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一種糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法與流程

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技術(shù)特征:

1.一種糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于包括如下步驟:

1)配制磷酸鹽緩沖液,將動(dòng)物血清蛋白加入到所配制的磷酸鹽緩沖液中至濃度為50-70g/L,獲得動(dòng)物血清蛋白溶液;

2)向所獲得的動(dòng)物血清蛋白溶液里加入丙酮醛,獲得丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液;丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液中丙酮醛的濃度為0.6-10mM;

3)將丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液裝入容器中,放置在37℃環(huán)境中,每12h打開(kāi)容器使丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液接觸空氣,并攪拌混勻一次,反應(yīng)時(shí)間為3-7天;反應(yīng)后,對(duì)丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液進(jìn)行純化,獲得糖基化終末產(chǎn)物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于,步驟3)所述對(duì)丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液進(jìn)行純化具體為采用透析袋對(duì)丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液進(jìn)行透析,去除游離的丙酮醛。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于,還包括步驟4),具體為對(duì)透析后的糖基化終末產(chǎn)物溶液進(jìn)行含量測(cè)定。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于,步驟4)所述含量測(cè)定的方法為對(duì)比糖基化終末產(chǎn)物溶液與動(dòng)物血清蛋白溶液的顏色差異;若與動(dòng)物血清蛋白溶液相比,糖基化終末產(chǎn)物溶液顏色變?yōu)樽厣珓t表明生成了糖基化終末產(chǎn)物,顏色越深則表明糖基化終末產(chǎn)物含量越高。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于,步驟4)所述含量測(cè)定的方法為:對(duì)糖基化終末產(chǎn)物溶液與動(dòng)物血清蛋白溶液的顏色分別進(jìn)行灰度分析,利用假設(shè)檢驗(yàn)獲得P值,當(dāng)P值小于0.05表明已生成糖基化終末產(chǎn)物。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于,步驟4)所述含量測(cè)定的方法為:采用熒光酶標(biāo)儀對(duì)糖基化終末產(chǎn)物溶液進(jìn)行含量檢測(cè),檢測(cè)所用激發(fā)波長(zhǎng)340nm,發(fā)射波長(zhǎng)465nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于:步驟1)所述配制磷酸鹽緩沖液具體為:分別稱取KCl 0.2g、Na2HPO4·12H2O 3.61g、KH2PO4 0.2g和NaCl 8.0g,加DI-H2O 800mL,待其完全溶解,定容至1000mL,調(diào)節(jié)pH至7.4,過(guò)濾除菌獲得磷酸鹽緩沖液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于:步驟1)所述的動(dòng)物血清蛋白為牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白中的一種。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化終末產(chǎn)物的簡(jiǎn)易制備方法,其特征在于包括如下步驟:

1)配制磷酸鹽緩沖液,將動(dòng)物血清蛋白加入到所配制的磷酸鹽緩沖液中至濃度為50-70g/L,獲得動(dòng)物血清蛋白溶液;所述動(dòng)物血清蛋白為牛血清白蛋白;

2)向所獲得的動(dòng)物血清蛋白溶液里加入丙酮醛,獲得丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液;丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液中丙酮醛的濃度為10mM;

3)將丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液裝入容器中,放置在37℃環(huán)境中,每12h打開(kāi)容器使丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液接觸空氣,并攪拌混勻一次,反應(yīng)時(shí)間為3天;反應(yīng)后,對(duì)丙酮醛-動(dòng)物血清蛋白反應(yīng)液進(jìn)行透析除去游離的丙酮醛,獲得糖基化終末產(chǎn)物;

4)采用熒光酶標(biāo)儀對(duì)糖基化終末產(chǎn)物溶液進(jìn)行含量檢測(cè),檢測(cè)所用激發(fā)波長(zhǎng)340nm,發(fā)射波長(zhǎng)465nm。

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