本發(fā)明涉及一種利用體細(xì)胞克隆技術(shù)培育地方優(yōu)良家畜品種的方法，屬于動物遺傳育種與繁殖學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

傳統(tǒng)的優(yōu)良家畜品種選育方法主要是通過選擇具有優(yōu)良性狀的公母個體進(jìn)行不斷雜交，在后代中對優(yōu)良個體進(jìn)行反復(fù)選擇，以此獲得具有優(yōu)良性狀的目標(biāo)家畜個體。對于在同一個家畜品種中存在的極少數(shù)的特別優(yōu)良的個體甚至是已經(jīng)面臨著瀕危滅絕的珍惜家畜個體，通過傳統(tǒng)的選育方法很難實現(xiàn)具有優(yōu)良品種目標(biāo)個體的選育，而且面臨著品種資源不足、選育周期長、選育成功率低的難題，很不利于優(yōu)良家畜個體的產(chǎn)業(yè)化以及優(yōu)良家畜品種資源的可持續(xù)利用。

近幾年來，隨著家畜育種學(xué)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，新型的細(xì)胞工程技術(shù)、基因工程技術(shù)在動物育種中逐漸浮現(xiàn)，家畜胚胎生物學(xué)的研究和應(yīng)用也取得了巨大的進(jìn)展，超數(shù)排卵、體外胚胎生產(chǎn)、胚胎移植以及性別鑒定、控制等技術(shù)日趨變得更加成熟，而動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)、體細(xì)胞克隆技術(shù)在家畜育種中也逐漸得到了開發(fā)和利用，但也面臨著家畜體細(xì)胞克隆難度遠(yuǎn)大于胚胎克隆等的難題、而且克隆胚胎移植后母畜妊娠率低、流產(chǎn)率高, 胎兒和初生家畜個體發(fā)育異常、死亡率偏高，這在很大程度上也制約了家畜體細(xì)胞克隆技術(shù)在家畜優(yōu)良品種培育中的推廣和應(yīng)用。

云南省地方優(yōu)良肉羊品種總體存在種群小，而且在同一種群中存在個體差異大，優(yōu)良品種個體少的問題。如云南省的烏骨綿羊因有非常好的藥用價值而享譽(yù)全國，但由于全省存欄不到2000只，主要分布于蘭坪、劍川、永勝、香格里拉等四個縣，而肉、骨、血等全身組織器官均呈烏骨的比例不足7%，數(shù)量極少。目前一只全烏的烏骨綿羊銷售價為1.5～2.0萬元，而且全國市場需求在1萬只以上，如果只靠傳統(tǒng)的繁育手段短期內(nèi)解決不了市場的需求

內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊?qū)賰?nèi)蒙古絨山羊一個品種類型，是中國羊絨品質(zhì)最優(yōu)的絨山羊之一，已被列入國家首批發(fā)布的動物遺傳資源一級保護(hù)名錄（馮美玲等，2010）。其主要分布在內(nèi)蒙古自治區(qū)西部地區(qū)的荒漠和半荒漠草原，具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和抗病性。以其羊絨纖維細(xì)、光澤好、強(qiáng)度大、纖維長、手感柔軟、凈絨率高等優(yōu)良品質(zhì)而出名，屬于我國重要的絨用經(jīng)濟(jì)動物。近年來，隨著絨毛市場對毛品質(zhì)和需求量的急劇增加，改良絨山羊品種，增加絨毛的產(chǎn)量和質(zhì)量顯得尤為重要（閻思進(jìn)，馮平，李福貴，2016）。但是，由于山羊絨收購沒有體現(xiàn)以質(zhì)論價、優(yōu)質(zhì)優(yōu)價，為提高山羊個體的產(chǎn)絨量，牧民近年來引進(jìn)一些產(chǎn)絨量高但細(xì)度差的絨山羊種羊，與當(dāng)?shù)亟q山羊品種雜交，產(chǎn)絨量顯著增加，而絨質(zhì)量卻大幅下降（李福貴，徐絢絢，2012），細(xì)度作為山羊絨品質(zhì)的重要指標(biāo)，在各個地區(qū)、各個山羊品種的羊絨細(xì)度逐年變粗（田文亮，2015），山羊絨平均直徑由2004年的15.25μm增加到2010年的15.85μm（李福貴，徐絢絢，2012），羊絨產(chǎn)業(yè)的資源優(yōu)勢出現(xiàn)弱化。2015年在內(nèi)蒙古自治區(qū)西部阿拉善右旗、以及巴彥淖爾市杭錦后旗等地區(qū)，發(fā)現(xiàn)了少數(shù)羊絨細(xì)度較細(xì)的二狼山絨山羊，其羊絨細(xì)度從12.8μm到13.89μm，屬于細(xì)度較細(xì)、經(jīng)濟(jì)價值較好的羊絨。這些個體為選育出羊絨細(xì)度較細(xì)的二狼山絨山羊提供了良好的材料。然而，目前羊的培育方法主要是以傳統(tǒng)的“雜交-橫交固定-選育提高”的雜交育種模式為主（譚曉山，李冰等，2015），且品種優(yōu)良的二狼山絨山羊數(shù)目不多又分散于不同的地區(qū)和不同的羊群中，這就在一定程度上制約了雜交育種改良的步伐。同時，也有很多時候這些優(yōu)良品種在發(fā)現(xiàn)時，大多數(shù)個體的年齡較大，已不宜用于自然繁殖，有的甚至已經(jīng)死亡，如果采取傳統(tǒng)的保種方式，很可能導(dǎo)致這一優(yōu)良品種的最終消亡。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為針對以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種利用體細(xì)胞克隆技術(shù)培育地方優(yōu)良家畜品種的方法，利用體細(xì)胞克隆技術(shù)對在同一個家畜品種中存在的極少數(shù)特別優(yōu)良的家畜個體進(jìn)行批量克隆，經(jīng)過對克隆個體的不斷雜交篩選、淘汰，成功批量地獲得了具有特別優(yōu)良性狀的家畜個體，該方法技術(shù)實用可靠，家畜個體的遺傳性狀和表型較穩(wěn)定、培育周期較短、資源投入低、能高效批量生產(chǎn)遺傳和表型穩(wěn)定的基因修飾豬個體，便于建立新型家畜優(yōu)良品種的培育模式，實現(xiàn)優(yōu)良家畜品種的可持續(xù)開發(fā)和利用。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提出如下技術(shù)方案：

一種利用體細(xì)胞克隆技術(shù)培育地方優(yōu)良家畜品種的方法，利用體細(xì)胞克隆技術(shù)培育地方優(yōu)良家畜品種的方法按照以下操作步驟進(jìn)行：

第一步、利用體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得具有優(yōu)良性狀的家畜個體

（1）獲取具有優(yōu)良性狀家畜的耳等組織，建立家畜成纖維細(xì)胞系并進(jìn)行傳代培養(yǎng)，做體細(xì)胞核移植備用；

（2）從屠宰場收集家畜卵巢，保存于適溫生理鹽水中并在4h內(nèi)運(yùn)送回實驗室，剪去卵巢系膜，用溫生理鹽水沖洗3遍，然后放入含50ug/ml肝素的PBS液里，將卵巢表面2～6mm的卵泡快速切開，收集卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體，然后置于成熟培養(yǎng)液中進(jìn)行成熟培養(yǎng)；

（3）卵母細(xì)胞經(jīng)過體外成熟培養(yǎng)后，用透明質(zhì)酸鈉去除卵母細(xì)胞外圍的卵丘細(xì)胞，將排出第一極體的卵母細(xì)胞放入預(yù)處理液中處理后移入卵母細(xì)胞操作液中，用顯微注射針將極體及其周圍胞質(zhì)一起去除，然后將已獲得的具有優(yōu)良性狀的家畜成纖維供體體細(xì)胞導(dǎo)入去核的卵母細(xì)胞間隙中，移出注射針，并輕輕按壓供體細(xì)胞上方的透明帶，使供體細(xì)胞與卵母細(xì)胞膜緊貼，獲得克隆重構(gòu)胚；

（4）選取自然發(fā)情的家畜作為胚胎移植的代孕家畜，再將經(jīng)過電融合、化學(xué)激活后并培養(yǎng)至囊胚階段的重構(gòu)胚用胚胎移植管移植到即將排卵或已排卵的兩側(cè)輸卵管傘第一彎曲部位后進(jìn)行發(fā)育，待代孕家畜妊娠達(dá)到預(yù)產(chǎn)期時，自然分娩后批量獲得相應(yīng)的克隆家畜個體；

第二步、克隆家畜個體的雜交選育

在同一批克隆出生的家畜個體中，通過一定時期的培育后，到達(dá)適宜的配種年齡時，讓來自不同公畜供體細(xì)胞的克隆公畜個體分別與來自不同母畜供體細(xì)胞的克隆母畜進(jìn)行自然雜交，待新生家畜個體出生后，再對每一雜交組合的F1代個體的肉品質(zhì)或絨毛細(xì)度等相關(guān)經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行鑒定，對達(dá)不到選育標(biāo)準(zhǔn)的F1代個體父母，查明是父代還是母代遺傳引起的性狀，然后再對相應(yīng)的父母個體進(jìn)行淘汰，逐步篩選出符合目的優(yōu)良性狀的家畜個體。

第三步、擴(kuò)群

對經(jīng)過第二步篩選后留下的后代個體中可以穩(wěn)定遺傳優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀的父母再進(jìn)行組群，選育出地方優(yōu)良家畜品種。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，在第一步具有優(yōu)良性狀家畜成纖維供體細(xì)胞的培養(yǎng)與細(xì)胞系的建立中，所用的材料為相應(yīng)家畜的耳等組織。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，第三步中，重構(gòu)胚的供體細(xì)胞所用的材料是用家畜胎兒建立的成纖維細(xì)胞。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，在第一步步驟（2）收集和體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞中，具體步驟為：從屠宰場收集家畜卵巢，保存于適溫生理鹽水中并在4h內(nèi)運(yùn)送回實驗室，剪去卵巢系膜，用溫生理鹽水沖洗3遍，然后放入含50ug/ml肝素的PBS液里，將卵巢表面2～6mm的卵泡切開，收集卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體，然后置于成熟培養(yǎng)液中進(jìn)行成熟培養(yǎng)。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，在第一步步驟（4）中，選取自然發(fā)情的家畜作為胚胎移植的代孕家畜，再將經(jīng)過電融合、化學(xué)激活后并培養(yǎng)至囊胚階段的重構(gòu)胚用胚胎移植管移植到即將排卵或已排卵的兩側(cè)輸卵管傘第一彎曲部位后進(jìn)行發(fā)育，待代孕家畜妊娠達(dá)到預(yù)產(chǎn)期時，自然分娩后批量獲得相應(yīng)的克隆家畜個體。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，在第一步步驟（4）中，重構(gòu)胚需在電壓參數(shù)為150V/mm、25us、2DC下進(jìn)行融合，其中，電融合液的組成為：3mol/L的山梨醇、1mmol/L硫酸鎂、5uM/L氯化鈣、0.05% BSA，隨后移入激活液中進(jìn)行激活；用5μM離子霉素作用5min后移入預(yù)先平衡好的含2mM 6DMAP的胚胎培養(yǎng)液中繼續(xù)激活培養(yǎng)。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明利用體細(xì)胞克隆技術(shù)培育的地方優(yōu)良家畜的品種，在一定程度上克服了在家畜現(xiàn)有的傳統(tǒng)選育方法中存在的選育周期長、資金、資源等投入大、選育成功率低的難題，同時也打破了家畜體細(xì)胞克隆技術(shù)在家畜育種與繁殖學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用不充分的瓶頸。

在本發(fā)明中不斷地優(yōu)化克隆技術(shù)，使家畜體細(xì)胞克隆效率最大化，能夠?qū)υ谕粋€家畜品種中存在的極少數(shù)的特別優(yōu)良性狀的個體進(jìn)行批量克隆，使極其優(yōu)良的家畜個體數(shù)量擴(kuò)大，最大限度地保持家畜遺傳和表型的穩(wěn)定性，同時在克隆家畜后代個體中通過雜交選配的方法使家畜優(yōu)良品種不斷地向著基因型純合的方向轉(zhuǎn)化，批量地獲得具有特別優(yōu)良性狀的家畜個體，實現(xiàn)家畜特有品種資源的可持續(xù)開發(fā)利用，大大縮短了家畜的育種年限，加速了家畜的育種進(jìn)程，提高了家畜的育種效率，使之在生產(chǎn)實踐中創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)效益。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的流程示意圖；

圖2為克隆個體間雜交組合示意圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明的實施例和附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實施例1

如圖1、2所示，一種利用體細(xì)胞克隆技術(shù)培育云南蘭坪烏骨綿羊的方法，具體操作過程按以下步驟進(jìn)行：

第一步、利用體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得具有優(yōu)良肉質(zhì)性狀的烏骨綿羊個體

（1）獲取具有優(yōu)良肉質(zhì)性狀烏骨綿羊的耳等組織，建立烏骨綿羊成纖維細(xì)胞系并進(jìn)行傳代培養(yǎng)，作體細(xì)胞核移植備用。

選取具有優(yōu)良肉質(zhì)性狀的云南蘭坪烏骨綿羊，用酒精擦拭耳部進(jìn)行消毒，盡量挑選耳組織上血管較細(xì)少的部位，用手術(shù)剪取一塊烏骨綿羊的耳組織，保存于含有5% Pencillin-Streptomycin Solution的DMEM中，置于碎冰中并立即運(yùn)回實驗室，在超凈工作臺上，置于無菌的培養(yǎng)皿中，然后用含5% Pencillin-Streptomycin Solution的PBS充分清洗3遍，并用無菌的手術(shù)刀片充分刮去毛，再用無菌PBS清洗1遍后去除Pencillin-Streptomycin Solution后用眼科剪充分剪碎，轉(zhuǎn)移至T-25培養(yǎng)瓶中并加入4ml 0.1%的膠原蛋白酶放入37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中消化約4h后用DMEM洗3遍，再將消化清洗后的細(xì)胞懸液全部轉(zhuǎn)入到T-75培養(yǎng)瓶中，加入10ml含10%FBS的DMEM并放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)并傳代。

（2）羊卵母細(xì)胞的準(zhǔn)備

從當(dāng)?shù)赝涝讏鍪占难蚵殉?，保存于適溫生理鹽水中并在4h內(nèi)運(yùn)送回實驗室，剪去卵巢系膜，用溫生理鹽水沖洗3遍，然后放入含50ug/ml肝素的PBS液里，用滅菌手術(shù)刀片快速將卵巢表面2～6mm 的卵泡切開，收集卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體，選擇胞質(zhì)均含2 層以上顆粒細(xì)胞包裹的卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體，在D-PBS中清洗3次，再用預(yù)先平衡2h的成熟液M199沖洗2次，然后置于預(yù)先在37.5℃、5%CO2、飽和濕度平衡2小時的卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)液：M199、10% FBS、0.1g/L L-半胱氨酸、l0ug/ml FSH、5ug/m1 LH、10ng/ml EGF、1ug/ml 17β-雌二醇、0.075g/L卡拉霉素培養(yǎng)20～22h。

（3）重構(gòu)胚的構(gòu)建

卵母細(xì)胞經(jīng)過體外成熟培養(yǎng)后，用含0.1%透明質(zhì)酸酶的H199消化顆粒細(xì)胞，選擇胞質(zhì)完好且均勻排出第一極體的卵母細(xì)胞，置于含5ug/m1細(xì)胞松弛素B（CB）的10%FBS的H199中進(jìn)行去核和導(dǎo)入已獲得的具有優(yōu)良性狀的云南蘭坪烏骨綿羊成纖維供體體細(xì)胞，獲得重構(gòu)胚。構(gòu)建好的重構(gòu)胚移入3mol/L的山梨醇、1mmol/L硫酸鎂、5uM/L氯化鈣、1mmol/L 0.05%BSA中平衡1分鐘，在電壓參數(shù)為150V/mm、25us、2DC下融合。隨后移入培養(yǎng)液中培養(yǎng)1.5h，進(jìn)行化學(xué)激活后繼續(xù)培養(yǎng)。

（4）胚胎移植及具有優(yōu)良性狀烏骨綿羊個體的獲取

選取自然發(fā)情的普通羊作為胚胎移植的代孕母羊，再將激活后培養(yǎng)2～48小時的胚胎通過外科手術(shù)移植到經(jīng)過同期發(fā)情處理后的普通羊兩側(cè)近輸卵管傘的第一彎曲部。移植30～50d左右用B超檢測妊娠情況，待代孕家畜妊娠到一定時期時，自然分娩后獲得相應(yīng)的克隆烏骨綿羊個體。

第二步、克隆烏骨綿羊個體的雜交選育

在同一批克隆出生的烏骨綿羊個體中，通過一定時期的培育后，到達(dá)適宜的配種年齡時，讓來自不同公烏骨綿羊供體細(xì)胞的克隆公烏骨綿羊個體分別與來自不同母烏骨綿羊供體細(xì)胞的克隆母烏骨綿羊進(jìn)行自然雜交，待新生烏骨綿羊個體出生后，再對每一雜交組合的F1代烏骨綿羊個體的肉品質(zhì)等相關(guān)經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行鑒定，對達(dá)不到選育標(biāo)準(zhǔn)的F1代個體父母，查明是父代還是母代遺傳引起的性狀，然后再對相應(yīng)的父母個體進(jìn)行淘汰，逐步篩選出符合目的優(yōu)良性狀的烏骨綿羊個體。

第三步、組群

對經(jīng)過第二步篩選后留下的后代個體中可以穩(wěn)定遺傳優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀的父母進(jìn)行組群繁殖，選育出地方優(yōu)良烏骨綿羊品種。

實施例2

如圖1、2所示，一種利用體細(xì)胞克隆技術(shù)培育內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊的方法，具體操作過程按以下步驟進(jìn)行：

第一步、利用體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得具有羊絨細(xì)度較細(xì)的內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊個體

（1）獲取羊絨細(xì)度較細(xì)的內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊的耳等組織，建立烏骨綿羊成纖維細(xì)胞系并進(jìn)行傳代培養(yǎng)，作體細(xì)胞核移植備用。

選取具有優(yōu)良羊絨性狀云南蘭坪烏骨綿羊，用酒精擦拭耳部進(jìn)行消毒，盡量挑選耳組織上血管較細(xì)少的部位，用手術(shù)剪取一塊內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊的耳組織，保存于含5% Pencillin-Streptomycin Solution的DMEM中，置于碎冰中并立即運(yùn)回實驗室，在超凈工作臺上，置于無菌的培養(yǎng)皿中，然后用含5% Pencillin-Streptomycin Solution的PBS充分清洗3遍，并用無菌的手術(shù)刀片充分刮去毛，再用無菌PBS清洗1遍后去除Pencillin-Streptomycin Solution后用眼科剪充分剪碎，轉(zhuǎn)移至T-25培養(yǎng)瓶中并加入4ml 0.1%的膠原蛋白酶后放入37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中消化約4h，后用DMEM洗3遍，再將消化清洗后的細(xì)胞懸液全部轉(zhuǎn)入到T-75培養(yǎng)瓶中，加入10ml含10%FBS的DMEM并放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)并傳代。

（2）羊卵母細(xì)胞的準(zhǔn)備

從當(dāng)?shù)赝涝讏鍪占难蚵殉?，保存于適溫生理鹽水中并在4h內(nèi)運(yùn)送回實驗室，剪去卵巢系膜，用溫生理鹽水沖洗3遍，然后放入含50ug/ml肝素的PBS液里，用滅菌手術(shù)刀片快速將卵巢表面2～6mm 的卵泡切開，收集卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體，選擇胞質(zhì)均含2 層以上顆粒細(xì)胞包裹的卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體，在D-PBS中清洗3次，再用預(yù)先平衡2h的成熟液M199沖洗2次，然后置于預(yù)先在37.5℃、5%CO2、飽和濕度平衡2h的卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)液：M199、10% FBS、0.1g/L L-半胱氨酸、l0ug/ml FSH、5ug/m1 LH、10ng/ml EGF、1ug/ml 17β-雌二醇、0.075g/L卡拉霉素培養(yǎng)20～22h。

（3）重構(gòu)胚的構(gòu)建

卵母細(xì)胞經(jīng)過體外成熟培養(yǎng)后，用含0.1%透明質(zhì)酸酶的H199消化顆粒細(xì)胞，選擇胞質(zhì)完好且均勻排出第一極體的卵母細(xì)胞，置于含5ug/m1細(xì)胞松弛素B（CB）的10%FBS的H199中進(jìn)行去核和導(dǎo)入已獲得的具有優(yōu)良羊絨性狀的內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊成纖維供體體細(xì)胞，獲得重構(gòu)胚，構(gòu)建好的重構(gòu)胚移入3mol/L的山梨醇、1mmol/L硫酸鎂、5uM/L氯化鈣、1mmol/L 0.05%BSA中平衡1分鐘，在電壓參數(shù)為150V/mm、25us、2DC下融合。隨后移入培養(yǎng)液中培養(yǎng)1.5h，進(jìn)行化學(xué)激活后繼續(xù)培養(yǎng)。

（4）胚胎移植及具有優(yōu)良羊絨性狀內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊個體的獲取

選取自然發(fā)情的普通羊作為胚胎移植的代孕母羊，再將激活后培養(yǎng)2～48小時的胚胎通過手術(shù)法移植到經(jīng)過同期發(fā)情處理后的普通羊兩側(cè)近輸卵管傘的第一彎曲部。移植后30～50d左右用B超檢測妊娠情況，待代孕家畜妊娠到一定時期時，自然分娩后獲得相應(yīng)的克隆內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊個體。

第二步、克隆內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊個體的雜交選育

在同一批克隆出生的內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊個體中，通過一定時期的培育后，到達(dá)適宜的配種年齡時，讓來自不同公二狼山白絨山羊供體細(xì)胞的克隆公二狼山白絨山羊個體分別與來自不同母二狼山白絨山羊供體細(xì)胞的克隆母二狼山白絨山羊進(jìn)行自然雜交，待新生二狼山白絨山羊個體出生后，再對每一雜交組合的F1代二狼山白絨山羊個體的羊絨等相關(guān)經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行鑒定，對達(dá)不到選育標(biāo)準(zhǔn)的F1代個體父母，查明是父代還是母代遺傳引起的性狀，然后再對相應(yīng)的父母個體進(jìn)行淘汰，逐步篩選出符合目的優(yōu)良性狀的二狼山白絨山羊個體。

第三步、組群

對經(jīng)過第二步篩選后留下的后代個體中可以穩(wěn)定遺傳優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀的父母進(jìn)行組群繁殖，選育出具有地方優(yōu)良羊絨性狀內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊品種。

本實施例中卵母細(xì)胞的準(zhǔn)備、重構(gòu)胚的構(gòu)建中等關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)針對內(nèi)蒙古二狼山白絨山羊進(jìn)行限定和優(yōu)化，在這個參數(shù)的選擇下，能夠在家畜群體中選擇具有優(yōu)良性狀的極少數(shù)家畜個體進(jìn)行體細(xì)胞克隆，能夠批量地獲得具有目標(biāo)優(yōu)良性狀的家畜個體，并且，能夠大大提高了家畜品種選育的成功率，縮短了家畜育種的年限，最大限度地保持了家畜優(yōu)良品種資源的遺傳穩(wěn)定性，使家畜中的具有優(yōu)良性狀的極少數(shù)家畜個體品種得以可持續(xù)開發(fā)利用。

本發(fā)明利用體細(xì)胞克隆技術(shù)培育的地方優(yōu)良家畜的品種，在一定程度上克服了在家畜現(xiàn)有的傳統(tǒng)選育方法中存在的選育周期長、資金、資源等投入大、選育成功率低的難題，同時也打破了家畜體細(xì)胞克隆技術(shù)在家畜育種與繁殖學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用不充分的瓶頸。在本發(fā)明中不斷地優(yōu)化克隆技術(shù)，使家畜體細(xì)胞克隆效率最大化，能夠?qū)υ谕粋€家畜品種中存在的極少數(shù)的特別優(yōu)良性狀的個體進(jìn)行批量克隆，使極其優(yōu)良的家畜個體數(shù)量最大化，最大限度地保持家畜遺傳和表型的穩(wěn)定性，同時在克隆家畜后代個體中通過雜交選配的方法使家畜優(yōu)良品種不斷地向著基因型純合的方向轉(zhuǎn)化，批量地獲得具有特別優(yōu)良性狀的家畜個體，實現(xiàn)家畜特有品種資源的可持續(xù)開發(fā)利用，大大縮短了家畜的育種年限，加速了家畜的育種進(jìn)程，提高了家畜的育種效率，使之在生產(chǎn)實踐中創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)效益。

最終，以上實施例和附圖僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過上述實施例已經(jīng)對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。