技術(shù)特征：

1.一種快速回補(bǔ)鴨疫里默氏桿菌缺失基因的方法，其特征在于：構(gòu)建含有目的基因的重組穿梭質(zhì)粒，并將重組穿梭質(zhì)粒加入含有MgCl₂的活化的鴨疫里默氏桿菌菌液中，37℃孵育30分鐘后，加入含MgCl₂的GCB培養(yǎng)基繼續(xù)孵育7小時(shí)，最后涂布在含對(duì)應(yīng)抗性固體GCB培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h至單克隆長出，即獲得鴨疫里默氏桿菌回補(bǔ)候選菌株；所述穿梭質(zhì)粒為能夠在鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌中穩(wěn)定存在的質(zhì)粒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速回補(bǔ)鴨疫里默氏桿菌缺失基因的方法，其特征在于：所述穿梭質(zhì)粒為含有鴨疫里默氏桿菌復(fù)制起始基因的質(zhì)粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速回補(bǔ)鴨疫里默氏桿菌缺失基因的方法，其特征在于：所述穿梭質(zhì)粒為穿梭質(zhì)粒pLMF03，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速回補(bǔ)鴨疫里默氏桿菌缺失基因的方法，其特征在于：所述MgCl₂的濃度為5mM。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速回補(bǔ)鴨疫里默氏桿菌缺失基因的方法，其特征在于，活化鴨疫里默氏桿菌的方法如下：從-80℃取出鴨疫里默氏桿菌在血平板上復(fù)蘇至菌落長出，用接種環(huán)挑取單克隆菌落接種至GCB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜；調(diào)整OD600＝1，得活化鴨疫里默氏桿菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速回補(bǔ)鴨疫里默氏桿菌缺失基因的方法，其特征在于：所述目的基因?yàn)轼喴呃锬蠗U菌RA0C_1193基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速回補(bǔ)鴨疫里默氏桿菌缺失基因的方法，其特征在于：所述重組穿梭質(zhì)粒由以下方法制備：將SEQ ID NO.4所示序列經(jīng)NcoI和XbaI酶切位點(diǎn)連入pLMF03質(zhì)粒NcoI和XbaI酶切位點(diǎn)制得。