本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，提供一類4-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯及其制備方法和藥物用途。
背景技術(shù)：
腦卒中具有高死亡率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率等特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類健康。由于腦組織結(jié)構(gòu)精細(xì)復(fù)雜，對(duì)缺血缺氧損傷特別敏感且脆弱，迄今臨床上少見療效確切的治療藥物。研究顯示：腦缺血條件下，興奮性氨基酸(如谷氨酸)過度釋放，引起N-甲基-D-天門冬氨酸受體(NMDAR)過度激活，通過NMDAR-PSD-95-nNOS的信號(hào)途徑病理性釋放一氧化氮(NO)(Science,1999,284,1845-1848；Nature Medicine 2010,16,1439-1443)。NO本身具有較強(qiáng)的氧化性，釋放過多或清除功能不足時(shí)，會(huì)直接損傷周圍細(xì)胞表面脂質(zhì)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。另一方面，腦缺血再灌注過程中生成了大量的氧陰離子自由基(O2-.)，和NO反應(yīng)生成超氧亞硝酸陰離子自由基(ONOO-.)，后者作為穩(wěn)定的強(qiáng)氧化物，將對(duì)細(xì)胞造成更為嚴(yán)重的損傷(Cell.Mol.Life Sci.,2004,61,657-668)。因此，NMDAR介導(dǎo)的nNOS激活是神經(jīng)元興奮性毒性發(fā)生的關(guān)鍵事件，圍繞這兩個(gè)靶分子開發(fā)了許多藥物，但由于NMDAR和nNOS均具有非常重要的生理功能，對(duì)它們的直接干預(yù)往往導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用(Curr.Opin.Pharmacol.,2006,6,53-60)。如果不直接干預(yù)NMDAR或nNOS，選擇性阻斷NMDAR與PSD-95(Science,2002,298,846-850)或者nNOS與PSD-95的偶聯(lián)(Nature Medicine 2010,16,1439-1443)，可以在不影響NMDAR和nNOS生理功能的前提下抑制腦缺血后NO的病理性釋放，可能獲得沒有明顯副作用的安全有效的抗腦卒治療藥物，而nNOS與PSD-95的偶聯(lián)處在整個(gè)信號(hào)通路的下游，是更為理想藥物作用靶點(diǎn)(Neuropharmacology,2003,45,738-754)。
nNOS-PSD-95解偶聯(lián)劑芐基苯胺衍生物4-N-(2-羥基-3，5-二氯芐基)氨基水楊酸(ZL006，化合物2)，能夠在不影響NMDAR、nNOS生理功能的前提下，減少NMDAR介導(dǎo)的NO的病理性釋放，對(duì)谷氨酸刺激下的神經(jīng)細(xì)胞損傷顯示出明顯的神經(jīng)保護(hù)作用，改善大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)再灌注引起的動(dòng)物神經(jīng)缺陷癥狀、縮小梗死容積(Nature Medicine 2010,16,1439–1443)。ZL006避免了直接干預(yù)NMDAR或/和nNOS可能引起的學(xué)習(xí)記憶障礙、行為異常等副作用，具有更好的安全性，對(duì)于腦缺血損傷相關(guān)疾病的治療具有重要意義(Nature.Rev.Neurol.,2011,7,61)。
ZL006為代表的nNOS-PSD-95解偶聯(lián)劑的作用靶點(diǎn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，該類藥物需要具有較好的中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布。但由于這類解偶聯(lián)劑具有較高的親水性，不利于藥物中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布。ZL006乙酯(化合物3)雖然能夠增加藥物在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布，但是在腦組織中產(chǎn)生的ZL006沒有明顯增加(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters 2016,158:494-506)。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，4-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯(1)既能夠在體內(nèi)具有一定的穩(wěn)定性，又能夠在中樞釋放出ZL006，與ZL006乙酯相比，能夠明顯增加ZL006在腦組織中的濃度，顯示了良好的腦靶向作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
解決的技術(shù)問題：本發(fā)明提供一類4-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯或其藥學(xué)上可接受的鹽，該藥物具有良好的腦靶向作用，可用于制備治療腦卒中藥物。
技術(shù)方案：一種腦靶向化合物，名稱為4-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯，結(jié)構(gòu)如式1所示：
上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療腦卒中藥物中的應(yīng)用。
上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療慢性病理性疼痛藥物中的應(yīng)用。
上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療神經(jīng)退行性疾病藥物中的應(yīng)用。
一種治療腦卒中的藥物，有效成分為上述化合物。
一種治療慢性病理性疼痛的藥物，有效成分為上述化合物。
一種治療神經(jīng)退行性疾病的藥物，有效成分為上述化合物。
本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽還可制成各種制劑，包含但不限于片劑、膠囊、注射液、凍干粉等。
有益效果：本發(fā)明所述的4-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯，具有良好的腦靶向作用。可用于制備治療腦卒中、神經(jīng)病理性疼痛、炎性病理性疼痛的藥物。同時(shí)，由于該類藥物獨(dú)特的作用機(jī)制，還可用于制備治療癲癇、情感障礙性疾病以及各種神經(jīng)退行性疾病的藥物。
附圖說明
圖1：尾靜脈注射ZL006衍生物的腦組織中ZL006濃度比較。式1化合物的腦組織中ZL006濃度明顯高于其他ZL006衍生物。圖1小鼠尾靜脈給藥化合物1、化合物2(ZL006)、化合物3(ZL006乙酯)后15分鐘、30分鐘、60分鐘，腦組織中ZL006的濃度。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例詳細(xì)描述了尾靜脈注射本發(fā)明的目標(biāo)化合物和其他ZL006衍生物的腦組織中ZL006濃度比較,可使本專業(yè)技術(shù)人員可全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1
4-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯的制備
1)乙基硫代硫酸鈉的制取
在50mL茄形瓶中加入溴乙烷(1.0g,9.3mmol)，PEG 400(0.05mL)以及乙醇(10mL)，攪拌，向其中加入五水合硫代硫酸鈉(2.6g,10.3mmol)的水(10mL)溶液，滴加完畢后，氮?dú)獗Ｗo(hù)，升溫至110℃，反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，干燥，得到黃色的乙基硫代硫酸鈉(1.44g，產(chǎn)率95％)。
2)碘化N,4-二甲基-5-[2-(羥基)乙基]噻唑的制取
在50mL茄形瓶中加入4-甲基-5-(β-羥乙基)噻唑(1.0g,7.0mmol)，碘甲烷(1.0g,7.0mmol)以及乙腈(10mL)，攪拌，加熱回流1.5h。反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至室溫，減壓旋蒸，向其中加入乙酸乙酯(30mL)，過濾，濾餅用乙酸乙酯(5mL)洗滌2次，減壓濃縮，干燥，得到黃色的碘化N,4-二甲基-5-[2-(羥基)乙基]噻唑(1.81g，產(chǎn)率91％)。
3)N-甲基-N-[4-羥基-1-甲基-2-(乙基)二硫-1-丁烯基]甲酰胺的制取
在50mL茄形瓶中加入碘化N,4-二甲基-5-[2-(羥基)乙基]噻唑(1.0g,3.5mmol)，乙基硫代硫酸鈉(0.6g,3.5mmol)，氫氧化鈉(0.28g,7.0mmol)以及水(20mL)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，常溫?cái)嚢?0min。反應(yīng)結(jié)束后，乙酸乙酯(20mL)萃取3次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮。所得粗產(chǎn)物通過硅膠柱純化(展開劑：石油醚：丙酮＝10:1)，得到黃色油狀的N-甲基-N-[4-羥基-1-甲基-2-(乙基)二硫-1-丁烯基]甲酰胺(0.13g，產(chǎn)率15％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),4.20-4.23(m,2H),2.93-3.00(m,2H),2.78(s,3H),2.56-2.62(m,2H),1.89(s,3H),1.19-1.23(m,3H).
MS(ESI):m/z 258.1[M+Na]+.
4)4-[N-(3,5-二氯-2-羥基芐)-N-叔丁氧羰基]氨基-2-羥基苯甲酸的制取
在50mL茄形瓶中加入5-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸(1.0g,3.0mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.37g,3.0mmol)，二碳酸二叔丁酯(0.65g,3.0mmol)以及二氯甲烷(3.0mL)，室溫?cái)嚢?h。反應(yīng)結(jié)束后，加水(20mL)，乙酸乙酯(20mL)萃取3次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到白色的5-[N-(3,5-二氯-2-羥基芐基)-N-叔丁氧羰基]氨基-2-羥基苯甲酸(1.2g，產(chǎn)率91％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.83(s,1H),7.77(d,J＝8.43Hz,1H),7.69(s,1H),6.93(s,1H),6.84(d,J＝7.69Hz,1H),5.72(s,1H),5.68(s,1H),4.85(s,2H),1.26(s,9H).
MS(ESI):m/z 427.1[M–H]-.
5)4-[N-(3,5-二氯-2-羥基芐)-N-叔丁氧羰基]氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯的制取
在50mL茄形瓶中加入化合物5-[N-(3,5-二氯-2-羥基芐)-N-叔丁氧羰基]氨基-2-羥基苯甲酸(0.214g,0.5mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.11g,0.55mmol)，1-羥基苯并三唑(0.07g,0.55mmol)以及二氯甲烷(20mL)，室溫下攪拌30min，然后加入N-甲基-N-[4-羥基-1-甲基-2-(乙基)二硫-1-丁烯基]甲酰胺(0.12g,0.5mmol)，室溫?cái)嚢?4h。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，加水(20mL)，乙酸乙酯(10mL)萃取3次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，所得黃色油狀物粗品通過硅膠柱純化(展開劑：石油醚：乙酸乙酯＝10:1)得黃色油狀的5-[N-(3,5-二氯-2-羥基芐)-N-叔丁氧羰基]氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯(0.10g，產(chǎn)率30％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.52(s,1H),7.80(s,1H),7.74(d,J＝8.43Hz,1H),7.67(s,1H),6.91(s,1H),6.84(d,J＝7.68Hz,1H),5.75(s,1H),5.67(s,1H),4.86(s,2H),4.49(t,J＝6.33Hz,2H),2.95-3.03(m,2H),2.81(s,3H),2.62-2.69(m,2H),1.89(s,3H),1.27(s,9H),1.19-1.23(m,3H).
MS(ESI):m/z 667.1[M+Na]+.
6)4-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯(1)的制取
在50mL茄形瓶中加入化合物5-[N-(3,5-二氯-2-羥基芐)-N-叔丁氧羰基]氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯(100mg,0.155mmol)，三氟醋酸(176mg,1.55mmol)以及二氯甲烷(5mL)，室溫下攪拌1h。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，加水(20mL)，乙酸乙酯(10mL)萃取3次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，所得黃色油狀物粗品通過硅膠柱純化(展開劑：石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得黃色油狀的5-(3,5-二氯-2-羥基芐)氨基-2-羥基苯甲酸3-(2-乙基)二硫-4-N-甲基甲酰胺基-3-戊烯醇酯(68mg，產(chǎn)率80％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.49(s,1H),7.81(s,1H),7.73(d,J＝8.43Hz,1H),7.66(s,1H),6.92(s,1H),6.84(d,J＝7.68Hz,1H),5.73(s,1H),5.64(s,1H),4.87(s,2H),4.50(t,J＝6.33Hz,2H),2.94-3.04(m,2H),2.80(s,3H),2.63-2.69(m,2H),1.91(s,3H),1.19-1.23(m,3H).
MS(ESI):m/z 567.1[M+Na]+.
實(shí)施例2
1)樣品溶液的配制
稱取化合物1樣品20mg，溶于極少量DMSO中(少于總體積1％)，加入吐溫80(少于總體積5％)，于熱水浴中后加入生理鹽水定容至20mL，配制成濃度為1mg·mL-1溶液。
2)試驗(yàn)方法
取ICR小鼠18只，體重20g左右，隨機(jī)分成3組，每組6只，尾靜脈給藥化合物1，劑量為20mg·kg-1。小鼠禁食不禁水12h，實(shí)驗(yàn)期間自由飲水。給藥后分別于15min、30min、1h處死小鼠。解剖取出腦組織，用生理鹽水漂洗組織表面的血漬，用濾紙將組織表面的水分吸干，稱重。加入重量比提及1:3的生理鹽水(即1g腦組織加入3mL生理鹽水)，電動(dòng)勻漿器將組織制備成勻漿液。超聲10min，排除氣泡。于1.5mL的離心管中精密吸取100μL腦組織勻漿液，隨后加入精密吸取的10μL內(nèi)標(biāo)溶液以及300μL甲醇作為沉淀劑，于渦旋振蕩器上混勻渦1min，于離心機(jī)中12000r·min-1，離心10min，精密吸取上清液150μL加入50μL超純水，取10μL溶液進(jìn)樣，采用Agilent 1200SL/6410B高效液相色譜/質(zhì)譜儀檢測(cè)，記錄其色譜圖像。應(yīng)用色譜工作站得到ZL006和內(nèi)標(biāo)的峰面積比值，代入隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線中，求得ZL006的血漿及腦組織濃度。
同法測(cè)定尾靜脈給藥ZL006(化合物2)，ZL006乙酯(化合物3)腦組織中ZL006的濃度。測(cè)定結(jié)果見圖1。小鼠尾靜脈給藥化合物1后組織中ZL006的濃度明顯高于ZL006或者ZL006乙酯。