本發(fā)明屬有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽的制備工藝。
背景技術(shù)：
喜樹(shù)堿是從分布于中國(guó)中南及西南地區(qū)的旱蓮木屬植物喜樹(shù)(Camptotheca accuminate)中提取分離得到的生物堿。相關(guān)研究證實(shí)喜樹(shù)堿及其相關(guān)類似物對(duì)腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出非常好的體內(nèi)和體外的抑制活性，是一類潛在的、有效的抗腫瘤藥物分子，是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的強(qiáng)效抑制劑。
目前，用于治療成人轉(zhuǎn)移性大腸癌的伊立替康(CPT-11,)是喜樹(shù)堿類似物的一個(gè)代表性藥物。臨床研究表明，伊立替康的體內(nèi)活性代謝物為7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿(SN38)，SN38對(duì)DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制活性比伊立替康高出了100到1000倍，從而表現(xiàn)更突出的抗癌活性。但SN38在生物相容性溶劑中的溶解度小，導(dǎo)致其難以應(yīng)用于臨床。
為改善SN38的水溶性，趙洪等人在WO2007092646(CN101420963)專利族中公開(kāi)了一種聚乙二醇(PEG)修飾的SN38復(fù)合物PEG-SN38(結(jié)構(gòu)如下式A所示)的合成方法，該復(fù)合物溶解性相對(duì)于SN38提高了1000倍。復(fù)合物PEG-SN38采用分子量40KDa的四臂PEG-OH與SN38鍵合；其一，大分子量的PEG提高了藥物分子的體積，減少腎清除率，延長(zhǎng)了藥物體內(nèi)的作用時(shí)間；另一方面，四臂PEG提高了大分子PEG的載藥量，即每個(gè)大分子PEG可連接4個(gè)小分子藥物SN38。US7671067B、US7928095B、US20120171201A等專利族先后公開(kāi)了復(fù)合物PEG-SN38在治療多種實(shí)體腫瘤中的應(yīng)用。目前，PEG-SN38已完成多個(gè)Ⅱ期臨床試驗(yàn)，結(jié)果表明該復(fù)合物對(duì)人體內(nèi)多種實(shí)體瘤具有顯著的療效。
在WO2007092646(CN101420963)專利族中公開(kāi)PEG-SN38的合成方法，其中小分子關(guān)鍵中間體7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽(化合物3)的合成路線如下所示：
在復(fù)合物PEG-SN38的合成過(guò)程中，小分子關(guān)鍵中間體7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽(化合物3)的質(zhì)量至關(guān)重要，其質(zhì)量會(huì)直接決定最終成品的質(zhì)量。因?yàn)榛衔?中的雜質(zhì)會(huì)繼續(xù)參與后續(xù)反應(yīng)與大分子PEG形成復(fù)合物，由于PEG分子量(40KDa)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于小分子SN38及其有關(guān)物質(zhì)(＜1KDa)，PEG的性質(zhì)對(duì)復(fù)合物的性質(zhì)將起決定性作用，所以這些PEG-雜質(zhì)的復(fù)合物各方面性質(zhì)均與PEG-SN38極其類似，很難通過(guò)后期純化除去這些高分子雜質(zhì)。
所以制備高純度化合物3對(duì)于制備高純的PEG-SN38極其重要，化合物3的質(zhì)量直接影響到PEG-SN38的質(zhì)量。
而WO2007092646(CN101420963)專利族中公開(kāi)的PEG-SN38的合成工藝，制備過(guò)程形成較大的雜質(zhì)且在該專利中公開(kāi)的工藝中難以除去，會(huì)繼續(xù)參與后續(xù)反應(yīng)，并最終形成PEG-雜質(zhì)復(fù)合物，該工藝制備小分子關(guān)鍵中間體(化合物3)純度較低，雜質(zhì)含量較高。
此外，WO2007092646(CN101420963)專利中報(bào)道的有關(guān)小分子(化合物1至化合物3)的合成方法及工藝過(guò)程極其繁瑣、收率低、工藝放大的后可操作性極差。
因此，對(duì)現(xiàn)有工藝進(jìn)一步的優(yōu)化和改良，尋找一條工藝使合成得到的小分子關(guān)鍵中間體(化合物3)純度更高，雜質(zhì)含量更低、小分子合成操作更簡(jiǎn)單、收率更高、工藝放大后可操作性更強(qiáng)很有必要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種制備高純度7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽的工藝，通過(guò)對(duì)現(xiàn)有工藝進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化和改良，使合成得到的小分子關(guān)鍵中間體(化合物3)純度更高，雜質(zhì)含量更低；并使小分子合成工藝操作更簡(jiǎn)單、收率更高、工藝放大后工藝可操作性更強(qiáng)。具體包括如下步驟：
步驟①7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿與叔丁基二苯基氯硅烷反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液濃縮所得漿狀物用C1-C3醇溶解，再滴入水結(jié)晶析出固體，過(guò)濾，濾餅經(jīng)C1-C3醇的水溶液打漿、過(guò)濾、洗滌、干燥得到7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿；
步驟②7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿與N-叔丁氧羰基甘氨酸反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)洗滌、濃縮所得漿狀物用C1-C4醇結(jié)晶，析出固體經(jīng)過(guò)濾、洗滌、干燥得到7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-(N-叔丁氧羰基)甘氨酸；
步驟③7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-(N-叔丁氧羰基)甘氨酸經(jīng)脫保護(hù)反應(yīng)脫除叔丁基氧羰基(Boc)保護(hù)基，反應(yīng)結(jié)束后，滴加醚類溶劑從反應(yīng)液中析出固體，過(guò)濾，濾餅溶于疏水有機(jī)溶劑中，有機(jī)層用酸的水溶液洗滌，分出有機(jī)層，有機(jī)層濃縮后經(jīng)重結(jié)晶析出固體，過(guò)濾、洗滌、干燥得到7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述步驟①中7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿的質(zhì)量與結(jié)晶過(guò)程中使用的C1-C3醇的體積比為1:10-30，其單位為g/ml，優(yōu)選1:20。7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿質(zhì)量與打漿過(guò)程中使用的C1-C3醇的水溶液中C1-C3醇的體積比為1:10-30，其單位為g/ml，優(yōu)選1:20。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述步驟①中結(jié)晶中使用的C1-C3醇與水的體積比為1:1-3:1，優(yōu)選1:1；打漿過(guò)程中使用的C1-C3醇的水溶液中C1-C3醇與水的體積比為1:1-3:1，優(yōu)選1:1，所述C1-C3醇優(yōu)選異丙醇。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述步驟②中結(jié)晶包括加熱溶解所得漿狀物、降溫析出固體；其中，溶解溫度優(yōu)選40-45℃，降溫終點(diǎn)溫度優(yōu)選20-25℃，降溫速度優(yōu)選每5分鐘1℃。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述步驟②中7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿的質(zhì)量與結(jié)晶使用的C1-C4醇的體積比為1:5-10，其單位為g/ml，優(yōu)選1:7.5；所述C1-C4醇優(yōu)選正丁醇。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述步驟③中酸的水溶液濃度為0.1mol/L-2mol/L，優(yōu)選1mol/L；酸的水溶液優(yōu)選為鹽酸溶液或硫酸溶液，更優(yōu)選鹽酸溶液。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述步驟③中，7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-(N-叔丁氧羰基)甘氨酸的質(zhì)量與酸的水溶液的體積比為1:30-70，其單位為g/ml，優(yōu)選1:50。
本發(fā)明的目的還在于提供兩種新的雜質(zhì)，即雜質(zhì)化合物4和雜質(zhì)化合物5，具有式4，式5所示結(jié)構(gòu)：
在制備化合物3的過(guò)程中，如下反應(yīng)路線所示，由于N-叔丁氧羰基甘氨酸(Boc-Gly-OH)中的主要雜質(zhì)為甘氨酸，在制備化合物2的反應(yīng)條件下會(huì)形成甘氨酸二聚體Boc-Gly-Gly-OH。該二聚體雜質(zhì)與化合物1反應(yīng)生成雜質(zhì)4，雜質(zhì)4會(huì)參與后續(xù)反應(yīng)形成雜質(zhì)5，并繼續(xù)與PEG反應(yīng)形成PEG-雜質(zhì)復(fù)合物6。復(fù)合物6的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與PEG-SN38極其相似，在后期純化過(guò)程中難以除去。而本發(fā)明所述工藝步驟②對(duì)雜質(zhì)化合物4能夠很好的控制，進(jìn)一步降低了雜質(zhì)5和PEG-雜質(zhì)復(fù)合物6的生成。
在化合物2脫保護(hù)制備化合物3的過(guò)程中，如下反應(yīng)路線所式，會(huì)形成雜質(zhì)8，雜質(zhì)8會(huì)繼續(xù)參與后續(xù)反應(yīng)，與兩分子PEG反應(yīng)，形成PEG-雜質(zhì)復(fù)合物9。復(fù)合物9為80KDa分子量的PEG-小分子復(fù)合物，性質(zhì)與40KDa分子量的PEG-小分子復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)仍極其相似，后期也很難通過(guò)結(jié)晶純化將其除去。在WO2007092646(CN101420963)專利族中公開(kāi)的PEG-SN38的合成工藝，雜質(zhì)8在化合物3中含量可以達(dá)到4％左右，從而導(dǎo)致最終PEG-SN38中80KDa的大分子雜質(zhì)也達(dá)到4％左右，而本發(fā)明所述工藝步驟③對(duì)雜質(zhì)化合物8能夠很好的控制，進(jìn)一步降低了PEG-雜質(zhì)復(fù)合物9的生成。
此外，本發(fā)明還保護(hù)了雜質(zhì)化合物4、雜質(zhì)化合物5或其鹽的形式、雜質(zhì)化合物8或其鹽的形式用于質(zhì)量檢測(cè)和控制的用途。
雜質(zhì)化合物4作為雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，用于7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-(N-叔丁氧羰基)甘氨酸的質(zhì)量檢測(cè)和控制。
雜質(zhì)化合物5或其鹽的形式、雜質(zhì)化合物8或其鹽的形式作為雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，用于7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽的質(zhì)量檢測(cè)和控制。
需要強(qiáng)調(diào)的是，本發(fā)明所述的步驟②采用正丁醇加熱溶解-降溫結(jié)晶的方式進(jìn)行純化，相關(guān)溶劑體積、溫度及降溫速度參數(shù)范圍僅依據(jù)本發(fā)明中所述的最佳實(shí)施例進(jìn)行指定，任何對(duì)這些參數(shù)范圍進(jìn)行調(diào)整的結(jié)晶方法均包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。更進(jìn)一步需要強(qiáng)調(diào)的是，本發(fā)明人員發(fā)現(xiàn)正丁醇常溫(20-30℃)下攪拌結(jié)晶對(duì)該中間體的主要雜質(zhì)也具有一定的除去能力，任何采用正丁醇作溶劑，對(duì)結(jié)晶方式進(jìn)行調(diào)整的操作均包括在本發(fā)明之內(nèi)。
更進(jìn)一步需要強(qiáng)調(diào)的是，本發(fā)明所述的步驟③中稀鹽酸的洗滌作用及目的不同于實(shí)施例一步驟①和實(shí)施例二步驟②中多次稀鹽酸洗滌的作用和目的。步驟①和步驟②中多次稀鹽酸洗滌的作用是利用酸堿中和的原理除去反應(yīng)溶液中過(guò)量的堿試劑(如：三乙胺，4-二甲氨基吡啶)，不具備對(duì)其他雜質(zhì)的除去能力。本發(fā)明所述的步驟③中，反應(yīng)溶液是強(qiáng)酸性(4mol/L氯化氫-二氧六環(huán)溶液)，在強(qiáng)酸性條件下，采用酸性水溶液洗滌可以有效地除去主要雜質(zhì)，達(dá)到預(yù)想不到的結(jié)果。
本發(fā)明所述的高純度7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽制備工藝是一套完整的制備工藝。本發(fā)明所述的7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽制備工藝可以制備高純度的7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽，收率高，工藝放大可操作性強(qiáng)，適合于工業(yè)放大生產(chǎn)。
具體的實(shí)施方式
下面具體實(shí)施例可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員全面理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
在下列實(shí)例中，除非另有指明，所有溫度為攝氏溫度；除非另有指明，所述的室溫均為20-30℃；除非另有指明，各種起始原料和試劑均來(lái)自市售，均不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用；除非另有指明，各種溶劑均為工業(yè)級(jí)溶劑，不經(jīng)進(jìn)一步處理直接使用。
下列實(shí)施例中提到的HPLC分析方法如下所述：
色譜柱Agilent Zorbax 300SB-C8柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相A：0.1％(體積百分?jǐn)?shù))三氟乙酸水溶液，B：乙腈，梯度洗脫(0→2min，A∶B＝65∶35，2→20min，A∶B＝65∶35→5∶95，25→30min，A∶B＝5∶95→65∶35)；檢測(cè)波長(zhǎng)385nm；柱溫25℃；流速1ml/min，進(jìn)樣體積10μl。
實(shí)施例一：7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1)的制備
A、WO2007092646(CN101420963)專利中公開(kāi)的工藝
稱取2.0g 7-乙基-10-羥基喜樹(shù)堿(SN38，5.1mmol，1eq)加至250mL反應(yīng)瓶中，加入100ml二氯甲烷(DCM)攪拌懸浮。室溫下攪拌10分鐘后，依次加入叔丁基二苯基氯硅烷(TBDPSCl，7.8ml，30.58mmol，6eq)和三乙胺(Et3N，4.3ml，30.58mmol,6eq)。懸濁液加熱回流過(guò)夜，HPLC檢測(cè)反應(yīng)基本完畢。分別依次用0.2N鹽酸溶液(2×50ml)、100ml飽和碳酸氫鈉溶液、100ml食鹽水洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液在30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物加入5ml二氯甲烷溶清，向溶清液中滴加50ml正己烷，布氏漏斗過(guò)濾，10ml正己烷洗滌濾餅。按此法重復(fù)結(jié)晶2次。濾餅在45-55℃條件下，減壓真空干燥，得7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1)2.18g，HPLC檢測(cè)，化合物1的純度及收率見(jiàn)表1。B、WO2007092646(CN101420963)專利中公開(kāi)的工藝中加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化劑
稱取2.0g 7-乙基-10羥基喜樹(shù)堿(5.1mmol，1eq)、0.31g 4-二甲氨基吡啶(DMAP，2.54mmol，0.5eq)加至250mL反應(yīng)瓶中，加入100ml二氯甲烷攪拌懸浮。室溫下攪拌10分鐘后，依次加入叔丁基二苯基氯硅烷(7.8ml，30.58mmol，6eq)和三乙胺(4.3ml，30.58mmol,6eq)。溶清液室溫下攪拌1.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。分別依次用0.2N鹽酸溶液(2×50ml)、100ml飽和碳酸氫鈉溶液、100ml食鹽水洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液在30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物加入5ml二氯甲烷溶清，向溶清液中滴加50ml正己烷，布氏漏斗過(guò)濾，100ml正己烷洗滌濾餅。按此法重復(fù)結(jié)晶2次。濾餅在45-55℃條件下，減壓真空干燥，得7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1)2.03g，HPLC檢測(cè)，化合物1的純度及收率見(jiàn)表1。
C、本發(fā)明所述的化合物1的制備工藝。(異丙醇/水結(jié)晶純化工藝)
稱取2.0g 7-乙基-10羥基喜樹(shù)堿(5.1mmol，1eq)加至250mL反應(yīng)瓶中，加入100ml二氯甲烷攪拌懸浮。室溫下攪拌10分鐘后，依次加入叔丁基二苯基氯硅烷(7.8ml，30.58mmol，6eq)和三乙胺(4.3ml，30.58mmol,6eq)。懸濁液加熱回流過(guò)夜，HPLC檢測(cè)反應(yīng)基本完畢。反應(yīng)液在30-40℃減壓濃縮得濃稠漿狀物。漿狀物中加入40ml異丙醇40℃溶解，向溶解液中滴加40ml純化水，所得懸濁液攪拌1小時(shí)，布氏漏斗過(guò)濾，10ml異丙醇/水(1:1)洗滌濾餅。濕餅轉(zhuǎn)出，用80ml異丙醇/水(1:3)打漿1小時(shí)，布氏漏斗過(guò)濾，10ml異丙醇/水(1:3)洗滌濾餅。濾餅在45-55℃條件下，減壓真空干燥，得7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1)3.08g，HPLC檢測(cè)，化合物1的純度及收率見(jiàn)表1。
D、本發(fā)明所述的化合物1的制備工藝(異丙醇/水結(jié)晶純化工藝，加入催化劑DMAP)
稱取2.0g 7-乙基-10羥基喜樹(shù)堿(5.1mmol，1eq)、0.31g 4-二甲氨基吡啶(2.54mmol，0.5eq)加至250mL反應(yīng)瓶中，加入100ml二氯甲烷攪拌懸浮。室溫下攪拌10分鐘后，依次加入叔丁基二苯基氯硅烷(7.8ml，30.58mmol，6eq)和三乙胺(4.3ml，30.58mmol,6eq)。溶清液室溫下攪拌1.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。反應(yīng)液在30-40℃減壓濃縮得濃稠漿狀物。漿狀物中加入20ml異丙醇45℃溶解，向溶解液中滴加60ml純化水，所得懸濁液攪拌3小時(shí)，布氏漏斗過(guò)濾，10ml異丙醇/水(1:1)洗滌濾餅。濕餅轉(zhuǎn)出，用80ml異丙醇/水(1:1)打漿3小時(shí)，布氏漏斗過(guò)濾，10ml異丙醇/水(1:1)洗滌濾餅。濾餅在45-55℃條件下，減壓真空干燥，得7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1)3.05g，HPLC檢測(cè)，化合物1的純度及收率見(jiàn)表1。
表1 7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1)質(zhì)量及收率對(duì)比
結(jié)論：化合物1的制備工藝中，加入催化劑DMAP可以明顯縮短反應(yīng)時(shí)間，降低反應(yīng)溫度至室溫，反應(yīng)條件更友好，更符合工藝安全性要求；結(jié)晶工藝采用異丙醇/水打漿可以有效的提高化合物1收率。
實(shí)施例二：
7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-(N-叔丁氧羰基)甘氨酸(2)的制備
同時(shí)在上述反應(yīng)過(guò)程中會(huì)發(fā)生如下反應(yīng)，產(chǎn)生雜質(zhì)4。
A、WO2007092646(CN101420963)專利中公開(kāi)的工藝
稱取2.0g 7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1，99.5％，3.18mmol，1eq)和0.834g Boc-Gly-OH(4.76mmol，1.5eq)加至150ml反應(yīng)瓶中，加入50ml二氯甲烷，攪拌溶清，并冷卻至0℃。向冷卻后的反應(yīng)混合液中，依次加入0.914g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl，4.76mmol，1.5eq)和0.174g DMAP(1.44mmol，0.45eq)。反應(yīng)混合液在0℃攪拌2小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。依次分別用0.5％碳酸氫鈉溶液(25ml×2)、25ml純化水、0.1mol/L鹽酸溶液(25ml×2)和25ml食鹽水溶液洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干，刮出沾于瓶壁上的產(chǎn)物，共計(jì)2.4g，HPLC檢測(cè)，化合物2的純度、收率及雜質(zhì)4的含量見(jiàn)表2。雜質(zhì)4，淡黃色粉末，1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.06(d,J＝9.2Hz,1H),7.77(d,J＝6.9Hz,4H),7.48(dd,J＝2.3,9.1Hz,1H),7.39–7.47(m,6H),7.14(s,1H),7.09(d,J＝2.5Hz,1H),6.67(s,1H),5.64(d,J＝17.1Hz,1H),5.36(d,J＝17.2Hz,1H),5.32(br s,1H),5.11(s,2H),4.36(dd,J＝6.1,18.3Hz,1H),4.13(dd,J＝4.5,18.3Hz,1H),3.81(d,J＝5.2Hz,2H),2.62(q,J＝7.6Hz,2H),2.30–2.23(m,1H),2.20–2.12(m,2H),1.39(s,9H),1.19(s,9H),0.97(t,J＝7.4Hz,3H),0.92–0.88(m,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ169.68,168.69,167.14,157.31,156.04,155.14,149.43,147.36,145.24,144.14,135.49,135.49,135.49,135.49,135.49,132.22,132.17,131.66,130.27,130.27,128.04,128.04,128.04,128.04,127.97,126.72,126.09,119.32,110.37,95.28,80.36,76.94,67.17,49.26,44.20,41.06,31.74,28.24,28.24,28.24,26.52,26.52,26.52,22.90,19.53,13.28,7.48.HR-ESI-MS:m/z845.3565[M+H]+,867.3393[M+Na]+(cal.845.3576,Found for C47H52N4O9Si).
B、本發(fā)明所述的化合物2的制備工藝(化合物1的質(zhì)量和正丁醇的體積比為1：7.5)
稱取2.0g 7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(化合物1，99.5％，3.18mmol，1eq)和0.834g Boc-Gly-OH(4.76mmol，1.5eq)加至150ml反應(yīng)瓶中，加入50ml二氯甲烷，攪拌溶清，并冷卻至0℃。向冷卻后的反應(yīng)混合液中，依次加入0.914g EDC·HCl(4.76mmol，1.5eq)和0.174g DMAP(1.44mmol，0.45eq)。反應(yīng)混合液在0℃攪拌2小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。依次分別用0.5％碳酸氫鈉溶液(25ml×2)、0.1mol/L鹽酸溶液(25ml×2)和25ml食鹽水溶液洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。所得漿狀物于40℃溶解于15ml正丁醇溶液中，溶清液每5分鐘降溫1℃，降溫至25℃，所得懸濁物攪拌30分鐘，布氏漏斗抽濾，5ml冷正丁醇溶液洗滌濾餅，濾餅50-55℃減壓干燥，得淡黃色化合物2共2.10g，HPLC檢測(cè)，化合物2的純度、收率及雜質(zhì)4的含量見(jiàn)表2。
C、本發(fā)明所述的化合物2的制備工藝(化合物1的質(zhì)量和正丁醇的體積比為1：10)
稱取2.0g 7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1，99.5％，3.18mmol，1eq)和0.834g Boc-Gly-OH(4.76mmol，1.5eq)加至150ml反應(yīng)瓶中，加入50ml二氯甲烷，攪拌溶清，并冷卻至0℃。向冷卻后的反應(yīng)混合液中，依次加入0.914g EDC·HCl(4.76mmol，1.5eq)和0.174g DMAP(1.44mmol，0.45eq)。反應(yīng)混合液在0℃攪拌2小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。依次分別用0.5％碳酸氫鈉溶液(25ml×2)、0.1mol/L鹽酸溶液(25ml×2)和25ml食鹽水溶液洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。所得漿狀物于40℃溶解于20ml正丁醇溶液中，溶清液每5分鐘降溫1℃，降溫至20℃，所得懸濁物攪拌30分鐘，布氏漏斗抽濾，5ml冷正丁醇溶液洗滌濾餅，濾餅50-55℃減壓干燥，得淡黃色化合物2共2.18g，HPLC檢測(cè)，化合物2的純度、收率及雜質(zhì)4的含量見(jiàn)表2。
D、本發(fā)明所述的化合物2的制備工藝(化合物1的質(zhì)量和正丁醇的體積比為1：5)
稱取2.0g 7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1，99.5％，3.18mmol，1eq)和0.834g Boc-Gly-OH(4.76mmol，1.5eq)加至150ml反應(yīng)瓶中，加入50ml二氯甲烷，攪拌溶清，并冷卻至0℃。向冷卻后的反應(yīng)混合液中，依次加入0.914g EDC·HCl(4.76mmol，1.5eq)和0.174g DMAP(1.44mmol，0.45eq)。反應(yīng)混合液在0℃攪拌2小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。依次分別用0.5％碳酸氫鈉溶液(25ml×2)、0.1mol/L鹽酸溶液(25ml×2)和25ml食鹽水溶液洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。所得漿狀物于45℃溶解于10ml正丁醇溶液中，溶清液每5分鐘降溫1℃，降溫至20℃，所得懸濁物攪拌30分鐘，布氏漏斗抽濾，5ml冷正丁醇溶液洗滌濾餅，濾餅50-55℃減壓干燥，得淡黃色化合物2共2.22g，HPLC檢測(cè)，化合物2的純度、收率及雜質(zhì)4的含量見(jiàn)表2。
表2化合物2制備工藝及質(zhì)量、收率對(duì)比
結(jié)論：化合物2的制備工藝中，通過(guò)正丁醇加熱-降溫結(jié)晶，可以有效的除去工藝雜質(zhì)4，得到高純度化合物2。同時(shí)，結(jié)晶析出的產(chǎn)物較方便轉(zhuǎn)移，工藝可操作性比原工藝更強(qiáng)。
實(shí)施例三：
7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿-20-O-甘氨酸鹽酸鹽(3)的制備
同時(shí)在上述反應(yīng)過(guò)程中會(huì)發(fā)生如下反應(yīng)，產(chǎn)生雜質(zhì)8。
在制備化合物2中產(chǎn)生雜質(zhì)4，雜質(zhì)4繼續(xù)反應(yīng)產(chǎn)生雜質(zhì)5。
A、WO2007092646(CN101420963)專利中公開(kāi)的工藝(化合物2雜質(zhì)4含量為0.22％)
稱取2.0g化合物2(99.7％，雜質(zhì)4：0.22％，2.54mmol)加至150ml反應(yīng)瓶中，依次加入10ml 1,4-二氧六環(huán)溶液和10ml 4mol/L氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。向反應(yīng)混合液中加入100ml乙醚，析出黃色固體，過(guò)濾固體，40ml乙醚洗滌濾餅。固體溶于100ml二氯甲烷中，并用50ml飽和食鹽水洗滌，加入飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至2.5。分液漏斗分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物溶于10ml二氯甲烷中，并加入100ml乙醚，析出黃色固體，布氏漏斗過(guò)濾，40ml乙醚洗滌濾餅。濾餅在40-45℃條件下，減壓真空干燥，得化合物3共計(jì)1.59g，HPLC檢測(cè)，化合物3的收率、純度及雜質(zhì)5和雜質(zhì)8的含量見(jiàn)表3。雜質(zhì)5，黃色粉末，1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.56(s,1H),8.00(d,J＝8.2,1H),7.90(br s,3H),7.75(d,J＝6.8Hz,2H),7.71(d,J＝6.9Hz,2H),7.40–7.32(m,7H),7.21(s,1H),6.96(s,1H),5.56–5.53(m,1H),5.20–5.16(m,1H),5.03–4.91(m,2H),3.91–4.15(m,4H),2.41-2.53(m,2H),2.06-1.92(m,2H),1.13(s,9H),0.77–0.75(m,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ169.11,167.93,167.64,157.20,154.97,149.30,146.69,145.16,144.45,144.20,135.54,135.54,135.50,135.50,132.22,132.14,131.50,130.25,130.19,128.03,128.03,127.99,127.99,127.73,127.01,126.06,119.31,110.13,96.52,72.80,67.20,49.30,41.22,41.22,31.49,26.56,26.56,26.56,22.78,19.47,13.18,7.42.HR-ESI-MS:m/z 745.3035[M+H]+,767.2859[M+Na]+(cal.745.3052,Found for C42H45ClN4O7Si)。雜質(zhì)8，黃色粉末，1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.60(s,3H),8.14(d,J＝9.1Hz,1H),7.58–7.55(m,1H),7.38–7.35(m,2H)，7.38–7.35(m,2H),5.39–5.27(m,3H),4.39–4.34(m,1H),4.11–4.05(m,1H),3.15–3.11(m,2H),2.22-2.11(m,2H),0.97–0.94(m,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ167.22,167.20,158.03,156.85,147.31,146.12,145.83,145.19,141.30,129.63,129.52,128.95,127.96,124.33,119.17,105.72,96.72,77.86,66.76,50.23,30.48,23.07,12.80,8.01.ESI-MS:m/z447.99[M+H]-。
B、WO2007092646(CN101420963)專利中公開(kāi)的工藝(化合物2雜質(zhì)4含量為1.1％)
稱取2.0g化合物2(98.7％，雜質(zhì)4：1.1％，2.54mmol)加至150ml反應(yīng)瓶中，依次加入10ml 1,4-二氧六環(huán)溶液和10ml 4mol/L氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。向反應(yīng)混合液中加入100ml乙醚，析出黃色固體，過(guò)濾固體，40ml乙醚洗滌濾餅。固體溶于100ml二氯甲烷中，并用50ml飽和食鹽水洗滌，加入飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至2.5。分液漏斗分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物溶于10ml二氯甲烷中，并加入100ml乙醚，析出黃色固體，布氏漏斗過(guò)濾，40ml乙醚洗滌濾餅。濾餅在40-45℃條件下，減壓真空干燥，得化合物3共計(jì)1.52g，HPLC檢測(cè)，化合物3的收率、純度及雜質(zhì)5和雜質(zhì)8的含量見(jiàn)表3。
C、本發(fā)明所述的化合物3制備工藝(0.1mol/L鹽酸溶液洗滌)
稱取2.0g化合物2(99.7％，雜質(zhì)4：0.22％，2.54mmol)加至150ml反應(yīng)瓶中，依次加入10ml 1,4-二氧六環(huán)溶液和10ml 4mol/L氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。向反應(yīng)混合液中加入100ml乙醚，析出黃色固體，過(guò)濾固體，40ml乙醚洗滌濾餅。固體溶于100ml二氯甲烷中，并用0.1mol/L鹽酸溶液(140ml×3)洗滌二氯甲烷層。分液漏斗分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物溶于10ml二氯甲烷中，并加入100ml乙醚，析出黃色固體，布氏漏斗過(guò)濾，40ml乙醚洗滌濾餅。濾餅在40-45℃條件下，減壓真空干燥，得化合物3共計(jì)1.61g，HPLC檢測(cè)，化合物3的收率、純度及雜質(zhì)5和雜質(zhì)8的含量見(jiàn)表3，
D、本發(fā)明所述的化合物3制備工藝(1mol/L鹽酸溶液洗滌)
稱取2.0g化合物2(99.7％，雜質(zhì)4：0.22％，2.54mmol)加至150ml反應(yīng)瓶中，依次加入10ml 1,4-二氧六環(huán)溶液和10ml 4mol/L氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。向反應(yīng)混合液中加入100ml乙醚，析出黃色固體，過(guò)濾固體，40ml乙醚洗滌濾餅。固體溶于100ml二氯甲烷中，并用1mol/L鹽酸溶液(100ml×3)洗滌二氯甲烷層。分液漏斗分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物溶于10ml二氯甲烷中，并加入100ml乙醚，析出黃色固體，布氏漏斗過(guò)濾，40ml乙醚洗滌濾餅。濾餅在40-45℃條件下，減壓真空干燥，得化合物3共計(jì)1.65g，HPLC檢測(cè)，化合物3的收率、純度及雜質(zhì)5和雜質(zhì)8的含量見(jiàn)表3。
E、本發(fā)明所述的化合物3制備工藝(2mol/L鹽酸溶液洗滌)
稱取2.0g化合物2(99.7％，雜質(zhì)4：0.22％，2.54mmol)加至150ml反應(yīng)瓶中，依次加入10ml 1,4-二氧六環(huán)溶液和10ml 4mol/L氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。向反應(yīng)混合液中加入100ml乙醚，析出黃色固體，過(guò)濾固體，40ml乙醚洗滌濾餅。固體溶于100ml二氯甲烷中，并用2mol/L鹽酸溶液(60ml×3)洗滌二氯甲烷層。分液漏斗分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物溶于10ml二氯甲烷中，并加入100ml乙醚，析出黃色固體，布氏漏斗過(guò)濾，40ml乙醚洗滌濾餅。濾餅在40-45℃條件下，減壓真空干燥，得化合物3共計(jì)1.58g，HPLC檢測(cè)，化合物3的收率、純度及雜質(zhì)5和雜質(zhì)8的含量見(jiàn)表3。
F、本發(fā)明所述的化合物3制備工藝(0.5mol/L H2SO4溶液洗滌)
稱取2.0g化合物2(99.7％，雜質(zhì)4：0.22％，2.54mmol)加至150ml反應(yīng)瓶中，依次加入10ml 1,4-二氧六環(huán)溶液和10ml 4mol/L氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。向反應(yīng)混合液中加入100ml乙醚，析出黃色固體，過(guò)濾固體，40ml乙醚洗滌濾餅。固體溶于100ml二氯甲烷中，并用0.5mol/L硫酸溶液(100ml×3)洗滌二氯甲烷層。分液漏斗分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物溶于10ml二氯甲烷中，并加入100ml乙醚，析出黃色固體，布氏漏斗過(guò)濾，40ml乙醚洗滌濾餅。濾餅在40-45℃條件下，減壓真空干燥，得化合物3共計(jì)1.66g，HPLC檢測(cè)，化合物3的收率、純度及雜質(zhì)5和雜質(zhì)8的含量見(jiàn)表3。
表3化合物3制備工藝及質(zhì)量、收率對(duì)比
結(jié)論：制備化合物3時(shí)會(huì)產(chǎn)生較大的工藝雜質(zhì)8，現(xiàn)有技術(shù)中公開(kāi)的工藝很難有效降低雜質(zhì)8的含量，但該雜質(zhì)可以通過(guò)本發(fā)明所述的化合物3的制備工藝有效的除去，制得高純度的化合物3，降低了雜質(zhì)8參與高分子反應(yīng)生成雜質(zhì)9的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，本發(fā)明所述工藝采用洗滌方式繼續(xù)雜質(zhì)純化，沒(méi)有pH調(diào)節(jié)的繁瑣工藝操作，簡(jiǎn)化了操作步驟。
實(shí)施例四：整體工藝對(duì)比
A、WO2007092646(CN101420963)專利中公開(kāi)的工藝
稱取10.0g 7-乙基-10羥基喜樹(shù)堿(25.5mmol，1eq)加至1L反應(yīng)瓶中，加入500ml二氯甲烷攪拌懸浮。室溫下攪拌10分鐘后，依次加入叔丁基二苯基氯硅烷(39.0ml，152.9mmol，6eq)和三乙胺(21.5ml，152.9mmol，6eq)。懸濁液加熱回流過(guò)夜，HPLC檢測(cè)反應(yīng)基本完畢。分別依次用0.2N鹽酸溶液(250ml×2)、500ml飽和碳酸氫鈉溶液、500ml食鹽水分別洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液在30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物加入25ml二氯甲烷溶清，向溶清液中滴加250ml正己烷，布氏漏斗過(guò)濾，50ml正己烷洗滌濾餅。按此法重復(fù)結(jié)晶2次。濾餅在45-55℃條件下，減壓真空干燥，得7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1)10.6g，HPLC檢測(cè)，化合物1的純度及收率見(jiàn)表4。
稱取上步制備所得化合物1(10.0g，15.9mmol，1eq)和4.17g Boc-Gly-OH(23.8mmol，1.5eq)加至500ml反應(yīng)瓶中，加入250ml二氯甲烷，攪拌溶清，并冷卻至0℃。向冷卻后的反應(yīng)混合液中，依次加入4.57g EDC·HCl(23.8mmol，1.5eq)和0.87g DMAP(7.2mmol，0.45eq)。反應(yīng)混合液在0℃攪拌2.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。依次分別用0.5％碳酸氫鈉溶液(125ml×2)、25ml純化水、0.1mol/L鹽酸溶液(125ml×2)和125ml食鹽水溶液洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干，刮出沾于瓶壁上的產(chǎn)物，共計(jì)12.2g，HPLC檢測(cè)，化合物2純度、收率及雜質(zhì)4的含量見(jiàn)表4。
稱取上步制備所得化合物2(12.0g，15.24mmol)加至250ml反應(yīng)瓶中，依次加入60ml 1,4-二氧六環(huán)溶液和60ml 4mol/L氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。向反應(yīng)混合液轉(zhuǎn)移至1L反應(yīng)瓶中，加入600ml乙醚，析出黃色固體，過(guò)濾固體，240ml乙醚洗滌濾餅。固體溶于600ml二氯甲烷中，并用300ml飽和食鹽水洗滌，加入飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH至2.5。分液漏斗分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物溶于60ml二氯甲烷中，并加入600ml乙醚，析出黃色固體，布氏漏斗過(guò)濾，240ml乙醚洗滌濾餅。濾餅在40-45℃條件下，減壓真空干燥，得化合物3共計(jì)9.6g，HPLC檢測(cè)，化合物3的收率、純度及雜質(zhì)5和雜質(zhì)8的含量見(jiàn)表4。
B、本發(fā)明所述的工藝
稱取10.0g 7-乙基-10羥基喜樹(shù)堿(25.2mmol，1eq)、1.55g 4-二甲氨基吡啶(12.7mmol，0.5eq)加至1L反應(yīng)瓶中，加入500ml二氯甲烷攪拌懸浮。室溫下攪拌10分鐘后，依次加入叔丁基二苯基氯硅烷(39.0ml，152.9mmol，6eq)和三乙胺(21.5ml，152.9mmol，6eq)。溶清液室溫下攪拌2小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。反應(yīng)液在30-40℃減壓濃縮得濃稠漿狀物。漿狀物中加入200ml異丙醇40℃溶解，向溶解液中滴加200ml純化水，所得懸濁液攪拌3小時(shí)，布氏漏斗過(guò)濾，50ml異丙醇/水(1:1)洗滌濾餅。濕餅轉(zhuǎn)出，用400ml異丙醇/水(1:1)打漿3小時(shí)，布氏漏斗過(guò)濾，50ml異丙醇/水(1:1)洗滌濾餅。濾餅在45-55℃條件下，減壓真空干燥，得7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1)15.3g，HPLC檢測(cè)，化合物1的純度及收率見(jiàn)表4。
稱取上步制備所得化合物1(15.0g，23.85mmol，1eq)和6.26g Boc-Gly-OH(35.7mmol，1.5eq)加至500ml反應(yīng)瓶中，加入375ml二氯甲烷，攪拌溶清，并冷卻至0℃。向冷卻后的反應(yīng)混合液中，依次加入6.86g EDC·HCl(35.7mmol，1.5eq)和1.31g DMAP(10.8mmol，0.45eq)。反應(yīng)混合液在0℃攪拌2小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。依次分別用0.5％碳酸氫鈉溶液(190ml×2)、0.1mol/L鹽酸溶液(190ml×2)和190ml食鹽水溶液洗滌反應(yīng)液。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。所得漿狀物于45℃溶解于113ml正丁醇溶液中，溶清液每5分鐘降溫1℃，1小時(shí)40分鐘降溫至25℃，所得懸濁物攪拌30分鐘，布氏漏斗抽濾，35ml冷正丁醇溶液洗滌濾餅，濾餅50-55℃減壓干燥，得淡黃色化合物2共16.0g，HPLC檢測(cè)，化合物2的純度、收率及雜質(zhì)4的含量見(jiàn)表4。
稱取上步制備所得化合物2(15.8g，20.1mmol)加至500ml反應(yīng)瓶中，依次加入80ml 1,4-二氧六環(huán)溶液和80ml 4mol/L氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。將反應(yīng)混合液轉(zhuǎn)移至1L反應(yīng)瓶中，加入800ml乙醚，析出黃色固體，過(guò)濾固體，320ml乙醚洗滌濾餅。固體溶于800ml二氯甲烷中，并用1mol/L鹽酸溶液(800ml×3)洗滌二氯甲烷層3次。分液漏斗分出有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾。濾液30-40℃減壓濃縮至干。漿狀物溶于80ml二氯甲烷中，并加入800ml乙醚，析出黃色固體，布氏漏斗過(guò)濾，300ml乙醚洗滌濾餅。濾餅在40-45℃條件下，減壓真空干燥，得化合物3共計(jì)12.5g，HPLC檢測(cè)，化合物3的收率、純度及雜質(zhì)5和雜質(zhì)8的含量見(jiàn)表4。
表4工藝整體及質(zhì)量對(duì)比表
結(jié)論：與WO2007092646專利族中所述的工藝相比較，本發(fā)明所述的化合物3的制備工藝，化合物3的純度更高，收率更高，雜質(zhì)含量更低，工藝可操作性更強(qiáng)。
實(shí)施例五 化合物4的制備
稱取1.0g 7-乙基-10-O-叔丁基二苯基硅基喜樹(shù)堿(1，1.59mmol，1eq)和0.552g Boc-Gly-Gly-OH(2.38mmol，1.5eq)加至100ml反應(yīng)瓶中，加入15ml二氯甲烷，攪拌溶清，并冷卻至0℃。向冷卻后的反應(yīng)混合液中，依次加入0.457g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl，2.38mmol，1.5eq)和0.087g DMAP(0.72mmol，0.45eq)。反應(yīng)混合液恢復(fù)至室溫?cái)嚢?小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。依次分別用0.5％碳酸氫鈉溶液(15ml×2)、0.1mol/L鹽酸溶液(15ml×2)和15ml食鹽水溶液洗滌反應(yīng)液。分出有機(jī)層，30-40℃減壓濃縮至干，漿狀物用3ml二氯甲烷和2ml正己烷混合溶劑溶清，向溶清液中滴加50ml正己烷，析出淡黃色固體，室溫?cái)嚢?0分鐘，過(guò)濾，正己烷(10ml×2)洗滌，所得濾餅經(jīng)40-45℃條件下，減壓真空干燥，得淡黃色粉末化合物4，共計(jì)1.18g。
實(shí)施例六 化合物5的制備
稱取化合物50.5g(0.59mmol)，加入5ml二氯甲烷溶清，向溶清液中加入5ml 4.0M氯化氫-1,4-二氧六環(huán)溶液，室溫?cái)嚢?0分鐘，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。向反應(yīng)液中滴入150ml甲基叔丁基醚，析出黃色固體。攪拌5分鐘后過(guò)濾，正己烷(10ml×2)洗滌。所得固體溶于20ml二氯甲烷中，用1.0mol/L的鹽酸溶液(20ml×3)洗滌二氯甲烷。二氯甲烷層分出，30-40℃減壓濃縮至干，漿狀物用3ml二氯甲烷和2ml甲基叔丁基醚混合溶劑溶清，向溶清液中滴加50ml甲基叔丁基醚，析出黃色固體。室溫?cái)嚢?0分鐘，過(guò)濾，甲基叔丁基醚(10ml×2)洗滌，所得濾餅經(jīng)40-45℃條件下，減壓真空干燥，得黃色粉末化合物5鹽酸鹽，共計(jì)0.388g。
實(shí)施例七 化合物8的制備
稱取1.0g化合物2(1.27mmol)加至100ml反應(yīng)瓶中，依次加入10ml 4M鹽酸水溶液，室溫?cái)嚢?小時(shí)，HPLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。反應(yīng)液于40℃減壓濃縮至干，固體溶于3ml二氯甲烷和2ml甲基叔丁基醚混合溶劑溶清，向溶清液中滴加50ml甲基叔丁基醚，析出黃色固體。室溫?cái)嚢?0分鐘，過(guò)濾，甲基叔丁基醚(10ml×2)洗滌，所得濾餅經(jīng)40-45℃條件下，減壓真空干燥，得黃色粉末化合物8鹽酸鹽，共計(jì)0.55g。
本發(fā)明的方法通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)領(lǐng)域人員明顯能在本發(fā)明內(nèi)容和范圍內(nèi)對(duì)本發(fā)明中所述的方法和應(yīng)用在有必要的地方稍加適當(dāng)常識(shí)性的調(diào)整、改動(dòng)和組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本領(lǐng)域人員也可以借鑒本發(fā)明內(nèi)容，通過(guò)適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的改進(jìn)和調(diào)整對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，都應(yīng)被視為包括在本發(fā)明之內(nèi)。