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技術(shù)領(lǐng)域：
】本發(fā)明涉及使用細(xì)胞產(chǎn)生物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
：【細(xì)胞培養(yǎng)和物質(zhì)產(chǎn)生】細(xì)胞生物在體內(nèi)一般作為取三維的結(jié)構(gòu)的集團(tuán)存在。一方面，在人工環(huán)境中培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，一般使用細(xì)胞在培養(yǎng)容器底面以單層狀粘著的形式二維培養(yǎng)的經(jīng)典的平面培養(yǎng)法，或在細(xì)胞在液體培養(yǎng)液中分散的狀態(tài)下培養(yǎng)的懸浮培養(yǎng)法。對(duì)于在平面培養(yǎng)法中使用的細(xì)胞適宜為粘接性比較高的細(xì)胞，但即使在使用適宜的細(xì)胞時(shí)，由培養(yǎng)環(huán)境的差異，細(xì)胞的性質(zhì)有時(shí)也大大家變化。對(duì)于懸浮培養(yǎng)法也存在適宜的細(xì)胞和不適宜的細(xì)胞。向疫苗、酶、激素、抗體、細(xì)胞因子等在醫(yī)療用途中使用的生物體內(nèi)蛋白質(zhì)等的需要提高，使用細(xì)胞培養(yǎng)的生物體內(nèi)蛋白質(zhì)等的大量產(chǎn)生受到關(guān)注。對(duì)于大腸桿菌等的懸浮細(xì)胞，研究了用大型培養(yǎng)槽大量培養(yǎng)的技術(shù)。在使用大型培養(yǎng)槽的懸浮細(xì)胞的大量培養(yǎng)中，大量的培養(yǎng)液和攪拌裝置變得必要。一方面，使用附著細(xì)胞而進(jìn)行物質(zhì)產(chǎn)生的研究，也伴隨使用的細(xì)胞的研究的進(jìn)展，受到多的關(guān)注。在附著細(xì)胞的情況中，在經(jīng)典的平面培養(yǎng)法中，由于細(xì)胞僅二維展開(kāi)，多的培養(yǎng)面積變得必要。為了生物體內(nèi)蛋白質(zhì)等的大量產(chǎn)生，為更立體地培養(yǎng)大量的細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)載體和生物反應(yīng)器的研究也大量進(jìn)行。作為代表性的細(xì)胞培養(yǎng)用載體，作為可附著培育細(xì)胞的小粒子的微載體成為廣泛的研究對(duì)象(專利文獻(xiàn)3)。各種各樣的種類的微載體被研究－開(kāi)發(fā)，也有不少在市售。疫苗或蛋白質(zhì)的制造也有多的使用，作為還耐放大的系統(tǒng)，作為廣泛的方法論采用。但是，在微載體培養(yǎng)中，由于微載體有必要充分地?cái)嚢瑁瓟U(kuò)散而不凝集，有細(xì)胞培養(yǎng)的量的上限。而且、當(dāng)例如進(jìn)行物質(zhì)產(chǎn)生時(shí)，為了分離載體本身而有必要用區(qū)分細(xì)的粒子的濾器等分離等，方法論上煩瑣的作業(yè)變得必要。同時(shí)，在微載體培養(yǎng)中，從形狀限定于稱為微載體的粒狀物質(zhì)，免不了形狀導(dǎo)致的性質(zhì)。作為與微載體培養(yǎng)不同的方法，也發(fā)現(xiàn)通過(guò)使用甲基纖維素或膠凝糖膠的3維培養(yǎng)法繼續(xù)大量培養(yǎng)球形形狀的細(xì)胞的方法。在使用纖維素海綿的生物反應(yīng)器等中，確實(shí)能培養(yǎng)大量的細(xì)胞。但是，作為系統(tǒng)成為大的封閉系統(tǒng)，在培養(yǎng)環(huán)境中無(wú)法簡(jiǎn)單地接觸的等、作業(yè)上的限制也多。為了可用趨于簡(jiǎn)便并且自動(dòng)化的系統(tǒng)在細(xì)胞中有效產(chǎn)生量多的物質(zhì)，希求新的系統(tǒng)的構(gòu)建?！揪埘啺范嗫踪|(zhì)膜】聚酰亞胺是在重復(fù)單位中含酰亞胺鍵的高分子的總稱。芳香族聚酰亞胺是指芳香族化合物直接經(jīng)酰亞胺鍵連接的高分子。芳香族聚酰亞胺由于芳香族和芳香族經(jīng)酰亞胺鍵具有共價(jià)結(jié)構(gòu)，具有剛直且強(qiáng)固的分子結(jié)構(gòu)，并且，由于酰亞胺鍵具有強(qiáng)的分子間力而有非常地高的水平的熱的、機(jī)械的、化學(xué)性質(zhì)。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜從本發(fā)明前就作為濾器、低介電常數(shù)膜、燃料電池用電解質(zhì)膜等，特別以電池關(guān)系作為中心的用途利用。專利文獻(xiàn)6～8特別記載了氣體等的物質(zhì)透過(guò)性優(yōu)良，空孔率高的，兩表面的平滑性優(yōu)良，相對(duì)強(qiáng)度高的，盡管高空孔率，但有多數(shù)對(duì)于向膜厚度方向的壓縮應(yīng)力的耐力優(yōu)良的大空隙的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。這些均是經(jīng)由酰胺酸制成的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。【現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)】【專利文獻(xiàn)】專利文獻(xiàn)1：特公平6-30570專利文獻(xiàn)2：專利2683946專利文獻(xiàn)3：wo2003/054174專利文獻(xiàn)4：特開(kāi)2009-261410專利文獻(xiàn)5：wo2000/068371專利文獻(xiàn)6：wo2010/038873專利文獻(xiàn)7：特開(kāi)2011-219585專利文獻(xiàn)8：特開(kāi)2011-219586【非專利文獻(xiàn)】非專利文獻(xiàn)1：hogwoodetal.,currentopinioninbiotechnology2014,30:153-160非專利文獻(xiàn)2：kurokawaetal.,journalofbioscienceandbioengineeringvol.111no.5,600-604,2011技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：【發(fā)明要解決的技術(shù)課題】本發(fā)明旨在提供使用細(xì)胞而產(chǎn)生物質(zhì)的方法、物質(zhì)產(chǎn)生裝置、試劑盒、及用途?！窘鉀Q課題的技術(shù)方案】本發(fā)明人為了提供能在細(xì)胞中簡(jiǎn)便并且有效產(chǎn)生物質(zhì)的方法、系統(tǒng)的課題的解決，銳意研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)通過(guò)進(jìn)行使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞培養(yǎng)，不進(jìn)行特別的預(yù)處理等，將大量的細(xì)胞在限定的空間內(nèi)培養(yǎng)，活用該高密度培養(yǎng)特性而可實(shí)現(xiàn)效率的物質(zhì)產(chǎn)生，想到本發(fā)明。從而，本發(fā)明以使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜培養(yǎng)細(xì)胞作為特征之一。細(xì)胞活用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜所具有的能通過(guò)細(xì)胞的大口徑連接孔而穩(wěn)定并且立體地生長(zhǎng)，與平面培養(yǎng)比較，即使成為含大量的細(xì)胞的狀態(tài)，也通過(guò)確保該連接孔與培養(yǎng)基的接觸，可穩(wěn)定繼續(xù)生長(zhǎng)。在蛋白質(zhì)或如病毒一樣的物質(zhì)產(chǎn)生中也貢獻(xiàn)同樣的結(jié)構(gòu)特性，可對(duì)于培養(yǎng)基有效率地供給產(chǎn)生物質(zhì)。再者，由聚酰亞胺多孔質(zhì)膜所具有的薄膜特性－柔性特性－形狀穩(wěn)定性－自由形態(tài)性，使在小的單位空間共存大量的片，或積層多數(shù)的膜變得可能，且由于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜所具有的超耐熱性－耐溶劑性，能用多種手段簡(jiǎn)便并且迅速地片的滅菌。再者，也期待由聚酰亞胺多孔質(zhì)膜所具有的立體的支架結(jié)構(gòu)，與平面培養(yǎng)比較時(shí)，每一個(gè)細(xì)胞的物質(zhì)產(chǎn)生量提高的可能性。雖不限定，但本發(fā)明優(yōu)選含以下的實(shí)施方式。[實(shí)施方式1]使用細(xì)胞而產(chǎn)生物質(zhì)的方法，其包括將細(xì)胞應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而培養(yǎng)細(xì)胞，由細(xì)胞產(chǎn)生物質(zhì)。[實(shí)施方式2]實(shí)施方式1所述的方法，其中上述物質(zhì)選自蛋白質(zhì)、糖蛋白質(zhì)及病毒。[實(shí)施方式3]實(shí)施方式1或2所述的方法，其中在靜置培養(yǎng)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。[實(shí)施方式4]實(shí)施方式1或2所述的方法，其中在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)或攪拌條件下培養(yǎng)細(xì)胞。[實(shí)施方式5]實(shí)施方式1或2所述的方法，其中連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。[實(shí)施方式6]實(shí)施方式5所述的方法，其包括在溫育器內(nèi)設(shè)置細(xì)胞培養(yǎng)裝置，培養(yǎng)細(xì)胞，其中，上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置含收容用于負(fù)載細(xì)胞的1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)單位，其為具備培養(yǎng)基供給口及培養(yǎng)基排出口的培養(yǎng)單位，及培養(yǎng)基供給單位，其具備培養(yǎng)基收納容器、培養(yǎng)基供給線和經(jīng)培養(yǎng)基供給線輸送培養(yǎng)基的送液泵，其中培養(yǎng)基供給線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器內(nèi)的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基供給口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)。[實(shí)施方式7]實(shí)施方式6所述的方法，其中上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置無(wú)空氣供給口、空氣排出口及氧透過(guò)膜。[實(shí)施方式8]實(shí)施方式1～7之任一項(xiàng)所述的方法，其中上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式9]實(shí)施方式8所述的方法，其中上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是通過(guò)使含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰胺酸溶液和著色前體的聚酰胺酸溶液組合物成形之后，在250℃以上熱處理得到的著色的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式10]實(shí)施方式8或9所述的方法，其中上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是有2個(gè)不同的表層面和大空隙層的多層結(jié)構(gòu)的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式11]實(shí)施方式10所述的方法，其中上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的膜厚是75μm以下。[實(shí)施方式12]實(shí)施方式1～11之任一項(xiàng)所述的方法，其中將上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜(i)折疊，(ii)卷成輪狀，(iii)將片或小片用絲狀的結(jié)構(gòu)體連接，或者，(iv)結(jié)成繩狀而在細(xì)胞培養(yǎng)容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮或固定。[實(shí)施方式13]實(shí)施方式1～12之任一項(xiàng)所述的方法，其中將2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜在細(xì)胞培養(yǎng)基中上下或左右積層而使用。[實(shí)施方式14]實(shí)施方式1～13之任一項(xiàng)所述的方法，其中細(xì)胞以表達(dá)物質(zhì)的方式由基因工程學(xué)技術(shù)轉(zhuǎn)化。[實(shí)施方式15]實(shí)施方式1～14之任一項(xiàng)所述的方法，其中細(xì)胞選自動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞、酵母菌及細(xì)菌。[實(shí)施方式16]實(shí)施方式15所述的方法，其中動(dòng)物細(xì)胞是屬于脊椎動(dòng)物門的動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞。[實(shí)施方式17]實(shí)施方式15或16所述的方法，其中動(dòng)物細(xì)胞選自中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢組織來(lái)源細(xì)胞(cho細(xì)胞)、非洲綠猴腎臟來(lái)源株化細(xì)胞(vero細(xì)胞)、人肝癌來(lái)源細(xì)胞(hepg2細(xì)胞)、狗腎臟腎小管上皮細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞株(mdck細(xì)胞)及人肝癌組織來(lái)源建立細(xì)胞株(hugk-14)。[實(shí)施方式18]實(shí)施方式15所述的方法，其中細(xì)菌選自乳酸菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及藍(lán)細(xì)菌。[實(shí)施方式19]用于在實(shí)施方式1～18之任一項(xiàng)所述的方法中使用的物質(zhì)產(chǎn)生裝置，其含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式20]實(shí)施方式19所述的物質(zhì)產(chǎn)生裝置，其中2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上下或左右積層。[實(shí)施方式21]用于在實(shí)施方式1～18之任一項(xiàng)所述的方法中使用的試劑盒，其含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。[實(shí)施方式22]聚酰亞胺多孔質(zhì)膜用于實(shí)施方式1～18之任一項(xiàng)所述的方法的用途?！景l(fā)明效果】由本發(fā)明的方法、裝置、試劑盒使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)，則通過(guò)以各種各樣的形態(tài)使1個(gè)或多個(gè)片在限定的空間內(nèi)共存，可有效培養(yǎng)大量的細(xì)胞。由本發(fā)明的方法，效率的并且簡(jiǎn)便的由細(xì)胞培養(yǎng)的物質(zhì)產(chǎn)生變得可能?！靖綀D說(shuō)明】【圖1】顯示在人皮膚成纖維細(xì)胞的長(zhǎng)期培養(yǎng)后的氣相傳代時(shí)的細(xì)胞數(shù)變化?！緦?shí)施方式】【i.產(chǎn)生物質(zhì)的方法】本發(fā)明涉及使用細(xì)胞而產(chǎn)生物質(zhì)的方法。本發(fā)明的方法包括將細(xì)胞應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而培養(yǎng)細(xì)胞，由細(xì)胞產(chǎn)生物質(zhì)。【1.細(xì)胞】可在本發(fā)明的方法中利用的細(xì)胞的種類不特別限定，能在任意的細(xì)胞的增殖中利用。例如，細(xì)胞選自動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞、酵母菌及細(xì)菌。動(dòng)物細(xì)胞被大分為屬于脊椎動(dòng)物門的動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞和無(wú)脊椎動(dòng)物(屬于脊椎動(dòng)物門的動(dòng)物以外的動(dòng)物)來(lái)源的細(xì)胞。在本說(shuō)明書中的，動(dòng)物細(xì)胞的來(lái)源不特別限定。優(yōu)選為，是指屬于脊椎動(dòng)物門的動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞。脊椎動(dòng)物門含無(wú)頜類和有頜類，有頜類含哺乳綱、鳥綱、兩棲綱、爬行綱等。優(yōu)選為，一般而言，稱為哺乳動(dòng)物的屬于哺乳綱的動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞。哺乳動(dòng)物不特別限定，優(yōu)選為，含小鼠、大鼠、人、猴、豬、狗、綿羊、山羊等。雖不限定，但作為動(dòng)物細(xì)胞優(yōu)選，例如，動(dòng)物細(xì)胞使用選自中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢組織來(lái)源細(xì)胞(cho細(xì)胞)、非洲綠猴腎臟來(lái)源株化細(xì)胞(vero細(xì)胞)、人肝癌來(lái)源細(xì)胞(hepg2細(xì)胞)、狗腎臟腎小管上皮細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞株(mdck細(xì)胞)、人肝癌組織來(lái)源建立細(xì)胞株(hugk-14)、正常人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(hfls細(xì)胞)及慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者來(lái)源成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(hfls-ra細(xì)胞)的細(xì)胞。在本說(shuō)明書中的植物細(xì)胞的來(lái)源不特別限定。含苔蘚植物、蕨類植物、種子植物的植物的細(xì)胞成為對(duì)象。種子植物細(xì)胞所來(lái)源的植物含單子葉植物、雙子葉植物之任何。雖不限定，但在單子葉植物中，含蘭科植物、稻科植物(稻、玉米、大麥、小麥、高粱等)、莎草科植物等。在雙子葉植物中，含屬于菊亞綱、木蘭亞綱、薔薇亞綱等多種亞綱的植物。藻類也可看作細(xì)胞來(lái)源生物。從作為真正細(xì)菌的藍(lán)細(xì)菌(藍(lán)藻)，含作為真核生物且單細(xì)胞生物的(硅藻、黃綠藻、渦鞭毛藻等)及作為多細(xì)胞生物的海藻類(紅藻、褐藻、綠藻)等的不同的組。在本說(shuō)明書中的古細(xì)菌及細(xì)菌的種類也不特別限定。古細(xì)菌由甲烷菌－高度好鹽菌－嗜熱好酸菌－超嗜熱菌等。細(xì)菌選自例如，乳酸菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及藍(lán)細(xì)菌等。可在本發(fā)明的方法中利用的動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞的種類雖不限定，但優(yōu)選選自多能性干細(xì)胞、組織干細(xì)胞、體細(xì)胞、及生殖細(xì)胞。在本發(fā)明中“多能性干細(xì)胞”是指有向所有的組織的細(xì)胞分化的能力(分化多能性)的干細(xì)胞的總稱。雖不限定，但多能性干細(xì)胞含胚胎干細(xì)胞(es細(xì)胞)、人工多能性干細(xì)胞(ips細(xì)胞)、胚性生殖干細(xì)胞(eg細(xì)胞)、生殖干細(xì)胞(gs細(xì)胞)等。優(yōu)選為，es細(xì)胞或ips細(xì)胞。ips細(xì)胞由于也無(wú)倫理的問(wèn)題等的理由特別優(yōu)選的。能使用作為多能性干細(xì)胞公知的任意的，例如，能使用在國(guó)際公開(kāi)wo2009/123349(pct/jp2009/057041)中記載的多能性干細(xì)胞?！敖M織干細(xì)胞”是指能分化的細(xì)胞系列限定于特定的組織，但有能向多樣的細(xì)胞種分化的能力(分化多能性)的干細(xì)胞。例如骨髓中的造血干細(xì)胞成為血細(xì)胞的祖先，神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化。此外，有制造肝臟的肝干細(xì)胞、成為皮膚組織的皮膚干細(xì)胞等各種各樣的種類。優(yōu)選為，組織干細(xì)胞從間充質(zhì)干細(xì)胞、肝干細(xì)胞、胰腺干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞、或者造血干細(xì)胞選擇?！绑w細(xì)胞”是指構(gòu)成多細(xì)胞生物的細(xì)胞的中生殖細(xì)胞以外的細(xì)胞的。在有性生殖中第二代不繼承。優(yōu)選為，體細(xì)胞從肝細(xì)胞、胰腺細(xì)胞、肌細(xì)胞、骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、皮膚細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、胰腺細(xì)胞、腎細(xì)胞、肺細(xì)胞、或者，淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或巨核細(xì)胞的血細(xì)胞選擇?！吧臣?xì)胞”是指具有在生殖中將遺傳信息傳遞給第二代的作用的細(xì)胞。例如，含用于有性生殖的配偶子、即卵子、卵細(xì)胞、精子、精細(xì)胞、用于無(wú)性生殖的孢子等。細(xì)胞也可選自肉瘤細(xì)胞、株化細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞?！叭饬觥笔侵冈诠?、軟骨、脂肪、肌肉、血液等的非上皮性細(xì)胞來(lái)源的結(jié)締組織細(xì)胞發(fā)生的癌，含軟部肉瘤、惡性骨腫瘤等。肉瘤細(xì)胞是來(lái)源于肉瘤的細(xì)胞。“株化細(xì)胞”是指經(jīng)長(zhǎng)期間在體外維持，至具有一定的穩(wěn)定的性質(zhì)，半永久的傳代培養(yǎng)變得可能的培養(yǎng)細(xì)胞。存在含pc12細(xì)胞(大鼠腎上腺髓質(zhì)來(lái)源)、cho細(xì)胞(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢來(lái)源)、hek293細(xì)胞(人胎兒腎臟來(lái)源)、hl-60細(xì)胞(人白血細(xì)胞來(lái)源)、hela細(xì)胞(人子宮頸癌來(lái)源)、vero細(xì)胞(非洲綠猴腎臟上皮細(xì)胞來(lái)源)、mdck細(xì)胞(狗腎臟腎小管上皮細(xì)胞來(lái)源)、hepg2細(xì)胞(人肝癌來(lái)源)等人的來(lái)源于各種各樣的生物種的各種各樣的組織的細(xì)胞株?！稗D(zhuǎn)化細(xì)胞”是指從細(xì)胞外部導(dǎo)入核酸(dna等)，使遺傳性質(zhì)變化的細(xì)胞。細(xì)胞只要是可表達(dá)期望的物質(zhì)的細(xì)胞，就不特別限定。細(xì)胞內(nèi)可天然表達(dá)所述物質(zhì)，或者，也可以由基因工程學(xué)技術(shù)產(chǎn)生所述物質(zhì)的方式轉(zhuǎn)化。優(yōu)選為細(xì)胞是以表達(dá)物質(zhì)的方式由基因工程學(xué)技術(shù)轉(zhuǎn)化的。對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、細(xì)菌的轉(zhuǎn)化公知各適宜的方法。(例如，molecularcloning：alaboratorymanual(fourthedition),michaelrgreenandjosephsambrook,2012,(coldspringharborlaboratorypress)、mutationresearch760(2014)36-45,reviewsinmutationresearch)【2.物質(zhì)】可由本發(fā)明的方法在細(xì)胞中產(chǎn)生的物質(zhì)的種類只要是可在細(xì)胞內(nèi)天然地或由基因工程學(xué)技術(shù)產(chǎn)生的物質(zhì)，就不特別限定。優(yōu)選為，上述物質(zhì)選自蛋白質(zhì)(含多肽)、糖蛋白質(zhì)及病毒。蛋白質(zhì)的例含促紅細(xì)胞生成素、胰島素、白蛋白等的生理活性蛋白質(zhì)、腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素6(il-6)、白細(xì)胞介素8(il-8)、粒細(xì)胞集落刺激因子(g-csf)、干擾素等的細(xì)胞因子、凝血酶、胰蛋白酶等的酶及含抗體醫(yī)藥的單克隆抗體等。優(yōu)選為，生理活性蛋白質(zhì)、單克隆抗體。糖蛋白質(zhì)的例含膠原、纖連蛋白、透明質(zhì)酸等。優(yōu)選為，纖連蛋白。病毒的例含流感病毒、腺病毒等。優(yōu)選為，流感病毒。本發(fā)明的，在特定的細(xì)胞中天然表達(dá)的物質(zhì)的例含由轉(zhuǎn)化細(xì)胞表達(dá)的抗體藥品、由人皮膚成纖維細(xì)胞表達(dá)的人膠原或纖連蛋白?！?.聚酰亞胺多孔質(zhì)膜】聚酰亞胺是在重復(fù)單位中含酰亞胺鍵的高分子的總稱，通常是指芳香族化合物直接經(jīng)酰亞胺鍵連接的芳香族聚酰亞胺。芳香族聚酰亞胺由于芳香族和芳香族經(jīng)酰亞胺鍵具有共價(jià)結(jié)構(gòu)，具有剛直且強(qiáng)固的分子結(jié)構(gòu)，并且，由于酰亞胺鍵具有強(qiáng)的分子間力而有非常高的水平的熱的、機(jī)械的、化學(xué)性質(zhì)。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是含由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺(作為主要的成分)的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，更優(yōu)選為由由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺構(gòu)成的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。“作為主要的成分含”是指作為聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的構(gòu)成成分，由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺以外的成分基本上不含，或者也可含，但不給由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亞胺的性質(zhì)影響的附加的成分。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜也含通過(guò)使含從四羧酸成分和二胺成分得到的聚酰胺酸溶液和著色前體的聚酰胺酸溶液組合物成形之后，在250℃以上熱處理而得到的著色的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。【聚酰胺酸】聚酰胺酸通過(guò)將四羧酸成分和二胺成分聚合而得到。聚酰胺酸是可通過(guò)熱亞胺化或化學(xué)亞胺化閉環(huán)而成聚酰亞胺的聚酰亞胺前體。聚酰胺酸即使酰胺酸的一部分被亞胺化，只要是不給本發(fā)明影響的范圍，就可使用。即，聚酰胺酸也可部分熱亞胺化或化學(xué)亞胺化。當(dāng)使聚酰胺酸熱亞胺化時(shí)，可根據(jù)需要，向聚酰胺酸溶液添加亞胺化催化劑、含有有機(jī)磷的化合物、無(wú)機(jī)微粒子、有機(jī)微粒子等的微粒子等。另外，當(dāng)使聚酰胺酸化學(xué)亞胺化時(shí)，可根據(jù)需要，向聚酰胺酸溶液添加化學(xué)亞胺化劑、脫水劑、無(wú)機(jī)微粒子、有機(jī)微粒子等的微粒子等。即使向聚酰胺酸溶液配合上述成分，也優(yōu)選在著色前體不析出的條件下進(jìn)行的?！局绑w】在本發(fā)明中使用的著色前體是指由250℃以上的熱處理一部分或全部碳化而生成著色化物的前體。作為在本發(fā)明中使用的著色前體，均一地溶解或分散于聚酰胺酸溶液或聚酰亞胺溶液，由250℃以上、優(yōu)選為260℃以上、再優(yōu)選為280℃以上、更優(yōu)選為300℃以上的熱處理、優(yōu)選為在空氣等的氧存在下的250℃以上、優(yōu)選為260℃以上、再優(yōu)選為280℃以上、更優(yōu)選為300℃以上的熱處理熱分解，優(yōu)選碳化生成著色化物，更優(yōu)選生成黑色系的著色化物，更優(yōu)選碳系著色前體。著色前體經(jīng)加熱則看起來(lái)像可見(jiàn)碳化物，但組織上含碳以外的異元素，含層結(jié)構(gòu)、芳香族交聯(lián)結(jié)構(gòu)、含四面體碳的無(wú)秩序結(jié)構(gòu)的。碳系著色前體不特別限制，例如，可舉出石油焦油、石油瀝青、煤焦油、煤瀝青等的焦油或?yàn)r青、焦炭、從含丙烯腈的單體得到的聚合物、二茂鐵化合物(二茂鐵及二茂鐵衍生物)等。在這些之中，優(yōu)選從含丙烯腈的單體得到的聚合物及/或二茂鐵化合物，作為從含丙烯腈的單體得到的聚合物，優(yōu)選聚丙烯酸類樹(shù)脂腈。四羧酸二酐可使用任意的四羧酸二酐，可根據(jù)期望的特性等適宜選擇。作為四羧酸二酐的具體例，可舉苯均四酸二酐、3,3’，4,4’-聯(lián)苯基四羧酸二酐(s-bpda)、2,3,3’，4’-聯(lián)苯基四羧酸二酐(a-bpda)等的聯(lián)苯基四羧酸二酐、氧基二酞酸二酐、二苯基砜-3,4,3’，4’-四羧酸二酐、雙(3,4-二羧基苯基)硫化物二無(wú)水物、2,2-雙(3,4-二羧基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷二無(wú)水物、2,3,3’，4’-二苯甲酮四羧酸二酐、3,3’，4,4’-二苯甲酮四羧酸二酐、雙(3,4-二羧基苯基)甲烷二無(wú)水物、2,2-雙(3,4-二羧基苯基)丙烷二無(wú)水物、p-亞苯基雙(偏苯三酸單酯酸酐)、p-雙亞苯基雙(偏苯三酸單酯酸酐)、m-三聯(lián)苯基-3,4,3’，4’-四羧酸二酐、p-三聯(lián)苯基-3,4,3’，4’-四羧酸二酐、1,3-雙(3,4-二羧基苯氧基)苯二無(wú)水物、1,4-雙(3,4-二羧基苯氧基)苯二無(wú)水物、1,4-雙(3,4-二羧基苯氧基)聯(lián)苯基二無(wú)水物、2,2-雙〔(3,4-二羧基苯氧基)苯基〕丙烷二無(wú)水物、2,3,6,7-萘四羧酸二酐、1,4,5,8-萘四羧酸二酐、4,4’-(2,2-六氟異亞丙基)二酞酸二酐等。另外，也優(yōu)選使用2,3,3’，4’-二苯基砜四羧酸等的芳香族四羧酸。這些可單獨(dú)使用，也可使2種以上組合使用。在這些之中，也特別優(yōu)選選自聯(lián)苯基四羧酸二酐及苯均四酸二酐的至少一種芳香族四羧酸二酐。作為聯(lián)苯基四羧酸二酐，可適宜地使用3,3’，4,4’-聯(lián)苯基四羧酸二酐。二胺可使用任意的二胺。作為二胺的具體例，可舉以下的。(1)1,4-二氨基苯(對(duì)亞苯基二胺)、1,3-二氨基苯、2,4-二氨基甲苯、2,6-二氨基甲苯等的苯核1個(gè)苯二胺；(2)4,4’-二氨基二苯基醚、3,4’-二氨基二苯基醚等的二氨基二苯基醚、4,4’-二氨基二苯基甲烷、3,3’-二甲基-4,4’-二氨基聯(lián)苯基、2,2’-二甲基-4,4’-二氨基聯(lián)苯基、2,2’-雙(三氟甲基)-4,4’-二氨基聯(lián)苯基、3,3’-二甲基-4,4’-二氨基二苯基甲烷、3,3’-二羧基-4,4’-二氨基二苯基甲烷、3,3’，5,5’-四甲基-4,4’-二氨基二苯基甲烷、雙(4-氨基苯基)硫化物、4,4’-二氨基苯甲酰苯胺、3,3’-二氯聯(lián)苯胺、3,3’-二甲基聯(lián)苯胺、2,2’-二甲基聯(lián)苯胺、3,3’-二甲氧基聯(lián)苯胺、2,2’-二甲氧基聯(lián)苯胺、3,3’-二氨基二苯基醚、3,4’-二氨基二苯基醚、4,4’-二氨基二苯基醚、3,3’-二氨基二苯基硫化物、3,4’-二氨基二苯基硫化物、4,4’-二氨基二苯基硫化物、3,3’-二氨基二苯基砜、3,4’-二氨基二苯基砜、4,4’-二氨基二苯基砜、3,3’-二氨基二苯甲酮、3,3’-二氨基-4,4’-二氯二苯甲酮、3,3’-二氨基-4,4’-二甲氧基二苯甲酮、3,3’-二氨基二苯基甲烷、3,4’-二氨基二苯基甲烷、4,4’-二氨基二苯基甲烷、2,2-雙(3-氨基苯基)丙烷、2,2-雙(4-氨基苯基)丙烷、2,2-雙(3-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-雙(4-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、3,3’-二氨基二苯基亞砜、3,4’-二氨基二苯基亞砜、4,4’-二氨基二苯基亞砜等的苯核2個(gè)二胺；(3)1,3-雙(3-氨基苯基)苯、1,3-雙(4-氨基苯基)苯、1,4-雙(3-氨基苯基)苯、1,4-雙(4-氨基苯基)苯、1,3-雙(4-氨基苯氧基)苯、1,4-雙(3-氨基苯氧基)苯、1,4-雙(4-氨基苯氧基)苯、1,3-雙(3-氨基苯氧基)-4-三氟甲基苯、3,3’-二氨基-4-(4-苯基)苯氧基二苯甲酮、3,3’-二氨基-4,4’-二(4-苯基苯氧基)二苯甲酮、1,3-雙(3-氨基苯基硫化物)苯、1,3-雙(4-氨基苯基硫化物)苯、1,4-雙(4-氨基苯基硫化物)苯、1,3-雙(3-氨基苯基砜)苯、1,3-雙(4-氨基苯基砜)苯、1,4-雙(4-氨基苯基砜)苯、1,3-雙〔2-(4-氨基苯基)異丙基〕苯、1,4-雙〔2-(3-氨基苯基)異丙基〕苯、1,4-雙〔2-(4-氨基苯基)異丙基〕苯等的苯核3個(gè)二胺；(4)3,3’-雙(3-氨基苯氧基)聯(lián)苯基、3,3’-雙(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯基、4,4’-雙(3-氨基苯氧基)聯(lián)苯基、4,4’-雙(4-氨基苯氧基)聯(lián)苯基、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕醚、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕醚、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕醚、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕醚、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕酮、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕酮、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕酮、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕酮、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕硫化物、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕硫化物、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕硫化物、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕硫化物、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕砜、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕砜、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕砜、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕砜、雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕甲烷、雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕甲烷、雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕甲烷、雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕甲烷、2,2-雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕丙烷、2,2-雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕丙烷、2,2-雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕丙烷、2,2-雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕丙烷、2,2-雙〔3-(3-氨基苯氧基)苯基〕-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-雙〔3-(4-氨基苯氧基)苯基〕-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-雙〔4-(3-氨基苯氧基)苯基〕-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-雙〔4-(4-氨基苯氧基)苯基〕-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷等的苯核4個(gè)二胺。這些可單獨(dú)使用，也可將2種以上混合使用。使用的二胺可根據(jù)期望的特性等適宜選擇。在這些之中，也優(yōu)選芳香族二胺化合物，可適宜地使用3,3’-二氨基二苯基醚、3,4’-二氨基二苯基醚、4,4’-二氨基二苯基醚及對(duì)亞苯基二胺、1,3-雙(3-氨基苯基)苯、1,3-雙(4-氨基苯基)苯、1,4-雙(3-氨基苯基)苯、1,4-雙(4-氨基苯基)苯、1,3-雙(4-氨基苯氧基)苯、1,4-雙(3-氨基苯氧基)苯。特別是，優(yōu)選選自苯二胺、二氨基二苯基醚及雙(氨基苯氧基)苯基的至少一種二胺。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜從耐熱性、高溫下的尺寸穩(wěn)定性的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選由將玻璃轉(zhuǎn)移溫度240℃以上，或者在300℃以上無(wú)明確的轉(zhuǎn)移點(diǎn)的四羧酸二酐和二胺組合得到的聚酰亞胺形成的。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜從耐熱性、高溫下的尺寸穩(wěn)定性的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選為由以下的芳香族聚酰亞胺構(gòu)成的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。(i)由選自聯(lián)苯基四羧酸單位及苯均四酸單位的至少一種四羧酸單位和芳香族二胺單位構(gòu)成的芳香族聚酰亞胺、(ii)由四羧酸單位和選自苯二胺單位、二氨基二苯基醚單位及雙(氨基苯氧基)苯基單位的至少一種芳香族二胺單位構(gòu)成的芳香族聚酰亞胺、及/或(iii)由選自聯(lián)苯基四羧酸單位及苯均四酸單位的至少一種四羧酸單位和選自苯二胺單位、二氨基二苯基醚單位及雙(氨基苯氧基)苯基單位的至少一種芳香族二胺單位構(gòu)成的芳香族聚酰亞胺。雖不限定，但作為聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，能在本發(fā)明中使用至少有2個(gè)表面層(a面及b面)和被所述2個(gè)表面層之間夾的大空隙層的多層結(jié)構(gòu)的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。優(yōu)選為，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是上述大空隙層有與上述表面層(a面及b面)結(jié)合的隔壁和被所述隔壁以及上述表面層(a面及b面)包圍的膜平面方向的平均孔徑是10～500μm的多個(gè)大空隙，上述的大空隙層的隔壁、以及上述表面層(a面及b面)各自是，厚度是0.01～20μm，有平均孔徑0.01～100μm的多個(gè)孔，所述細(xì)孔彼此可連通，再者連通到上述大空隙而部分的或全面地有多層結(jié)構(gòu)，進(jìn)而，總膜厚是5～500μm，空孔率是40％以上不足95％的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的總膜厚雖不限定，但作為一實(shí)施方式，也可作為20～75μm。由膜厚的差異，可在細(xì)胞的增殖速度、細(xì)胞的形態(tài)、面內(nèi)的細(xì)胞的飽和度等方面觀察到差異。在本發(fā)明中，當(dāng)使用有2個(gè)不同的表面層(a面及b面)和被所述2個(gè)表面層之間夾的大空隙層的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜時(shí)，在a面存在的孔的平均孔徑也可與在b面存在的孔的平均孔徑有差。優(yōu)選為，在a面存在的孔的平均孔徑比在b面存在的孔的平均孔徑小。更優(yōu)選為，在a面存在的孔的平均孔徑比在b面存在的孔的平均孔徑小，在a面存在的孔的平均孔徑是0.01～50μm、0.01μm～40μm、0.01μm～30μm、0.01μm～20μm、或者0.01μm～15μm，在b面存在的孔的平均孔徑是20μm～100μm、30μm～100μm、40μm～100μm、50μm～100μm、或者60μm～100μm。特別優(yōu)選為，a面是有平均孔徑15μm以下的，例如0.01μm～15μm的小的孔的網(wǎng)結(jié)構(gòu)，b面是平均孔徑20μm以上的，例如20μm～100μm的大孔結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明的方法中，當(dāng)使用在a面存在的孔的平均孔徑比在b面存在的孔的平均孔徑小的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜時(shí)，細(xì)胞可從a面接種，也可從b面接種，優(yōu)選為，細(xì)胞從a面接種。在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的總膜厚的測(cè)定可用接觸式的厚度計(jì)進(jìn)行。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜表面的平均孔徑可由多孔質(zhì)膜表面的掃描型電子顯微鏡照片，由對(duì)于200分以上的開(kāi)孔部測(cè)定孔面積，從該孔面積的平均值根據(jù)下式(1)計(jì)算設(shè)孔的形狀是正圓時(shí)的平均直徑求出。【數(shù)1】(式中，sa是指孔面積的平均值。)在本發(fā)明中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的空孔率可測(cè)定切取為指定的大小的多孔質(zhì)膜的膜厚及質(zhì)量，從單位面積重量質(zhì)量根據(jù)下式(2)求出?！緮?shù)2】空孔率(％)＝(1-w/(s×d×d))×100(2)(式中，s表示多孔質(zhì)膜的面積、d表示總膜厚、w表示測(cè)定的質(zhì)量、d表示聚酰亞胺的密度。聚酰亞胺的密度設(shè)為1.34g/cm3。)例如，在國(guó)際公開(kāi)wo2010/038873、特開(kāi)2011-219585、或者特開(kāi)2011-219586中記載的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜也能在本發(fā)明中使用。在本發(fā)明的方法中，應(yīng)用細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜當(dāng)然優(yōu)選不含裝填的細(xì)胞以外的生物體成分的狀態(tài)、即，滅菌的。本發(fā)明的方法，優(yōu)選為，包括預(yù)先滅菌聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的工序。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜耐熱性極優(yōu)良，且輕量，形－大小也即能自由選擇，容易滅菌處理。能由干熱滅菌、蒸氣滅菌、乙醇等殺菌劑的滅菌、含uv或γ線的電磁波滅菌等任意的滅菌處理。接種到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面上的細(xì)胞能在膜的表面及/或內(nèi)部穩(wěn)定生長(zhǎng)－增殖。細(xì)胞根據(jù)膜中的生長(zhǎng)－增殖的位置，可取各種的不同的形態(tài)。在本發(fā)明的一實(shí)施方式中，根據(jù)細(xì)胞的種類，有時(shí)一邊在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面及內(nèi)部移動(dòng)，一邊使形狀變化，一邊增殖。【4.細(xì)胞向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的應(yīng)用】細(xì)胞向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的應(yīng)用的具體的工序不特別限定。能采用在本說(shuō)明書中記載的工序、或者適宜于將細(xì)胞應(yīng)用于膜狀的載體的任意的方法。雖不限定，但在本發(fā)明的方法中，細(xì)胞向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的應(yīng)用，例如，含如下所述的實(shí)施方式。(a)包括向上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面接種細(xì)胞的工序的實(shí)施方式；(b)包括如下工序的實(shí)施方式：向上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的干燥的表面加載細(xì)胞懸浮液，放置或移動(dòng)上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而促進(jìn)液的流出，或刺激表面的一部分，而使上述膜吸入細(xì)胞懸浮液，進(jìn)而在上述膜內(nèi)蓄積細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞，水分使流出；以及，(c)包括如下工序的實(shí)施方式：將上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一面或兩面用細(xì)胞培養(yǎng)液或滅菌的液體潤(rùn)濕，向上述潤(rùn)濕的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜裝填細(xì)胞懸浮液，進(jìn)而在上述膜內(nèi)蓄積細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞，水分使流出。(a)的實(shí)施方式含向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面直接接種細(xì)胞、細(xì)胞塊?；蛘?，也含向細(xì)胞懸浮液中放入聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，從膜的表面浸潤(rùn)細(xì)胞培養(yǎng)液的實(shí)施方式。接種到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面上的細(xì)胞粘接到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，進(jìn)入多孔的內(nèi)部。優(yōu)選為，即使不特別從外部加物理的或化學(xué)的力，細(xì)胞也自發(fā)粘接到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。接種到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面上的細(xì)胞能在膜的表面及/或內(nèi)部穩(wěn)定生長(zhǎng)－增殖。細(xì)胞根據(jù)生長(zhǎng)－增殖的膜的位置，可取各種的不同的形態(tài)。在(b)的實(shí)施方式中，向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的干燥的表面加載細(xì)胞懸浮液。通過(guò)放置聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，或移動(dòng)上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜而促進(jìn)液的流出，或刺激表面的一部分而向上述膜吸入細(xì)胞懸浮液，細(xì)胞懸浮液滲透到膜中。不被理論束縛，這被認(rèn)為是由來(lái)源于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的各表面形狀等的性質(zhì)的。由本實(shí)施方式，細(xì)胞被吸入接種膜的裝填細(xì)胞懸浮液的位置?；蛘撸?c)的如實(shí)施方式一樣，也可將上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一面或兩面的部分或整體用細(xì)胞培養(yǎng)液或滅菌的液體潤(rùn)濕，之后向潤(rùn)濕的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜裝填細(xì)胞懸浮液。此時(shí)，細(xì)胞懸浮液的通過(guò)速度大大提高。例如，可使用以膜的飛散防止作為主目的潤(rùn)濕膜極一部分的方法(之后，將其記為“一分濕法”)。一分濕法是大致接近基本上不使膜潤(rùn)濕的干法((b)的實(shí)施方式)。但是，對(duì)于潤(rùn)濕的小部分被認(rèn)為細(xì)胞液的膜透過(guò)變得迅速。另外，也可使用向?qū)⒕埘啺范嗫踪|(zhì)膜的一面或兩面的整體充分地潤(rùn)濕的(之后，將其記為“濕膜”)裝填細(xì)胞懸浮液的方法(之后，將其記為“濕膜法”)。此時(shí)，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的整體中，細(xì)胞懸浮液的通過(guò)速度大大提高。在(b)及(c)的實(shí)施方式中，在上述膜內(nèi)蓄積細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞，水分流出。由此濃縮細(xì)胞懸浮液中的細(xì)胞的濃度的，使細(xì)胞以外的不要的成分與水分一同流出的，等的處理也變得可能。有時(shí)將(a)的實(shí)施方式稱為“自然播種”，將(b)及(c)的實(shí)施方式稱為“吸入播種”。雖不限定，但優(yōu)選為，在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜中活細(xì)胞選擇性地停留。從而，在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式中，活細(xì)胞在上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜內(nèi)停留，死細(xì)胞優(yōu)先與水分一同流出。在實(shí)施方式(c)中使用的滅菌的液體不特別限定，是滅菌的緩沖液或滅菌水。緩沖液是例如，(+)及(-)dulbecco氏pbs、(+)及(-)hank氏平衡鹽溶液等。緩沖液的例示于以下的表1。【表1】成分濃度(mmol/l)濃度(g/l)nacl1378.00kcl2.70.20na2hpo4101.44kh2po41.760.24ph(-)7.47.4再者，在本發(fā)明的方法中，細(xì)胞向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的應(yīng)用也含通過(guò)使處于懸浮狀態(tài)的粘接性細(xì)胞與聚酰亞胺多孔質(zhì)膜懸浮共存細(xì)胞附著于膜的實(shí)施方式(附著)。例如，在本發(fā)明的細(xì)胞的方法中，也可為了將細(xì)胞應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，向細(xì)胞培養(yǎng)容器中放入細(xì)胞培養(yǎng)基、細(xì)胞及1或其以上的上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)基是液體的情況中，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是懸浮到細(xì)胞培養(yǎng)基中的狀態(tài)。由聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的性質(zhì)，細(xì)胞可粘接到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。從而，即使是先天不適宜于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜能在懸浮到細(xì)胞培養(yǎng)基中的狀態(tài)下培養(yǎng)。優(yōu)選為，細(xì)胞自發(fā)粘接到聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。“自發(fā)粘接”是指即使不特別從外部加物理的或化學(xué)的力，細(xì)胞也在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面或內(nèi)部停留?！?.細(xì)胞的培養(yǎng)】本發(fā)明包括培養(yǎng)應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞，由細(xì)胞產(chǎn)生物質(zhì)。對(duì)于向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用細(xì)胞，培養(yǎng)而言，如下在pct/jp2014/070407中記載。細(xì)胞培養(yǎng)可由細(xì)胞培養(yǎng)中的存在形態(tài)而培養(yǎng)細(xì)胞被分類為粘接培養(yǎng)系細(xì)胞和懸浮培養(yǎng)系細(xì)胞。粘接培養(yǎng)系細(xì)胞是附著于培養(yǎng)容器而增殖的培養(yǎng)細(xì)胞，在傳代中進(jìn)行培養(yǎng)基更換。懸浮培養(yǎng)系細(xì)胞是在培養(yǎng)基中在懸浮狀態(tài)下增殖的培養(yǎng)細(xì)胞，一般而言，在傳代時(shí)不進(jìn)行培養(yǎng)基更換，進(jìn)行稀釋培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)由于能在懸浮狀態(tài)、即液體中的培養(yǎng)，能大量培養(yǎng)，與僅在培養(yǎng)容器表面生長(zhǎng)的附著細(xì)胞比，由于是立體的培養(yǎng)，有每單位空間能培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)多的益處。在本發(fā)明的方法中，在將聚酰亞胺多孔質(zhì)膜懸浮于細(xì)胞培養(yǎng)基中的狀態(tài)下使用時(shí)，也可使用2個(gè)以上的上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的小片。由于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜是柔性的薄膜，通過(guò)例如將該小片懸浮到培養(yǎng)液中而使用，一定容量的細(xì)胞培養(yǎng)基中保持有多個(gè)表面積的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜變得可能。通常培養(yǎng)的情況中，容器底面積成為能細(xì)胞培養(yǎng)的面積的上限，但在使用本發(fā)明的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞培養(yǎng)中，先前帶的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的大表面積的全部成為能細(xì)胞培養(yǎng)的面積。由于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜使細(xì)胞培養(yǎng)液通過(guò)，例如在折疊的膜內(nèi)營(yíng)養(yǎng)或氧等的供給變得可能。聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的小片的大小，形狀不特別限定。形狀可取圓、橢圓形、四角形、三角形、多角形、繩狀等任意的形。本發(fā)明的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜由于有柔軟性，可使形狀變化而使用。也可不將聚酰亞胺多孔質(zhì)膜加工成平面狀，而是加工成立體狀形狀使用。例如，也可將聚酰亞胺多孔質(zhì)膜(i)折疊，(ii)卷成輪狀，(iii)將片或小片用絲狀的結(jié)構(gòu)體連接，或者，(iv)結(jié)成繩狀，在細(xì)胞培養(yǎng)容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基中懸浮或固定。通過(guò)如(i)～(iv)一樣加工形狀，可與使用小片時(shí)同樣地，向一定容量的細(xì)胞培養(yǎng)基中放入多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。再者，因?yàn)榭梢愿餍∑鳛榧象w處理，使細(xì)胞體集合化移動(dòng)變得可能，綜合的應(yīng)用性高。作為與小片集合體同樣的想法，也可將2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜在細(xì)胞培養(yǎng)基中上下或左右積層而使用。積層也含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜一部分重疊的實(shí)施方式。由積層培養(yǎng)，在窄的空間以高密度培養(yǎng)細(xì)胞變得可能。在細(xì)胞已經(jīng)培育的膜上還積層膜而設(shè)置，還能形成與別種細(xì)胞的多層系統(tǒng)。積層的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的數(shù)不特別限定。也可將上述的細(xì)胞的培養(yǎng)方法使2種或更多的方法組合使用。例如，也可使用實(shí)施方式(a)～(c)的任何的方法而先向細(xì)胞應(yīng)用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，接下來(lái)，對(duì)粘接細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。或者，作為應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的工序，也可將上述實(shí)施方式(a)～(c)的任何的方法使2種或更多組合使用。在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選為，細(xì)胞在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的表面及內(nèi)部生長(zhǎng)增殖。由本發(fā)明的方法，細(xì)胞可持續(xù)2天以上、更優(yōu)選為4天以上、再優(yōu)選為6天以上增殖。在本發(fā)明的方法中，通過(guò)向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜應(yīng)用細(xì)胞，培養(yǎng)，由于在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜所具有的內(nèi)部的多面的連接多孔部分或表面，大量的細(xì)胞生長(zhǎng)，簡(jiǎn)便地培養(yǎng)大量的細(xì)胞變得可能。另外，在本發(fā)明的方法中，相比以往的方法更大幅地減在細(xì)胞培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基的量的同時(shí)，有效培養(yǎng)大量的細(xì)胞變得可能。例如，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的一部分或整體即使是不與細(xì)胞培養(yǎng)基的液相接觸的狀態(tài)，也可培養(yǎng)大量的細(xì)胞。另外，對(duì)于含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和，相比以往的方法更顯著地減細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積也變得可能。通過(guò)使用本發(fā)明的方法，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積，即使在含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的10000倍或更少的條件下，經(jīng)長(zhǎng)期良好地培養(yǎng)細(xì)胞變得可能。另外，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積，即使在含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的1000倍或更少的條件下，可經(jīng)長(zhǎng)期良好地培養(yǎng)細(xì)胞。再者，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積，即使在含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的100倍或更少的條件下，可經(jīng)長(zhǎng)期良好地培養(yǎng)細(xì)胞。進(jìn)而，細(xì)胞培養(yǎng)容器中所含的細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積，即使在含細(xì)胞生存域的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜體積的總和的10倍或更少的條件下，可經(jīng)長(zhǎng)期良好地培養(yǎng)細(xì)胞。以往，作為細(xì)胞的三維培養(yǎng)用基材，知作為多孔質(zhì)聚苯乙烯制基材的alvetex(注冊(cè)商標(biāo))(reprocell公司)、作為聚己內(nèi)酯制基材的3dinsert-pcl(3dbiotech公司)、作為聚苯乙烯制基材的3dinsert-ps(3dbiotech公司)等。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的方法使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，與使用以往知的三維培養(yǎng)基材細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)比較，每單位體積的產(chǎn)生物質(zhì)的效率極高。另外，在本發(fā)明的方法中，細(xì)胞不形成細(xì)胞塊(球形)而在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜中培養(yǎng)。在這樣的培養(yǎng)條件下，因?yàn)榭刹粍冸x細(xì)胞而長(zhǎng)期間穩(wěn)定生長(zhǎng)，可以產(chǎn)生的物質(zhì)作為清澄液取得。另外，能在大量地負(fù)載細(xì)胞的狀態(tài)下將聚酰亞胺多孔質(zhì)膜冷凍、保存。再者，在任意時(shí)解凍所述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，不經(jīng)預(yù)培養(yǎng)工序，能在蛋白質(zhì)的產(chǎn)生中使用。即使經(jīng)冷凍－解凍工序，細(xì)胞的物質(zhì)產(chǎn)生能力不降低。以往，為了使用解凍的細(xì)胞，有預(yù)培養(yǎng)解凍的細(xì)胞，向期望的基材或載體負(fù)載生存的細(xì)胞而培養(yǎng)的必要。但是，能通過(guò)使用所述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，不經(jīng)作為以往必要的解凍后的預(yù)培養(yǎng)工序，使細(xì)胞粘接于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的狀態(tài)下培養(yǎng)、冷凍、保存、解凍、進(jìn)而再培養(yǎng)。因此，例如，如果大量地準(zhǔn)備在負(fù)載細(xì)胞的狀態(tài)下冷凍的聚酰亞胺多孔質(zhì)，則不經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)工序而在期望之時(shí)使用大量的細(xì)胞成為可能。這樣的冷凍、保存、解凍、及培養(yǎng)的工序可多次重復(fù)?！?.細(xì)胞的培養(yǎng)－物質(zhì)產(chǎn)生系統(tǒng)及培養(yǎng)條件】在本發(fā)明的方法中，細(xì)胞的培養(yǎng)－物質(zhì)產(chǎn)生系統(tǒng)及培養(yǎng)條件可根據(jù)細(xì)胞的種類等適宜決定。公知適宜于動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、及細(xì)菌的各細(xì)胞的培養(yǎng)方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用任意的公知的方法培養(yǎng)應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)基也可根據(jù)細(xì)胞的種類適宜調(diào)制。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)基，例如，在lonza公司的細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品目錄中記載。植物細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)基，例如，在wako公司的植物組織培養(yǎng)基系列等中記載。細(xì)菌的細(xì)胞培養(yǎng)方法、細(xì)胞培養(yǎng)基，例如，在bd公司的一般細(xì)菌用培養(yǎng)基產(chǎn)品目錄中記載。能在本發(fā)明的方法中使用的細(xì)胞培養(yǎng)基也可為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基等的任何的形態(tài)。另外，也可通過(guò)將作為霧狀的液體培養(yǎng)基噴霧到細(xì)胞培養(yǎng)容器中，培養(yǎng)基與負(fù)載細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜接觸。關(guān)于使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞的培養(yǎng)也可與微載體或纖維素海綿等其他懸浮型培養(yǎng)載體共存。在本發(fā)明的方法中，在培養(yǎng)中使用的系統(tǒng)的形狀、規(guī)模等不特別限定，能從細(xì)胞培養(yǎng)用的培養(yǎng)皿、瓶、塑料袋、試管至大型的箱適宜利用。例如，含bdfalcon公司制的細(xì)胞培養(yǎng)皿或thermoscientific公司制的nunc細(xì)胞工廠等。再者，在本發(fā)明中，通過(guò)使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，對(duì)于不能先天懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞也用向懸浮培養(yǎng)裝置，進(jìn)行在懸浮培養(yǎng)類似狀態(tài)下的培養(yǎng)變得可能。作為懸浮培養(yǎng)用的裝置，例如，能使用康寧公司制的旋轉(zhuǎn)瓶或旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)等。另外，作為可實(shí)現(xiàn)同樣的功能的環(huán)境，也能使用veritas公司的如fibercell(注冊(cè)商標(biāo))system一樣的中空絲培養(yǎng)。在本發(fā)明中，也可在靜置培養(yǎng)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。能通過(guò)間歇地更換培養(yǎng)基，單離產(chǎn)生的有用物質(zhì)。使用一次性培養(yǎng)袋的靜置培養(yǎng)，也通過(guò)應(yīng)用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，效率面飛躍性地提高。在本發(fā)明中，也可在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)或攪拌條件下培養(yǎng)細(xì)胞。通過(guò)繼續(xù)搖一次性培養(yǎng)袋，變得都能應(yīng)付非常大的規(guī)模。用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)－旋轉(zhuǎn)瓶的攪拌培養(yǎng)也同樣。另外，在這些各方法中，設(shè)置連續(xù)或間歇的培養(yǎng)基更換系統(tǒng)，指向長(zhǎng)期培養(yǎng)也可能。在本發(fā)明中，也可連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。例如，在本發(fā)明的方法中的培養(yǎng)能以使用向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上連續(xù)添加培養(yǎng)基而回收式樣的連續(xù)循環(huán)或開(kāi)放型的裝置，在空氣中露出聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片的型式執(zhí)行。在本發(fā)明中，細(xì)胞的培養(yǎng)也可用從設(shè)置于細(xì)胞培養(yǎng)容器外的細(xì)胞培養(yǎng)基供給手段連續(xù)或間歇地向細(xì)胞培養(yǎng)容器中供給細(xì)胞培養(yǎng)基的系統(tǒng)進(jìn)行。此時(shí)，可為細(xì)胞培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)基供給手段和細(xì)胞培養(yǎng)容器之間循環(huán)的系統(tǒng)。本發(fā)明包括含在溫育器內(nèi)設(shè)置細(xì)胞培養(yǎng)裝置，培養(yǎng)細(xì)胞的，實(shí)施方式。當(dāng)用從設(shè)置于細(xì)胞培養(yǎng)容器外的細(xì)胞培養(yǎng)基供給手段連續(xù)或間歇地向細(xì)胞培養(yǎng)容器中供給細(xì)胞培養(yǎng)基的系統(tǒng)進(jìn)行時(shí)，該系統(tǒng)可含作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的培養(yǎng)單位和作為細(xì)胞培養(yǎng)基供給手段的培養(yǎng)基供給單位的細(xì)胞培養(yǎng)裝置，細(xì)胞培養(yǎng)裝置可為，其中，培養(yǎng)單位是收容用于負(fù)載細(xì)胞的1個(gè)或多個(gè)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的培養(yǎng)單位，其為具備培養(yǎng)基供給口及培養(yǎng)基排出口的培養(yǎng)單位，培養(yǎng)基供給單位具備培養(yǎng)基收納容器、培養(yǎng)基供給線和經(jīng)培養(yǎng)基供給線輸送培養(yǎng)基的送液泵，其中培養(yǎng)基供給線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器內(nèi)的培養(yǎng)基接觸，培養(yǎng)基供給線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基供給口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)的培養(yǎng)基供給單位。另外，在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，培養(yǎng)單位可為不具備空氣供給口及空氣排出口的培養(yǎng)單位，另外，也可為具備空氣供給口及空氣排出口的培養(yǎng)單位。培養(yǎng)單位可不具備空氣供給口及空氣排出口，向培養(yǎng)基通入對(duì)于細(xì)胞的培養(yǎng)必要的氧等而充分地供給于細(xì)胞。再者，在上述細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，培養(yǎng)單位還具備培養(yǎng)基排出線，其中培養(yǎng)基排出線的第一端部與培養(yǎng)基收納容器連接，培養(yǎng)基排出線的第二端部經(jīng)培養(yǎng)單位的培養(yǎng)基排出口連通到培養(yǎng)單位內(nèi)，培養(yǎng)基也可能在培養(yǎng)基供給單位和培養(yǎng)單位循環(huán)?！?.由細(xì)胞的物質(zhì)的產(chǎn)生】本發(fā)明通過(guò)如上所述培養(yǎng)細(xì)胞，產(chǎn)生比細(xì)胞更期望的物質(zhì)。產(chǎn)生的物質(zhì)可為在細(xì)胞內(nèi)停留的物質(zhì)，也可為從細(xì)胞分泌的物質(zhì)。產(chǎn)生的物質(zhì)能根據(jù)物質(zhì)的種類、性質(zhì)由公知的方法回收。從細(xì)胞分泌的物質(zhì)的情況，可從細(xì)胞培養(yǎng)基回收物質(zhì)。產(chǎn)生的物質(zhì)是在細(xì)胞內(nèi)停留的物質(zhì)的情況中，能通過(guò)由使用細(xì)胞溶解劑等的化學(xué)處理、使用超聲波處理、均漿器、破碎用dispo管等的物理處理等的公知的方法破壞細(xì)胞，向細(xì)胞外排出物質(zhì)而回收。本領(lǐng)域技術(shù)人員能根據(jù)細(xì)胞的種類、物質(zhì)的種類等適宜應(yīng)用破壞細(xì)胞的方法。【ii.物質(zhì)產(chǎn)生裝置】本發(fā)明另外涉及含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的，用于在本發(fā)明的方法中使用的由細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生物質(zhì)的裝置。在本發(fā)明的物質(zhì)產(chǎn)生裝置中，聚酰亞胺多孔質(zhì)膜可固定使用，或者可懸浮到細(xì)胞培養(yǎng)基中使用，可置于培養(yǎng)基中，也可從培養(yǎng)基露出。在物質(zhì)產(chǎn)生裝置中，2個(gè)以上的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜也可上下或左右積層。積層的集合體或蓄積體無(wú)論是置于培養(yǎng)基中還是從培養(yǎng)基露出均可。作為由本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)的物質(zhì)產(chǎn)生裝置，只要是含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的，就可取任意的形態(tài)，能使用公知的細(xì)胞培養(yǎng)裝置。培養(yǎng)裝置的形狀、規(guī)模等不特別限定，能從培養(yǎng)皿、試管至大型的箱適宜利用。例如，含bdfalcon公司制的細(xì)胞培養(yǎng)皿或thermoscientific公司制的nunc細(xì)胞工廠等。再者，在本發(fā)明中，通過(guò)使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，對(duì)于不能先天懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行用向懸浮培養(yǎng)裝置，在懸浮培養(yǎng)類似狀態(tài)下的培養(yǎng)也變得可能。作為懸浮培養(yǎng)用的裝置，例如，能使用康寧公司制的旋轉(zhuǎn)瓶或旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)等。另外，作為可實(shí)現(xiàn)同樣的功能的環(huán)境，也能使用veritas公司的如fibercell(注冊(cè)商標(biāo))system一樣的中空絲培養(yǎng)。由本發(fā)明的培養(yǎng)細(xì)胞的物質(zhì)產(chǎn)生裝置能以向網(wǎng)上的片連續(xù)添加培養(yǎng)基而回收的型式，用連續(xù)循環(huán)或開(kāi)放型的裝置，在空氣中露出聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片的型式執(zhí)行。也可還設(shè)用于回收本發(fā)明的細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)的手段。例如，通過(guò)使半透膜等直接連接于循環(huán)式添加培養(yǎng)基，一邊除去乳酸等的不要物，一邊追加糖質(zhì)或氨基酸類，也能構(gòu)建效率好的長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)法兼不要物除去法?！緄ii.試劑盒】本發(fā)明還涉及含聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的，用于在本發(fā)明的方法中使用的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒除聚酰亞胺多孔質(zhì)膜之外，可適宜含對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)、物質(zhì)產(chǎn)生、物質(zhì)回收必要的構(gòu)成要素。例如，含應(yīng)用于聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、連續(xù)培養(yǎng)基供給裝置、連續(xù)培養(yǎng)基循環(huán)裝置、支持聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的支架或模塊、細(xì)胞培養(yǎng)裝置、用于確認(rèn)物質(zhì)產(chǎn)生的elisa、細(xì)胞破壞手段(例如，細(xì)胞溶解劑、破碎用dispo均漿器)、物質(zhì)回收手段(例如，超濾離心管、共沉用試劑組及管、抗體等的試劑)、試劑盒的對(duì)待說(shuō)明書等。雖不限定，但作為一實(shí)施方式，在透明的袋內(nèi)單獨(dú)或多個(gè)保存滅菌的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，含直接能在細(xì)胞培養(yǎng)中使用的形態(tài)的包裝，或者，含在同袋內(nèi)與聚酰亞胺多孔質(zhì)膜一同封入滅菌液體，效率的吸入接種變得可能的膜－液體的一體型形態(tài)的試劑盒?！緄v.用途】本發(fā)明還包括聚酰亞胺多孔質(zhì)膜用于上述的本發(fā)明的方法的用途。【實(shí)施例】以下，基于實(shí)施例詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于這些的實(shí)施例。本領(lǐng)域技術(shù)人員可基于本說(shuō)明書的記載容易地向本發(fā)明加修飾－變更，它們包括在本發(fā)明的技術(shù)性范圍內(nèi)。之后，在不特別記述時(shí)，“聚酰亞胺多孔質(zhì)膜”是指總膜厚25μm、空孔率73％的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。所述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜有2個(gè)不同的表面層(a面及b面)和被所述2個(gè)表面層之間夾的大空隙層。在a面存在的孔的平均孔徑是6μm，在b面存在的孔的平均孔徑是46μm。再者，在以下的實(shí)施例中使用的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜通過(guò)使含從作為四羧酸成分的3,3’，4,4’-聯(lián)苯基四羧酸二酐(s-bpda)和作為二胺成分的4,4’-二氨基二苯基醚(oda)得到的聚酰胺酸溶液和作為著色前體的聚丙烯酰胺的聚酰胺酸溶液組合物成形之后，在250℃以上熱處理，調(diào)制。<使用的細(xì)胞、材料等>·正常人皮膚成纖維細(xì)胞(lonza公司productcodecc-2511)·正常人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞hfls(cellapplications,inc.公司)·慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者來(lái)源成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞hfls-ra(cellapplications,inc.公司)·hepg2(cet(cellularengineeringtechnologies,inc.)公司、hepg2-500)·cho-k1(publichealthenglandcat.85051005)·chodp-12(atcccrl-12445)·cho-k1用培養(yǎng)基(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社ham’sf-12087-08335)·chodp-12用培養(yǎng)基(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社imdm098-06465)·細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(株式會(huì)社同仁化學(xué)研究所ck04)·不銹鋼網(wǎng)(久寶金屬株式會(huì)社60目e9117)·2cm×2cm的滅菌的正方形容器(thermofisherscientific公司cat.103)·青霉素-鏈霉素-兩性霉素b懸浮液(x100)(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社161-23181)·顯微鏡名、使用的圖像軟件名carlzeiss公司制lsm700使用軟件zen【實(shí)施例1：由正常人皮膚成纖維細(xì)胞的自發(fā)物質(zhì)產(chǎn)生】在本實(shí)施例中，使用正常人皮膚成纖維細(xì)胞，進(jìn)行向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的接種而進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)之后，確認(rèn)培養(yǎng)皿內(nèi)的纖連蛋白的產(chǎn)生量。向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加細(xì)胞培養(yǎng)基(2％fbs、fibroblastmedia、lonza公司制)1ml，1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而浸漬到培養(yǎng)基中。另行，準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基懸浮4.2×106個(gè)正常人皮膚成纖維細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是4.2×106個(gè)、死細(xì)胞是4.0×104個(gè)、活細(xì)胞率99％)的正常人皮膚成纖維細(xì)胞懸浮液。每個(gè)片各添加各4×104個(gè)/cm2細(xì)胞懸浮液到上述正方形容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基中，在此正方形容器中培養(yǎng)14天。另外，每1ml培養(yǎng)基懸浮3.0×106個(gè)正常人皮膚成纖維細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是2.9×106個(gè)、死細(xì)胞是1.6×105個(gè)、活細(xì)胞率95％)的，準(zhǔn)備正常人皮膚成纖維細(xì)胞懸浮液。向5cm2培養(yǎng)皿加1ml的細(xì)胞培養(yǎng)基，添加1.0×104個(gè)/cm2上述的細(xì)胞懸浮液而培養(yǎng)43天，在培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。放入1個(gè)在上述細(xì)胞培養(yǎng)的片的5cm2培養(yǎng)皿及未放入在上述片而且準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)的5cm2培養(yǎng)皿。廢棄培養(yǎng)基上清，各自新加1ml細(xì)胞培養(yǎng)基，以5％的co2、于37℃溫育2天，回收培養(yǎng)基上清。將回收的上清中所含的纖連蛋白量由elisa法定量(表2)。表2顯示對(duì)于使用人皮膚成纖維細(xì)胞的纖連蛋白的自發(fā)的產(chǎn)生量，以聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片和培養(yǎng)皿作為各培養(yǎng)支架使用時(shí)的結(jié)果。如表2所示，使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片時(shí)比使用培養(yǎng)皿時(shí)，纖連蛋白的自發(fā)的產(chǎn)生量多2倍以上?！颈?】每單位面積的纖連蛋白產(chǎn)生量的比較(實(shí)施例1)培養(yǎng)支架纖連蛋白量(ng/cm2)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜3.2×103培養(yǎng)皿1.4×103【實(shí)施例2：由正常人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞hfls及慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者來(lái)源成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞hfls-ra的自發(fā)物質(zhì)產(chǎn)生】在本實(shí)施例中，使用正常人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞hfls及慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者來(lái)源成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞hfls-ra，進(jìn)行向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的接種而進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)之后，確認(rèn)培養(yǎng)皿內(nèi)的il-6的產(chǎn)生量。向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加細(xì)胞培養(yǎng)基(10％fbs、synoviocytegrowthmedium、cellapplications,inc.公司制)1ml，1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而浸漬到培養(yǎng)基中。另行，準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基懸浮1.5×106個(gè)hfls細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是1.4×106個(gè)、死細(xì)胞是2.0×104個(gè)、活細(xì)胞率99％)的hfls細(xì)胞懸浮液。每片各添加4.0×104個(gè)/cm2細(xì)胞懸浮液到上述正方形容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基中，在此正方形容器中培養(yǎng)13天。另外，向5cm2培養(yǎng)皿加1ml的細(xì)胞培養(yǎng)基，另行，準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基懸浮5.9×105個(gè)hfls細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是5.7×105個(gè)、死細(xì)胞是2.0×104個(gè)、活細(xì)胞率97％)的hfls細(xì)胞懸浮液。添加7×103個(gè)/cm2細(xì)胞懸浮液而培養(yǎng)8天，在培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。同樣地，準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基懸浮2.2×106個(gè)hfls-ra細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是2.0×106個(gè)、死細(xì)胞是1.6×105個(gè)、活細(xì)胞率93％)的hfls-ra細(xì)胞懸浮液。每片各添加4.0×104個(gè)/cm2細(xì)胞懸浮液到上述正方形容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基中，在此正方形容器中培養(yǎng)13天。另外，向5cm2培養(yǎng)皿加1ml的細(xì)胞培養(yǎng)基，另行，準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基懸浮5.8×105個(gè)hfls-ra細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是5.6×105個(gè)、死細(xì)胞是2.0×104個(gè)、活細(xì)胞率97％)的hfls-ra細(xì)胞懸浮液。添加7.0×103個(gè)/cm2細(xì)胞懸浮液而培養(yǎng)8天，在培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。準(zhǔn)備2個(gè)5cm2培養(yǎng)皿，各自放入1個(gè)在上述細(xì)胞培養(yǎng)的hfls片、hfls-ra片。再者，準(zhǔn)備在上述中未放入片而細(xì)胞培養(yǎng)的hfls、hfls-ra的5cm2培養(yǎng)皿。廢棄培養(yǎng)基上清而各自新加1ml細(xì)胞培養(yǎng)基，5％的co2、于37℃溫育3天，回收培養(yǎng)基上清。將回收的上清中所含的il-6量由elisa法定量(表3)。在表3中，顯示對(duì)于使用正常人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞的il-6的自發(fā)的產(chǎn)生量，以聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片和培養(yǎng)皿作為各培養(yǎng)支架使用時(shí)的結(jié)果。如表3所示，使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片時(shí)比使用培養(yǎng)皿時(shí)，il-6的自發(fā)的產(chǎn)生量是在正常人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞hfls的情況中多約25倍以上、在慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者來(lái)源成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞hfls-ra的情況中多約5倍以上?！颈?】由人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞的il-6的產(chǎn)生(實(shí)施例2)細(xì)胞和培養(yǎng)支架il-6量(pg/ml)人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞/聚酰亞胺多孔質(zhì)膜2.7×102ra人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞/聚酰亞胺多孔質(zhì)膜3.5×103人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞/培養(yǎng)皿1.1×101ra人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞/培養(yǎng)皿7.1×102【實(shí)施例3：由人肝癌來(lái)源細(xì)胞株hepg2細(xì)胞的自發(fā)的白蛋白產(chǎn)生】在本實(shí)施例中，向聚酰亞胺多孔質(zhì)膜接種人肝癌來(lái)源細(xì)胞株hepg2細(xì)胞而進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)之后，確認(rèn)在一定期間自發(fā)地向培養(yǎng)基中釋放的白蛋白的產(chǎn)生量。向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加細(xì)胞培養(yǎng)基(10％fbs、hepg2.e.media-450、cellularengineeringtechnologiesinc公司制)1ml，1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而浸漬到培養(yǎng)基中。另行，準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基懸浮1.6×106個(gè)hepg2細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是1.4×106個(gè)、死細(xì)胞是1.3×105個(gè)、活細(xì)胞率92％)的hepg2細(xì)胞懸浮液。每片各添加2×104個(gè)/cm2細(xì)胞懸浮液到上述正方形容器中的細(xì)胞培養(yǎng)基中，在此正方形容器中培養(yǎng)21天。另外，向10cm2培養(yǎng)皿加2ml的細(xì)胞培養(yǎng)基，添加2×104個(gè)/cm2上述的細(xì)胞懸浮液而培養(yǎng)21天，在培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。準(zhǔn)備放入3個(gè)、1個(gè)在上述中培養(yǎng)細(xì)胞的片的10cm2培養(yǎng)皿及在上述細(xì)胞培養(yǎng)的10cm2培養(yǎng)皿。廢棄培養(yǎng)基上清而各自新加2ml細(xì)胞培養(yǎng)基，5％的co2、于37℃溫育3小時(shí)，回收培養(yǎng)基上清。將回收的上清中所含的白蛋白量由elisa法定量(表4、5)。表4及5顯示對(duì)于使用hepg2細(xì)胞的白蛋白的自發(fā)的產(chǎn)生量，以聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片和培養(yǎng)皿作為各培養(yǎng)支架使用時(shí)的結(jié)果。表4顯示膜的每單位面積的白蛋白產(chǎn)生量，進(jìn)而，表5顯示每1細(xì)胞的白蛋白的產(chǎn)生量。由于共存的膜的枚數(shù)與每細(xì)胞的白蛋白產(chǎn)生量無(wú)相關(guān)，每聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的產(chǎn)生量變得一定，預(yù)計(jì)與細(xì)胞數(shù)的升高一同，物質(zhì)產(chǎn)生依比例進(jìn)展?！颈?】由hepg2細(xì)胞的每單位面積的白蛋白的產(chǎn)生量(實(shí)施例3)培養(yǎng)支架和細(xì)胞量白蛋白量(ng/cm2)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜：3個(gè)2.8×102聚酰亞胺多孔質(zhì)膜：1個(gè)3.2×102培養(yǎng)皿2.5×101【表5】由hepg2細(xì)胞的每1細(xì)胞的白蛋白的產(chǎn)生量(實(shí)施例3)培養(yǎng)支架和細(xì)胞量白蛋白量(pg/細(xì)胞)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜：3個(gè)2.8×10-1聚酰亞胺多孔質(zhì)膜：1個(gè)2.7×10-1培養(yǎng)皿9.7×10-2【實(shí)施例4：由產(chǎn)生g-csf的cho-k1細(xì)胞株的物質(zhì)產(chǎn)生】在本實(shí)施例中，測(cè)定由使用產(chǎn)生g-csf的cho-k1細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生并釋放到培養(yǎng)基中的g-csf的量。準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基4.1×106個(gè)產(chǎn)生g-csf的cho-k1細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是3.6×106個(gè)、死細(xì)胞是4.1×105個(gè)、活細(xì)胞率90％)的懸浮液。對(duì)于8×12.5cm的長(zhǎng)方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的a面每片接種上述細(xì)胞懸浮液各4.1×104個(gè)/cm2，向10×14cm的滅菌的長(zhǎng)方形容器加細(xì)胞培養(yǎng)基(1％fbs、ham’sf-12、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社)20ml，浸漬到培養(yǎng)基中。在此長(zhǎng)方形容器中進(jìn)行每周2次的培養(yǎng)基更換，培養(yǎng)7天。除去培養(yǎng)的片的培養(yǎng)基上清，新加20ml細(xì)胞培養(yǎng)基，5％的co2、于37℃溫育24小時(shí)，回收培養(yǎng)基上清。將回收的上清中所含的g-csf量由elisa法定量(表6)。【表6】培養(yǎng)支架g-csf量(pg/細(xì)胞/日)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜3.4×10-2【實(shí)施例5：由產(chǎn)生抗人il-8的chodp-12細(xì)胞的物質(zhì)產(chǎn)生】在本實(shí)施例中，通過(guò)測(cè)定由使用產(chǎn)生人抗il-8抗體的chodp-12細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生并釋放到培養(yǎng)基中的抗人il-8抗體的量，研究使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的效率。作為比較例，調(diào)查在通常的培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)中的同抗體產(chǎn)生量。向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加細(xì)胞培養(yǎng)基(2％fbs、imdm、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社)0.5ml，使網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而各自浸漬滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。向培養(yǎng)基內(nèi)片上每1個(gè)片各自添加4×104個(gè)產(chǎn)生人抗il-8的chodp-12細(xì)胞懸浮液，以每1周2次的比例進(jìn)行培養(yǎng)基更換，繼續(xù)實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)。85天細(xì)胞培養(yǎng)之后，使用cck8而測(cè)定細(xì)胞數(shù)。向各1個(gè)10cm2培養(yǎng)皿放入2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的片，各自加2ml細(xì)胞培養(yǎng)基，5％的co2、于37℃溫育24小時(shí)，回收培養(yǎng)基上清。將回收的上清中所含的抗人il-8抗體量由elisa法定量(表7的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜1及聚酰亞胺多孔質(zhì)膜2)。另外，向60cm2培養(yǎng)皿加12ml的細(xì)胞培養(yǎng)基，準(zhǔn)備每1ml培養(yǎng)基5.3×106個(gè)產(chǎn)生人抗il-8的chodp-12細(xì)胞(其中，活細(xì)胞是5.3×106個(gè)、死細(xì)胞是2.8×105個(gè)、活細(xì)胞率95％)的懸浮液，各接種2.0×104個(gè)/cm2。在培養(yǎng)24小時(shí)后回收培養(yǎng)基上清。將回收的上清中所含的人抗il-8抗體量由elisa法定量(表7的培養(yǎng)皿1及培養(yǎng)皿2)?！颈?】培養(yǎng)支架人抗il-8抗體量(pg/細(xì)胞/日)聚酰亞胺多孔質(zhì)膜116.2聚酰亞胺多孔質(zhì)膜219.3培養(yǎng)皿15.4培養(yǎng)皿24.6令人驚訝地，當(dāng)作為培養(yǎng)支架使用聚酰亞胺多孔質(zhì)膜時(shí)，與使用培養(yǎng)皿時(shí)比較，cho-k1細(xì)胞的每1細(xì)胞的物質(zhì)產(chǎn)生量增大3倍以上?！緦?shí)施例6：由產(chǎn)生抗人il-8的chodp-12細(xì)胞的物質(zhì)產(chǎn)生】在本實(shí)施例中，在使用產(chǎn)生人抗il-8抗體的chodp-12細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)中，每聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片冷凍培養(yǎng)細(xì)胞，再次融解之后，研究培養(yǎng)時(shí)，在持續(xù)通常的培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生并釋放到培養(yǎng)基中的抗人il-8抗體量和變化發(fā)生與否。向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加細(xì)胞培養(yǎng)基(2％fbs、imdm、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社)0.5ml，使網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而各自浸漬滅菌的6個(gè)1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。向培養(yǎng)基內(nèi)片上每1個(gè)片各自添加4×104個(gè)產(chǎn)生人抗il-8的chodp-12細(xì)胞懸浮液，以每1周2次的比例進(jìn)行培養(yǎng)基更換，繼續(xù)實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)。78天細(xì)胞培養(yǎng)之后，使用cck8而測(cè)定細(xì)胞數(shù)。其后，向各1個(gè)10cm2培養(yǎng)皿放入由細(xì)胞培養(yǎng)負(fù)載細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片6個(gè)之中2個(gè)，各自加2ml細(xì)胞培養(yǎng)基，5％的co2、于37℃溫育24小時(shí)，回收培養(yǎng)基上清。將回收的上清中所含的抗人il-8抗體量由elisa法定量(表8的非冷凍片1及非冷凍片2)。另外，在滅菌條件下向冷凍保存袋移由細(xì)胞培養(yǎng)負(fù)載細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜片6個(gè)之中4個(gè)，向其中加3ml作為細(xì)胞冷凍保存液的cellbanker。用程序冷凍器用2條件(每1分鐘1℃、或者每10分鐘1℃)于-80℃冷凍后，于-80℃保存24小時(shí)，向液氮中移動(dòng)。3天后，將袋于37℃加溫而融解內(nèi)容物，放入培養(yǎng)基2ml而在溫育器內(nèi)放置24小時(shí)之后，向2cm×2cm的滅菌的正方形容器移片，加1ml細(xì)胞培養(yǎng)基而培養(yǎng)3天。其后，向10cm2培養(yǎng)皿放入各1個(gè)片，各自加2ml細(xì)胞培養(yǎng)基，5％的co2、于37℃溫育24小時(shí)，回收培養(yǎng)基上清。將回收的上清中所含的抗人il-8抗體量由elisa法定量(表8的冷凍片1～4)。確認(rèn)不到隨冷凍的抗il-8產(chǎn)生量的變化?！颈?】人抗il-8抗體量(pg/細(xì)胞/日)冷凍片126.4冷凍片218.0冷凍片324.0冷凍片428.7非冷凍片116.2非冷凍片219.3【實(shí)施例7：由人皮膚成纖維細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)的氣相傳代的增殖確認(rèn)】向直徑6cm的培養(yǎng)皿加2ml的培養(yǎng)基，向滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜的網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面每1個(gè)片接種4×104個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞，1個(gè)月培養(yǎng)。其后，將片切斷成4分之1，再繼續(xù)培養(yǎng)而合計(jì)培養(yǎng)230天。其后，在3.5cm皿中央重復(fù)設(shè)置3個(gè)1.4cm見(jiàn)方的不銹鋼網(wǎng)，在其上置上述聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，用滅菌的1.4cm見(jiàn)方的空的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜2個(gè)夾。在該狀態(tài)下加培養(yǎng)基1ml，則培養(yǎng)基與片成同樣的高度。在此狀態(tài)下向co2溫育器內(nèi)移動(dòng)，以每1周2次的比例進(jìn)行培養(yǎng)基更換而繼續(xù)實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)7天后，將各片分為各1個(gè)，作為單一的片繼續(xù)培養(yǎng)。在7天、10日、16天、21日、28天、42日、56天后使用cck8測(cè)量細(xì)胞數(shù)，對(duì)于原來(lái)的片和后接地的空的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜，將細(xì)胞的增殖行為使用用cck8的染色法觀察。觀察到從長(zhǎng)期間培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜有效率地向空的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜移動(dòng)細(xì)胞，繼續(xù)增殖的行為。結(jié)果示于圖1。對(duì)于不經(jīng)氣相傳代而在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上繼續(xù)長(zhǎng)期培養(yǎng)294天的人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)片及將氣相傳代經(jīng)第230天同期間培養(yǎng)的基盤片及由氣相培養(yǎng)傳代后培養(yǎng)56天的上下2個(gè)片，將生息的人皮膚成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的纖連蛋白用elisa測(cè)定，用向培養(yǎng)片的培養(yǎng)基中經(jīng)24小時(shí)釋放的纖連蛋白的量比較。不影響培養(yǎng)期間及氣相傳代，確認(rèn)穩(wěn)定的纖連蛋白的產(chǎn)生。結(jié)果示于表9。作為比較對(duì)象，并記從在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上培養(yǎng)13天的片2個(gè)產(chǎn)生的纖連蛋白量?！颈?】【實(shí)施例8：人皮膚成纖維細(xì)胞的冷凍及物質(zhì)產(chǎn)生】向2cm×2cm的滅菌的正方形容器加細(xì)胞培養(yǎng)基0.5ml，使用不網(wǎng)結(jié)構(gòu)的a面朝上而各自浸漬滅菌的1.4cm見(jiàn)方的正方形的聚酰亞胺多孔質(zhì)膜。向培養(yǎng)基內(nèi)片上每1個(gè)片各自添加4×104個(gè)人皮膚成纖維細(xì)胞懸浮液，在co2溫育器內(nèi)開(kāi)始培養(yǎng)。以每1周2次的比例進(jìn)行培養(yǎng)基更換而繼續(xù)實(shí)施細(xì)胞培養(yǎng)，49天細(xì)胞培養(yǎng)之后，當(dāng)使用cck8測(cè)定細(xì)胞數(shù)時(shí)，是9.1×104個(gè)。向加了cellbanker3ml的冷凍保存袋之中放入此細(xì)胞生長(zhǎng)的片，用程序冷凍器以每10分鐘降低1℃冷凍至-80℃后，于-80℃保存24小時(shí)，向液氮中移動(dòng)。5天后，將袋于37℃加溫而融解內(nèi)容物，放入培養(yǎng)基2ml而在溫育器內(nèi)放置24小時(shí)。在24小時(shí)后，5天后，8天后，13天后，21天后，29天后及35天后使用cck8測(cè)定細(xì)胞數(shù)。24小時(shí)后，8天后，21天后及35天后的比活性是34％、91％、105％及152％。培養(yǎng)35天后，將在同片生長(zhǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞的纖連蛋白產(chǎn)生量由elisa法測(cè)定。結(jié)果示于表10。再者，作為比較對(duì)象，并記從不冷凍而在聚酰亞胺多孔質(zhì)膜上培養(yǎng)13天的片2個(gè)產(chǎn)生的纖連蛋白量。確認(rèn)不受冷凍導(dǎo)致的損傷，物質(zhì)產(chǎn)生繼續(xù)?！颈?0】當(dāng)前第1頁(yè)12