本發(fā)明屬于食品加工領(lǐng)域，具體涉及一株植物乳桿菌grx15及該菌在發(fā)酵果蔬制品方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

泡菜作為傳統(tǒng)的發(fā)酵蔬菜食品，有著2000多年的悠久歷史，在中國(guó)許多地區(qū)都有廣泛的消費(fèi)市場(chǎng)。中國(guó)傳統(tǒng)泡菜是各種蔬菜，如白菜、青菜和蘿卜經(jīng)過(guò)預(yù)處理，然后浸沒(méi)在6-8％(W/V)混合各種調(diào)味成分像大蒜和八角的鹽溶液中，放入泡菜壇，然后放置在環(huán)境溫度(20-25℃)下發(fā)酵6-10天而成。

在其原理上來(lái)說(shuō)，泡菜是以微生物主導(dǎo)發(fā)酵進(jìn)行生產(chǎn)加工的傳統(tǒng)發(fā)酵食品，富含以乳酸菌為主的優(yōu)勢(shì)益生菌群。泡菜的泡漬發(fā)酵是對(duì)生鮮蔬菜進(jìn)行“冷加工”，常溫或低溫下微生物的新陳代謝活動(dòng)貫穿始終，泡漬與發(fā)酵伴隨著一系列復(fù)雜的物理、化學(xué)和生物反應(yīng)的變化，由此賦予泡菜鮮明獨(dú)特的色彩和風(fēng)味，再加上制作工藝簡(jiǎn)單、原料豐富，能夠極好的儲(chǔ)存蔬菜以及保持蔬菜的營(yíng)養(yǎng)，使得泡菜從古至今受到人們的喜愛(ài)。

在我國(guó)，泡菜的制作長(zhǎng)期采用自然發(fā)酵的生產(chǎn)工藝，但是該發(fā)酵工藝有著以下多個(gè)弊端：(1)發(fā)酵周期相對(duì)較長(zhǎng)，生產(chǎn)力低下；(2)受衛(wèi)生條件、生產(chǎn)季節(jié)和用鹽量影響，發(fā)酵易失??；(3)發(fā)酵質(zhì)量不穩(wěn)定，不利于工廠化、規(guī)模化及標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)；(4)沿用老泡漬鹽水的傳統(tǒng)工藝，難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)；(5)異地生產(chǎn)難以保證產(chǎn)品的一致性；(6)亞銷酸鹽、食鹽含量高，食用安全性差。

要將泡菜的發(fā)酵模式由傳統(tǒng)的自然發(fā)酵方式轉(zhuǎn)變?yōu)樯镏苿┙臃N發(fā)酵的現(xiàn)代方式，并且能更好的控制發(fā)酵過(guò)程提高產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性的關(guān)鍵在于菌種。乳酸菌的發(fā)酵性能對(duì)縮短發(fā)酵時(shí)間、提高泡菜品質(zhì)、延長(zhǎng)保質(zhì)期等方面都有重要影響。因此，根據(jù)泡菜發(fā)酵特性篩選優(yōu)良菌種，要求其性狀穩(wěn)定、生長(zhǎng)繁殖迅速、產(chǎn)酸高、對(duì)不同發(fā)酵環(huán)境的適應(yīng)能力強(qiáng)以及對(duì)亞硝酸鹽的降解能力強(qiáng)，且不產(chǎn)生生物胺等，能確保純接種快速發(fā)酵技術(shù)的成功。

另外，泡菜產(chǎn)品的安全性和保質(zhì)期長(zhǎng)短與病原菌和腐敗菌的存在息息相關(guān)。大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等致病菌的存在會(huì)嚴(yán)重影響蔬菜產(chǎn)品的安全性。因此，篩選出能夠有效抑制這些腐敗菌和病原菌的乳酸菌用于蔬菜的發(fā)酵生產(chǎn)迫在眉睫。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于從四川老壇酸菜分離篩選出一株中出可以耐受胃腸環(huán)境，產(chǎn)酸高、耐酸耐鹽以及降解亞硝酸鹽能力強(qiáng)的乳酸菌，并對(duì)其部分生物學(xué)特性進(jìn)行研究。為后續(xù)應(yīng)用于泡菜發(fā)酵生產(chǎn)、提升泡菜營(yíng)養(yǎng)功能和使用安全性奠定良好基礎(chǔ)。

本發(fā)明涉及一株植物乳桿菌grx15，該菌株已于2016年10月30日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心(地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所)，分類命名為植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，保藏號(hào)：CGMCC NO.7.199。

grx15不僅具有良好的產(chǎn)酸性能、耐酸性和耐鹽性，能迅速產(chǎn)酸，抑制病原微生物，具有較強(qiáng)的亞硝酸鹽降解能力，而且菌株的鳥(niǎo)氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等氨基酸脫羧 酶活性呈陰性。

本發(fā)明還公開(kāi)了所述的植物乳桿菌grx15在制備發(fā)酵果蔬產(chǎn)品中的應(yīng)用。

進(jìn)一步，公開(kāi)了植物乳桿菌grx15單獨(dú)或者與其他乳酸菌混合作為發(fā)酵劑在制備天然發(fā)酵果蔬產(chǎn)品中的應(yīng)用。

所述的植物乳桿菌grx15的部分生物學(xué)特性如下：

本發(fā)明的植物乳桿菌grx15最適生長(zhǎng)溫度為30℃，最適生長(zhǎng)初始pH為6.4。

本發(fā)明的植物乳桿菌grx15具有較高的產(chǎn)酸能力，在MRS中培養(yǎng)48h后總酸含量達(dá)到2.08％，pH下降到3.76。在pH為3.0的人工胃液和腸液中的存活率分別為69.5％和60.8％；在0.1％濃度的膽鹽中存活率為68.4％；對(duì)亞硝酸鹽的降解率達(dá)到83％，并且耐鹽能力較強(qiáng)，能在0-8％鹽濃度中生長(zhǎng)良好，在14％的高鹽濃度下仍能生長(zhǎng)。

本發(fā)明的植物乳桿菌grx15’對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌中度抑制，抑菌圈分別為18.45mm、17.42mm、15.65mm。grx15的產(chǎn)酸活力從最初原始菌株的1.65％到10代時(shí)的1.56％，期間有波動(dòng)性變化，但是基本保持穩(wěn)定。說(shuō)明grx15遺傳穩(wěn)定性較好。grx15的凍干存活率為81.43％。

本發(fā)明的植物乳桿菌grx15安全性較高，經(jīng)過(guò)氨基酸脫羧酶試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，鳥(niǎo)氨酸、精氨酸、組氨酸等的脫羧酶活性為陰性，說(shuō)明不產(chǎn)生生物胺，有利于提高后續(xù)發(fā)酵泡菜的安全性。

附圖說(shuō)明

圖1為植物乳桿菌的革蘭氏染色的菌體形態(tài)圖。

圖2為不同pH條件下乳酸菌的生長(zhǎng)情況

圖3為不同鹽濃度條件下乳酸菌的生長(zhǎng)情況

圖4為本發(fā)明所用菌株生長(zhǎng)曲線圖

圖5為植物乳桿菌grx15在不同溫度下的生長(zhǎng)情況

具體實(shí)施方式

1乳酸菌的分離純化

從四川、貴州等地采集老壇酸菜、酸湯、泡青菜樣品，將其在發(fā)酵容器中充分?jǐn)嚇踊靹蚝?，用滅菌移液器吸取泡菜汁樣品于滅菌采樣瓶中，旋緊螺旋帽，做好標(biāo)記并記錄其發(fā)酵時(shí)間，放入冰盒內(nèi)冷卻，在較低狀態(tài)下帶回實(shí)驗(yàn)室，轉(zhuǎn)放到-80℃冰箱凍藏，并盡快進(jìn)行乳酸菌的分離。

利用MRS、改良MRS、PTYG和M17等培養(yǎng)基結(jié)合革蘭氏染色、鏡檢，共分離得到37株乳酸菌，其中球菌2株，桿菌35株，grx15的菌體形態(tài)如圖1。

2不同乳酸菌產(chǎn)酸特性比較

將37株試驗(yàn)菌活化后接種于MRS液體培養(yǎng)基，30℃條件下靜置培養(yǎng)48h，其pH和總酸含量的結(jié)果如表1所示。

表1不同菌株培養(yǎng)48h的pH和酸度

注：n＝3，同列比較，不同字母表示具有差異性(P<0.05)，下表同。

從表1可以看出，grx15、5-2-5-3'、3-4-5-1'、3-7-3”等17株菌在MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后pH顯著低于其他組，總酸含量顯著高于其他組(P<0.05)，說(shuō)明其產(chǎn)酸能力較強(qiáng)，因此對(duì)這17株菌進(jìn)行下一步研究。3乳酸菌對(duì)人工胃液、腸液和膽鹽的耐受能力

乳酸菌必須要能克服胃腸道環(huán)境影響，對(duì)胃酸、腸液、膽鹽等具有較強(qiáng)的耐受性，且活菌數(shù)在106CFU/mL以上，才能在人體中發(fā)揮重要作用。乳酸菌對(duì)人工胃液、人工腸液和不同濃度膽鹽的耐受性如表2所示。

表2乳酸菌在人工胃液和人工腸液中的耐受能力

由表2可知，在pH3.0的人工胃液中培養(yǎng)3h有13株菌的存活率均大于50％，另外，人工腸液中培養(yǎng) 4h有12株菌的存活率大于50％，并且培養(yǎng)8h后仍有2株菌存活率大于50％。其中P-3-3-2在三種情況下的存活率均最高，達(dá)到77.4％，顯著高于其他菌株(P<0.05)，其次為grx15。

選取在pH3.0的人工胃液及腸液中均具有一定的耐受能力的13株菌進(jìn)行膽鹽耐受能力試驗(yàn)。

表3乳酸菌在不同膽鹽濃度培養(yǎng)基中的膽鹽耐受力

結(jié)果如表3，試驗(yàn)株菌在0.1％、0.3％、0.5％濃度的膽鹽培養(yǎng)基中存活率分別大于37.93％、25.29％、7.43％。當(dāng)膽鹽濃度為0.1％時(shí)，有8株菌的存活率大于50％，其中g(shù)rx15、5-2-5-3'和7-7-2-2的存活率顯著高于其他菌株(P<0.05)；當(dāng)膽鹽濃度達(dá)到了0.3％時(shí)，有7株菌的存活率大于30％，其中7-7-2-2的存活率顯著高于其他菌株(P<0.05)；當(dāng)膽鹽濃度達(dá)到了0.5％時(shí)，有10株菌存活率大于10％，其中g(shù)rx15的存活率顯著高于其他菌株(P<0.05)，能在人體內(nèi)發(fā)揮微生態(tài)調(diào)節(jié)等作用。

綜合所篩乳酸菌在pH3.0人工胃液、腸液以及0.1％、0.3％、0.5％濃度的膽鹽培養(yǎng)基中的耐受能力，選出耐受性較高的8株菌進(jìn)行下一步試驗(yàn)，包括7-7-2-2、grx15、5-2-5-3’、L-4-3-3、M-4-3-2、P-3-3-2、M17-6-3-2和M-14-3-3’。

4乳酸菌的耐酸性能

優(yōu)良菌種應(yīng)該具備對(duì)特殊酸堿環(huán)境的適應(yīng)能力，圖2顯示了8株乳酸菌的耐酸性能。

人體胃液的pH在1.5-4.5之間變化，平均值在3左右。因此，篩選能夠在pH為3的情況下生長(zhǎng)良好的菌株對(duì)于蔬菜發(fā)酵極為有益。從圖2中可以看到：pH在4.5-6.4時(shí)，8株菌都能較好地生長(zhǎng)，pH低于4時(shí)，菌株的OD600明顯下降。pH降到3時(shí)，菌株7-7-2-2、grx15、5-2-5-3’、L-4-3-3、P-3-3-2和M-14-3-3'的OD600顯著大于另外2株菌(P<0.05)，生長(zhǎng)情況良好，說(shuō)明其耐酸能力比較強(qiáng)，所以選這6株菌進(jìn)行進(jìn)一步研究。

5乳酸菌對(duì)亞硝酸鹽的降解能力

乳酸菌降解亞硝酸鹽的能力大不相同，即使同一個(gè)種內(nèi)的不同菌株之間也會(huì)有所差異。因此篩選出降解亞硝酸鹽能力強(qiáng)的菌株作為發(fā)酵劑應(yīng)用于泡菜生產(chǎn)，有利于降低泡菜發(fā)酵過(guò)程及最終產(chǎn)品的亞硝酸鹽含 量，從而提高產(chǎn)品的安全性。

表4不同菌株在72h內(nèi)對(duì)NaNO2的降解率

不同菌株對(duì)NaNO₂的降解率如表2-5所示。其中g(shù)rx15、L-4-3-3、7-7-2-2和M-14-3-3'對(duì)亞硝酸鹽的降解能力比較強(qiáng)，降解率都達(dá)到80％-85％，均能較好降解酸菜中的亞硝酸鹽，提高發(fā)酵制品的食用安全性，因此對(duì)這4株菌進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

6乳酸菌的耐鹽能力

由于泡菜中食鹽一般含量較高，在發(fā)酵過(guò)程中起調(diào)味和抑菌作用，因此，研究菌種對(duì)不同鹽度的適應(yīng)能力可以篩選出耐鹽性好的菌株滿足泡菜發(fā)酵不同鹽量的特殊要求。4株乳酸菌的耐鹽能力圖3。

圖3中的數(shù)據(jù)表明，鹽濃度為0％-8％的情況下4株菌都生長(zhǎng)良好；當(dāng)鹽濃度達(dá)到10％時(shí)，菌株的OD值下降，但是在14％的高鹽濃度下，這4株菌仍然能夠生長(zhǎng)。發(fā)酵蔬菜所用的鹽濃度一般為4％-6％，因此可知此4株菌可以滿足發(fā)酵要求，其中g(shù)rx15耐鹽性更出色，在2％-14％鹽濃度范圍內(nèi)，OD值都顯著高于其他菌株(P<0.05)。

綜合以上試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，grx15具有較強(qiáng)的產(chǎn)酸能力和耐酸能力，其對(duì)人工胃液、腸液和膽鹽的耐受性也高于其它菌株，且具有較強(qiáng)的降解亞硝酸鹽的能力和耐鹽性，可作為發(fā)酵泡菜的參選菌株。

7乳酸菌的鑒定

7.1API鑒定

利用API50CHL系列鑒定試劑對(duì)菌株grx15進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果如表5和表6所示。

表5 API50CHL系統(tǒng)鑒定結(jié)果

注：“+”表示陽(yáng)性；“-”表示陰性

將API鑒定產(chǎn)生的生化圖譜提交數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行在線比對(duì)，可以得出此株乳酸菌的菌種名稱及鑒定率，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 API比對(duì)結(jié)果

7.2 16S rDNA測(cè)序鑒定

采用CTAB法提取乳酸菌DNA，以基因組DNA作為模板，采用25μL反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物為T(mén)1(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，SEQ ID NO.1)T2(5′-GGCTGCTGGCACGTAGTTAG-3′，SEQ ID NO.2)，均由上海生物工程公司合成。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃5min；94℃1min，64℃45s，72℃1min，循環(huán)35次；72℃8min。取PCR產(chǎn)物5.00μL與1.00μL 6×Loading buffer混合，用1.00％瓊脂糖凝膠電泳，100v電壓30min。電泳結(jié)束后用EB染色15min，凝膠成像儀拍照觀察。擴(kuò)增產(chǎn)物委托上海生工生物工程公司進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果通過(guò)BLAST程序與GenBank基因庫(kù)進(jìn)行在線比對(duì)以得出結(jié)果，結(jié)果如表7所示。

表7 16S rDNA比對(duì)結(jié)果

結(jié)合API及16S rDNA鑒定結(jié)果，將菌株grx15鑒定為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)。

8植物乳桿菌grx15的生長(zhǎng)曲線

通過(guò)對(duì)乳酸菌進(jìn)行生長(zhǎng)曲線的測(cè)定可以了解其生長(zhǎng)周期及生長(zhǎng)情況。將活化3代后的植物乳桿菌grx15按3％的接種量接種到新鮮MRS培養(yǎng)基中，混勻并精確吸取300μL菌液到培養(yǎng)板中，放入自動(dòng)生長(zhǎng)曲線分析儀中，37℃培養(yǎng)48h，每隔2h讀取數(shù)據(jù)。以O(shè)D600值為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)作圖，即為植物乳桿菌grx15在MRS培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線。由生長(zhǎng)曲線圖可知，grx15在6h后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在18h開(kāi)始進(jìn)入穩(wěn)定期，之后OD值較為穩(wěn)定。具體見(jiàn)附圖4。

9乳酸菌的最適生長(zhǎng)溫度

將grx15按3％添加量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，置于不同溫度下培養(yǎng)24h后，觀察菌株的生長(zhǎng)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，30℃發(fā)酵條件下grx15發(fā)酵液的OD值顯著高于其他組(P<0.05)，說(shuō)明其最適生長(zhǎng)溫度為30℃，溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響乳酸菌的生長(zhǎng)。具體見(jiàn)附圖5。

10乳酸菌最適初始pH的測(cè)定

將grx15按3％添加量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，置于不同初始pH條件下培養(yǎng)24h后，觀察菌株的生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表8。

表8不同初始pH條件下菌株生長(zhǎng)情況

由表8可以看出，grx15隨著pH的升高，OD值都先上升再下降，pH為6.4時(shí)，OD值最大，為1.8865，顯著高于其他組(P<0.05)，即grx15的最適生長(zhǎng)初始pH為6.4。

11乳酸菌抑菌性試驗(yàn)

采用牛津杯法測(cè)定grx15的抑菌能力，結(jié)果如表9所示。

表9乳酸菌對(duì)致病菌的抑制作用

注：抑菌圈直徑包含牛津杯外徑(8mm)。

grx15對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌三種致病菌的抑菌圈均大于10mm并且小于20mm，表明grx15對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌中度抑制。

12乳酸菌遺傳穩(wěn)定性

微生物傳代時(shí)間一般較短，在長(zhǎng)期連續(xù)傳代過(guò)程中極易發(fā)生變異甚至死亡，因此常常造成工業(yè)菌種的退化，甚至可能使優(yōu)良菌種丟失。通常，菌株的一個(gè)或多個(gè)形態(tài)特征和生理性狀會(huì)在退化過(guò)程中逐漸減退或消失。這種退化是從量變到質(zhì)變的過(guò)程，不是單個(gè)細(xì)胞的改變，而是整個(gè)群體特性的變化。

對(duì)兩株乳酸菌進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，菌株在不同時(shí)間內(nèi)產(chǎn)酸及OD值變化如下表所示。

表10菌株在不同時(shí)間內(nèi)菌體產(chǎn)酸及OD₆₀₀值變化

由表10可以看出，菌株grx15的產(chǎn)酸活力從最初原始菌株的1.65％左右，到10代時(shí)的1.56％，期間有波動(dòng)性變化，但是基本保持穩(wěn)定。在10代的連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中，與原始菌株相比，grx15在培養(yǎng)基中的產(chǎn)酸活力并沒(méi)有發(fā)生顯著性變化(P>0.05)。說(shuō)明菌株grx15在傳代時(shí)菌株活力可以很好地維持。

培養(yǎng)基中光密度的變化可以總生物量的變化情況。在連續(xù)培養(yǎng)10代過(guò)程中，培養(yǎng)周期末各菌株的OD值變化情況如表所示。從中可以看出，OD值在傳代過(guò)程中雖然有變化，但是沒(méi)有隨傳代數(shù)目的變化而呈遞減或遞增趨勢(shì)，總生物量呈波動(dòng)性變化。說(shuō)明菌株在一開(kāi)始的適應(yīng)期后，均可適應(yīng)其生長(zhǎng)環(huán)境，并基本維持總生物量相對(duì)穩(wěn)定。這表明grx15和P-3-3-2在連續(xù)傳代10代后總生物量仍能保持良好的穩(wěn)定性。

13乳酸菌酶活性測(cè)定

生物胺是一種有害物質(zhì)，確保用于發(fā)酵的乳酸菌不產(chǎn)生生物胺對(duì)于提高泡菜產(chǎn)品的安全性具有十分重 要意義。將活化好的乳酸菌接種于pH6.4的MRS液體培養(yǎng)基中，30℃下培養(yǎng)，活化3代，收集處于對(duì)數(shù)后期的菌體，測(cè)定菌株氨基酸脫羧酶活性。測(cè)定結(jié)果如表11所示。

經(jīng)過(guò)氨基酸脫羧酶試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)grx15的試驗(yàn)結(jié)果皆為陰性，說(shuō)明不產(chǎn)生生物胺，有利于提高后續(xù)發(fā)酵泡菜的安全性。

表11乳酸菌的氨基酸脫羧酶試驗(yàn)

注：+為陽(yáng)性反應(yīng)，－為陰性反應(yīng)。

14乳酸菌保藏試驗(yàn)

將grx15凍干后測(cè)定其存活率，結(jié)果如表12所示

表12乳酸菌的凍干存活率

由表12可知，grx15的凍干存活率較高為81.43％。

應(yīng)用示例

實(shí)施例1：

選取成熟度高，無(wú)腐爛變質(zhì)無(wú)機(jī)械損傷和蟲(chóng)害斑點(diǎn)的蓮藕100.0kg，經(jīng)流動(dòng)水洗凈附著在上面的雜質(zhì)，用自動(dòng)切片機(jī)去皮、切片(0.3cm-0.8cm)，再用清水沖洗干凈。

在泡菜壇內(nèi)加人大蒜2kg、生姜2kg、辣椒1kg、以及香料0.3kg(茴香：花椒：八角＝2:1:1)，投入預(yù)處理過(guò)的蓮藕，加入90升溶有食鹽2kg、白砂糖2.5kg的涼開(kāi)水，接種10升的植物乳桿菌grx15發(fā)酵劑，最后水封并且定期檢查壇內(nèi)pH變化。泡菜水pH達(dá)3.5左右，泡菜水、蓮藕泡菜的鹽濃度一致時(shí)泡菜成熟。出壇調(diào)味，調(diào)味后包裝成約500g的小袋，真空密封。采用巴氏滅菌法，在85℃水浴中加熱15min，取出后迅速用冷水冷卻，即得到蓮藕泡菜成品。

實(shí)施例2：

在發(fā)酵罐中裝入90升涼開(kāi)水，添加糖2kg，鹽6kg，投入100kg清水洗凈去蒂的辣椒，接種植物乳桿菌grx15發(fā)酵劑10升，水封并且定期檢查pH壇內(nèi)變化。泡菜水pH達(dá)3.5左右，泡菜水、辣椒泡菜的鹽濃度一致時(shí)泡菜成熟。出壇調(diào)味。調(diào)味后包裝成約500g的小袋。然后真空密封。采用巴氏滅菌法，在85℃水浴中加熱15min，取出后迅速用冷水冷卻，即得到辣椒泡菜成品。

SEQUENCE LISTING

<110> 揚(yáng)州大學(xué)

<120> 一株果蔬發(fā)酵用植物乳桿菌grx15及其應(yīng)用

<130>

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

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