本實(shí)用新型涉及生物技術(shù)檢測(cè)用具領(lǐng)域，尤其涉及一種快速診斷雞肉品質(zhì)基因試劑盒。

背景技術(shù)：

隨著生活水平的不斷提高和消費(fèi)觀念的轉(zhuǎn)變，人們對(duì)于雞肉的質(zhì)量和口味的要求越來(lái)越高，對(duì)優(yōu)質(zhì)雞的需求日漸擴(kuò)大。優(yōu)質(zhì)雞主要強(qiáng)調(diào)的是肉質(zhì)，而肌纖維是構(gòu)成肌肉組織的基本單位，大量的研究表明肌纖維類型是直接影響肌肉品質(zhì)的重要因素，慢肌纖維含量較多的肉品質(zhì)相對(duì)較好，選育慢肌纖維比例高的肌纖維類型形狀是優(yōu)質(zhì)雞育種中的主要目標(biāo)之一，從分子水平上鑒定影響肌纖維類型的基因或標(biāo)記是目前雞功能基因研究的熱點(diǎn)之一，但前提是要找到與該形狀緊密聯(lián)系的標(biāo)記，以及適用于此研究的試劑盒。

過(guò)氧化物體增殖物激活受體γ輔激活因子1-α(PGC-1α)對(duì)肌肉中的能量代謝產(chǎn)生著非常重要的作用，其在肌肉纖維細(xì)胞中表達(dá)豐富，慢肌纖維的表達(dá)要高于快肌纖維，研究表明，PGC-1α可能是調(diào)控肌纖維的關(guān)鍵因子并可以組合肌纖維轉(zhuǎn)化過(guò)程中的多條信號(hào)通路，但關(guān)于PGC-1α基因的試劑盒卻很少，并且常見(jiàn)的試劑盒結(jié)構(gòu)都較為簡(jiǎn)單，空間利用率低，在有限的空間內(nèi)不能盛放多種試劑，實(shí)驗(yàn)人員需要另行購(gòu)買(mǎi)或配置所需試劑，從而影響實(shí)驗(yàn)效率。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決上述問(wèn)題，本實(shí)用新型提供一種快速診斷雞肉品質(zhì)基因試劑盒來(lái)滿足所有用戶需求，該試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便，檢測(cè)過(guò)程不易受污染，診斷過(guò)程敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短，密封安全，方便運(yùn)輸。

本實(shí)用新型是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種快速診斷雞肉品質(zhì)基因試劑盒，包括盒體和連接在盒體上的盒蓋，盒體內(nèi)設(shè)有隔板，隔板將盒體內(nèi)部分隔成左、右兩個(gè)空間，右部空間內(nèi)分別架設(shè)上安裝板a、上安裝板b、下安裝板a和下安裝板b；上安裝板a和上安裝板b通過(guò)右部空間內(nèi)壁上開(kāi)設(shè)的插槽固定，插槽中嵌有安裝件；上安裝板a、下安裝板a對(duì)應(yīng)開(kāi)通孔形成試管槽a，上安裝板b和下安裝板b上分別開(kāi)設(shè)試管槽b，試管槽a和試管槽b內(nèi)均嵌裝試管，左部空間設(shè)有上下層疊的上襯墊和下襯墊，兩襯墊上開(kāi)設(shè)有容器槽，容器槽內(nèi)裝有試劑瓶。

進(jìn)一步地，PCR擴(kuò)增引物為：

上游引物序列為：5’-GGAGCAATAAAGCGAAGAGC-3’，

下游引物序列為：5’-CTGTGCTCCCACACCTACCT-3’。

進(jìn)一步地，LDR檢測(cè)反應(yīng)探針為：

A探針PGC-1α_modify序列：

5’-P-GTTCGTAGTCAGATATTTGAGAAGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-FAM-3’，

B探針PGC-1α_G序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGGTTTGGTCTGAGGAGGGTCATC-3’，

C探針PGC-1α_A序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGGTTTGGTCTGAGGAGGGTCATT-3’。

進(jìn)一步地，試管包括含PGC-1α基因PCR擴(kuò)增引物的試管、含LDR檢測(cè)反應(yīng)探針的試管、含Taq酶的試管、含DNA連接酶的試管、含DNA模板的試管和含Mg²⁺的試管。

進(jìn)一步地，試劑瓶包括PCR緩沖液試劑瓶、含dNTP的試劑瓶、含Q-solution的試劑瓶和含去離子水的試劑瓶。

進(jìn)一步地，上襯墊底部設(shè)有凸起，下襯墊頂部設(shè)有凹槽，凸起和凹槽相配合，實(shí)現(xiàn)貼合連接，保持兩者的穩(wěn)定。

進(jìn)一步地，試管槽a和試管槽b的深度為試管高度的1/3-2/3。

進(jìn)一步地，盒蓋和盒體通過(guò)鎖扣扣合。

進(jìn)一步地，盒體上設(shè)有視窗，方便實(shí)驗(yàn)員觀測(cè)盒體內(nèi)部的情況。

進(jìn)一步地，上襯墊和下襯墊上均設(shè)有扣手，方便兩襯墊的取放。

本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便，檢測(cè)過(guò)程不易受污染，能有效防止試劑交叉引起的污染，特異性強(qiáng)、耗時(shí)短，密封安全，方便運(yùn)輸，在有限的空間內(nèi)可以容納多種試劑，方便實(shí)驗(yàn)的操作，本實(shí)用新型自帶的含PCR擴(kuò)增引物的試管、含LDR檢測(cè)反應(yīng)探針的試管、PCR緩沖液試劑瓶、含Taq酶的試管等設(shè)備使得實(shí)驗(yàn)人員能夠快速診斷出不同個(gè)體肉雞上有利于標(biāo)記的基因以及適合育種的情況。

附圖說(shuō)明

圖1為本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為盒體和盒蓋的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為安裝板的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4為上襯墊和下襯墊的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖中，1、盒體；2、盒蓋；3、隔板；4-1、上安裝板a；4-2、上安裝板b；4-3、下安裝板a；4-4、下安裝板b；5-1、試管槽a；5-2、試管槽b；6、試管；7、含PGC-1α基因PCR擴(kuò)增引物的試管；8、含LDR檢測(cè)反應(yīng)探針的試管；9、插槽；10、安裝件；11、海綿墊；12、上襯墊；13、下襯墊；14、凸起；15、凹槽；16、容器槽；17、試劑瓶；18、含Taq酶的試管；19、含DNA連接酶的試管；20、含DNA模板的試管；21、含Mg²⁺的試管；22、PCR緩沖液試劑瓶；23、含dNTP的試劑瓶；24、含Q-solution的試劑瓶；25、含去離子水的試劑瓶；26、鎖扣；27、視窗；28、扣手。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型做進(jìn)一步的說(shuō)明。

如圖1-4所示的快速診斷雞肉品質(zhì)基因試劑盒，包括盒體1和連接在盒體1上的盒蓋2，盒體1和盒蓋2通過(guò)鎖扣26扣合，盒蓋2內(nèi)側(cè)設(shè)有海綿墊11，起保護(hù)試管和試劑瓶的作用，盒體上設(shè)有視窗27，透過(guò)視窗可以判斷盒體1內(nèi)的試管和試劑瓶有無(wú)損壞情況，盒體1內(nèi)設(shè)有隔板3，隔板3將盒體1內(nèi)部分隔成左、右兩個(gè)空間，右部空間內(nèi)分別架設(shè)上安裝板a4-1、上安裝板b4-2、下安裝板a4-3和下安裝板b4-4；上安裝板a4-1和上安裝板b4-2通過(guò)右部空間內(nèi)壁上開(kāi)設(shè)的插槽9固定，插槽9中嵌有安裝件10；上安裝板a4-1、下安裝板a4-3對(duì)應(yīng)開(kāi)通孔形成試管槽a5-1，上安裝板b4-2和下安裝板b4-4分別開(kāi)設(shè)試管槽b5-2，試管槽a5-1和試管槽b5-2內(nèi)均嵌裝試管6，試管槽a5-1和試管槽b5-2的深度為試管6高度的1/3-2/3；左部空間設(shè)有上下層疊的上襯墊12和下襯墊13，上襯墊12底部設(shè)有凸起14，下襯墊13頂部設(shè)有凹槽15，凸起14和凹槽15相配合，實(shí)現(xiàn)貼合連接，上襯墊12和下襯墊13上均設(shè)有扣手28，兩襯墊上均開(kāi)設(shè)有容器槽16，容器槽16內(nèi)裝有試劑瓶17。

安裝件10使得下層試管距上層安裝板有一定間距，保證下層試管不會(huì)因?yàn)樯蠈影惭b板的擠壓而破碎。

上襯墊12上開(kāi)設(shè)的容器槽小于下襯墊13上開(kāi)設(shè)的容器槽，由此可以將不同大小的試劑瓶分層排放，提高盒體的空間利用率，上襯墊12的底部可開(kāi)設(shè)凹槽，與下襯墊13上的試劑瓶形成卡扣結(jié)構(gòu)。

PCR擴(kuò)增引物為：

上游引物序列為：5’-GGAGCAATAAAGCGAAGAGC-3’，

下游引物序列為：5’-CTGTGCTCCCACACCTACCT-3’；

含PCR擴(kuò)增引物的試管包括含PCR擴(kuò)增上游引物的試管和含PCR擴(kuò)增下游引物的試管。

LDR檢測(cè)反應(yīng)探針為：

A探針PGC-1α_modify序列：

5’-P-GTTCGTAGTCAGATATTTGAGAAGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-FAM-3’，

B探針PGC-1α_G序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGGTTTGGTCTGAGGAGGGTCATC-3’，

C探針PGC-1α_A序列：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCTGGTTTGGTCTGAGGAGGGTCATT-3’；

含LDR檢測(cè)反應(yīng)探針的試管為含三種探針混合物的試管。

如圖3所示，上安裝板a4-1和下安裝板a4-3上的試管槽a5-1內(nèi)插裝含PGC-1α基因PCR擴(kuò)增引物的試管7和含LDR檢測(cè)反應(yīng)探針的試管8,上安裝板b4-2的試管槽b5-2內(nèi)插裝含Taq酶的試管18和含DNA連接酶的試管19，下安裝板b4-4的試管槽b5-2內(nèi)插裝含DNA模板的試管20和含Mg²⁺的試管21。

如圖4所示，試劑瓶17可為PCR緩沖液試劑瓶22、含dNTP的試劑瓶23、含Q-solution的試劑瓶24和含去離子水的試劑瓶25。

由于本實(shí)用新型中的安裝板、上襯墊12或下襯墊13均可活動(dòng)的放置在盒體內(nèi)，根據(jù)不同試劑的保存條件，可將安裝板從盒體1內(nèi)取出，或?qū)⑸弦r墊12或下襯墊13取出，放置在對(duì)應(yīng)的保存條件下，由此，增加了本實(shí)用新型的實(shí)用性。

利用本實(shí)用新型診斷雞肉品質(zhì)的操作步驟如下：

1.DNA提取：

對(duì)隨機(jī)選取的雞進(jìn)行采血，放入含有抗凝劑的EP管中，然后進(jìn)行DNA提??；

2.PCR擴(kuò)增：

PCR擴(kuò)增包含PGC-1α基因外顯子G646A突變位點(diǎn)的核苷酸序列，長(zhǎng)度為210bp，在該序列的第87bp處有一個(gè)G87-A87的堿基突變，所用的引物信息即為上述內(nèi)容中的上游引物和下游引物。

PCR擴(kuò)增SNP位點(diǎn)所在片段，PCR擴(kuò)增體系為：50ng/μL DNA模板1μL、20mMdNTP2μL、100mM Mg2⁺0.6μL、10×PCR反應(yīng)緩沖液2μL、10μM上下游引物各0.4μL、5U/μLTaq酶0.2μL、5×Q-solution 4μL、加ddH2O至總體積20μL。

PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min、94℃變性30s、56℃退火30s、72℃延伸30s、35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸8min。

用2％瓊脂糖凝膠檢測(cè)PCR產(chǎn)物，判定PCR擴(kuò)增片段是否正確。

3.LDR分型：

剩余PCR產(chǎn)物用于LDR分型，LDR三根探針信息同上述內(nèi)容中的A、B、C探針。

LDR體系為：PCR產(chǎn)物1μL、10×PCR反應(yīng)緩沖液1μL、0.5μM探針混合物1μL、40U/μLDNA連接酶0.05μL、加ddH2O至總體積10μL。

LDR檢測(cè)反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性2min、94℃變性30s、60℃退火2mi，30個(gè)循環(huán)。

最后，對(duì)試驗(yàn)雞的基因進(jìn)行分析，并判斷何種基因更利于標(biāo)記和育種。

由于在上述實(shí)驗(yàn)中，需要多種試劑，且實(shí)驗(yàn)次數(shù)較多，需要大量的實(shí)驗(yàn)，因此需要的每種試劑也較多，每種試劑的試管或試劑瓶至少為2個(gè)，可為不同體積，根據(jù)需要取用,能有效防止試劑交叉引起的污染，可以保證在某種試劑污染后，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。

以上所述實(shí)施方式僅表達(dá)了本實(shí)用新型的一種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本實(shí)用新型專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本實(shí)用新型構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。