。參見例如，tinubu等,1994,j.immunol.,4330-4338。ibd和結(jié)腸炎模型.示例性炎性腸病模型為使用轉(zhuǎn)移到scid小鼠的cd4+cd45rb高表達(dá)細(xì)胞。參見例如，hirano等,jpharmacolsci.2009jun；110(2):169-81以及使用轉(zhuǎn)基因il-10缺陷小鼠。參見例如，inaba等,inflammboweldis.,doi:10.1002/ibd.21253(2010)。另一種示例性結(jié)腸炎模型采用葡聚糖硫酸鈉(dss)誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎。例如，可通過在自由攝取的飲用水中施用5％(重量/體積)的dss(分子量30–40kda；icnbiomedicals,aurora,oh)在小鼠中誘導(dǎo)結(jié)腸炎。在此種處理下所造成的癥狀為血性腹瀉、體重減輕、結(jié)腸縮短和黏膜潰瘍伴隨嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。dss誘導(dǎo)的結(jié)腸炎在組織學(xué)上的特征在于炎性細(xì)胞侵入固有層，伴隨著淋巴增生、局灶性隱窩損傷和上皮潰瘍。這些變化被認(rèn)為會(huì)發(fā)展，因?yàn)閐ss對(duì)上皮的毒性效應(yīng)以及固有層細(xì)胞的吞噬作用以及tnf-α和ifn-γ的產(chǎn)生。參見例如，hassan等plosone.2010年1月25日；5(1):e8868。干眼病模型.受體結(jié)合劑可在干眼病小鼠模型中進(jìn)行評(píng)價(jià)。可通過以下方式誘導(dǎo)干眼?。浩は伦⑸鋿|莨菪堿，接著將小鼠放在環(huán)境受控的室內(nèi)。作為特定實(shí)例，可通過持續(xù)暴露在環(huán)境受控室內(nèi)的干燥環(huán)境而使正常健康的6至10周齡的雌性c57bl/6小鼠誘導(dǎo)成患有干眼癥。室內(nèi)具有低于30％(一般而言約19％)的低相對(duì)濕度、高氣流量(15升/分鐘)和恒溫(約22℃)。放在室內(nèi)的小鼠還用東莨菪堿進(jìn)行處理以抑制淚液分泌。持續(xù)釋放的透皮東莨菪堿貼片可得自novartis(summit,n.j.)。每48小時(shí)將一張貼片的四分之一施加到小鼠的脫毛尾部中段。環(huán)境受控室與東莨菪堿的組合在相對(duì)短的一段時(shí)間內(nèi)(約2-4天)產(chǎn)生嚴(yán)重的干眼病。環(huán)境受控室可如barbino等,invest.ophthal.vis.sci.,46:2766-2711(2005)所述來準(zhǔn)備，并可控制氣流量、濕度和溫度?？杀O(jiān)測(cè)小鼠的干眼病體征，例如通過進(jìn)行：a)棉線試驗(yàn)以測(cè)量淚水的產(chǎn)生，其在患有干眼病的患者中通常會(huì)減少；b)角膜熒光素染色，其是角膜表面損傷的一個(gè)標(biāo)志；以及一般眼科檢查。棉線試驗(yàn)：可利用通過酚紅(zone-quick,lacrimedics,eastsound,wash.)浸漬的棉線來測(cè)量淚液的產(chǎn)生。在放大熒光燈下，將棉線用珠寶鑷子夾持，并置于右眼結(jié)膜穹隆的外眥30或60秒。在顯微鏡下利用血球計(jì)標(biāo)度讀出淚液距離(以mm為單位)。角膜熒光染色：角膜熒光染色可通過利用微量吸液管將1.0μl的5％熒光素施加至眼睛的下結(jié)膜囊而進(jìn)行評(píng)價(jià)。在熒光素滴注后3分鐘，將角膜通過裂隙燈生物顯微鏡利用鈷藍(lán)燈進(jìn)行檢查。利用0-3級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)化美國(guó)國(guó)家眼科研究所(nei)分級(jí)系統(tǒng)，針對(duì)被分成五個(gè)區(qū)域的角膜表面中的每個(gè)區(qū)域，以盲性方式記錄點(diǎn)狀染色。診斷和其他用途本文所述的受體結(jié)合劑可用于檢測(cè)樣本中的il-1r1，或表達(dá)此受體的細(xì)胞。例如，可將藥劑直接或間接地用作為標(biāo)記或能產(chǎn)生信號(hào)的部分進(jìn)行標(biāo)記，該部分例如為酶、放射性標(biāo)記、表位或熒光蛋白(諸如綠色熒光蛋白)?？墒顾巹┡c樣本或細(xì)胞接觸以確定所述受體是否存在于樣本中或細(xì)胞上，例如，使用標(biāo)準(zhǔn)免疫印跡、免疫熒光、酶免疫測(cè)定(eia)、放射性免疫測(cè)定(ria)、熒光能量轉(zhuǎn)移、western印跡以及其他診斷和檢測(cè)技術(shù)。受體結(jié)合劑也可進(jìn)行標(biāo)記用于體內(nèi)檢測(cè)并施用給受試者?？蓪?duì)受試者成像，例如，通過nmr或其他斷層成像裝置。例如，結(jié)合劑可用放射性標(biāo)記(諸如131i、111in、123i、99mtc、32p、125i、3h、14c和188rh)、熒光標(biāo)記(諸如熒光素和若丹明)、核磁共振活性標(biāo)記、能通過正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層("pet")掃描儀檢測(cè)的正電子發(fā)射同位素、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記(諸如蟲熒光素)和酶標(biāo)記(諸如過氧化物酶或磷酸酶)進(jìn)行標(biāo)記。藥劑可以用造影劑標(biāo)記，諸如順磁劑和鐵磁性或超順磁性(主要改變t2反應(yīng))物質(zhì)。受體結(jié)合劑也可用于純化表達(dá)與其結(jié)合的受體的細(xì)胞。例如，可將受體結(jié)合劑與固定化載體(例如，磁珠或柱基質(zhì))連接并接觸可能表達(dá)所述受體的細(xì)胞。載體可(例如)用生理緩沖液洗滌，并且可從載體回收細(xì)胞。受體結(jié)合劑也可用于純化與其結(jié)合的受體的可溶形式。例如，包含該可溶受體的樣本可接觸固定化的受體結(jié)合劑，然后，例如在洗滌后，可從固定化的受體結(jié)合劑中回收。下列非限制性實(shí)例進(jìn)一步說明本文所述的本發(fā)明的實(shí)施方案。實(shí)施例實(shí)施例1在含有t7啟動(dòng)子和氨芐青霉素(pet31系列)或卡那霉素抗性基因(pet28系列)的pet載體(emdchemicals,gibbstownnj,usa)中，構(gòu)建了編碼具有表4(見下)所列氨基酸序列的蛋白質(zhì)的核酸，并進(jìn)行表達(dá)?？捎糜诒磉_(dá)的編碼序列的實(shí)例在表5中提供。表4編碼上述蛋白質(zhì)的示例性核酸序列在表5中列出。在一些實(shí)施方案中，該核酸序列在下面所列的第一個(gè)核苷酸前進(jìn)一步包含atg。在一些實(shí)施方案中，該核酸序列在下面所列的最后一個(gè)核苷酸后進(jìn)一步包含終止密碼子(諸如taa、tag或tga)。表5蛋白質(zhì)可包含如下所示的來自il-1β和il-1ra的一系列不同殘基。在實(shí)例p01、p02、p03、p04和p05之中，細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域可具有48-70％來自il-1β的殘基以及55-78％來自il-1ra的殘基。(由于大量氨基酸殘基在這兩種蛋白質(zhì)之間是保守的，因此與il-1β以及與il-1ra的百分比同一性的總和可大于100％。)表6實(shí)施例2通過在37℃下在lb肉湯培養(yǎng)基中用1mmiptg誘導(dǎo)3小時(shí)，在大腸桿菌細(xì)胞bl21(des)菌株中表達(dá)了含有六組氨酸標(biāo)記的蛋白質(zhì)。將細(xì)胞在20-50mmtris、0.5mnacl、2.5mmedta、0.1％tritonx-100(ph8.0)中裂解。使用預(yù)裝填柱(gehealthcare,piscatawaynj,usa)將裂解液進(jìn)行imac層析。將蛋白質(zhì)上樣到20mm磷酸鈉、0.5mnacl、10mm咪唑的ph7.4緩沖液中。將其用200mm咪唑、20mm磷酸鈉、0.5mnacl的ph7.4緩沖液洗脫。將洗脫出的蛋白質(zhì)對(duì)pbs、0.1％聚山梨醇酯80(ph7.4)作廣泛透析，使用amicon(10k)過濾器濃縮，并在4℃或-80℃下保存。不含六組氨酸標(biāo)記的蛋白質(zhì)通過離子交換層析純化。p05蛋白質(zhì)通過離子交換層析純化。將得自表達(dá)細(xì)胞的裂解物在不存在鹽的情況下(電導(dǎo)率約1ms/cm)在低ph(約ph5.5)下施加到gigacapstm柱(tosohbiosciencellc,kingofprussia,pa,usa)上。然后通過ph梯度(緩沖液a＝10mm乙酸，ph5.5；緩沖液b＝20mmtrisph8)對(duì)柱進(jìn)行洗脫。然后將含有洗脫蛋白的5ml餾分用5mlh2o和5ml20mmtris(ph8)洗脫，并然后施加到captoqtm樹脂(gehealthcare,piscatawaynj,usa)上，并用20mmtris(ph8.0)中的0mm至250mmnacl梯度進(jìn)行洗脫。將洗脫出的蛋白質(zhì)對(duì)1.25xpbs0.1％80或不含的1.25xpbs作廣泛透析，并保存。參見圖6。將p03和p04蛋白質(zhì)用相似的方法純化。使表達(dá)p05的細(xì)胞還在sartorius2lbiostattma+中的補(bǔ)充了10g/l葡萄糖、10mmmgso4、微量元素(1mg/mlteknovatm1000x微量元素，#t1001)和抗生素的含非動(dòng)物源大豆胨的teknovatm極品肉湯(#t7660)中生長(zhǎng)，并用1mmiptg在od35-40下誘導(dǎo)約6小時(shí)。細(xì)胞在以下條件下生長(zhǎng)：37℃，含30％溶解氧，ph7.0，200-800rpm的攪拌，以及2l/min的氧氣曝氣。在通過ph升高所檢測(cè)的葡萄糖耗盡時(shí)，向細(xì)胞進(jìn)給9g葡萄糖/l/h。當(dāng)ph降低時(shí)(誘導(dǎo)后約2.5小時(shí))，將進(jìn)料降低到6g葡萄糖/l/h。收集細(xì)胞，在裂解緩沖液(20mmtris，10mmedta，0.1％triton，ph8.0；20mmtris，10mmedta，0.1％triton，ph7.0；50mmmops，10mmedta，0.1％triton，ph6.5或50mmmops，10mmedta，0.1％triton，ph6.0)中裂解。在ph5.3和3ms/cm(35mg產(chǎn)物每毫升柱樹脂)下將裂解液上樣到poros陽離子交換介質(zhì)(lifetechnologiescorp.,carlsbadcausa)。在示例性程序中，使用ph7.0的含100mmmops25mmnacl的緩沖液通過一個(gè)步驟將p05蛋白質(zhì)洗脫到ph7.0。將第一個(gè)洗脫峰丟棄，并對(duì)第二個(gè)洗脫峰合并收集，并且其包含p05蛋白質(zhì)。早期的合并液相對(duì)于des-ala形式而言富含完整p05蛋白質(zhì)。然后使該洗脫出的材料流經(jīng)captoqtm陰離子交換樹脂。收集包含完整p05蛋白質(zhì)的穿柱液(flowthrough)。在另一示例性程序中，將介質(zhì)用100mmmops20mmnacl(ph6.0)洗滌。使用ph6.0的含100mmmops50-58mmnacl的緩沖液通過一個(gè)步驟將p05蛋白質(zhì)洗脫到ph6.0。將第一洗脫峰與后續(xù)峰分離，并且其包含完整p05蛋白質(zhì)。然后使該洗脫出的材料流經(jīng)captoqtm陰離子交換樹脂。收集包含完整p05蛋白質(zhì)的穿柱液。實(shí)施例3可在基于細(xì)胞的測(cè)定中評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)或包含蛋白質(zhì)的上清液的il-1活性。hek-bluetmil-1β反應(yīng)性細(xì)胞用于監(jiān)測(cè)il-1β活性(可得自invivogeninc.,sandiegoca,usa)。這些細(xì)胞包含處于與五個(gè)nf-κb和五個(gè)ap-1結(jié)合位點(diǎn)融合的ifn-β最小啟動(dòng)子控制之下的seap報(bào)告基因。il-1β接合細(xì)胞表面上的il-1受體導(dǎo)致nf-κb的活化以及seap產(chǎn)生。seap報(bào)告可例如使用quanti-bluetm(invivogeninc.,sandiegoca,usa)和分光光度分析進(jìn)行檢測(cè)。通過培養(yǎng)到70-80％匯合度的細(xì)胞制備hek-blueil-1β細(xì)胞懸液。將重懸的細(xì)胞在新鮮生長(zhǎng)培養(yǎng)基(dmem，4.5g/l葡萄糖，2mml-谷氨酰胺，10％(v/v)熱滅活胎牛血清(在56℃下30min)，50u/ml青霉素，50μg/ml鏈霉素，100μg/mlnormocint)中調(diào)整到約330,000個(gè)細(xì)胞/ml。將以下試劑加到平底96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的孔中：10μl20ng/ml的il-1β、1μl所關(guān)注的藥劑以及30μl細(xì)胞培養(yǎng)基，得到50μl的最終體積。平行地制備陽性和陰性對(duì)照樣本。然后，將150μlhek-blueil-1β細(xì)胞懸液(約50,000個(gè)細(xì)胞)加到各孔中，并將板在37℃下在5％co2的組織培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。一般來講，最終il-1β濃度(以200μl最終體積)為0.1ng/ml。隔日(12-15小時(shí)后)評(píng)價(jià)il-1β活性。在定量前，根據(jù)制造商說明制備quanti-bluetm試劑。準(zhǔn)備平底96孔測(cè)定板，其中向每個(gè)孔中加入150μlquanti-bluetm溶液。將來自96孔組織培養(yǎng)板的孔中的50μl條件培養(yǎng)基加到測(cè)定板的每個(gè)孔中。將板在37℃下孵育約15-20分鐘。然后使用分光光度計(jì)在620-655nm處測(cè)量seap水平。結(jié)果.如圖7a所示，在該測(cè)定中，p06蛋白質(zhì)表現(xiàn)為il-1ri激動(dòng)劑，p07蛋白質(zhì)表現(xiàn)為部分激動(dòng)劑，而p01蛋白質(zhì)則未能起到激動(dòng)作用。事實(shí)上，在il-1β存在下進(jìn)行測(cè)定時(shí)p01蛋白質(zhì)表現(xiàn)為拮抗劑。圖7b顯示使用以上的hekbluetm細(xì)胞測(cè)定，在一定范圍的il-1β蛋白濃度下p01拮抗il-1β活性。隨著p01的量增加，拮抗作用增強(qiáng)(x軸反映含有p01的上清液的微升數(shù))。蛋白質(zhì)p01、p02、p03、p04和p05每一者都會(huì)拮抗il-1β活性。例如，參見圖8a和8b。p05的ic50小于約5ng/ml。在該測(cè)定中測(cè)試了p05激動(dòng)il-1ri的能力，并且甚至在所測(cè)試的最高濃度(1mg/ml)下也未觀察到具有任何可檢測(cè)的激動(dòng)活性。p01、p02、p03、p04和p05還抑制了mg-63細(xì)胞(響應(yīng)il-1β的人骨肉瘤細(xì)胞系)中il-1β誘導(dǎo)的il-6表達(dá)。在干眼病鼠模型中，觀察到了六組氨酸標(biāo)記的p05具有生物活性。關(guān)于未標(biāo)記的p05，另見下文實(shí)施例8。實(shí)施例4通過reichertsr7000dc雙通道spr系統(tǒng)，采用表面等離子體共振評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)對(duì)可溶性重組人il-1ri(對(duì)應(yīng)于il-1ri的胞外域)的結(jié)合性質(zhì)。在含有0.005％tween20的磷酸緩沖鹽水中對(duì)結(jié)合進(jìn)行評(píng)價(jià)。據(jù)觀察，il-1β具有8-9nm的kd和2-3×10-3s-1的解離常數(shù)(kd)以及在另一實(shí)驗(yàn)中約2nm的kd、1.3-1.5×106m-1s-1的締合常數(shù)和約2.9-3.0×10-3s-1的解離常數(shù)(kd)。參見圖9a。p01蛋白質(zhì)以與il-1β類似的締合動(dòng)力學(xué)結(jié)合，但在結(jié)合實(shí)驗(yàn)的解離階段(約180秒)中不解離。因此，在相似的條件下，p01蛋白質(zhì)以高于il-1β的親和力與il-1ri結(jié)合。據(jù)觀察，il-1ra的結(jié)合具有約0.33nm的kd、約2×105m-1s-1的締合常數(shù)(ka)和約6.6×10-5s-1的解離常數(shù)(kd)。參見圖9b。據(jù)觀察，嵌合細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)域p01、p02、p03、p04和p05具有約12-1700pm范圍內(nèi)的kd、約3×104m-1s-1至3×106m-1s-1范圍內(nèi)的締合常數(shù)(ka)以及約2×10-5至1×10-3s-1范圍內(nèi)的解離常數(shù)(kd)。參見例如圖9c和9d以及下文的表7。表7蛋白質(zhì)ka(m-1s-1)kd(s-1)kd(pm)il-1β1.47×106m-1s-12.95×10-3s-12010il-1ra2.01×105m-1s-16.58×10-5s-1326p014.93×104m-1s-12.32×10-5s-1470p023.39×104m-1s-12.16×10-5s-1636p034.1×106m-1s-11.2×10-3s-1290p043.00×104m-1s-15.14×10-4s-11714p053.47×106m-1s-14.15×10-5s-112p064.8×106m-1s-11.7×10-3s-1410p071.58×104m-1s-11.46×10-3s-192553實(shí)施例5另外的示例性嵌合il-1家族蛋白質(zhì)還包括以下這些：以下多肽是包含來自il-1α的至少兩個(gè)片段以及來自il-1ra的至少兩個(gè)片段的嵌合結(jié)構(gòu)域。實(shí)施例6可通過利用接頭序列并為各末端選擇新的位置將分子的n端連接到c端，從而建構(gòu)循環(huán)排列的il-1嵌合結(jié)構(gòu)域。對(duì)于具有衍生自il-1β的末端的蛋白，接頭長(zhǎng)度可為五至十個(gè)氨基酸，例如，約七個(gè)氨基酸。新末端的優(yōu)選位置位于背對(duì)受體的環(huán)中，諸如β6-β7環(huán)(例如，對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第71-80位的氨基酸)或β7-β8環(huán)(例如，對(duì)應(yīng)于seqidno:1的第84-99位的氨基酸)。此類循環(huán)排列的il-1嵌合結(jié)構(gòu)域的實(shí)例包括：dkptlqlesvdpknypkkkmekrfvfnkieinnklefesaqfpnwflctameadqpvsltnmpdegvmvtkfymqfvssggsgggsapvrslncriwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleekfsmsfvqgeesndkipvalglkeknlylscvlkd(seqidno：40)和nypkkkmekrfvfnkieinnklefesaqfpnwflctameadqpvsltnmpdegvmvtkfymqfvssggsgggsapvrslncriwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleekfsmsfvqgeesndkipvalglkeknlylscvlkddkptlqlesvdpk(seqidno：41)實(shí)施例7以0.5mg/ml的濃度，在ph7.4的磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)中制備蛋白質(zhì)p03、p04、p05、mil-1ra(甲硫氨?；鵬l-1ra)和il-1β。將蛋白質(zhì)與sypro橙色染料(invitrogen，ca)以1∶500稀釋的儲(chǔ)備濃度合并，并進(jìn)行差示掃描熒光分析。參見例如，he等(2010)j.pharm.sciences，991707-1720。使用agilentmx3005qpcr儀器隨著溫度以每分鐘1℃的速率從25℃升至95℃監(jiān)測(cè)熒光測(cè)量值。解鏈溫度(tm)值由熒光躍遷一階導(dǎo)數(shù)的最大值得出。據(jù)觀察，蛋白質(zhì)p03、p04和p05在高于50℃以及高達(dá)59℃時(shí)開始解折疊，并具有高于59、60、62和64℃的tm。結(jié)果在下表8以及圖10a和10b中示出：表8蛋白質(zhì)tm(℃)開始解折疊(℃)mil-1ra5648il-1β5641p036559p046051p056559p04具有比mil-1ra和il-1β高約4度的tm，并表現(xiàn)出比mil-1ra高約3度以及比il-1β高約10度的解折疊開始溫度。p03和p05具有比mil-1ra和il-1β高約9度的tm，并表現(xiàn)出比mil-1ra高約11度以及比il-1β高約18度的解折疊開始溫度。實(shí)施例8將純化的p05(不含六組氨酸標(biāo)記)在1.25xpbs中制備并在干眼病鼠模型中進(jìn)行測(cè)試。在該模型中，將6至10周齡的得自jackson實(shí)驗(yàn)室的雌性c57bl/6小鼠(在具有≥30％相對(duì)濕度、水凝膠食品補(bǔ)充劑和envirodry環(huán)境豐富的動(dòng)物房中馴養(yǎng)1至2周)在第0天進(jìn)行熒光素染色預(yù)篩選。對(duì)于熒光素染色，將以10mg/ml稀釋在wfih2o中的現(xiàn)制熒光素以0.4μl施用給每只眼睛。施用后約8-13分鐘，使用olympus熒光解剖顯微鏡對(duì)眼睛評(píng)分。利用0-3級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)化美國(guó)國(guó)家眼科研究所(nei)分級(jí)系統(tǒng)，針對(duì)被分成五個(gè)區(qū)域的角膜表面中的每個(gè)區(qū)域，記錄點(diǎn)狀染色(評(píng)分范圍0-15分/眼)。使用教學(xué)橋牌，兩名盲性評(píng)分者同時(shí)對(duì)小鼠進(jìn)行評(píng)價(jià)以給出各眼的單個(gè)總分?jǐn)?shù)。將各眼分?jǐn)?shù)≤7的小鼠(在最大分15之外)在第1天置于干眼病室內(nèi)(20％±2％濕度和約21l/min/籠的恒定氣流量)，并在實(shí)驗(yàn)過程中保持在該室內(nèi)(檢查時(shí)除外)。在第3天，對(duì)小鼠再次評(píng)分并隨機(jī)分到每組具有8至10只小鼠的處理組中。將小鼠隨機(jī)化分配，使得具有4至5只小鼠的各籠具有大約相同的平均疾病分?jǐn)?shù)。從第3天開始并在隨機(jī)化后，以3μl/眼向小鼠局部施用滴眼劑中的p05或媒介物(1.25xpbs)，頻率為每日兩次(bid)。在第7、9和11天時(shí)針對(duì)如上所述的角膜熒光素染色，對(duì)小鼠進(jìn)行檢查并進(jìn)行評(píng)分。評(píng)分者在該實(shí)驗(yàn)的過程中對(duì)處理組是盲性的。圖11a是在接受下列每日兩次(bid)處理的來自兩個(gè)相同實(shí)驗(yàn)的小鼠在第0、3、7、9和11天時(shí)的平均角膜染色評(píng)分±sem的條形圖：無處理、媒介物(1.25xpbs)和10mg/ml(1％)p05。10mg/mlp05在實(shí)驗(yàn)的第7、9和11天明顯減少了角膜染色。在低至0.1mg/mlp05的劑量下也觀察到了由角膜染色減少所評(píng)價(jià)的功效。在大腸桿菌中產(chǎn)生的重組il-1ra也在該動(dòng)物模型中適度減少了角膜染色。如圖11b所示，基于與相同媒介物中10mg/ml鼠血清白蛋白的比較，10mg/mlp05的效果為特異性的。10mg/ml鼠血清白蛋白(msa)相對(duì)于媒介物并未觀察到效果，而10mg/mlp05的效果相對(duì)于10mg/ml鼠血清白蛋白具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。如圖11c所示，還將10mg/mlp05與眼用乳劑中0.05％的環(huán)孢霉素進(jìn)行了比較。p05減少了角膜染色，而0.05％環(huán)孢霉素眼用乳劑在約1周的每日兩次(bid)給藥后并未觀察到效果。實(shí)施例9開發(fā)了捕獲步驟用于純化通過在blr(de3)大腸桿菌細(xì)胞中發(fā)酵而產(chǎn)生的p05。洗脫條件通過在1ml柱上的統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方法(doe)而定義。優(yōu)化的條件以中等規(guī)模(10ml柱)進(jìn)行。將產(chǎn)物在由20mmtris(ph7.0)與添加的10mmedta組成的裂解緩沖液中通過微流化而提取。將澄清的裂解物調(diào)節(jié)到ph5.3以及3ms/cm的電導(dǎo)率。將調(diào)節(jié)后的裂解液上樣到porosxs(強(qiáng)陽離子交換樹脂)，停留時(shí)間為2min以達(dá)到25-30mgp05/ml柱的容量。將柱用平衡緩沖液洗滌以除去未結(jié)合的物質(zhì)。進(jìn)行ph6.0和3ms/cm下的第二次洗滌以除去多種雜質(zhì)。將產(chǎn)物在ph6.0和6.6ms/cm下洗脫。產(chǎn)物相關(guān)物質(zhì)在ph6.0和12.4ms/cm下洗脫。將柱用高鹽緩沖液和naoh清洗。p05為17kda蛋白質(zhì)，pi為6.58。des-ala形式的pi為6.8，并易于通過分析型弱陽離子交換層析而分離。該形式可能為存在于大腸桿菌中的氨基肽酶p活性的產(chǎn)物。它可通過質(zhì)譜、肽圖分析和hplc方法進(jìn)行鑒定。層析材料.porosxs基于名義粒度為50μm的交聯(lián)聚(苯乙烯-二乙烯苯)珠。層析基質(zhì)具有磺丙基表面化學(xué)并設(shè)計(jì)為耐受結(jié)合過程中的高鹽水平。porosxs(cn4404339,lifetechnologies)材料獲得為批量漿液并裝填到5×50mmtricorn柱(cn28-4064-09,gehealthcare)中達(dá)到1ml的最終柱體積(5cm床高)，或裝填到10×150mmtricorn柱(cn28-4064-16,gehealthcare)中達(dá)到10.5ml的最終體積(13.4cm床高)。緩沖液.所有緩沖液均通過milliq水定容制備。為了達(dá)到所需的ph，將10nhcl或1mnaoh(由10mnaoh儲(chǔ)液制成)加入以滴定緩沖液。制備好后，將所有緩沖液通過0.2μmpes瓶頂過濾器過濾。所有ph和電導(dǎo)率測(cè)量均在室溫(約20-25℃)下進(jìn)行。porosxs緩沖液：cex平衡緩沖液–10mm乙酸(hoac)及21mmnacl，通過每升緩沖液添加0.57ml冰醋酸和2.44gnacl而制備。最終ph為5.3，并且最終電導(dǎo)率為3ms/cm。cex洗滌緩沖液–100mmmops及22mmnacl，通過每升緩沖液添加19.5gmops游離酸、1.5gmops鈉鹽和1.28gnacl而制備。最終ph為5.7-6.6(根據(jù)需要)，并且最終電導(dǎo)率為3ms/cm。cex洗脫緩沖液–100mmmops及118mmnacl，通過每升緩沖液添加19.5gmops游離酸、1.5gmops鈉鹽和6.93gnacl而制備。最終ph為5.7-6.6(根據(jù)需要)，并且最終電導(dǎo)率為12.4ms/cm。cex再生緩沖液(stripbuffer)–10mm乙酸及3mnacl，通過每升緩沖液添加0.57ml冰醋酸和175gnacl而制備。最終ph為5.3，并且最終電導(dǎo)率為188ms/cm。裂解物制備.使用通過每升緩沖液混合11.5ml冰醋酸而制備的ph4.5的200mm乙酸調(diào)節(jié)裂解物的ph。使用1mnaoh將溶液滴定到4.5的最終ph。使用該溶液以避免因?yàn)闈馑峄驈?qiáng)酸的低ph而導(dǎo)致的局部沉淀。這些實(shí)驗(yàn)的上樣材料為來自2l分批補(bǔ)料生物反應(yīng)器運(yùn)行的提取物。使用20mmtris(ph7.0)及添加的10mmedta從細(xì)胞沉淀中提取產(chǎn)物。將新鮮提取物用milliq水稀釋到3ms/cm的電導(dǎo)率(通常按1:1-1.5稀釋)。將稀釋提取物以41ml等分試樣在-20℃下冷凍。為了制備上樣液，將等分試樣在室溫下解凍，并用200mm乙酸(ph4.5)滴定到ph5.3。滴定后根據(jù)需要通過添加milliq水對(duì)電導(dǎo)率進(jìn)行小幅調(diào)整。最后，使用cex平衡緩沖液將上樣液稀釋2.5倍，達(dá)到約1.7g/l的濃度。將上樣液通過0.8/0.2μm過濾器無菌過濾。調(diào)整后的上樣液在制備當(dāng)天使用。宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)測(cè)定.通過對(duì)大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)(cnf410,cygnustechnologies)特異的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)試劑盒測(cè)定宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)(hcp)水平。嚴(yán)格遵照與試劑盒一起提供的方案。將待測(cè)定hcp水平的樣本用樣本稀釋劑(cni028,cygnustechnologies)以10倍最低稀釋度稀釋。樣本通常以兩個(gè)稀釋度運(yùn)行，并且對(duì)于每個(gè)稀釋度一式兩份地進(jìn)行平板接種。hcp的水平以份每一百萬份(ppm)或ng-hcp/mg-產(chǎn)物表示。sds-page分析.對(duì)于通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)進(jìn)行的純化分析，使用1mm×10孔或1mm×15孔nupage4-12％bistris凝膠(分別為cnnp0322box和np0323box，invitrogen)。運(yùn)行緩沖液為由20×濃度(cnnp0002,invitrogen)制備的1×messds運(yùn)行緩沖液。將novexsharp預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(cn57318,invitrogen)用作分子量標(biāo)記。分析樣本通過用milliq水稀釋到30μl的最終體積而制備，并將10μl4×十二烷基硫酸鋰(lds)(cnnp0008,invitrogen)加入以達(dá)到1×終濃度。將樣本渦旋混合5s。基于通過a280/a320測(cè)量而計(jì)算出的蛋白濃度，每孔上樣3μg目標(biāo)物。wcex.采用以下層析條件通過弱陽離子交換層析(wcex)對(duì)p05進(jìn)行評(píng)價(jià)：dionexwcx-104x250mm柱(產(chǎn)品編號(hào)054993)，流速1.2ml/min，流動(dòng)相溶液10mm乙酸鈉(ph5.5)(緩沖液a)和10mm乙酸鈉(ph5.5)、250mmnacl(緩沖液b)。在20分鐘的時(shí)間內(nèi)從10％b至25％b運(yùn)行梯度。完整p05在梯度的靠后部分在des-ala形式前約1.5至2.5分鐘時(shí)洗脫。陽離子交換捕獲層析.在aktaexplorer100層析系統(tǒng)上進(jìn)行層析。裝填10mlporosxs柱。將材料以40mgp05/ml的濃度上樣，或可以25-30mgp05/ml的濃度上樣。層析方法在表9中匯總。在上樣和洗脫步驟中將停留時(shí)間保持恒定在2分鐘。制備模擬洗脫混合樣，并測(cè)定產(chǎn)物回收率、hcp水平和完整蛋白質(zhì)百分比。在ph6.0下以30％和35％的％b在10ml柱上完成總共2次運(yùn)行。表9第2次洗滌得到主要由雜質(zhì)組成的峰。通過30％和35％b進(jìn)行的第1次洗脫得到由sds-page分析的純度>95％的產(chǎn)物。第2次洗滌的鹽濃度可少量增加以除去洗脫峰上的肩峰。實(shí)施例10將p04純化，并在20℃下的25％peg1500、0.1mpcb(ph4.0)中長(zhǎng)成衍射質(zhì)量的晶體。蛋白質(zhì)在空間組p212121中結(jié)晶，其中典型的單位晶胞尺寸為a＝44.5、b＝46.4、c＝64.8。晶體衍射至高分辨率，并在advancedphotonsource，光束線ls-cat21id-f(chicagoil,usa)處采集擴(kuò)展至的數(shù)據(jù)集。使用結(jié)合了來自pdb結(jié)構(gòu)1itb和1ira的已知il-1β和il-1ra結(jié)構(gòu)的相關(guān)部分的模型，通過分子置換解析p04的x射線結(jié)構(gòu)(vigers等,(1997)nature386:190-194和schreuder等，(1997)nature386:194-200)。最終模型精修(refine)到17.6％/20.4％的rwork/rfree，并包含一個(gè)p04分子(140個(gè)殘基)和98個(gè)水分子(表10)。p04殘基1-2、48-49和85-93在電子密度中不可見，并在最終模型中缺失。表10括號(hào)中的數(shù)字對(duì)應(yīng)于最高分辨率殼層(shell)rmerge＝∑hkl[∑i│ii-<i>│/∑iii]rwork＝∑hkl||fobs│-│fcalc||/∑hkl│fobs│其中fobs和fcalc是測(cè)得的和計(jì)算的結(jié)構(gòu)因子rfree由未用于精修的反射子集(5％)計(jì)算而得。p04晶體結(jié)構(gòu)具有與通過建模所預(yù)測(cè)的相似的折疊。該結(jié)構(gòu)的視圖在圖1中示出。兩種結(jié)構(gòu)的疊加圖在圖12a中示出。對(duì)于與各自親本分子上的相同殘基相對(duì)的il-1β和il-1ra片段，主鏈碳的rmsd為和p04具有至少一個(gè)獨(dú)特的鹽橋和兩個(gè)獨(dú)特的氫鍵，它們參與衍生自il-1β的殘基與衍生自il-1ra的對(duì)應(yīng)殘基之間的相互作用：(i)如圖12b中所示的glu39-lys64(來自il-1ra的glu39；來自il-1β的lys64)，(ii)如圖12c中所示的arg9-gln149(來自il-1ra的arg9；來自il-1β的gln149)，以及(iii)如圖12c中所示的ser152-lys40(來自il-1ra的ser152；來自il-1β的lys50)。這些獨(dú)特的相互作用可以對(duì)p04增加的熱穩(wěn)定性作出解釋，因?yàn)檫@些相互作用不存在于il-1β和il-1ra結(jié)構(gòu)中。這些相互作用中涉及到的殘基也存在于p03和p05中，這些蛋白質(zhì)同樣具有增加的熱穩(wěn)定性。其他實(shí)施方案在以下權(quán)利要求的范圍內(nèi)。序列表<110>十一生物治療股份有限公司（elevenbiotherapeutics,inc.）<120>嵌合il-1受體i型激動(dòng)劑和拮抗劑<130>d2046-7025wo<140>pct/us2011/045995<141>2011-07-29<15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