本發(fā)明屬于分子生物學(xué)基因檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種用于皮膚抗衰老能力基因檢測(cè)的引物組合物及檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：美國(guó)媒體稱“新的研究表明，加強(qiáng)鍛煉、規(guī)律作息，使用護(hù)膚品有助于讓人保持年輕，但遺傳基因也有可能預(yù)先決定衰老速度”。美國(guó)科學(xué)家特斯曼說：“通過人類基因組計(jì)劃，我們可以對(duì)衰老過程中發(fā)生的數(shù)百種遺傳變化進(jìn)行分析。皮膚通過八種不同方法不斷衰老，每一種衰老方式都由它自己的基因組控制。無論你是像克利夫·理查(CliffRichard)一樣慢慢衰老，還是像基思、理查茲(KeithRichards)一樣長(zhǎng)滿皺紋，這些都由你的生活方式?jīng)Q定，并由這些基因起著部分作用”。特斯曼和他的科研組認(rèn)為，其中最重要的一種因素就是水合作用，即皮膚收集和保持水分的方法，這種方法利用分子把水分鎖在皮膚里；隨著皮膚衰老，控制這個(gè)過程的基因變得活性越來越小，皮膚鎖住的水分也越來越少，因此皮膚開始起皺。特斯曼同時(shí)也表示“與皮膚起皺有關(guān)的基因達(dá)700種之多”。另一種“衰老途徑”涉及到膠原蛋白，這是一種構(gòu)成皮膚下層結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)。衰老過程中，分解膠原蛋白的基因會(huì)變的過于活躍，最終導(dǎo)致皮膚上出現(xiàn)更多皺紋。該科研組發(fā)現(xiàn)40種可導(dǎo)致膠原蛋白分解的基因，并發(fā)現(xiàn)有大約400種基因可導(dǎo)致發(fā)炎，另一些基因影響皮膚對(duì)陽光的反應(yīng)，皮膚對(duì)“自由基”的反應(yīng)，也是導(dǎo)致皮膚衰老的關(guān)鍵。隨著人類基因組計(jì)劃、國(guó)際千人基因組計(jì)劃的完成，測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展，對(duì)于基因功能的研究，以及對(duì)人群的遺傳學(xué)的研究產(chǎn)生了大量關(guān)于基因功能和遺傳學(xué)文獻(xiàn)，這些技術(shù)進(jìn)展使得我們能夠在NCBI網(wǎng)站中檢索到大量的文獻(xiàn)，然后再對(duì)皮膚衰老的相關(guān)基因做出篩選和評(píng)估，通過對(duì)這些基因多態(tài)性的檢測(cè)科學(xué)地評(píng)估個(gè)體皮膚衰老進(jìn)程的差異，對(duì)個(gè)體的日常皮膚護(hù)理乃至生活習(xí)慣提出科學(xué)化、精準(zhǔn)化建議，同時(shí)也有助于個(gè)人根據(jù)自己的皮膚類型合理選擇護(hù)膚產(chǎn)品。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一目的是提供一種用于皮膚抗衰老能力基因檢測(cè)的引物組合物，通過在大量基因功能和遺傳學(xué)文獻(xiàn)中，確定了七種用于評(píng)估皮膚抗衰老能力的八個(gè)基因，包括膠原蛋白增生能力基因COL1A1、肌膚鎖水保濕能力基因AQP3、輻射保護(hù)能力基因ASIP、紫外線損傷修復(fù)能力基因ERCC2和LOC105374069、皮膚排毒能力基因GSTP1、肌膚敏感性基因IL6R和雌激素水平基因DIAPH2，并分別對(duì)上述八個(gè)基因設(shè)計(jì)了相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸反應(yīng)引物，再經(jīng)樣本DNA提取、PCR擴(kuò)增、單堿基延伸和核酸質(zhì)譜分析測(cè)得對(duì)應(yīng)的基因型，在此基礎(chǔ)上，再進(jìn)行分析評(píng)估，給予個(gè)體化日常護(hù)膚建議。本發(fā)明的第二目的是提供一種利用上述引物組合物對(duì)皮膚抗衰老能力基因進(jìn)行檢測(cè)方法，通過在大量基因功能和遺傳學(xué)文獻(xiàn)中，確定了七種用于評(píng)估皮膚抗衰老能力的八個(gè)基因，包括膠原蛋白增生能力基因COL1A1、肌膚鎖水保濕能力基因AQP3、輻射保護(hù)能力基因ASIP、紫外線損傷修復(fù)能力基因ERCC2和LOC105374069、皮膚排毒能力基因GSTP1、肌膚敏感性基因IL6R和雌激素水平基因DIAPH2，并分別對(duì)上述八個(gè)基因設(shè)計(jì)了相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸反應(yīng)引物，再經(jīng)樣本DNA提取、PCR擴(kuò)增、單堿基延伸和核酸質(zhì)譜分析測(cè)得對(duì)應(yīng)的基因型，在此基礎(chǔ)上，再進(jìn)行分析評(píng)估，給予個(gè)體化日常護(hù)膚建議。本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種用于皮膚抗衰老能力基因檢測(cè)的引物組合物，所述的皮膚抗衰老能力基因包括膠原蛋白增生能力基因COL1A1、肌膚鎖水保濕能力基因AQP3、輻射保護(hù)能力基因ASIP、紫外線損傷修復(fù)能力基因ERCC2和LOC105374069、皮膚排毒能力基因GSTP1、肌膚敏感性基因IL6R和雌激素水平基因DIAPH2；所述的COL1A1的PCR擴(kuò)增引物為ACGTTGGATGATTATAGCCCCTGCAGTCTC(SEQIDNO：1)和ACGTTGGATGGCTGGTTTTGTGCAACGAAG(SEQIDNO：2)，所述的COL1A1的單堿基延伸反應(yīng)引物為ACCCTTCTGTTCCTTTTTTT(SEQIDNO：3)；所述的AQP3的PCR擴(kuò)增引物為ACGTTGGATGATCTGTCACCAGATGCAATC(SEQIDNO：4)和ACGTTGGATGGGTAGGTAGCAAAGATGCCG(SEQIDNO：5)，所述的AQP3的單堿基延伸反應(yīng)引物為TGTCACCAGATGCAATCTGGCACTT(SEQIDNO：6)；所述的ASIP的PCR擴(kuò)增引物為ACGTTGGATGCTGAACAAATAGTCCCGACC(SEQIDNO：7)和ACGTTGGATGAAGTGTGTACTGTGTGTCTG(SEQIDNO：8)，所述的ASIP的單堿基延伸反應(yīng)引物為GAGGAGATGAAAACATCTCA(SEQIDNO：9)；所述的ERCC2的PCR擴(kuò)增引物為ACGTTGGATGCTCAGAGCTGCTGAGCAATC(SEQIDNO：10)和ACGTTGGATGAGCAGCTAGAATCAGAGGAG(SEQIDNO：11)，所述的ERCC2的單堿基延伸反應(yīng)引物為CAATCTGCTCTATCCTCT(SEQIDNO：12)；所述的LOC105374069的PCR擴(kuò)增引物為ACGTTGGATGGCTGTGTGACCTTAGATAAA(SEQIDNO：13)和ACGTTGGATGCCTCACAGTAAAAGGTATGTC(SEQIDNO：14)，所述的LOC105374069的單堿基延伸反應(yīng)引物為TTATTAAACCTTTCTGAGCTT(SEQIDNO：15)；所述的GSTP1的PCR擴(kuò)增引物為ACGTTGGATGTGAATGACGGCGTGGAGGAC(SEQIDNO：16)和ACGTTGGATGTTTCTTTGTTCAGCCCCCAG(SEQIDNO：17)，所述的GSTP1的單堿基延伸反應(yīng)引物為CCTCCGCTGCAAATAC(SEQIDNO：18)；所述的IL6R的PCR擴(kuò)增引物為ACGTTGGATGTCTCCTCTTCCTCCTCTATC(SEQIDNO：19)和ACGTTGGATGCTCCAGCAACCAGGAATGTG(SEQIDNO：20)，所述的IL6R的單堿基延伸反應(yīng)引物為CTTTTTTTTTTAACCTAGTGC(SEQIDNO：21)；所述的DIAPH2的PCR擴(kuò)增引物為ACGTTGGATGAATGATCTCCAGTTCCATTC(SEQIDNO：22)和ACGTTGGATGGGAACTTATACACAATGGG(SEQIDNO：23)，所述的DIAPH2的單堿基延伸反應(yīng)引物為AAATGACAGGATCTCCTT(SEQIDNO：24)。本發(fā)明還公開了上述引物組合物對(duì)皮膚抗衰老能力基因進(jìn)行檢測(cè)的方法，包括以下步驟：(1)待測(cè)樣本基因提?。簭纳飿颖局刑崛“龅钠つw抗衰老能力基因SNP位點(diǎn)的基因組，獲得待測(cè)樣本DNA；(2)將所述的皮膚抗衰老能力基因的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸反應(yīng)引物設(shè)計(jì)在一檢測(cè)孔內(nèi)，對(duì)所述的皮膚抗衰老能力基因SNP位點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和單堿基延伸反應(yīng)，然后核酸質(zhì)譜分析得到樣本的各基因型。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：本發(fā)明的一種用于皮膚抗衰老能力基因檢測(cè)的引物組合物及檢測(cè)方法，通過在大量基因功能和遺傳學(xué)文獻(xiàn)中，確定了七種用于評(píng)估皮膚抗衰老能力的八個(gè)基因，并分別對(duì)上述八個(gè)基因設(shè)計(jì)了相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸反應(yīng)引物，然后經(jīng)樣本DNA提取、PCR擴(kuò)增、單堿基延伸和核酸質(zhì)譜分析等步驟，測(cè)得對(duì)應(yīng)的各基因型，再進(jìn)行分析評(píng)分，科學(xué)地評(píng)估個(gè)體皮膚衰老進(jìn)程的差異，對(duì)個(gè)體的日常皮膚護(hù)理和生活習(xí)慣提出科學(xué)化、精準(zhǔn)化建議，同時(shí)也有助于個(gè)人根據(jù)自己的皮膚類型合理選擇護(hù)膚產(chǎn)品，因此，本發(fā)明具有快速準(zhǔn)確、敏感、高通量和性價(jià)比高的優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)然，實(shí)施本發(fā)明的任一產(chǎn)品并不一定需要同時(shí)達(dá)到以上所述的所有優(yōu)點(diǎn)。附圖說明圖1為實(shí)施例1編號(hào)為160119005樣本的ASIP基因分型圖；圖2為實(shí)施例1編號(hào)為160221001樣本的AQP3基因分型圖；圖3為實(shí)施例1編號(hào)為160221002樣本的ASIP基因分型圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)該理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。在實(shí)際應(yīng)用中本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明做出的改進(jìn)和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的一種用于皮膚抗衰老能力基因檢測(cè)的引物組合物，所述的皮膚抗衰老能力基因包括膠原蛋白增生能力基因COL1A1(參見：AzizJ1，ShezaliH，RadziZ，YahyaNA，etal.MolecularMechanismsofStress-ResponsiveChangesinCollagenandElastinNetworksinSkin.SkinPharmacolPhysiol.2016.29(4)：190-203.)、肌膚鎖水保濕能力基因AQP3(參見：SchraderA1，SiefkenW，KueperT，etal.EffectsofglycerylglucosideonAQP3expression，barrierfunctionandhydrationofhumanskin.SkinPharmacolPhysiol.2012.25(4)：192-9.)、輻射保護(hù)能力基因ASIP(參見：MaccioniL1，RachakondaPS，SchererD，etal.Variantsatchromosome20(ASIPlocus)andmelanomarisk.IntJCancer.2013.132(1)：42-54.)、紫外線損傷修復(fù)能力基因ERCC2(參見：SongYZ1，DuanMN2，ZhangYY3，etal.ERCC2polymorphismsandradiation-inducedadverseeffectsonnormaltissue：systematicreviewwithmeta-analysisandtrialsequentialanalysis.RadiatOncol.2015.10：247.)和LOC105374069(參見：LeClercS1，TaingL，EzzedineK，etal.Agenome-wideassociationstudyinCaucasianwomenpointsoutaputativeroleoftheSTXBP5Lgeneinfacialphotoaging.JInvestDermatol.2013.133(4)：929-35.)、皮膚排毒能力基因GSTP1(參見：BowatteG，LodgeCJ，PerretJL，etal.InteractionsofGSTPolymorphismsinAirPollutionExposureandRespiratoryDiseasesandAllergies.CurrAllergyAsthmaRep.2016.16(12)：85.)、肌膚敏感性基因IL6R(參見：IgnatiusIrudayamJ，ContrerasD，etal.ProfileofInflammation-associatedgenesduringHepaticDifferentiationofHumanPluripotentStemCells.DataBrief.2015.5：871-578.)和雌激素水平基因DIAPH2(參見：GenesioR，MormileA，LicenziatiMR，etal.ShortstatureandprimaryovarianinsufficiencypossiblyduetochromosomalpositioneffectinabalancedX；1translocation.Mo1Cytogenet.2015.8：50.)；以上各基因的PCR擴(kuò)增引物和單堿基延伸反應(yīng)引物如下：其中：1st-PCRP和2nd-PCRP為PCR擴(kuò)增引物，UEP_SEQ為單堿基延伸反應(yīng)引物。下面是利用本發(fā)明的引物組合物對(duì)皮膚抗衰老能力基因進(jìn)行檢測(cè)的方法，為了能獲得足夠樣本基因型數(shù)量，以下對(duì)315例樣本進(jìn)行皮膚抗衰老能力基因檢測(cè)，具體包括以下步驟：樣本采集、DNA提取、核酸質(zhì)譜法-皮膚抗衰老能力基因型檢測(cè)和基因型評(píng)分表。一.樣本采集樣本采集方法采用口腔拭子采集口腔脫落細(xì)胞，具體方法如下：1、取樣前準(zhǔn)備(1)取樣前30分鐘內(nèi)禁止進(jìn)食、吸煙和飲酒；(2)取樣前5分鐘，準(zhǔn)備清水，一次飲入約30ml，充分洗漱口腔8-12秒，吐出；(3)按照上步，再洗漱口腔2次；(4)采集人員取樣前需洗凈雙手。2.取樣操作(1)旋開口腔拭子柄部外蓋，從管中小心抽出口腔拭子，避免手觸及拭子頭部；(2)用手按住左側(cè)臉頰，握住手柄，將拭子伸入口腔左側(cè)，用拭子頭部充分接觸左側(cè)口腔內(nèi)壁粘膜，在左側(cè)上下牙床咬合部位用力上下擦拭，同時(shí)旋轉(zhuǎn)拭子，使拭子頭部均勻接觸口腔粘膜，重復(fù)此動(dòng)作1分鐘。擦拭力度等同刷牙力度。采樣后將拭子插回套管擰緊；(3)用第二支口腔拭子按照上步相同方法采集右側(cè)口腔內(nèi)壁脫落細(xì)胞；(4)用剩余兩支口腔拭子按(2)、(3)步驟再次分別采集左右兩側(cè)口腔內(nèi)壁脫落細(xì)胞；(5)取樣后將采集完畢的所有口腔拭子管放回樣本盒原處。二、DNA提取流程(1)樣本(棉拭子)的預(yù)處理：雙手戴上手套，從冰箱取出樣本，檢查樣本是否合格并核對(duì)編號(hào)，做好記錄，從樣本盒中取出樣本管依次置于試管架上，做好標(biāo)記，放于超凈臺(tái)上；(2)取一定數(shù)量的2ml離心管，對(duì)應(yīng)樣本依次編號(hào)后置于離心管架上，放入超凈臺(tái)上備用；(3)打開2ml離心管管蓋，用剪刀將棉簽部分從桿上剪下，加入400μl的生理鹽水，蓋上蓋子靜置5min；(4)打開蓋子，加入20μl的蛋白酶K，再加入400μlbufferAL；(5)將離心管蓋好，在渦旋振蕩器上適度振蕩，簡(jiǎn)短離心去除管蓋上的液滴；(6)將恒溫金屬浴設(shè)定在56℃，溫浴10分鐘，時(shí)間到后取出簡(jiǎn)短離心去除管蓋上的液滴；(7)打開離心管的蓋子，加入400μl無水乙醇，蓋上蓋子，在渦旋振蕩器上適度振蕩，簡(jiǎn)短離心去除管蓋上的液滴；(8)準(zhǔn)備一定數(shù)量的QIAamp離心柱(已套在2ml收集管內(nèi))，對(duì)應(yīng)樣本依次編號(hào)后置于離心管架上，打開離心柱的蓋子，取上一步的樣品600μl轉(zhuǎn)移到離心柱中，蓋好蓋子，置于離心機(jī)中，配平后進(jìn)行離心，6000g離心1min；(9)離心完畢后，取出離心柱與收集管，將離心柱置于一個(gè)干凈的2ml收集管中，將原來的收集管棄掉；(10)將2ml離心管中剩余的樣品轉(zhuǎn)移到QIAamp離心柱中，重復(fù)前兩步操作；(11)小心打開離心柱蓋，加入500μlbufferAW1到離心柱中，小心蓋上蓋子，置于離心機(jī)中，配平后進(jìn)行離心，6000g離心1min；(12)離心完畢后，取出離心柱與收集管，棄掉收集管中的廢液；(13)小心打開離心柱蓋，加入500μlbufferAW2到離心柱中，小心蓋上蓋子，置于離心機(jī)中，配平后進(jìn)行離心，20000g離心3min；(14)離心完畢后，取出離心柱與收集管，棄掉收集管中的廢液；(15)重新放入離心機(jī)中進(jìn)行空甩，20000g離心1min；(16)準(zhǔn)備一定數(shù)量的1.5ml離心管，對(duì)應(yīng)樣本依次編號(hào)后置于離心管架上，放入超凈臺(tái)上，將離心柱對(duì)應(yīng)編號(hào)依次置于1.5ml離心管中，棄掉裝有離心廢液的舊收集管。打開離心柱的蓋子，于超凈臺(tái)上晾干5min；(17)加入70μlbufferAE，槍頭不要接觸濾膜且盡量使液體均勻鋪在濾膜上，蓋上蓋子，室溫靜置5min，再置于離心機(jī)中，配平后進(jìn)行離心，6000g離心1min；(18)離心完畢后，取出離心柱與收集管，右手使用移液器將1.5ml管中的液體吸出再次垂直加入離心柱中進(jìn)行二次洗脫，蓋上蓋子，室溫靜置5min。置于離心機(jī)中，配平后進(jìn)行離心，6000g離心1min；(19)離心完畢后，取出離心柱與收集管，棄掉離心柱，蓋上蓋子，進(jìn)行濃度測(cè)定；(20)濃度測(cè)定完畢，將樣品放入-20℃冰箱進(jìn)行保存并進(jìn)行入庫(kù)登記。三、核酸質(zhì)譜法-皮膚抗衰老能力基因型檢測(cè)和基因型評(píng)分1.樣本稀釋及編排：(1)將保存于-20℃冰箱的樣本出庫(kù)，并進(jìn)行出庫(kù)登記，編排樣本在96孔板上的位置；(2)在有裙邊96孔板中稀釋樣品至5ng/μL，并加入2μL稀釋好的樣品至無裙邊96孔板中。2.PCR反應(yīng)：(1)配制1μM(每個(gè)引物)PCR引物混合物，里面包含多重反應(yīng)里每個(gè)SNP位點(diǎn)的forward(正向)和reverse(反向)引物；(2)在0.6mL離心管中配制PCR反應(yīng)混液；(3)將配好的PCR混液用排槍取3μL加至無裙邊96孔板中；(4)把板用膜封好，渦旋震蕩并離心。(5)將96孔板放上PCR儀進(jìn)行PCR反應(yīng)熱循環(huán)，PCR完成后取出96孔板備用。3.SAP反應(yīng)：(1)在0.6mL離心管中配制SAP混液；(2)將無裙邊96孔板的封板膜撕開，加2μLSAP混液到每一個(gè)孔里(加混液后總體積：7μL)；(3)把板用膜封好，渦旋震蕩并離心；(4)將96孔板放上PCR儀進(jìn)行SAP反應(yīng)熱循環(huán)，PCR完成后取出96孔板備用。4.延伸反應(yīng)：(1)配制iPLEX延伸引物混液；方法一：根據(jù)以下規(guī)則配制7/14μMiPLEX延伸引物混液：1)將延伸引物分成2組：低分子量和高分子量；2)將低分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為7μM并計(jì)算所需體積；3)將高分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為14μM并計(jì)算所需體積；4)計(jì)算達(dá)到工作體積所需的水的體積。方法二：根據(jù)以下規(guī)則配制8/10/15μMiPLEX延伸引物混液：1)將延伸引物分成3組：低分子量、中分子量和高分子量；2)將低分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為8μM并計(jì)算所需體積；3)將中分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為10μM并計(jì)算所需體積；4)將高分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為15μM并計(jì)算所需體積；5)計(jì)算達(dá)到工作體積所需的水的體積。方法三：根據(jù)以下規(guī)則配制7/9.3/11.6/14μMiPLEX延伸引物混液：1)按照分子量將延伸引物分成4組；2)將低分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為7μM并計(jì)算所需體積；3)將兩個(gè)中分子量組別的在iPLEX延伸引物混液的濃度分別定為9.3μM和11.6μM，并計(jì)算所需體積；4)將高分子量組在iPLEX延伸引物混液的濃度定為14μM并計(jì)算所需體積；5)計(jì)算達(dá)到工作體積所需的水的體積。方法四：根據(jù)“線性調(diào)整方法(linearadjustmentmethod)”配制延伸引物混液。簡(jiǎn)單來說，每個(gè)延伸引物的庫(kù)存(500μM)有15μl已預(yù)先放在孔A1到C12里，并成干粉狀。加15uLPCRgradeH2O到每個(gè)孔里并且混好。然后根據(jù)linearPrimerRegressionspreadsheet(線性引物回歸表)混合不同體積的延伸引物到新的管中，并加水至目標(biāo)體積。制成品就是Extendprimerworkingpool(延伸引物工作混合物)。(2)在0.6μL管中配制iPLEX延伸混液；(3)將無裙邊96孔板的封板膜撕開，加2μL延伸混液到每一個(gè)孔里(加混液后總體積：9μL)；(4)把板用膜封好，渦旋震蕩和離心；(5)將96孔板放上PCR儀進(jìn)行延伸反應(yīng)熱循環(huán)，PCR完成后取出96孔板備用。5.調(diào)節(jié)(樣本脫鹽)(1)把潔凈樹脂(Resin)鋪平在96/15mgdimpleplate上，風(fēng)干15分鐘；(2)在樣本板的每一個(gè)有樣本的孔里加入42μL水然后離心；(3)加入15mg潔凈樹脂(Resin)：輕輕將樣本板凌空反轉(zhuǎn)，放在已放樹脂的dimpleplate上，然后將dimpleplate連樣本板一起反轉(zhuǎn)(過程中兩塊板不可水平移動(dòng))，讓樹脂掉到孔里；(4)用膜把板封好，放在旋轉(zhuǎn)器上顛倒搖勻15分鐘；(5)3200g(標(biāo)準(zhǔn)板離心機(jī)的4000rpm)將板離心5分鐘。6.點(diǎn)樣至芯片(1)點(diǎn)樣儀準(zhǔn)備工作：在實(shí)驗(yàn)樣品在進(jìn)行脫鹽的過程中，對(duì)點(diǎn)樣儀進(jìn)行清洗：主面板的TOOLS選項(xiàng)下，先選擇DRAIN，排空清洗池里的液體，然后選擇FILL，打開機(jī)蓋，將洗瓶里加滿無水乙醇，將預(yù)置96孔板中加入NaOH，放置好后，蓋上機(jī)蓋，進(jìn)行清洗；(2)開啟Typer軟件，使用AssayEditor導(dǎo)入assay信息，使用PlateEditor編板，設(shè)置assay和樣本名稱；(3)將無裙邊96孔板放在帶裙邊的轉(zhuǎn)換器上。點(diǎn)樣儀的設(shè)置已按此板調(diào)好；(4)放入新的芯片，記錄ID號(hào)，開始進(jìn)行點(diǎn)樣。7.進(jìn)行質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)并分析結(jié)果(1)使用ChipLinker軟件連結(jié)編板信息與芯片號(hào)；(2)開啟RTworkstation軟件；(3)將芯片放到MassARRAYTyperWorkstationMA4或Compact里打質(zhì)譜，使用MALDI-TOF(基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間)質(zhì)譜儀獲得數(shù)據(jù)；(4)得到相關(guān)數(shù)據(jù)，進(jìn)行檢測(cè)基因型分析并給予相應(yīng)的評(píng)分表，如下：該打分表是在315例樣本基因型檢測(cè)結(jié)果的基礎(chǔ)上，并客觀下結(jié)合對(duì)樣本各皮膚抗衰老能力的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果和主觀下給予某一檔評(píng)分而做出的基因型對(duì)應(yīng)的評(píng)分表。以肌膚鎖水保濕能力為例，在得到315例樣本進(jìn)行基因型結(jié)果后，對(duì)其進(jìn)行調(diào)查問卷根據(jù)主觀評(píng)價(jià)給予相應(yīng)的分值，和客觀上對(duì)315例應(yīng)試者進(jìn)行皮膚水分流失儀和表皮含水量檢測(cè)儀檢測(cè)，通過測(cè)試計(jì)算出經(jīng)表皮失水率(TEWL)和表皮含水量根據(jù)兩者結(jié)果給予相應(yīng)的分值，然后將主觀評(píng)價(jià)給予的分值和客觀檢測(cè)給予的分值進(jìn)行相加，取其平均值，同時(shí)根據(jù)基因型檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，得到上述基因型評(píng)分表；其中第3、5、7列為基因型，第4、6、8列為依次對(duì)應(yīng)的打分，滿分為5分制。實(shí)施例1本實(shí)施例的一種利用本發(fā)明的引物組合物對(duì)皮膚抗衰老能力基因進(jìn)行檢測(cè)的方法，其檢測(cè)步驟也包括樣本采集、DNA提取、核酸質(zhì)譜法-皮膚抗衰老能力基因型檢測(cè)和基因型評(píng)分，具體步驟同上述介紹的。一、樣本采集樣本采集信息如下，操作步驟同上。采樣日期姓名縮寫編號(hào)樣本類型樣本數(shù)量20160119YX160119005口腔脫落細(xì)胞4支口腔拭子20160221LYF160221001口腔脫落細(xì)胞4支口腔拭子20160221ZSX160221002口腔脫落細(xì)胞4支口腔拭子二、DNA提取，操作步驟同上。測(cè)得的三個(gè)樣本的DNA濃度如下：樣本編號(hào)160119005160221001160221002姓名縮寫YXLYFZSX原始濃度μg/ml30.124.935.4三、核酸質(zhì)譜法-皮膚抗衰老能力基因型檢測(cè)和基因型評(píng)分，操作步驟同上。圖1是編號(hào)160119005樣本的ASIP基因分型的核酸質(zhì)譜圖，圖1中被圈上的點(diǎn)為該基因的基因型，由圖1可知，該基因型為CT，由于我們?cè)谠O(shè)計(jì)這個(gè)基因的引物時(shí)是采用的是反向引物，因此，該基因的基因型為AG；圖2是編號(hào)160221001樣本的AQP3基因分型的核酸質(zhì)譜圖，圖2中被圈上的點(diǎn)為該基因的基因型，由圖2可知，該基因型為GG；圖3是編號(hào)160221002樣本的ASIP基因分型的核酸質(zhì)譜圖，圖3中被圈上的點(diǎn)為該基因的基因型，由圖3可知，該基因型為CC，由于我們?cè)谠O(shè)計(jì)這個(gè)基因的引物時(shí)是采用的是反向引物，因此，該基因的基因型為GG。具體的三個(gè)樣本的基因型分別如下所示：基因160119005160221001160221002COL1A1AAAAAAAQP3AAGGGAASIPAGGGGGERCC2TTTTGTLOC105374069GAAAGGGSTP1AAAAAGIL6RAACCACDIAPH2GGGGGG三個(gè)樣本的評(píng)分：四、針對(duì)基因檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行解讀(1)編號(hào)為160119005的樣本，肌膚敏感能力基因檢測(cè)結(jié)果為敏感且紫外線損傷修復(fù)能力較差，給予護(hù)膚建議。護(hù)膚建議：√合理選擇化妝品盡可能選擇成分簡(jiǎn)單，少含或不含致敏物和刺激物的化妝品?！虦厮茨樏舾行图∧w，無論是熱水還是冷水，都會(huì)產(chǎn)生不良的刺激，最好用溫水洗臉，水溫只需比冷水稍高一點(diǎn)即可。√皮膚注意保濕補(bǔ)水保濕對(duì)于敏感型皮膚來說比較重要，膚質(zhì)過于敏感易遭受周邊天氣變化/季節(jié)變化以及環(huán)境變遷的影響。進(jìn)行相應(yīng)的補(bǔ)水保濕處理可以防止皮膚的水分流失，在皮膚表面形成一層保護(hù)薄膜，使肌膚更顯彈性，更顯年輕?！套⒁怙嬍称綍r(shí)要多吃含有富含維生素的蔬菜和水果。不要多吃辛辣刺激性的食物，如海鮮、酒等?！套⒁夥罆癖苊膺^度的日曬，使用敏感肌膚專用防曬品，否則皮膚受到灼傷，會(huì)出現(xiàn)紅斑、發(fā)黑、脫皮等過敏現(xiàn)象。(2)160221001樣本肌膚鎖水能力分?jǐn)?shù)為1分，給予預(yù)防建議。預(yù)防建議：√日常皮膚護(hù)理務(wù)必要注意根據(jù)自己的膚質(zhì)選擇補(bǔ)水保濕類型的護(hù)膚品、洗面奶、化妝水和BB霜等潔面和化妝用品。在白天的日常活動(dòng)中也要注意隨時(shí)補(bǔ)水，建議隨身攜帶便捷的補(bǔ)水保濕噴霧等來進(jìn)行補(bǔ)水?！套⒁怙嬍沉?xí)慣嚴(yán)格控制飲食習(xí)慣，盡量的去選擇食用清淡的、補(bǔ)氣養(yǎng)血的食物，每天至少要喝6杯白開水，以補(bǔ)充身體內(nèi)快速流失的水分。√晚間補(bǔ)水保濕晚間對(duì)于皮膚的護(hù)理也不容小覷。每天睡前用補(bǔ)水保濕的面膜敷臉，不但可以彌補(bǔ)一天肌膚流失的水分，也可以對(duì)皮膚進(jìn)行深層修復(fù)。在每天晚上的沐浴時(shí)，也可以加入適量的玫瑰精油或者是洋甘菊精油來進(jìn)行全身的補(bǔ)水保濕。√適量運(yùn)動(dòng)健身所有的肌膚問題本質(zhì)上都是自身機(jī)體狀況不佳的反應(yīng)，所以平時(shí)應(yīng)要注意適當(dāng)?shù)腻憻捝眢w，提升自己的免疫力和抵抗力，只有當(dāng)自身的身體條件好了，所使用的補(bǔ)水保濕的護(hù)膚品才能最大程度的發(fā)揮功效。(3)編號(hào)為160221002樣本，輻射保護(hù)能力分值為1分，即在輻射保護(hù)方面較弱，給予預(yù)防建議。預(yù)防建議：√盡量遠(yuǎn)離輻射源實(shí)驗(yàn)證明，距離電腦、手機(jī)屏幕越近，輻射就越大，因此。建議在使用電腦、手機(jī)時(shí)與顯示屏保持距離在40厘米以上?！套龊眉∧w防護(hù)在正常的程序潔面、護(hù)膚之后，給肌膚補(bǔ)充足夠的水分，然后涂上隔離霜，每隔3個(gè)小時(shí)再補(bǔ)充涂抹一次，以避免輻射射線直接照射到皮膚。√清潔皮膚屏幕輻射會(huì)產(chǎn)生靜電，最容易吸附灰塵，所以在使用完電腦或手機(jī)之后，應(yīng)對(duì)肌膚進(jìn)行深層清潔，這是抵制輻射傷害的基本習(xí)慣。還要養(yǎng)成定期去角質(zhì)的好習(xí)慣，以保障皮膚的自由呼吸，但不要太頻繁，以免對(duì)皮膚造成傷害。油性肌膚一周一次，干性肌膚和中性肌膚一個(gè)月一次?！碳訌?qiáng)眼部護(hù)理長(zhǎng)時(shí)間使用電腦，也會(huì)很容易出現(xiàn)眼部周圍皮膚松弛、眼角下垂、眼袋嚴(yán)重等眼部問題，因此要對(duì)眼部進(jìn)行加強(qiáng)護(hù)理。要注意休息，保證充足的睡眠，隔天敷眼膜，經(jīng)常給眼部按摩并且及時(shí)涂抹眼霜?！炭刂破聊涣炼葘?shí)驗(yàn)證明，屏幕亮度越大，輻射就越強(qiáng)，因此，在使用電腦或手機(jī)時(shí)，應(yīng)將顯示屏調(diào)到適宜亮度?！套⒁怙嬍尘G茶中含有豐富的茶多酚，而茶多酚對(duì)于降低電腦輻射具有非常好的效果。因此，每天喝兩三杯綠茶是一個(gè)良好的生活習(xí)慣。經(jīng)常喝新鮮果汁和生菜汁可以起到清潔體內(nèi)堆積的毒素和廢物的作用。此外，還應(yīng)多食用一些含抗輻射成分的食物，例如：牛奶、蛋類、卷心菜、茄子、扁豆、胡蘿卜、黃瓜、番茄等。以上公開的本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例只是用于幫助闡述本發(fā)明。優(yōu)選實(shí)施例并沒有詳盡敘述所有的細(xì)節(jié)，也不限制該發(fā)明僅為所述的具體實(shí)施方式。顯然，根據(jù)本說明書的內(nèi)容，可作很多的修改和變化。本說明書選取并具體描述這些實(shí)施例，是為了更好地解釋本發(fā)明的原理和實(shí)際應(yīng)用，從而使所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)人員能很好地理解和利用本發(fā)明。本發(fā)明僅受權(quán)利要求書及其全部范圍和等效物的限制。序列表〈110〉上海東方杰瑪基因生物科技有限公司〈120〉一種皮膚抗衰老能力基因檢測(cè)〈130〉〈160〉24〈170〉Typer4.0〈210〉1〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉1ACGTTGGATGATTATAGCCCCTGCAGTCTC〈210〉2〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉2ACGTTGGATGGCTGGTTTTGTGCAACGAAG〈210〉3〈211〉20〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉3ACCCTTCTGTTCCTTTTTTT〈210〉4〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉4ACGTTGGATGATCTGTCACCAGATGCAATC〈210〉5〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉5ACGTTGGATGGGTAGGTAGCAAAGATGCCG〈210〉6〈211〉26〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉6TGTCACCAGATGCAATCTGGCACTT〈210〉7〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉7ACGTTGGATGCTGAACAAATAGTCCCGACC〈210〉8〈211〉31〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉8ACGTTGGATGAAGTGTGTACTGTGTGTCTG〈210〉9〈211〉20〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉9GAGGAGATGAAAACATCTCA〈210〉10〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉10ACGTTGGATGCTCAGAGCTGCTGAGCAATC〈210〉11〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉11ACGTTGGATGAGCAGCTAGAATCAGAGGAG〈210〉12〈211〉18〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉12CAATCTGCTCTATCCTCT〈210〉13〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉13ACGTTGGATGGCTGTGTGACCTTAGATAAA〈210〉14〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉14ACGTTGGATGCCTCACAGTAAAAGGTATGTC〈210〉15〈211〉21〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉15TTATTAAACCTTTCTGAGCTT〈210〉16〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉16ACGTTGGATGTGAATGACGGCGTGGAGGAC〈210〉17〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉17ACGTTGGATGTTTCTTTGTTCAGCCCCCAG〈210〉18〈211〉16〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉18CCTCCGCTGCAAATAC〈210〉19〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉19ACGTTGGATGTCTCCTCTTCCTCCTCTATC〈210〉20〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉20ACGTTGGATGCTCCAGCAACCAGGAATGTG〈210〉21〈211〉21〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉21CTTTTTTTTTTAACCTAGTGC〈210〉22〈211〉30〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉22ACGTTGGATGAATGATCTCCAGTTCCATTC〈210〉23〈211〉29〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉29ACGTTGGATGGGAACTTATACACAATGGG〈210〉24〈211〉18〈212〉DNA〈213〉人工引物〈400〉24AAATGACAGGATCTCCTT當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3