本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法。
背景技術(shù)：
：三七具有顯著的活血化瘀、消腫定痛功效，是一種中國(guó)傳統(tǒng)名貴藥材。近年來(lái)，對(duì)三七原材料的需求日益增長(zhǎng)，但是栽培過(guò)程中的真菌病害嚴(yán)重影響了三七生長(zhǎng)。三七黑斑病、能侵染三七植株和地下根系，以莖、葉、花軸受害較重，根部感染后呈褐色濕腐狀，四季均可發(fā)生。三七圓斑病可為害植株各個(gè)部位，葉片發(fā)病初期葉背面呈現(xiàn)黃色小點(diǎn)，在天氣潮濕或連續(xù)陰雨天，迅速擴(kuò)大成透明狀圓形，可引起芽腐和莖基腐。三七灰霉病以危害葉為主，多從下部老葉的葉尖或近地部分葉柄發(fā)病，灰褐色病斑，腐爛。在廣西三七的傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)，由于低海拔及高溫多濕的氣象條件，這種病害往往是同時(shí)發(fā)生的，造成了三七的大量減產(chǎn)甚至絕收，給種植戶(hù)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，在三七種植上，防治真菌病害過(guò)度依賴(lài)化學(xué)農(nóng)藥，大量化學(xué)農(nóng)藥的使用不僅影響了三七的品質(zhì)，也造成了三七藥材的大量農(nóng)藥殘留。因此，開(kāi)展生物防治三七真菌病害對(duì)三七產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展是非常迫切和必要的。為此篩選出能同時(shí)拮抗這些病害的拮抗菌具有重大意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法及其應(yīng)用，此制備方法簡(jiǎn)單，易操作，不僅對(duì)三七灰霉病病原菌、三七圓斑病病原菌病原菌、苦玄參褐斑病病原菌、艾納香條斑病病原菌、廣西莪術(shù)葉斑病病原菌、草豆蔻葉斑病病原菌和羅漢果斑枯病病原菌菌絲有很好的抑制作用，還對(duì)其孢子萌發(fā)具有很強(qiáng)的抑制作用。為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：步驟一、將暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，挑取菌絲塊接入改良的PDB培養(yǎng)基中，于25～28℃，搖床培養(yǎng)8～12d，得初次發(fā)酵液；其中所述改良的PDB培養(yǎng)基包括PDB和100～150mL三七莖葉原漿；步驟二、按體積質(zhì)量比為1000mL:0.00004～0.0001g:0.00004～0.0001g向步驟一中得到的初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉，于25～28℃，搖床培養(yǎng)3～8d，得二次發(fā)酵液；步驟三、按體積比為1:1～2向步驟二中得到的二次發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，離心處理，濾除沉淀物，取上清液，然后旋蒸蒸發(fā)去除溶劑，旋蒸溫度為50～60℃，即得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。優(yōu)選的是，步驟三中乙酸乙酯可以用氯仿或者乙醚替代，其旋蒸溫度分別為45～55℃和20～30℃。優(yōu)選的是，步驟一中三七莖葉原漿的制備方法：將三七的莖和葉放入研缽中，加入冰水研磨30min，然后加入胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸，置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理40min，再用研缽研磨10min，置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理20min，過(guò)濾即得，置于4℃環(huán)境中保藏，備用；其中所述三七的莖、葉、冰水、胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸的質(zhì)量比為1:1:10:0.00005:0.00005:0.00005:0.00005。優(yōu)選的是，步驟一的初次發(fā)酵液進(jìn)行誘導(dǎo)后處理：將1000重量份初次發(fā)酵液放入4℃環(huán)境中培養(yǎng)1d，然后加入1重量份病原菌懸濁液，再移至10℃環(huán)境中培養(yǎng)5d，然后移至搖床，于25～28℃，200r/min條件下繼續(xù)培養(yǎng)3d后即得；其中，所述病原菌懸濁液的制備方法：挑取0.1～0.5重量份病原菌菌絲塊至100重量份水中，再用電動(dòng)攪拌器以1000r/min的轉(zhuǎn)速條件下攪拌20～30min制成懸濁液；所述病原菌菌絲塊可以為三七灰霉病病原菌和三七圓斑病病原菌的一種或兩種。本發(fā)明還提供了一種采用上述制備方法獲得的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的應(yīng)用，在防治三七灰霉病和三七圓斑病中的應(yīng)用。優(yōu)選的是，還包括在防治苦玄參褐斑病、艾納香條斑病、廣西莪術(shù)葉斑病、草豆蔻葉斑病和羅漢果斑枯病中的應(yīng)用。本發(fā)明至少包括以下有益效果：第一、采用三七莖葉原漿改良的PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌，三七莖葉原漿可以提供暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌繁殖所需要的活性物質(zhì)，可以加快其繁殖速度，在相同時(shí)間內(nèi)得到更多其菌體。第二、在初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉進(jìn)行二次發(fā)酵，琥珀酸鈉可以促進(jìn)暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，氯化鈣可以促進(jìn)暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的溶出，兩者結(jié)合可以促使暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌分泌更多活性代謝產(chǎn)物。第三、將胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸加入三七莖葉研磨液中，促使三七細(xì)胞膜破裂，與超聲手段結(jié)合可以促進(jìn)三七莖葉中活性物質(zhì)流出，并在低溫環(huán)境中與氨基酸形成穩(wěn)定微溶液，保持三七莖葉活性物質(zhì)的活性。第四、利用病原菌懸濁液對(duì)初次發(fā)酵液的誘導(dǎo)后處理，可以激活其菌體內(nèi)分泌暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的機(jī)制，促使其分泌出更多活性代謝產(chǎn)物，且暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的活性更強(qiáng)。第五、暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物在乙酸乙酯、氯仿和乙醚中溶解度高，采用這3種溶劑萃取，所得暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物得率高。利用本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書(shū)文字能夠據(jù)以實(shí)施。<實(shí)施例1>暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：步驟一、將暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間5d，挑取菌絲塊接入改良的PDB培養(yǎng)基中，于28℃，搖床培養(yǎng)10d，得初次發(fā)酵液；其中所述改良的PDB培養(yǎng)基包括PDB和100mL三七莖葉原漿；步驟二、按體積質(zhì)量比為1000mL:0.00005g:0.00005g向步驟一中得到的初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉，于28℃，搖床培養(yǎng)5d，得二次發(fā)酵液；步驟三、按體積比為1:1向二次發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，離心處理，濾除沉淀物，取上清液，然后旋蒸蒸發(fā)去除溶劑，旋蒸溫度為55℃，即得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<實(shí)施例2>一、暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：步驟一、將暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間5d，挑取菌絲塊接入改良的PDB培養(yǎng)基中，于28℃，搖床培養(yǎng)12d，得初次發(fā)酵液；其中所述改良的PDB培養(yǎng)基包括PDB和150mL三七莖葉原漿；步驟二、按體積質(zhì)量比為1000mL:0.0001g:0.0001g向步驟一中得到的初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉，于28℃，搖床培養(yǎng)8d，得二次發(fā)酵液；步驟三、按體積比為1:2向二次發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，離心處理，濾除沉淀物，取上清液，然后旋蒸蒸發(fā)去除溶劑，旋蒸溫度為60℃，即得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<實(shí)施例3>暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：步驟一、將暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間5d，挑取菌絲塊接入改良的PDB培養(yǎng)基中，于25℃，搖床培養(yǎng)8d，得初次發(fā)酵液；其中所述改良的PDB培養(yǎng)基包括PDB和100mL三七莖葉原漿；步驟二、按體積質(zhì)量比為1000mL:0.00004g:0.00004g向步驟一中得到的初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉，于25℃，搖床培養(yǎng)3d，得二次發(fā)酵液；步驟三、按體積比為1:1向二次發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，離心處理，濾除沉淀物，取上清液，然后旋蒸蒸發(fā)去除溶劑，旋蒸溫度為50℃，即得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<實(shí)施例4>暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：步驟一、將暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間5d，挑取菌絲塊接入改良的PDB培養(yǎng)基中，于28℃，搖床培養(yǎng)10d，得初次發(fā)酵液；其中，初次發(fā)酵液進(jìn)行誘導(dǎo)后處理：將1000重量份初次發(fā)酵液放入4℃環(huán)境中培養(yǎng)1d，然后加入1重量份病原菌懸濁液，再移至10℃環(huán)境中培養(yǎng)5d，然后移至搖床，于28℃，200r/min條件下繼續(xù)培養(yǎng)3d后即得；其中，所述病原菌懸濁液的制備方法：挑取0.3重量份三七灰霉病病原菌菌絲塊至100重量份水中，再用電動(dòng)攪拌器以1000r/min的轉(zhuǎn)速條件下攪拌25min制成懸濁液；其中所述改良的PDB培養(yǎng)基包括PDB和100mL三七莖葉原漿；其中，三七莖葉原漿的制備方法：將三七的莖和葉放入研缽中，加入冰水研磨30min，然后加入胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸，置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理40min，再用研缽研磨10min，置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理20min，過(guò)濾即得，置于4℃環(huán)境中保藏，備用；三七的莖、葉、冰水、胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸的質(zhì)量比為1:1:10:0.00005:0.00005:0.00005:0.00005；步驟二、按體積質(zhì)量比為1000mL:0.00005g:0.00005g向步驟一中得到的初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉，于28℃，搖床培養(yǎng)5d，得二次發(fā)酵液；步驟三、按體積比為1:1向二次發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，離心處理，濾除沉淀物，取上清液，然后旋蒸蒸發(fā)去除溶劑，旋蒸溫度為55℃，即得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<實(shí)施例5>暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：步驟一、將暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間5d，挑取菌絲塊接入改良的PDB培養(yǎng)基中，于28℃，搖床培養(yǎng)12d，得初次發(fā)酵液；其中，初次發(fā)酵液進(jìn)行誘導(dǎo)后處理：將1000重量份初次發(fā)酵液放入4℃環(huán)境中培養(yǎng)1d，然后加入1重量份病原菌懸濁液，再移至10℃環(huán)境中培養(yǎng)5d，然后移至搖床，于28℃，200r/min條件下繼續(xù)培養(yǎng)3d后即得；其中，所述病原菌懸濁液的制備方法：挑取0.5重量份三七灰霉病病原菌菌絲塊至100重量份水中，再用電動(dòng)攪拌器以1000r/min的轉(zhuǎn)速條件下攪拌30min制成懸濁液；其中所述改良的PDB培養(yǎng)基包括PDB和150mL三七莖葉原漿；其中，三七莖葉原漿的制備方法：將三七的莖和葉放入研缽中，加入冰水研磨30min，然后加入胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸，置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理40min，再用研缽研磨10min，置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理20min，過(guò)濾即得，置于4℃環(huán)境中保藏，備用；三七的莖、葉、冰水、胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸的質(zhì)量比為1:1:10:0.00005:0.00005:0.00005:0.00005；步驟二、按體積質(zhì)量比為1000mL:0.0001g:0.0001g向步驟一中得到的初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉，于28℃，搖床培養(yǎng)8d，得二次發(fā)酵液；步驟三、按體積比為1:2向二次發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，離心處理，濾除沉淀物，取上清液，然后旋蒸蒸發(fā)去除溶劑，旋蒸溫度為60℃，即得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<實(shí)施例6>暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：步驟一、將暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間5d，挑取菌絲塊接入改良的PDB培養(yǎng)基中，于25℃，搖床培養(yǎng)8d，得初次發(fā)酵液；其中，初次發(fā)酵液進(jìn)行誘導(dǎo)后處理：將1000重量份初次發(fā)酵液放入4℃環(huán)境中培養(yǎng)1d，然后加入1重量份病原菌懸濁液，再移至10℃環(huán)境中培養(yǎng)5d，然后移至搖床，于25℃，200r/min條件下繼續(xù)培養(yǎng)3d后即得；其中，所述病原菌懸濁液的制備方法：挑取0.1重量份三七灰霉病病原菌菌絲塊至100重量份水中，再用電動(dòng)攪拌器以1000r/min的轉(zhuǎn)速條件下攪拌20min制成懸濁液；其中所述改良的PDB培養(yǎng)基包括PDB和100mL三七莖葉原漿；其中，三七莖葉原漿的制備方法：將三七的莖和葉放入研缽中，加入冰水研磨30min，然后加入胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸，置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理40min，再用研缽研磨10min，置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理20min，過(guò)濾即得，置于4℃環(huán)境中保藏，備用；三七的莖、葉、冰水、胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴(lài)氨酸的質(zhì)量比為1:1:10:0.00005:0.00005:0.00005:0.00005；步驟二、按體積質(zhì)量比為1000mL:0.00004g:0.00004g向步驟一中得到的初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉，于25℃，搖床培養(yǎng)3d，得二次發(fā)酵液；步驟三、按體積比為1:1向二次發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，離心處理，濾除沉淀物，取上清液，然后旋蒸蒸發(fā)去除溶劑，旋蒸溫度為50℃，即得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<實(shí)施例7>按實(shí)施例1的方法，將乙酸乙酯替換成氯仿，旋蒸溫度為45℃，其它操作與實(shí)施例1一致，得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<實(shí)施例8>按實(shí)施例1的方法，將乙酸乙酯替換成乙醚，旋蒸溫度為25℃，其它操作與實(shí)施例1一致，得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<對(duì)比試驗(yàn)>取乙醇為對(duì)比例1，按實(shí)施例1的方法，將乙酸乙酯替換成乙醇，旋蒸溫度為55℃，其它操作與實(shí)施例1一致，得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。取丙酮為對(duì)比例2，按實(shí)施例1的方法，將乙酸乙酯替換成丙酮，旋蒸溫度為35℃，其它操作與實(shí)施例1一致，得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。采用實(shí)施例1，實(shí)施例7，實(shí)施例8、對(duì)比例1、對(duì)比例2的方法，5種溶劑對(duì)暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的提取效果如表1所示，以乙酸乙酯得率最高，氯仿和乙醚次之，乙醇和丙酮最低。暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物得率(％)＝暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物體積/二次發(fā)酵液體積×100％表1暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的得率有機(jī)溶劑得率/％乙酸乙酯5.23氯仿3.31乙醚2.84乙醇0.88丙酮0.72<實(shí)施例9>按實(shí)施例4的方法，將三七灰霉病病原菌菌絲塊替換成三七圓斑病病原菌菌絲塊，其它操作與實(shí)施例4一致，得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<實(shí)施例10>按實(shí)施例4的方法，將三七灰霉病病原菌菌絲塊替換成混合菌，其中混合菌采用三七灰霉病病原菌菌絲塊和三七圓斑病病原菌菌絲塊制成，其它操作與實(shí)施例4一致，得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。<病原菌抑制試驗(yàn)>采用實(shí)施例1～6、實(shí)施例9和實(shí)施例10的方法獲得的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌進(jìn)行抑制率試驗(yàn)，病原菌包括三七灰霉病病原菌、三七圓斑病病原菌、苦玄參褐斑病病原菌、艾納香條斑病病原菌、廣西莪術(shù)葉斑病病原菌、草豆蔻葉斑病病原菌和羅漢果斑枯病病原菌。1、暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌菌絲的影響：采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定。取10mL的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物加入到90mL的PDA培養(yǎng)基，充分混勻，倒入直徑為9cm的培養(yǎng)皿中制成帶藥平板，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)。以無(wú)菌水作為對(duì)照。將培養(yǎng)好的直徑為5mm病原菌接種至處理及對(duì)照的平板中央，于28℃溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d后，用直尺測(cè)量菌落直徑。按以下公式計(jì)算抑制率：菌絲生長(zhǎng)抑制率(％)＝(對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑-藥劑處理菌落增長(zhǎng)直徑)/對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑×100％表2暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌菌絲的影響2、暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的影響：采用懸滴法測(cè)定暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物對(duì)孢子萌發(fā)的抑制作用：將病原菌培養(yǎng)一定時(shí)間后使其產(chǎn)孢，加無(wú)菌水配置成10倍物鏡下每視野50～60個(gè)孢子左右的孢子懸浮液。等體積吸取孢子懸浮液與暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物，以孢子懸液為對(duì)照，4次重復(fù)，28℃下培養(yǎng)，24h后檢查孢子萌發(fā)情況，計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率。萌發(fā)抑制率(％)＝(對(duì)照萌發(fā)率-處理萌發(fā)率)/對(duì)照萌發(fā)率×100％表3暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的影響由表2和表3中的病原菌菌絲抑制率和病原菌孢子萌發(fā)的抑制率的數(shù)據(jù)，可以看出采用實(shí)施例3～6的制備方法制備的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌菌絲的抑制率和對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的抑制率明顯高于采用實(shí)施例1～3的制備方法制備的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物，說(shuō)明在初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉進(jìn)行二次發(fā)酵，可以促使暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌分泌更多活性代謝產(chǎn)物，再利用病原菌懸濁液對(duì)初次發(fā)酵液的誘導(dǎo)后處理，可以激活其菌體內(nèi)分泌暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的機(jī)制，促使其分泌出更多活性代謝產(chǎn)物，且暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的活性更強(qiáng)。由實(shí)施例4、實(shí)施例9和實(shí)施例10的病原菌菌絲抑制率和病原菌孢子萌發(fā)的抑制率的數(shù)據(jù)可以看出，3個(gè)實(shí)施例所得的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌菌絲抑制率和病原菌孢子萌發(fā)的抑制率差不多，說(shuō)明采用三七灰霉病病原菌或三七圓斑病病原菌或二者的混合物對(duì)初次發(fā)酵液進(jìn)行誘導(dǎo)后處理的作用相當(dāng)，且均可以促使暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌分泌出更多活性代謝產(chǎn)物，暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的活性更強(qiáng)。盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開(kāi)如上，但其并不僅僅限于說(shuō)明書(shū)和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實(shí)施例。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3