1.一種經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,包括以下步驟:
1)取經(jīng)血樣本,加入樣本保存液混勻,然后進(jìn)行離心,收集沉淀物;
2)將步驟1)得到的沉淀物加入紅細(xì)胞裂解液中,混勻后靜置進(jìn)行裂解,然后進(jìn)行離心,收集沉淀物;
3)將步驟2)得到的沉淀物用細(xì)胞培養(yǎng)基重懸,然后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),收集培養(yǎng)獲得的細(xì)胞,即為所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,其特征在于:所述的樣本保存液為含有50~150U/mL青霉素、0.8~1.2mg/mL鏈霉素、0.05~0.1mg/mL兩性霉素B和0.2~0.5mg/mL EDTA-Na2的PBS緩沖液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,其特征在于:所述的紅細(xì)胞裂解液為含有120~180mmol/L NH4Cl、5~15mmol/LKHCO3和0.05~0.15mmol/L EDTA-Na2的水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,其特征在于:所述的紅細(xì)胞裂解液的pH值為7.2~7.4。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,其特征在于:所述的細(xì)胞培養(yǎng)基為含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,其特征在于:在步驟1)中,經(jīng)血樣本與樣本保存液的用量體積比為1:1~1:3;離心的轉(zhuǎn)速為1200~1500rpm,離心的時間為5~10分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,其特征在于:在步驟2)中,紅細(xì)胞裂解液與經(jīng)血樣本的用量體積比為1:2~1:3;裂解的時間為5~10分鐘;離心的轉(zhuǎn)速為1200~1500rpm,離心的時間為5~10分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,其特征在于:在步驟3)中,所述細(xì)胞培養(yǎng)的接種密度為5~10×104cells/cm2;所述的細(xì)胞培養(yǎng)是在37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的分離提取方法,其特征在于:在步驟3)中,所述的細(xì)胞培養(yǎng)是將步驟2)得到的沉淀物用細(xì)胞培養(yǎng)基重懸后,在37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天,用PBS緩沖液洗掉未貼壁的細(xì)胞,再加入細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),此后每隔3天更換一次細(xì)胞培養(yǎng)基,直至細(xì)胞融合至80%后進(jìn)行傳代。