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一種細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料及其制備方法與應(yīng)用與流程

文檔序號:12692643閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料,其特征在于其結(jié)構(gòu)如通式(1)所示:

其中,R1為芐基、烷基或聚乙二醇,n為聚合度,x為側(cè)鏈不含雙鍵的重復(fù)單元的聚合度,且x<n。

2.一種權(quán)利要求1所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料的制備方法,其特征在于包括四步合成反應(yīng):(1)L-半胱氨酸與溴丙炔的親核取代反應(yīng)制備S-炔丙基-L-半胱胺酸;(2)制備S-炔丙基-L-半胱氨酸-N-羧基環(huán)內(nèi)酸酐單體;(3)引發(fā)S-炔丙基-L-半胱氨酸-N-羧基環(huán)內(nèi)酸酐單體開環(huán)聚合,得到聚(S-炔丙基-L-半胱胺酸);(4)通過光化學(xué)點(diǎn)擊技術(shù)將聚(S-炔丙基-L-半胱胺酸)側(cè)鏈改性,制備水溶性的陽離子多肽。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料的制備方法,其特征在于具體包括以下四個(gè)步驟:

(1)L-半胱氨酸與溴丙炔發(fā)生取代反應(yīng),生成側(cè)鏈含有C≡C鍵的S-炔丙基-L-半胱氨酸;

(2)步驟(1)得到的S-炔丙基-L-半胱氨酸和三光氣在乙酸乙酯中發(fā)生閉環(huán)反應(yīng),生成S-炔丙基-L-半胱氨酸-N-羧基環(huán)內(nèi)酸酐;

(3)利用端基為伯氨基的引發(fā)劑引發(fā)步驟(2)的S-炔丙基-L-半胱氨酸-N-羧基環(huán)內(nèi)酸酐單體開環(huán)聚合,得到側(cè)鏈含C≡C鍵的多肽聚(S-炔丙基-L-半胱胺酸);

(4)利用“巰基-炔”光化學(xué)點(diǎn)擊技術(shù),將半胱胺鹽酸鹽接枝到步驟(3)的多肽聚(S-炔丙基-L-半胱胺酸)的側(cè)鏈,得到陽離子多肽。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料的制備方法,其特征在于:步驟(1)中溴丙炔與L-半胱氨酸的摩爾比為1:1.1~1:2.0;所述反應(yīng)時(shí)間為2~3h。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料的制備方法,其特征在于:步驟(1)具體為向溶有L-半胱氨酸的氨水溶液中滴加溴丙炔進(jìn)行反應(yīng);氨水的濃度為3.0~4.0M。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料的制備方法,其特征在于:步驟(2)中所述S-炔丙基-L-半胱氨酸和三光氣的反應(yīng)摩爾比例為3:1;所述反應(yīng)溫度控制在80~90℃;反應(yīng)時(shí)間為3~6h。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料的制備方法,其特征在于:步驟(3)中所述的引發(fā)劑為芐胺、丙胺、正丁胺、正戊胺、正己胺和端基為伯氨基的聚乙二醇中的至少一種;所述聚合溫度控制在0~25℃,聚合時(shí)間為36~72h。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料的制備方法,其特征在于:步驟(4)中所述多肽側(cè)鏈的炔基和半胱胺鹽酸鹽的巰基的摩爾比為1:2~1:4。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料的制備方法,其特征在于:步驟(4)具體為將步驟(3)中的多肽和半胱胺鹽酸鹽分別溶于二甲基亞砜中,混合后加入光引發(fā)劑安息香雙甲醚,在紫外光的照射下反應(yīng);紫外光的最大吸收波長為365nm,光強(qiáng)為4mW·cm-2,功率為4W,光照時(shí)間為10~30min。

10.權(quán)利要求1所述的細(xì)胞毒性低、轉(zhuǎn)染效率高的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體材料在siRNA遞送中的應(yīng)用。

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