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紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來源的鑒定方法與流程

文檔序號:12056595閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來源的鑒定方法,其特征是所用標(biāo)記引物為mtDNA-Z,分別由左端引物序列mtDNA-Z-F和右端引物序列mtDNA-Z-R組成。

2.如權(quán)利要求1所述的紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來源的鑒定方法,其特征是上述左端引物序列mtDNA-Z-F為:5’-TATGAGGTGTCCCCCAAGTC-3’。

3.如權(quán)利要求1所述紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來源的鑒定方法,其特征是上述右端引物序列mtDNA-Z-R為:5’-ACTGGCAGACAAACAAATCGT-3’。

4.如權(quán)利要求所述的紫扇貝、海灣扇貝與雜交后代母本來源的鑒定方法,其特征在于具體步驟如下:

(1)取待鑒定的紫扇貝、海灣扇貝與海紫雜交扇貝、紫海雜交扇貝的閉殼肌,直接用常規(guī)的方法提取全基因組DNA,用TE緩沖液稀釋至終濃度100ng/μL保存在-20℃?zhèn)溆茫?/p>

(2)以提取的紫扇貝、海灣扇貝與上述雜交扇貝的DNA為模板,用上述引物mtDNA-Z對其進(jìn)行PCR擴(kuò)增,反應(yīng)體系為10μL,包括0.25U Taq DNA酶,含1.5mM MgCl2的1×PCR buffer,0.2mM dNTP mix,左右端引物各1μM,50ngDNA模板;反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3min,94℃1min,56℃1min,72℃1min,30個循環(huán),72℃延伸10min;PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,凝膠成像系統(tǒng)照相觀察電泳結(jié)果;如果在近460bp處有PCR特異性條帶出現(xiàn),則確定母本線粒體基因來源為紫扇貝,如果在近460bp處沒有PCR特異性條帶出現(xiàn),則確定其母本線粒體基因來源為海灣扇貝。

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