本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種高效介導(dǎo)促性腺激素抑制激素基因過表達(dá)的慢病毒載體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitoryhormone，gnih)是2000年tsutsui及其同事于日本鵪鶇下丘腦發(fā)現(xiàn)的一種含有12個(gè)氨基酸的精氨酰-苯丙酰胺(rf酰胺)神經(jīng)肽，其作用受體為一種g蛋白偶聯(lián)受體147(gpr147)。gnih能抑制性腺激素的合成與釋放進(jìn)而調(diào)控動物的繁殖，故將其命名為促性腺激素抑制激素。此后，gnih及其同系物于各類動物中相繼被發(fā)現(xiàn)，因它們都擁有特征性的c端氨基酸序列l(wèi)pxrf(x＝l或p)，故被稱為rf酰胺相關(guān)肽(rfrps)。gnih的發(fā)現(xiàn)，證明促性腺激素釋放激素(gonadotropininhibitoryhormone，gnrh)并不是唯一調(diào)節(jié)性腺類激素合成與分泌的神經(jīng)肽，因此在動物繁殖的研究領(lǐng)域，對gnih功能的研究也逐漸成為一個(gè)熱點(diǎn)之一。

對于外源基因?qū)爰?xì)胞常用的方法有脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、電轉(zhuǎn)法以及顯微注射法。但是以上方法存在著自身的缺陷，如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對原代和非分裂期細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低，電轉(zhuǎn)法對細(xì)胞損傷大，顯微注射操作難度大等，而且以上幾種方法對于轉(zhuǎn)錄的基因都無法實(shí)現(xiàn)長期穩(wěn)定的表達(dá)。慢病毒載體是一種常用的逆轉(zhuǎn)錄病毒，是在由人類免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus,hiv)的基礎(chǔ)上改裝而來，對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞、干細(xì)胞和不分化的細(xì)胞等，使用慢病毒載體，能大大提高目的基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，且目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加，能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因的長期、穩(wěn)定表達(dá)。所以，在體外實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的研究中，慢病毒載體己經(jīng)成為表達(dá)外源基因的常用載體形式之一，并且正在獲得越來越廣泛的應(yīng)用。已有研究表明利用慢病毒在疾病的基因治療方面發(fā)揮重要的作用。

促性腺激素抑制激素作為一種對性腺激素具有抑制作用的調(diào)節(jié)因子，在一些物種激素調(diào)節(jié)中有過一些報(bào)道，但是構(gòu)建其慢病毒載體并在小鼠卵泡發(fā)育中的作用還未見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于，針對現(xiàn)有技術(shù)還沒有對小鼠促性腺激素抑制激素基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控的產(chǎn)品這一缺陷，提供一種高效表達(dá)小鼠促性腺激素抑制激素(簡稱gnih)基因的慢病毒載體，同時(shí)提供該載體的應(yīng)用。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種高效表達(dá)小鼠促性腺激素抑制激素基因的慢病毒表達(dá)載體，該慢病毒表達(dá)載體是將小鼠促性腺激素抑制激素基因插入慢病毒載體plvx-ires-zsgreen1中構(gòu)建而成。

本發(fā)明同時(shí)提供上述慢病毒表達(dá)載體在促進(jìn)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞促性腺激素抑制激素基因表達(dá)中的應(yīng)用。其中，該應(yīng)用是指對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖具有抑制作用；對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞雌激素分泌具有抑制作用；對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡具有促進(jìn)作用。

本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明構(gòu)建的慢病毒表達(dá)載體能夠顯著提高小鼠卵巢顆粒細(xì)胞gnih基因的表達(dá)，以及對雌激素分泌及顆粒細(xì)胞增殖、凋亡均產(chǎn)生重要作用。通過實(shí)時(shí)定量熒光pcr檢測發(fā)現(xiàn)，慢病毒表達(dá)載體能使gnihmrna表達(dá)量提高1200倍以上，通過elsia檢測發(fā)現(xiàn)，慢病毒表達(dá)載體能使雌激素分泌量降低38.2％，流式細(xì)胞技術(shù)檢測表明，顆粒細(xì)胞凋亡升高47.5％。本發(fā)明所構(gòu)建的慢病毒表達(dá)載體可制備成基因藥物或其他合適的制劑用于調(diào)節(jié)小鼠促性腺激素抑制激素分泌水平，可應(yīng)用于調(diào)控動物繁殖功能。

附圖說明

圖1是慢病毒系統(tǒng)質(zhì)粒圖。

其中，a為慢病毒表達(dá)質(zhì)粒，b為慢病毒包裝質(zhì)粒。

圖2是gnihpcr電泳結(jié)果圖。

其中，1：gnih，2：m：dl2000marker。

圖3是plvx-ires-zsgreen1空質(zhì)粒酶切圖。

其中，1：plvx-ires-zsgreen1空質(zhì)粒，2：ecori和bamhi雙酶切，m：dl8000marker。

圖4是plvx-gnih菌落pcr檢測圖。

其中，1-5：plvx-gnih菌液，m:dl2000marker。

圖5是小鼠plvx-gnih酶切鑒定電泳圖。

其中，1：plvx-ires-zsgreen1空質(zhì)粒，2：plvx-ires-zsgreen1空質(zhì)粒ecori和bamhi雙酶切plvx-gnih產(chǎn)物，m1：dl5000marker，m2：dl2000maker

圖6是克隆基因同小鼠gnih基因?qū)Ρ冉Y(jié)果。

其中，query為小鼠gnih基因序列，sbjet為克隆得到的測序結(jié)果。

圖7是慢病毒干擾質(zhì)粒滴度測定圖。

其中，a：plvx-gnih，b：plvx-nc；a：病毒液量為9×10⁰，b：病毒液量為9×10^-1，c：病毒液量為9×10^-2、d：病毒液量為9×10^-3、e：病毒液量為9×10^-4、f：病毒液量為9×10^-5、g：病毒液量為9×10^-6、h：病毒液量為9×10^-7。

圖8是plvx-gnih轉(zhuǎn)染顆粒細(xì)胞96h熒光顯微鏡圖(100×)。

圖9是慢病毒質(zhì)粒對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞中g(shù)nihmrna表達(dá)水平的影響，b表示差異性顯著(p<0.05)。

圖10是轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒病毒和慢病毒質(zhì)粒后對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖的影響，b表示差異性顯著(p<0.05)。

圖11是慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞72h后流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡圖。

其中，a：plvx-nc；b：plvx-gnih。

圖12是圖11是慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞72h后的細(xì)胞凋亡率，b表示差異性顯著(p<0.05)。

圖13是轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒病毒和慢病毒質(zhì)粒96h后對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞雌激素分泌的影響，b表示差異性顯著(p<0.05)。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

實(shí)施例1小鼠卵巢顆粒細(xì)胞中g(shù)nih的擴(kuò)增

1.按照invitrogen公司的trizolreagent試劑盒提取小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的rna(小鼠促性腺激素抑制激素(gnih)，genebank登錄號nm021892)，所用的器材均經(jīng)過0.1％depc水浸泡過夜后，高壓滅菌。所用的試管均為rna-freeep管，收集的細(xì)胞經(jīng)trizol溶解，氯仿抽提及異丙醇沉淀后，用0.1％depc水溶解rna，并以此為模板合成cdna第一鏈；

2.以上述合成的cdna第一鏈為模板，以含有bamhi及ecori酶切位點(diǎn)的上下游引物進(jìn)行pcr擴(kuò)增，上游引物：ccggaattcatggaaattatttcattaaaacgattc(seqidno：1)，下游引物：cgcggatccctatttttctggtttcctttctgc(seqidno：2)，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為567bp。pcr反應(yīng)體系：10×buffer5μl、上游引物1μl、下游引物1μl、ps酶0.5μl、dntp2μl、cdna模板2μl、補(bǔ)加ddh2o至20μl。反應(yīng)條件：95℃，2min；95℃，10s,59℃，20s,72℃，30s，35個(gè)循環(huán)后72℃延伸10min，然后將擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定，電泳片段大小與預(yù)期一致(圖2)，然后用膠回收試劑盒回收片段。

實(shí)施例2構(gòu)建plv-gnih慢病毒表達(dá)載體

1.酶切反應(yīng)。反應(yīng)體系：ecori與bamhi雙酶切pcr產(chǎn)物。ecori與bamhi雙酶切圖1a所示的plvx-ires-zsgreen1，酶切體系：10×buffer2μl、bamhi1μl、ecori1μl、plvx-ires-zsgreen1質(zhì)粒5μl，補(bǔ)充ddh2o至20μl。反應(yīng)條件為37℃反應(yīng)1h，然后采用1％瓊脂糖凝膠電泳(圖3)。酶切產(chǎn)物用dna純化回收試劑盒回收，于-20℃保存。

2.連接反應(yīng)。反應(yīng)體系：10×buffer1μl、線性化的plvx-ires-zsgreen1質(zhì)粒2μl、gnih片段2μl、t4dna連接酶1μl，補(bǔ)充ddh2o至10μl。反應(yīng)條件為16℃連接過夜，獲得重組的plvx-gnih-ires-zsgreen1質(zhì)粒。

3.轉(zhuǎn)化與陽性克隆的鑒定。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至感受態(tài)的大腸桿菌，于具有amp抗性的固體lb培養(yǎng)基中37℃孵育過夜后，挑取單個(gè)菌落，接種到lb液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫震蕩培養(yǎng)5h。pcr鑒定陽性克隆，采用primer5設(shè)計(jì)引物，其中上游引物序列：gaggatctatttccggtgaattatg(seqidno：3)，下游引物序列：gtattttccgtcaccttctttgc(seqidno：4)，由南京金斯瑞生物公司合成。擴(kuò)增的片段包含于插入的目的dna片段中。

pcr擴(kuò)增片段約為150bp，反應(yīng)體系為：10×buffer1μl、dntp0.5μl、taq酶0.1μl、上游引物0.2μl、下游引物0.2μl、菌液0.4μl，補(bǔ)充ddh2o至10μl。按以下條件進(jìn)行pcr反應(yīng)：95℃，2min；95℃，30s,60℃，30s,72℃，30s，30個(gè)循環(huán)后72℃延伸10min。分別取2μl產(chǎn)物于1％瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果見圖4。

陽性克隆酶切鑒定：選取任一陽性克隆，采用ecori與bamhi雙酶切鑒定，反應(yīng)體系為10×buffer1μl、bamhi0.5μl、ecori0.5μl、質(zhì)粒2μl，補(bǔ)充ddh2o至10μl。反應(yīng)條件為37℃反應(yīng)1h，然后采用1％瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果見圖5。

陽性克隆測序驗(yàn)證：選取陽性克隆的菌液送南京金斯瑞生物公司測序，測序結(jié)果見圖6，利用blast進(jìn)行同源性分析，將構(gòu)建成功的慢病毒質(zhì)粒命名為plv-gnih(plvx-gnih是在plvx-ires-zsgreen1質(zhì)粒中插入gnih序列構(gòu)成)。實(shí)施例3慢病毒包裝及滴度測定

1.準(zhǔn)備293ft細(xì)胞。用0.25％胰蛋白酶消化對數(shù)生長期的293ft細(xì)胞，以含10％血清的培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度為10⁷個(gè)細(xì)胞重新接種于10cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，37℃，5％co2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合度達(dá)70-80％時(shí)即可用于轉(zhuǎn)染。

2.細(xì)胞轉(zhuǎn)染，按照lipofectaminetm2000試劑盒說明書進(jìn)行。

轉(zhuǎn)染前2小時(shí)，更換新鮮培養(yǎng)基。按照10，6.5,3.5g,2.5μg的比例分別把重組質(zhì)粒(空質(zhì)粒),plp1,vsvg,plp2(購自invitrogen公司)加入到1500μlopti-mem內(nèi)混勻，另外取35μllip2000加入到1500μlopti-mem內(nèi)混勻，兩者迅速混合，混勻，室溫靜止15min,逐滴加入到培養(yǎng)皿內(nèi)，充分混勻。12h后更換不含雙抗的含2％fbs的病毒收獲培養(yǎng)基。

3.病毒收集。收獲病毒培養(yǎng)基到離心管內(nèi)，迅速置于冰上進(jìn)行預(yù)冷。在4℃，1500g的條件下離心30min。病毒液經(jīng)0.45μm濾器過濾后，加入4×病毒濃縮液，加入比例為3:1。濃縮液加入后在4℃的冰箱中靜置過夜，在4℃，1500g轉(zhuǎn)速下對其進(jìn)行離心45min，棄上清液。用500μl無血清培養(yǎng)基吹打重懸病毒聚集團(tuán)塊，制成病毒液。

4.滴度測定。取10μl濃縮病毒加入到90μl稀釋液中，此為第一稀釋度，從第一稀釋度中取10μl加入到90μl稀釋液中，此為第二稀釋度，逐級稀釋，共取8個(gè)稀釋度(病毒液量為9×10⁰-9×10^-7μl)。取90μl稀釋病毒液加入96孔板，感染4天后，進(jìn)行熒光觀察計(jì)數(shù)。病毒滴度(tu/ml)等于熒光表達(dá)量除以病毒液量。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)病毒液量為9×10^-7時(shí)，視野下均無熒光，當(dāng)病毒液量為9×10^-6時(shí)，plvx-gnih及plvx-nc感染的視野下的熒光個(gè)數(shù)均為2個(gè)(見圖7)，因此根據(jù)滴度計(jì)算公式，其滴度都為2×10⁸tu/ml。

實(shí)施例4gnihmrna表達(dá)水平檢測

1.病毒液感染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞。培養(yǎng)的顆粒細(xì)胞密度達(dá)70-80％時(shí)，以合適的感染復(fù)數(shù)(moi＝100)將感染慢病毒的病毒液感染細(xì)胞。以不感染任何慢病毒的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞為空白對照，以感染plvx-nc病毒液的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞為陰性對照。感染96h后收集細(xì)胞，-70℃保存，用于rna提取。

2.感染細(xì)胞總rna提取。采用invitrogen公司的trizolreagent提取感染細(xì)胞的總rna。

3.realtime-pcr檢測細(xì)胞內(nèi)gnih的表達(dá)水平

以提取的rna為模板，利用thermo公司逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，以oligo-dt為引物進(jìn)行rt反應(yīng)。取總rna5ug，oligo-dt2.5μl，depc水補(bǔ)至12.5μl于72℃反應(yīng)5min后立即至于冰上；在冰浴狀態(tài)下加入5×reactionbuffer4μl，ribolockrnaseinhibitor0.5μl，dntpmix(10mm)2μl，revertaidreversetranscriptase1μl，于42℃反應(yīng)60min后，再72℃反應(yīng)10min逆轉(zhuǎn)錄形成cdna。

gnih的引物如下，gnih上游引物：tgatgcctcattttcacagca(seqidno：5)，下游引物：ctgcggggcttcttttctc(seqidno：6)，pcr擴(kuò)增片段為225bp。以小鼠gapdh為內(nèi)參基因(gapdh上游引物為：aggtcggtgtgaacggatttg(seqidno：7)；下游引物為：tgtagaccatgtagttgaggtca(seqidno：8))，擴(kuò)增片段為123bp，引物由南京金斯瑞生物公司合成。

在熒光定量pcr專用96孔板中，每孔加入2×qpcrmix10μl、上游引物0.5μl、下游引物0.5μl、cdna模板2μl，加depc水至20μl，每組設(shè)置三個(gè)平行。小心將離心管蓋壓緊后短暫離心。

按biorad熒光定量pcr儀的操作說明放入96孔pcr板，設(shè)置pcr反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃，5min；95℃，30s；58℃，30s；72℃,20s，經(jīng)42個(gè)循環(huán)后72℃，10min進(jìn)行延伸。各目的基因的表達(dá)水平可用2^-△ct法進(jìn)行計(jì)算，△ct＝(目的基因ct-內(nèi)參基因ct)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染96h后，小鼠卵巢顆粒細(xì)胞中可見到熒光(圖8)。慢病毒液感染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞后，與空白組相比，空質(zhì)粒病毒液組感染后基因表達(dá)幾乎無變化，慢病毒過表達(dá)組顯著提高細(xì)胞中g(shù)nihmrna的表達(dá)水平，提高1200倍以上(圖9)。

由此可見，體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明涉及的慢病毒質(zhì)?？捎行У靥岣遟nih基因的表達(dá)，因此可用于小鼠促性腺激素抑制激素生物學(xué)功能研究。

實(shí)施例5gnih過表達(dá)對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的增殖作用

1.慢病毒感染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞。以未感染任何病毒液的顆粒細(xì)胞為空白組，以感染plvx-nc顆粒細(xì)胞為陰性對照組，感染plvx-gnih慢病毒為實(shí)驗(yàn)組。

2.mtt法測定細(xì)胞增殖情況

(1)96孔板板中，以每孔5000個(gè)細(xì)胞的接種量，鋪板感染慢病毒的顆粒細(xì)胞于96孔板中(每組三個(gè)平行)；

(2)每孔加20μlmtt溶液(5mg/ml)，在37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h；

(3)小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，避免吸去紫色結(jié)晶，然后每孔加150μldmso，振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解；

(4)選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果。結(jié)果表明，經(jīng)過96h培養(yǎng)，細(xì)胞增長了將近3倍，在72h時(shí)細(xì)胞的增長速度減緩。相對于空白對照與陰性對照組，plvx-gnih可抑制顆粒細(xì)胞增殖，而在72h時(shí)的抑制作用最明顯，相對于空白組其抑制效率為29％(圖10)。

實(shí)施例6gnih過表達(dá)對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的作用

1.慢病毒感染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞。以感染plvx-nc顆粒細(xì)胞為對照組，感染plvx-gnih為實(shí)驗(yàn)組。

2.流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡

采用南京凱基生物公司的annexinv-apc/pi細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書進(jìn)行：

(1)慢病毒感染細(xì)胞72h后，各組細(xì)胞離心收集，用4℃預(yù)冷pbs洗滌2次；

(2)用500μl結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為10⁶/ml，然后取100μl細(xì)胞懸浮于5ml流式管中；

(3)加入5μlannexinv-apc混勻后，再加入5μlpropidiumiodide混勻，于室溫避光孵育15min；

(4)重懸于400μlpbs，400目篩網(wǎng)過濾，加樣于流式細(xì)胞儀(facs)檢測細(xì)胞凋亡。激發(fā)波長ex＝488nm，發(fā)射波長em＝530nm。獲得細(xì)胞凋亡數(shù)據(jù)后用modfitlt軟件進(jìn)行細(xì)胞凋亡相對定量分析。結(jié)果顯示，plvx-nc感染細(xì)胞后顆粒細(xì)胞凋亡率為11.62％；plvx-gnih組顆粒細(xì)胞凋亡率為22.12％。因此相對于plvx-nc組，plvx-gnih對顆粒細(xì)胞凋亡的促進(jìn)效率為47.5％(圖11和圖12)。

實(shí)施例7gnih過表達(dá)對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞雌激素分泌的作用

1.慢病毒感染小鼠卵巢顆粒細(xì)胞。以未感染任何病毒液的顆粒細(xì)胞為空白組，以感染plvx-nc顆粒細(xì)胞為陰性對照組，感染plvx-gnih慢病毒為實(shí)驗(yàn)組。

2.采用上海麗臣公司小鼠雌激素elisa試劑盒的操作說明測定雌激素含量。

(1)室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃；

(2)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔、空白孔(空白孔什么都不加)；標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度(濃度設(shè)置見標(biāo)準(zhǔn)曲線中標(biāo)準(zhǔn)品的濃度)的標(biāo)準(zhǔn)品50μl；

(3)待測樣本孔先加樣本稀釋液40μl，再加待測樣本10μl；

(4)隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過氧化物酶hrp標(biāo)記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min；

(5)棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次；

(6)所有孔加入底物a\b各50μl，37℃避光孵育15min；

(7)所有孔加入終止液50μl，15min內(nèi)在450nm波長處測定各孔的od值。

(8)以標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測定的各組的吸光度計(jì)算雌激素濃度。

結(jié)果表明，空白組的雌激素濃度為27.56pg/ml；plvx-nc組的雌激素濃度為25.67pg/ml；plvx-gnih組中雌激素濃度為17.49pg/ml。與空白組比，plvx-n組雌激素含量減少，但二組差異性不顯著；與空白組對比，plvx-gnih組雌激素濃度降低36.5％(圖13)。因此，在顆粒細(xì)胞中g(shù)nih過表達(dá)時(shí)，雌激素分泌會受到抑制。

綜上所述，所構(gòu)建的慢病毒質(zhì)粒能明顯促進(jìn)gnihmrna的表達(dá)，gnih過表達(dá)后對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖及雌激素分泌具有抑制作用，對顆粒細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用。因此，此高效表達(dá)促性腺激素抑制激素的基因的慢病毒載體能用于調(diào)控動物的繁殖過程。

sequencelisting

<110>湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)

<120>一種高效表達(dá)小鼠促性腺激素抑制激素基因的慢病毒載體及其應(yīng)用

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<213>人工序列

<400>3

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