技術(shù)特征：

1.有效抑制牦牛CAPN1基因表達(dá)的shRNA，其特征在于：所述shRNA為以下（1）-（3）中的任意一條，每一條shRNA分子由上下游兩條DNA互補(bǔ)單鏈組成：

。

2.權(quán)利要求1所述的shRNA在有效抑制牦牛CAPN1基因表達(dá)中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：是將一條shRNA分子中的兩條互補(bǔ)單鏈經(jīng)退火形成雙鏈的shRNA分子后，連接到慢病毒干擾載體上，構(gòu)建得到shRNA慢病毒重組載體；然后將shRNA慢病毒重組載體與CAPN1表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述慢病毒干擾載體為miRZip慢病毒干擾載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：所述shRNA慢病毒重組載體的具體構(gòu)建方法為：

（1）取100pmol的兩條互補(bǔ)單鏈核苷酸各2μl，加入2μl 10×退火緩沖液和14μl滅菌超純水，反應(yīng)程序：95℃ 5min 72℃ 10min，在室溫下放置 60min；然后取5ul加水95ul作為退火產(chǎn)物工作濃度；

（2）將miRZip慢病毒干擾載體經(jīng)BamHI和EcoRI雙酶切后回收線性化質(zhì)粒，與步驟（1）得到的退火產(chǎn)物4℃過(guò)夜連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)胞，用含氨芐青霉素100μg/μl的LB平板篩選，將篩選陽(yáng)性克隆經(jīng)測(cè)序正確后，提取純化重組質(zhì)粒。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：將shRNA慢病毒重組載體與CAPN1表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的具體方法為：

將shRNA慢病毒重組載體2μg與2μg的CAPN1表達(dá)質(zhì)?；旌?，加入生理鹽水混勻，室溫孵育5min，再加入6μl濃度為1mg/ml的聚乙烯亞胺，混勻后，室溫孵育10min；最后加入293T細(xì)胞中進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，充分的搖勻后放入37℃、5％CO₂、95%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；感染6小時(shí)后，吸走孔內(nèi)的培養(yǎng)基，換成新鮮的2ml含10％胎牛血清的 DMEM完全培養(yǎng)基，放入37℃、5％CO₂、95%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；待細(xì)胞長(zhǎng)滿后，收集細(xì)胞。

7.一種有效抑制牦牛CAPN1基因表達(dá)的方法，其特征在于：是將一條shRNA分子中的兩條互補(bǔ)單鏈經(jīng)退火形成雙鏈的shRNA分子后，連接到慢病毒干擾載體上，構(gòu)建得到shRNA慢病毒重組載體；然后將shRNA慢病毒重組載體與CAPN1表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；作為優(yōu)選，所述慢病毒干擾載體為miRZip慢病毒干擾載體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述shRNA慢病毒重組載體的具體構(gòu)建方法為：

（1）取100pmol的兩條互補(bǔ)單鏈核苷酸各2μl，加入2μl 10×退火緩沖液和14μl滅菌超純水，反應(yīng)程序：95℃ 5min 72℃ 10min，在室溫下放置 60min；然后取5ul加水95ul作為退火產(chǎn)物工作濃度；

（2）將miRZip慢病毒干擾載體經(jīng)BamHI和EcoRI雙酶切后回收線性化質(zhì)粒，與步驟（1）得到的退火產(chǎn)物4℃過(guò)夜連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)胞，用含氨芐青霉素100μg/μl的LB平板篩選，將篩選陽(yáng)性克隆經(jīng)測(cè)序正確后，提取純化重組質(zhì)粒。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：將shRNA慢病毒重組載體與CAPN1表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的具體方法為：

將shRNA慢病毒重組載體2μg與2μg的CAPN1表達(dá)質(zhì)?；旌希尤肷睇}水混勻，室溫孵育5min，再加入6μl濃度為1mg/ml的聚乙烯亞胺，混勻后，室溫孵育10min；最后加入293T細(xì)胞中進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，充分的搖勻后放入37℃、5％CO₂、95%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；感染6小時(shí)后，吸走孔內(nèi)的培養(yǎng)基，換成新鮮的2ml含10％胎牛血清的 DMEM完全培養(yǎng)基，放入37℃、5％CO₂、95%相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；待細(xì)胞長(zhǎng)滿后，收集細(xì)胞。