1.一種利用體細胞克隆技術培育地方優(yōu)良家畜品種的方法,其特征在于,利用體細胞克隆技術培育家畜優(yōu)良品種的方法按照以下操作步驟進行:
第一步、利用體細胞克隆技術獲得具有優(yōu)良性狀的家畜個體
(1)獲取具有優(yōu)良性狀家畜的耳等組織,建立家畜成纖維細胞系并進行傳代培養(yǎng),做體細胞核移植備用;
(2)收集卵丘-卵母細胞復合體,然后置于成熟培養(yǎng)液中進行成熟培養(yǎng);
(3)卵母細胞經(jīng)過體外成熟培養(yǎng)后,用透明質酸鈉去除卵母細胞外圍的卵丘細胞,將排出第一極體的卵母細胞放入預處理液中處理后移入卵母細胞操作液中,用顯微注射針將極體及其周圍胞質一起去除,然后將已獲得的具有優(yōu)良性狀的家畜成纖維供體體細胞導入去核的卵母細胞間隙中,移出注射針,并輕輕按壓供體細胞上方的透明帶,使供體細胞與卵母細胞膜緊貼,獲得克隆重構胚;
(4)選擇代孕家畜進行胚胎移植,帶自然分娩后批量獲得相應的克隆家畜個體;
第二步、克隆家畜個體的雜交選育
在同一批克隆出生的家畜個體中,通過培育后,到達適宜的配種年齡時,讓來自不同公畜供體細胞的克隆公畜個體分別與來自不同母畜供體細胞的克隆母畜進行自然雜交,待新生家畜個體出生后,再對每一雜交組合的F1代個體的肉品質或絨毛細度等相關經(jīng)濟性狀進行鑒定,對達不到選育標準的F1代個體父母,查明是父代還是母代遺傳引起的性狀,然后再對相應的父母個體進行淘汰,逐步篩選出符合目的優(yōu)良性狀的家畜個體;
第三步、擴群
對經(jīng)過第二步篩選后留下的后代個體中可以穩(wěn)定遺傳優(yōu)良經(jīng)濟性狀的父母再進行組群,選育出地方優(yōu)良家畜品種。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種利用體細胞克隆技術培育家畜優(yōu)良品種的方法,其特征在于:在第一步步驟(2)收集和體外培養(yǎng)卵母細胞中,具體步驟為:從屠宰場收集家畜卵巢,保存于適溫生理鹽水中并在4h內運送回實驗室,剪去卵巢系膜,用溫生理鹽水沖洗3遍,然后放入含50ug/ml肝素的PBS液里,將卵巢表面2~6mm的卵泡切開,收集卵丘-卵母細胞復合體,然后置于成熟培養(yǎng)液中進行成熟培養(yǎng)。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種利用體細胞克隆技術培育家畜優(yōu)良品種的方法,其特征在于:在第一步步驟(2)中,成熟培養(yǎng)液的組成為:M199、10%FBS、0.1g/L L-半胱氨酸、l0ug/ml FSH、5ug/m1 LH、10ng/ml EGF、1ug/ml 17β-雌二醇、0.075g/L卡拉霉素,培養(yǎng)時間為20~22h。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種利用體細胞克隆技術培育家畜優(yōu)良品種的方法,其特征在于:在第一步步驟(4)中,選取自然發(fā)情的家畜作為胚胎移植的代孕家畜,再將經(jīng)過電融合、化學激活后并培養(yǎng)至囊胚階段的重構胚用胚胎移植管移植到即將排卵或已排卵的兩側輸卵管傘第一彎曲部位后進行發(fā)育,待代孕家畜妊娠達到預產(chǎn)期時,自然分娩后批量獲得相應的克隆家畜個體。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種利用體細胞克隆技術培育家畜優(yōu)良品種的方法,其特征在于:在第一步步驟(1)中,具有優(yōu)良性狀家畜成纖維供體細胞的培養(yǎng)與細胞系的建立中,所用的材料為相應家畜的耳組織。