本發(fā)明屬于化學(xué)品毒性的生物檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體來講是涉及一種利用熱帶爪蟾胚胎測定化學(xué)品發(fā)育毒性的方法。
背景技術(shù)：
：熱帶爪蟾是負(fù)子蟾科下的一種青蛙。它們是爪蟾屬下唯一擁有二倍體基因組的，且已被dna序列，補(bǔ)充了非洲爪蟾成為遺傳學(xué)上的模式生物。特征是無舌,上叛有齒,耳咽管(歐氏管)匯合成一個(gè),僅有一耳咽管口,開口在上瓢的后端。顫骨很原始,蝶筋骨和副蝶骨癲合在一起。上穎骨退化,具有瘤合的前鋤骨。身體遍布粘液腺,因此很滑、后肢有五趾,趾簡有蹼,其中三趾生有黑色趁利的爪,故名爪蟾躲,籍牛保留側(cè)換器官,永遠(yuǎn)生活在水中,幼體從卵中孵出時(shí)已無外鰓。補(bǔ)充了非洲爪蟾成為遺傳學(xué)上的模式生物。與非洲爪蟾相比，熱帶爪蟾個(gè)體更小、生長周期更短(3-6個(gè)月)、產(chǎn)卵量更大(2000-3000個(gè))、基因組結(jié)構(gòu)(2倍體)更簡單和胚胎發(fā)育更快等優(yōu)點(diǎn)。因此熱帶爪蟾是發(fā)育生物學(xué)、胚胎學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)中重要的模式生物。與魚類相比，熱帶爪蟾與人類的親緣關(guān)系更近，更適合于進(jìn)行健康風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)。并且對于某些污染物，熱帶爪蟾更為敏感，熱帶爪蟾一年四季均可人工誘導(dǎo)排卵，并且產(chǎn)卵量大，保證了充足的實(shí)驗(yàn)材料。熱帶爪蟾胚胎非常適合進(jìn)行分子操作，目前不僅發(fā)展了針對爪蟾早期胚胎發(fā)育的成熟的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，如顯微注射、轉(zhuǎn)基因和熒光原位雜交等技術(shù)，而且大量針對熱帶爪蟾的特異性抗體甚至基因芯片等均可從商業(yè)途徑獲得。運(yùn)用爪蟾胚胎畸形表型特征，結(jié)合分子標(biāo)志物能夠靈敏地表征微污染水體的毒理學(xué)效應(yīng)。熱帶爪蟾在生態(tài)毒理學(xué)研究中具有廣闊的應(yīng)用前景。有研究表明，熱帶爪蟾蝌蚪可用于甲狀腺激素干擾物的篩選，并且由于熱帶爪蟾性成熟快等特點(diǎn)，在生殖毒性的研究中有明顯優(yōu)勢。在熱帶爪蟾作為模式生物發(fā)展日益成熟和毒理學(xué)體外測試方法需求強(qiáng)烈的雙重背景下，胚胎期的熱帶爪蟾將在毒理學(xué)研究中發(fā)揮更重要的作用。胚胎致畸實(shí)驗(yàn)是檢測污染物發(fā)育毒性的有效方法，用胚胎實(shí)驗(yàn)代替?zhèn)€體實(shí)驗(yàn)也是今后毒性檢測和毒理學(xué)研究的趨勢。爪蟾胚胎致畸實(shí)驗(yàn)(fetax)已被廣泛應(yīng)用于污染物和環(huán)境樣品毒性效應(yīng)的檢測。熱帶爪蟾在胚胎致畸實(shí)驗(yàn)中可以取代非洲爪蟾，不同濃度的污染物引起的胚胎畸形特征不同，這為污染物致畸機(jī)制的解析提供了形態(tài)學(xué)依據(jù)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種利用熱帶爪蟾胚胎測定化學(xué)品發(fā)育毒性的方法，檢測過程簡單，適應(yīng)性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，可對化學(xué)品產(chǎn)生的毒性進(jìn)行程度分級，直觀方便。本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種利用熱帶爪蟾胚胎測定化學(xué)品發(fā)育毒性的方法，主要包括以下步驟：(1)挑選合適的胚胎，然后用胚胎培養(yǎng)液清洗2-3次去除壞卵和雜質(zhì)后，置于胚胎培養(yǎng)液中，在25℃，無光照的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行靜置培養(yǎng)，在顯微鏡下挑選來自同一親本、正常發(fā)育比率達(dá)80％以上且發(fā)育時(shí)期一致的熱帶爪蟾胚胎，備用；(2)化學(xué)品毒性對比暴露實(shí)驗(yàn)：a.將待測的化學(xué)品溶于標(biāo)準(zhǔn)稀釋水中，分別配制成10mg/l、30mg/l、50mg/l的待測液裝入試劑瓶中，每個(gè)試劑瓶中裝待測液20ml，將試劑瓶用膜封口后置于2℃冰箱避光保存，備用；b.將挑選的熱帶爪蟾活體胚胎分為四組，每組10-20只，分別標(biāo)記為試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組3、對照組，每組的熱帶爪蟾活體胚胎生理情況無明顯差異，具有可比性；c.將試驗(yàn)組的胚胎進(jìn)行活體培養(yǎng)，然后給三組試驗(yàn)組中分別加入10mg/l、30mg/l、50mg/l的待測液，對照組繼續(xù)使用胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)，然后將所述的胚胎置于多功能培養(yǎng)箱中進(jìn)行暴露實(shí)驗(yàn)，光照12h，黑暗12h，24h后觀察每組是否有胚胎死亡，記錄死亡數(shù)據(jù)，將未死亡的胚胎取出后使用100mg/lms-222麻醉處理后，然后固定在6％的甲醛溶液中，備用；(3)使用解剖鏡觀察不同化學(xué)品濃度下胚胎的發(fā)育情況，通過顯微鏡照相系統(tǒng)獲取每只胚胎的特征圖像，并將試驗(yàn)組于對照組進(jìn)行比較，從而根據(jù)每組胚胎的畸形類型及表型特征體系對應(yīng)的畸形系數(shù)來判斷化學(xué)品的毒性程度。進(jìn)一步的，所述的挑選合適的胚胎是指挑選實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖的性成熟的熱帶爪蟾多對，熱帶爪蟾的各項(xiàng)生命體征正常，采用人工注射hcg(人絨毛膜促性腺激素)的方法誘導(dǎo)產(chǎn)卵，每只爪蟾都進(jìn)行兩次注射，初次注射20iu，36小時(shí)后，再次注射給雌性爪蟾注射130-150iu單位，雄性爪蟾注射100-120iu，從熱帶爪蟾的背部注射，注射完成后將雌雄個(gè)體進(jìn)行配對，待蛙抱對產(chǎn)卵結(jié)束后收集胚胎即可。進(jìn)一步的，所述的胚胎培養(yǎng)液的制備方法為：給300ml的ph為7-8的弱堿性的人工合成輸卵管液中加入100iu/ml的青霉素3-5ml、100μg/ml的鏈霉素1-3ml及10-15mg/ml的血清白蛋白20-30mg，震蕩搖勻充分溶解后加入人工合成輸卵管液定容至500ml，再給定容后的溶液中加入10mmnacl60ml、15mmkcl50ml、5-10μg/ml的植物多糖10ml，攪拌均勻，經(jīng)0.22μm過濾器過濾除菌，3-5℃溫度條件下儲(chǔ)存，即得到所述的胚胎培養(yǎng)液。進(jìn)一步的，所述的胚胎活體培養(yǎng)是指將每組的五只熱帶爪蟾活體胚胎和50ml的胚胎培養(yǎng)液置于玻璃培養(yǎng)皿中，放入恒溫培養(yǎng)箱中，溫度控制在20-25℃，24小時(shí)后更換胚胎培養(yǎng)液一次，連續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，觀察熱帶爪蟾胚胎的生理活性，取出死亡的胚胎，備用。進(jìn)一步的，所述的畸形類型是指主要表現(xiàn)為：眼睛畸形、泄殖腔畸形、鰭畸形、尾巴畸形、皮膚色素畸形。進(jìn)一步的，所述的畸形類型及表型特征體系是通過實(shí)驗(yàn)過程得到不同濃度的化學(xué)品污染的胚胎生育的畸形數(shù)據(jù)，并對畸形類型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，主要表現(xiàn)為：眼睛畸形、泄殖腔畸形、鰭畸形、尾巴畸形、皮膚色素畸形；然后根據(jù)畸形表型特征統(tǒng)計(jì)建立對應(yīng)的畸形程度分級(如表1所示)，從而根據(jù)對應(yīng)的化學(xué)品濃度數(shù)據(jù)建立毒性分級體系對應(yīng)不同毒性濃度的畸形系數(shù)(如表2所示)，確定所測化學(xué)品的對熱帶爪蟾的發(fā)育毒性強(qiáng)度。表1畸形程度分級表2毒性分級體系毒性程度輕度毒性中度毒性重度毒性畸形系數(shù)0-55-1010-15進(jìn)一步的，所述的畸形系數(shù)是指每個(gè)熱帶爪蟾胚胎的所有畸形部位的畸形程度分級的總和。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：通過挑選發(fā)育時(shí)期一致的熱帶爪蟾胚胎的胚胎，然后進(jìn)行化學(xué)品毒性對比暴露實(shí)驗(yàn)，通過顯微鏡照相系統(tǒng)獲取每只胚胎的特征圖像，從而根據(jù)每組胚胎的畸形類型及表型特征體系對應(yīng)的畸形系數(shù)來判斷化學(xué)品的毒性程度，所建立的胚胎的畸形類型及表型特征體系覆蓋全面，原理簡單，數(shù)據(jù)易整理，結(jié)果直觀。具體實(shí)施方式為便于對本發(fā)明的理解，下面將結(jié)合具體實(shí)施例為例做進(jìn)一步的解釋說明，實(shí)施例并不構(gòu)成對本發(fā)明實(shí)施例的限定。實(shí)施例1：一種利用熱帶爪蟾胚胎測定化學(xué)品發(fā)育毒性的方法，主要包括以下步驟：(1)挑選合適的胚胎，然后用胚胎培養(yǎng)液清洗2次去除壞卵和雜質(zhì)后，置于胚胎培養(yǎng)液中，在25℃，無光照的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行靜置培養(yǎng)，在顯微鏡下挑選來自同一親本、正常發(fā)育比率達(dá)80％以上且發(fā)育時(shí)期一致的熱帶爪蟾胚胎，備用；(2)化學(xué)品毒性對比暴露實(shí)驗(yàn)：a.將待測的化學(xué)品溶于標(biāo)準(zhǔn)稀釋水中，分別配制成10mg/l、30mg/l、50mg/l的待測液裝入試劑瓶中，每個(gè)試劑瓶中裝待測液20ml，將試劑瓶用膜封口后置于2℃冰箱避光保存，備用；b.將挑選的熱帶爪蟾活體胚胎分為四組，每組10只，分別標(biāo)記為試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組3、對照組，每組的熱帶爪蟾活體胚胎生理情況無明顯差異，具有可比性；c.將試驗(yàn)組的胚胎進(jìn)行活體培養(yǎng)，然后給三組試驗(yàn)組中分別加入10mg/l、30mg/l、50mg/l的待測液，對照組繼續(xù)使用胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)，然后將所述的胚胎置于多功能培養(yǎng)箱中進(jìn)行暴露實(shí)驗(yàn)，光照12h，黑暗12h，24h后觀察每組是否有胚胎死亡，記錄死亡數(shù)據(jù)，將未死亡的胚胎取出后使用100mg/lms-222麻醉處理后，然后固定在6％的甲醛溶液中，備用；(3)使用解剖鏡觀察不同化學(xué)品濃度下胚胎的發(fā)育情況，通過顯微鏡照相系統(tǒng)獲取每只胚胎的特征圖像，并將試驗(yàn)組于對照組進(jìn)行比較，從而根據(jù)每組胚胎的畸形類型及表型特征體系對應(yīng)的畸形系數(shù)來判斷化學(xué)品的毒性程度。其中，所述的挑選合適的胚胎是指挑選實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖的性成熟的熱帶爪蟾多對，熱帶爪蟾的各項(xiàng)生命體征正常，采用人工注射hcg(人絨毛膜促性腺激素)的方法誘導(dǎo)產(chǎn)卵，每只爪蟾都進(jìn)行兩次注射，初次注射20iu，36小時(shí)后，再次注射給雌性爪蟾注射130iu單位，雄性爪蟾注射100iu，從熱帶爪蟾的背部注射，注射完成后將雌雄個(gè)體進(jìn)行配對，待蛙抱對產(chǎn)卵結(jié)束后收集胚胎即可。所述的胚胎培養(yǎng)液的制備方法為：給300ml的ph為7的弱堿性的人工合成輸卵管液中加入100iu/ml的青霉素3ml、100μg/ml的鏈霉素1ml及10mg/ml的血清白蛋白20mg，震蕩搖勻充分溶解后加入人工合成輸卵管液定容至500ml，再給定容后的溶液中加入10mmnacl60ml、15mmkcl50ml、5μg/ml的植物多糖10ml，攪拌均勻，經(jīng)0.22μm過濾器過濾除菌，3℃溫度條件下儲(chǔ)存，即得到所述的胚胎培養(yǎng)液。所述的胚胎活體培養(yǎng)是指將每組的五只熱帶爪蟾活體胚胎和50ml的胚胎培養(yǎng)液置于玻璃培養(yǎng)皿中，放入恒溫培養(yǎng)箱中，溫度控制在20℃，24小時(shí)后更換胚胎培養(yǎng)液一次，連續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，觀察熱帶爪蟾胚胎的生理活性，取出死亡的胚胎，備用。所述的畸形類型是指主要表現(xiàn)為：眼睛畸形、泄殖腔畸形、鰭畸形、尾巴畸形、皮膚色素畸形。所述的畸形類型及表型特征體系是通過實(shí)驗(yàn)過程得到不同濃度的化學(xué)品污染的胚胎生育的畸形數(shù)據(jù)，并對畸形類型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，主要表現(xiàn)為：眼睛畸形、泄殖腔畸形、鰭畸形、尾巴畸形、皮膚色素畸形；然后根據(jù)畸形表型特征統(tǒng)計(jì)建立對應(yīng)的畸形程度分級(如表1所示)，從而根據(jù)對應(yīng)的化學(xué)品濃度數(shù)據(jù)建立毒性分級體系對應(yīng)不同毒性濃度的畸形系數(shù)(如表2所示)，確定所測化學(xué)品的對熱帶爪蟾的發(fā)育毒性強(qiáng)度。所述的畸形系數(shù)是指每個(gè)熱帶爪蟾胚胎的所有畸形部位的畸形程度分級的總和。實(shí)施例2：一種利用熱帶爪蟾胚胎測定化學(xué)品發(fā)育毒性的方法，主要包括以下步驟：(1)挑選合適的胚胎，然后用胚胎培養(yǎng)液清洗2次去除壞卵和雜質(zhì)后，置于胚胎培養(yǎng)液中，在25℃，無光照的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行靜置培養(yǎng)，在顯微鏡下挑選來自同一親本、正常發(fā)育比率達(dá)80％以上且發(fā)育時(shí)期一致的熱帶爪蟾胚胎，備用；(2)化學(xué)品毒性對比暴露實(shí)驗(yàn)：a.將待測的化學(xué)品溶于標(biāo)準(zhǔn)稀釋水中，分別配制成10mg/l、30mg/l、50mg/l的待測液裝入試劑瓶中，每個(gè)試劑瓶中裝待測液20ml，將試劑瓶用膜封口后置于2℃冰箱避光保存，備用；b.將挑選的熱帶爪蟾活體胚胎分為四組，每組15只，分別標(biāo)記為試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組3、對照組，每組的熱帶爪蟾活體胚胎生理情況無明顯差異，具有可比性；c.將試驗(yàn)組的胚胎進(jìn)行活體培養(yǎng)，然后給三組試驗(yàn)組中分別加入10mg/l、30mg/l、50mg/l的待測液，對照組繼續(xù)使用胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)，然后將所述的胚胎置于多功能培養(yǎng)箱中進(jìn)行暴露實(shí)驗(yàn)，光照12h，黑暗12h，24h后觀察每組是否有胚胎死亡，記錄死亡數(shù)據(jù)，將未死亡的胚胎取出后使用100mg/lms-222麻醉處理后，然后固定在6％的甲醛溶液中，備用；(3)使用解剖鏡觀察不同化學(xué)品濃度下胚胎的發(fā)育情況，通過顯微鏡照相系統(tǒng)獲取每只胚胎的特征圖像，并將試驗(yàn)組于對照組進(jìn)行比較，從而根據(jù)每組胚胎的畸形類型及表型特征體系對應(yīng)的畸形系數(shù)來判斷化學(xué)品的毒性程度。其中，所述的挑選合適的胚胎是指挑選實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖的性成熟的熱帶爪蟾多對，熱帶爪蟾的各項(xiàng)生命體征正常，采用人工注射hcg(人絨毛膜促性腺激素)的方法誘導(dǎo)產(chǎn)卵，每只爪蟾都進(jìn)行兩次注射，初次注射20iu，36小時(shí)后，再次注射給雌性爪蟾注射140iu單位，雄性爪蟾注射110iu，從熱帶爪蟾的背部注射，注射完成后將雌雄個(gè)體進(jìn)行配對，待蛙抱對產(chǎn)卵結(jié)束后收集胚胎即可。所述的胚胎培養(yǎng)液的制備方法為：給300ml的ph為7的弱堿性的人工合成輸卵管液中加入100iu/ml的青霉素4ml、100μg/ml的鏈霉素2ml及12.5mg/ml的血清白蛋白25mg，震蕩搖勻充分溶解后加入人工合成輸卵管液定容至500ml，再給定容后的溶液中加入10mmnacl60ml、15mmkcl50ml、7.5μg/ml的植物多糖10ml，攪拌均勻，經(jīng)0.22μm過濾器過濾除菌，4℃溫度條件下儲(chǔ)存，即得到所述的胚胎培養(yǎng)液。所述的胚胎活體培養(yǎng)是指將每組的五只熱帶爪蟾活體胚胎和50ml的胚胎培養(yǎng)液置于玻璃培養(yǎng)皿中，放入恒溫培養(yǎng)箱中，溫度控制在22.5℃，24小時(shí)后更換胚胎培養(yǎng)液一次，連續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，觀察熱帶爪蟾胚胎的生理活性，取出死亡的胚胎，備用。所述的畸形類型是指主要表現(xiàn)為：眼睛畸形、泄殖腔畸形、鰭畸形、尾巴畸形、皮膚色素畸形。所述的畸形類型及表型特征體系是通過實(shí)驗(yàn)過程得到不同濃度的化學(xué)品污染的胚胎生育的畸形數(shù)據(jù)，并對畸形類型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，主要表現(xiàn)為：眼睛畸形、泄殖腔畸形、鰭畸形、尾巴畸形、皮膚色素畸形；然后根據(jù)畸形表型特征統(tǒng)計(jì)建立對應(yīng)的畸形程度分級，從而根據(jù)對應(yīng)的化學(xué)品濃度數(shù)據(jù)建立毒性分級體系對應(yīng)不同毒性濃度的畸形系數(shù)，確定所測化學(xué)品的對熱帶爪蟾的發(fā)育毒性強(qiáng)度。所述的畸形系數(shù)是指每個(gè)熱帶爪蟾胚胎的所有畸形部位的畸形程度分級的總和。實(shí)施例3：一種利用熱帶爪蟾胚胎測定化學(xué)品發(fā)育毒性的方法，主要包括以下步驟：(1)挑選合適的胚胎，然后用胚胎培養(yǎng)液清洗3次去除壞卵和雜質(zhì)后，置于胚胎培養(yǎng)液中，在25℃，無光照的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行靜置培養(yǎng)，在顯微鏡下挑選來自同一親本、正常發(fā)育比率達(dá)80％以上且發(fā)育時(shí)期一致的熱帶爪蟾胚胎，備用；(2)化學(xué)品毒性對比暴露實(shí)驗(yàn)：a.將待測的化學(xué)品溶于標(biāo)準(zhǔn)稀釋水中，分別配制成10mg/l、30mg/l、50mg/l的待測液裝入試劑瓶中，每個(gè)試劑瓶中裝待測液20ml，將試劑瓶用膜封口后置于2℃冰箱避光保存，備用；b.將挑選的熱帶爪蟾活體胚胎分為四組，每組20只，分別標(biāo)記為試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組3、對照組，每組的熱帶爪蟾活體胚胎生理情況無明顯差異，具有可比性；c.將試驗(yàn)組的胚胎進(jìn)行活體培養(yǎng)，然后給三組試驗(yàn)組中分別加入10mg/l、30mg/l、50mg/l的待測液，對照組繼續(xù)使用胚胎培養(yǎng)液培養(yǎng)，然后將所述的胚胎置于多功能培養(yǎng)箱中進(jìn)行暴露實(shí)驗(yàn)，光照12h，黑暗12h，24h后觀察每組是否有胚胎死亡，記錄死亡數(shù)據(jù)，將未死亡的胚胎取出后使用100mg/lms-222麻醉處理后，然后固定在6％的甲醛溶液中，備用；(3)使用解剖鏡觀察不同化學(xué)品濃度下胚胎的發(fā)育情況，通過顯微鏡照相系統(tǒng)獲取每只胚胎的特征圖像，并將試驗(yàn)組于對照組進(jìn)行比較，從而根據(jù)每組胚胎的畸形類型及表型特征體系對應(yīng)的畸形系數(shù)來判斷化學(xué)品的毒性程度。其中，所述的挑選合適的胚胎是指挑選實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖的性成熟的熱帶爪蟾多對，熱帶爪蟾的各項(xiàng)生命體征正常，采用人工注射hcg(人絨毛膜促性腺激素)的方法誘導(dǎo)產(chǎn)卵，每只爪蟾都進(jìn)行兩次注射，初次注射20iu，36小時(shí)后，再次注射給雌性爪蟾注射150iu單位，雄性爪蟾注射120iu，從熱帶爪蟾的背部注射，注射完成后將雌雄個(gè)體進(jìn)行配對，待蛙抱對產(chǎn)卵結(jié)束后收集胚胎即可。所述的胚胎培養(yǎng)液的制備方法為：給300ml的ph為8的弱堿性的人工合成輸卵管液中加入100iu/ml的青霉素5ml、100μg/ml的鏈霉素3ml及15mg/ml的血清白蛋白30mg，震蕩搖勻充分溶解后加入人工合成輸卵管液定容至500ml，再給定容后的溶液中加入10mmnacl60ml、15mmkcl50ml、10μg/ml的植物多糖10ml，攪拌均勻，經(jīng)0.22μm過濾器過濾除菌，5℃溫度條件下儲(chǔ)存，即得到所述的胚胎培養(yǎng)液。所述的胚胎活體培養(yǎng)是指將每組的五只熱帶爪蟾活體胚胎和50ml的胚胎培養(yǎng)液置于玻璃培養(yǎng)皿中，放入恒溫培養(yǎng)箱中，溫度控制在25℃，24小時(shí)后更換胚胎培養(yǎng)液一次，連續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，觀察熱帶爪蟾胚胎的生理活性，取出死亡的胚胎，備用。所述的畸形類型是指主要表現(xiàn)為：眼睛畸形、泄殖腔畸形、鰭畸形、尾巴畸形、皮膚色素畸形。所述的畸形類型及表型特征體系是通過實(shí)驗(yàn)過程得到不同濃度的化學(xué)品污染的胚胎生育的畸形數(shù)據(jù)，并對畸形類型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，主要表現(xiàn)為：眼睛畸形、泄殖腔畸形、鰭畸形、尾巴畸形、皮膚色素畸形；然后根據(jù)畸形表型特征統(tǒng)計(jì)建立對應(yīng)的畸形程度分級，從而根據(jù)對應(yīng)的化學(xué)品濃度數(shù)據(jù)建立毒性分級體系對應(yīng)不同毒性濃度的畸形系數(shù)，確定所測化學(xué)品的對熱帶爪蟾的發(fā)育毒性強(qiáng)度。所述的畸形系數(shù)是指每個(gè)熱帶爪蟾胚胎的所有畸形部位的畸形程度分級的總和。現(xiàn)根據(jù)以上三種實(shí)施例對含有不同毒性化學(xué)物質(zhì)的水溶液進(jìn)行檢測，并測試其相同濃度下的毒性程度。1.水樣制備：首先人工制備重金屬汞、鉛、鎘、銅污染水樣。在人工配制汞污染水樣時(shí)，于雙蒸水中分別加入氯化汞標(biāo)準(zhǔn)液，使水樣中的汞含量分別為0.15mg/l。按上述方法分別利用硝酸鉛、氯化鎘、硫酸銅配制重金屬鉛、鎘、銅的人工污染水樣。單獨(dú)或混合重金屬污染水樣的配制如下：①濃度0.03mg/l的汞污染水樣；②濃度為0.05mg/l的鉛污染水樣；③濃度為0.05mg/l的鎘污染水樣；④濃度為0.05mg/l的銅污染水樣；⑤自來水樣。2.熱帶爪蟾發(fā)育毒性試驗(yàn)：將制備的水樣分別使用實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3進(jìn)行本發(fā)明的發(fā)育毒性試驗(yàn)，將不同化學(xué)品的水溶液毒性進(jìn)行試驗(yàn)并得出，得到的數(shù)據(jù)如下表：從上表可以得出，在熱帶爪蟾對化學(xué)品生育毒性檢測中，汞的屬于重度毒性，鉛、鎘屬于中度毒性且鉛的毒性要強(qiáng)于鎘，銅屬于輕度毒性。最后說明：采用上述技術(shù)方案是為了便于理解本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明還可以有其他實(shí)施例，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員當(dāng)可根據(jù)本發(fā)明做出各種相應(yīng)的改變和變形，但這些相應(yīng)的改變和變形都屬于本發(fā)明的權(quán)利要求的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁12