1.一種制備玻尿酸的方法,以獸疫鏈球菌為發(fā)酵菌株,包括如下步驟:
將獸疫鏈球菌接種至固體培養(yǎng)基上進(jìn)行菌種培養(yǎng),得到單克隆菌種;
配制種子培養(yǎng)基,獸疫鏈球菌種子培養(yǎng)基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀組成,將獸疫鏈球菌接種至種子培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),得到獸疫鏈球菌種子培養(yǎng)液;
配制發(fā)酵培養(yǎng)基,所述發(fā)酵培養(yǎng)基由葡萄糖、酵母粉、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、谷氨酸鈉,微量元素液組成,所述微量元素由氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸錳、乙二胺四乙酸二鈉組成,發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌后調(diào)節(jié)pH至7.5,將獸疫鏈球菌種子培養(yǎng)液接種至發(fā)酵培養(yǎng)液,即可得到透明質(zhì)酸發(fā)酵液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備玻尿酸的方法,其特征在于:所述b步驟的種子培養(yǎng)液中葡萄糖濃度為1-10g/L,酵母粉濃度為5-10g/L,蛋白胨濃度為10-20 g/L,硫酸鎂濃度為0.5-2 g/L,磷酸二氫鉀濃度為0.5-2 g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備玻尿酸的方法,其特征在于:所述c步驟的發(fā)酵培養(yǎng)液中葡萄糖濃度為50-100g/L,酵母粉濃度為5-10g/L,蛋白胨濃度為10-20 g/L,硫酸鎂濃度為0.5-2 g/L,磷酸二氫鉀濃度為0.5-2 g/L,谷氨酸鈉為10-20 g/L,微量元素液濃度為0.5-10ml/L;所述微量元素中氯化鈣濃度為0.5-5g/L,硫酸鎂濃度為1-20g/L,硫酸亞鐵為0.200-2g/L,硫酸錳為0.2-2g/L,乙二胺四乙酸二鈉濃度為1-50 g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備玻尿酸的方法,其特征在于:所述b步驟中種子培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度33-37℃,振蕩培養(yǎng)10-14小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備玻尿酸的方法,其特征在于:所述c步驟中的發(fā)酵過程中,發(fā)酵攪拌速度為200-500rpm,發(fā)酵溫度為33-37℃,用30%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié),使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值在7.5±0.5,通氣量為1-3vvm,發(fā)酵周期在12-18小時(shí)。