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一種騷動厄斯考維菌及在制備(R)?3?氯苯乙醇中的應用的制作方法

文檔序號:12584344閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.騷動厄斯考維菌(Oerskovia turbata)ZJPH1604,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號:CCTCC NO:M 2016541,保藏日期:2016年9月30日,地址:中國,武漢,武漢大學,郵編:430072。

2.一種權利要求1所述騷動厄斯考維菌ZJPH1604在微生物催化不對稱還原3-氯苯乙酮制備(R)-3-氯苯乙醇中的應用。

3.如權利要求2所述的應用,其特征在于所述應用為:以3-氯苯乙酮為底物,以騷動厄斯考維菌ZJPH1604經發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體細胞為酶源,加入輔助底物,于pH為6.0~9.0的緩沖液中,在25℃~35℃下進行轉化反應,反應結束后,反應液經分離純化得到(R)-3-氯苯乙醇;所述輔助底物為葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、異丙醇、甲醇或乙醇中的一種。

4.如權利要求3所述的應用,其特征在于所述底物3-氯苯乙酮的初始濃度為20~200mmol/L緩沖液,騷動厄斯考維菌ZJPH1604濕菌體細胞的添加量以濕重計為50~300g/L緩沖液;所述輔助底物為葡萄糖、蔗糖或麥芽糖時,加入量為20~300g/L緩沖液,所述輔助底物為甲醇、乙醇或異丙醇時,加入體積為緩沖液體積的10~30%。

5.如權利要求3所述的應用,其特征在于所述酶源按如下方法制備:1)斜面培養(yǎng):將騷動厄斯考維菌ZJPH1604接種至斜面培養(yǎng)基中,30℃培養(yǎng)1-2天,獲得斜面菌體;所述斜面培養(yǎng)基組成為:葡萄糖10g/L,蛋白胨5g/L,酵母膏4g/L,(NH4)2SO4 2g/L,KH2PO4 1g/L,NaCl 0.5g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,瓊脂20g/L,溶劑為水,pH 6.5;

2)種子培養(yǎng):從斜面挑一環(huán)菌體接入裝有100mL種子培養(yǎng)基的250mL搖瓶中,30℃,200r/min培養(yǎng)24小時,獲得種子液;所述種子培養(yǎng)基組成為:葡萄糖10-20g/L,蛋白胨5-10g/L,酵母膏4-8g/L,(NH4)2SO4 2-4g/L,KH2PO4 2-4g/L,NaCl 0.5-2g/L,MgSO4·7H2O 0.5-2g/L,溶劑為水,pH 6.5-8.0;

3)發(fā)酵培養(yǎng):以體積濃度4-10%的接種量將種子液轉接到裝有100mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL搖瓶中,30℃,180-220r/min培養(yǎng)36-48小時,將發(fā)酵液離心,收集濕菌體;所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度組成如下:葡萄糖20~30g/L,酵母膏10~40g/L,(NH4)2SO4 1.0-6.0g/L,KH2PO42.0~6.0g/L,MgSO4·7H2O 0.3~0.6g/L,NaCl 0.2~0.8g/L,溶劑為水,pH6.0~7.5。

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