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一種檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒及其制備方法與流程

文檔序號:12697747閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒:其特征在于包括:標(biāo)準(zhǔn)品、引物、含有熒光染料的qPCR擴(kuò)增試劑;所述標(biāo)準(zhǔn)品為包含JAG2 rs741859(c*1053G>A)位點的野生型DNA序列和包含JAG2 rs741859(c*1053G>A)位點的純合突變型DNA序列;所述引物用于擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測樣品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒,其特征在于:所述野生型DNA序列為序列W;所述純合突變型DNA序列為序列M。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒,其特征在于:所述標(biāo)準(zhǔn)品為連接有序列W的質(zhì)粒和連接有序列M的質(zhì)粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒,其特征在于:所述引物為JAG2-F和JAG2-R。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒,其特征在于:所述含有熒光染料的qPCR擴(kuò)增試劑為生工生物工程(上海)股份有限公司所產(chǎn)的含EvaGreen的Green-2-Go qPCR Mastermix試劑盒。

6.一種如權(quán)利要求1所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒的制備方法,其特征在于包括如下步驟:

1)引物設(shè)計與合成

根據(jù)JAG2 rs741859基因序列,應(yīng)用Primer express 3軟件、Primer Premier 5軟件以及Oligo 7軟件,設(shè)計一組引物;

2)制備標(biāo)準(zhǔn)品

A、合成含有JAG2 rs741859(c*1053G>A)位點的野生型DNA序列和純合突變型DNA序列;

B、將野生型DNA序列和純合突變型DNA序列分別與質(zhì)粒連接;將連接后的質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌中;培養(yǎng)細(xì)菌并且獲得陽性克??;

C、擴(kuò)大培養(yǎng)步驟B所獲得的陽性克隆,提取質(zhì)粒得到標(biāo)準(zhǔn)品;

3)選購或配制含有熒光染料的qPCR擴(kuò)增試劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒的制備方法,其特征在于步驟B中所述的質(zhì)粒為pMD18-T質(zhì)粒。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒的制備方法,其特征在于:所述野生型DNA序列為序列W;所述純合突變型DNA序列為序列M。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒的制備方法,其特征在于:步驟B中將序列W或序列M分別與pMD18-T質(zhì)粒連接,所采用的連接體系為:

連接的反應(yīng)時間為10-16小時,反應(yīng)溫度為16℃。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測JAG2基因SNP位點rs741859基因型的試劑盒的制備方法,其特征在于:步驟C的具體操作為將陽性克隆接種于含有氨芐抗性的LB液體培養(yǎng)基中,溫度為37℃攪拌速度為220rpm培養(yǎng)14-16h;再從菌體中提取質(zhì)粒獲得標(biāo)準(zhǔn)品。

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