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一種我國(guó)小麥根部禾谷多黏菌分型及其鑒定的方法與流程

文檔序號(hào):12584450閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種我國(guó)小麥根部禾谷多黏菌分型(I-CN型),其特征在于,具有SEQ ID NO:11表示的核苷酸序列。

2.權(quán)利要求1所述的禾谷多黏菌分型的特異性反向引物,其特征在于,具有ITS.CN(r)表示的核苷酸序列。

3.權(quán)利要求1所述的禾谷多黏菌分型的一對(duì)特異性引物,其特征在于,具有正向引物NS7(f)和反向引物ITS.CN(r)。

4.一種對(duì)小麥根部禾谷多黏菌的檢測(cè)方法,其特征在于,利用正向引物NS7(f)和反向引物ITS.CN(r)明確禾谷多黏菌的分型(I-CN型)。

5.一種對(duì)小麥根部禾谷多黏菌的檢測(cè)方法,其特征在于,利用禾谷多黏菌的特異性引物PSP2(f)和ITS4(r)對(duì)引物對(duì)小麥根部基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,判斷小麥根部是否存在禾谷多黏菌。再利用正向引物NS7(f)和反向引物ITS.CN(r)明確禾谷多黏菌的分型。

6.一種對(duì)小麥根部禾谷多黏菌的鑒定方法,其特征在于,利用禾谷多黏菌的特異性引物PSP2(f)和ITS4(r)對(duì)引物對(duì)小麥根部基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,判斷小麥根部是否存在禾谷多黏菌。再利用正向引物NS7(f)和反向引物ITS.CN(r),及正向引物Pg.F2(f)和反向引物Pg.R2(r)明確禾谷多黏菌的分型。

7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任一權(quán)利要求所述的鑒定方法,其特征在于,PCR反應(yīng)體系為:10×PCR Buffer 1μL,dNTP 2mM 1μL,上游引物10μM 0.25μL,下游引物10μM 0.25μL,DNA 1.0μL,HiFi DNA polymerase 5U/μL 0.25μL,ddH2O 6.25μL,終體積為10μL;PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3min;94℃變性30s,58℃退火50s,72℃延伸時(shí)間根據(jù)引物不同分別為:PSP2(f)和ITS4(r)延伸20s,Ns7(f)和ITS.CN(r)延伸60s,Pg.F2(f)和Pg.R2(r)延伸30s,共進(jìn)行35個(gè)循環(huán);最后72℃延伸10min。

8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的鑒定方法,其特征在于,所述判斷小麥根部是否存在禾谷多黏菌是指:根據(jù)引物PSP2(f)和ITS4(r)的擴(kuò)增產(chǎn)物為大小是否為250bp左右的DNA條帶,由此判斷小麥根部是否含有禾谷多黏菌;根據(jù)引物Ns7(f)和ITS4.CN(r)的擴(kuò)增產(chǎn)物為大小是否為800bp左右的DNA條帶,由此判斷小麥根部是否含有I-CN型禾谷多黏菌。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的鑒定方法,其特征在于,所述判斷小麥根部是否存在禾谷多黏菌是指:根據(jù)引物Pg.F2(f)和Pg.R2(r)的擴(kuò)增產(chǎn)物為大小是否為430bp左右的DNA條帶,由此判斷小麥根部是否含有II型禾谷多黏菌。

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