1.一種精確測量人群端粒長度的方法,其特征在于,該測量方法單拷貝基因選用編碼酸性核糖體磷蛋白質(zhì)P0的36B4基因,步驟包括:
(1)人基因組DNA提?。红o脈穿刺取血150~200μl,用血液基因組提取試劑盒提取樣本基因組DNA,同時計算其濃度和純度;
(2)設計標準物和引物并合成;
(3)設計端粒和36B4標準曲線:
①端粒標準曲線設計,根據(jù)引物合成報告書中的分子質(zhì)量MW=26667.2μg/μmole,阿伏伽德羅常數(shù)Avogadro’s number=6.02×1023,端粒標準品的質(zhì)量MW/Avogadro’s number=0.44×10-19g,計算出最高濃度的標準物Standard A相當于有1.14×1012kb端粒,稀釋六個端粒標準物A~F,最低濃度的標準物相當于含1.14×107kb端粒,端粒標準曲線對樣品的端??傞L度進行度量,得出具體數(shù)值;
②根據(jù)引物合成報告書中的分子質(zhì)量MW=23268.15μg/μmole,單拷貝基因標準品的質(zhì)量MW/Avogadro’s number=0.38×10-19,計算出最高濃度的標準物Standard A含20pg的36B4合成物,相當于2.63×108個基因組拷貝,稀釋六個36B4標準物A~F,最低濃度的標準物相當于有2630個基因組拷貝,通過單拷貝基因標準曲線對樣品的基因組數(shù)量進行度量;
(4)RT-qPCR法測量人群端粒長度:樣品體系和標準品體系按Power SYBR Green mastermix(2×)10μl、引物-F 1μl、引物-R1μl、雙蒸水4μl、DNA 4μl,20μl體系;按95℃10min,95℃15s、60℃1min、×40,進行PCR反應;
(5)數(shù)據(jù)分析:樣本的端粒總長度和基因組拷貝數(shù),二者的比率就是樣本的端粒絕對長度。
2.根據(jù)權利要求1所述精確測量人群端粒長度的方法,其特征在于,步驟(2)中,所述標準物包括端粒標準物和36B4標準物,所述端粒標準物序列如SEQ ID No.1所示,所述36B4標準物序列如SEQ ID No.2所示。
3.根據(jù)權利要求1所述精確測量人群端粒長度的方法,其特征在于,步驟(2)中,所述引物序列為:
Telo-F CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT
Telo-R GGCTTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCT
36B4-F CAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCC
36B4-R CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA。