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一種促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞生長的方法與流程

文檔序號(hào):12778841閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長的方法,其特征在于,包括如下步驟:將腫瘤細(xì)胞與CD45+CD215+細(xì)胞和IL15細(xì)胞因子共培養(yǎng);

其中,所述腫瘤細(xì)胞為前列腺癌細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述CD45+CD215+細(xì)胞來自于小鼠體內(nèi),優(yōu)選為第三代免疫缺陷小鼠NOD-scid-IL2Rγ-/-。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述CD45+CD215+細(xì)胞與所述腫瘤細(xì)胞的比例為(300-600):1,優(yōu)選為(360-500):1,進(jìn)一步優(yōu)選為450:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述CD45+CD215+細(xì)胞的接種密度為(1-5)×104/mL,優(yōu)選為(1-3)×104/mL,進(jìn)一步優(yōu)選為2×104/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述IL15細(xì)胞因子的接種密度為50-600ng/mL,優(yōu)選為100-500ng/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述共培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括1640培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素/鏈霉素雙抗和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子;

優(yōu)選地,所述共培養(yǎng)的培養(yǎng)基為1640培養(yǎng)基、體積比為10%胎牛血清、體積比為1%青霉素/鏈霉素雙抗和20ng/mL粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述共培養(yǎng)的溫度為35-40℃,優(yōu)選為37℃;

優(yōu)選地,所述共培養(yǎng)的濕度為90-98%,優(yōu)選為92-97%,進(jìn)一步優(yōu)選為95%。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述共培養(yǎng)的CO2濃度為2-10%,優(yōu)選為3-6%,進(jìn)一步優(yōu)選為5%;

優(yōu)選地,所述共培養(yǎng)的時(shí)間為110-150h,優(yōu)選為115-130h,進(jìn)一步優(yōu)選為120h;

優(yōu)選地,所述共培養(yǎng)的過程需要每1-4天進(jìn)行半換液,優(yōu)選為1-3天進(jìn)行半換液,進(jìn)一步優(yōu)選為2天進(jìn)行半換液。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)共培養(yǎng)的前一天在96孔板內(nèi)種入25-35個(gè)前列腺癌細(xì)胞,過夜培養(yǎng);

(2)用1640培養(yǎng)基、體積比為10%胎牛血清、體積比為1%青霉素/鏈霉素雙抗、20ng/mL粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子組成的培養(yǎng)基重懸的CD45+CD215+細(xì)胞,控制密度在(1-5)×104/mL;

(3)培養(yǎng)前挑選出孔內(nèi)前列腺癌細(xì)胞數(shù)量為25-35的孔用于共培養(yǎng),加入重懸的CD45+CD215+細(xì)胞560-650μL和IL15細(xì)胞因子50-600ng/mL;

(4)在溫度35-40℃、濕度90-98%和CO2濃度2-10%下進(jìn)行培養(yǎng)110-150h,培養(yǎng)期間每1-4天采用新鮮的培養(yǎng)基進(jìn)行半換液。

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