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嗜酸乳桿菌成分的快速定性檢測試劑盒、檢測方法及應(yīng)用與流程

文檔序號:12577849閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種乳粉中嗜酸乳桿菌成分的快速定性檢測試劑盒,其特征在于,包括用于檢測乳粉中嗜酸乳桿菌成分的特異性擴增引物對,所述特異性擴增引物對的序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

2.一種乳粉中嗜酸乳桿菌成分的快速定性檢測方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:

A、待測樣品預(yù)處理;

B、提取待測樣品總DNA;

C、以待測樣品總DNA為模板進行PCR擴增,獲得PCR擴增產(chǎn)物;其中,PCR擴增體系中包括如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物對序列;

D、對擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳;

E、分析待測樣品中是否含有嗜酸乳桿菌:如果待測樣品DNA組中在746bp附近出現(xiàn)特異性條帶,則待測樣品中含有嗜酸乳桿菌,反之待測樣品不含有嗜酸乳桿菌。

3.如權(quán)利要求2所述的快速定性檢測方法,其特征在于,步驟C的PCR反應(yīng)的條件如下:

PCR擴增程序為:95℃,4min;95℃,30s,66℃,30s,72℃,40s,共35個循環(huán);72℃,5min;

PCR擴增的反應(yīng)體系為:2×Colorless Reaction Buffer 12.5μL;1μL 5μmol·L-1如SEQ ID NO.7所示的引物和1μL 5μmol·L-1如SEQ ID NO.8所示的引物,樣品DNA 2μL,ddH2O 8.5μL,總體積25μL。

4.如權(quán)利要求2所述的快速定性檢測方法,其特征在于,所述的待測樣品為添加有嗜酸乳桿菌的嬰幼兒配方乳粉。

5.如權(quán)利要求2所述的快速定性檢測方法,其特征在于,步驟A所述的待測樣品預(yù)處理的方法包括:稱取均質(zhì)混勻的待測樣品25g,置于裝有225mL生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi),于8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,制成1:10樣品勻液;或置于225mL生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min制成1:10的樣品勻液;接著選擇2個~3個連續(xù)的適宜稀釋度,于MRS培養(yǎng)基瓊脂平板需氧培養(yǎng)48h±2h后,挑2個或2個以上單菌落轉(zhuǎn)劃MRS平板擴增,獲得供DNA提取的單克隆菌株菌苔。

6.如權(quán)利要求5所述的快速定性檢測方法,其特征在于,步驟B的待測樣品總DNA的提取方法為:從2個或2個以上步驟A的平板上挑取單克隆菌株菌苔,加入200μL 50mg/mL溶菌酶溶液,37℃保溫2h;接著,依次加入10μL 20mg/mL蛋白酶K和400μL SDS裂解液,在56℃中水浴2h;而后用酚/氯仿法抽提DNA,測定DNA濃度和純度,獲得待測細菌基因組DNA。

7.一種如權(quán)利要求1所述的快速定性檢測試劑盒在制備嗜酸乳桿菌的檢測試劑中的應(yīng)用。

8.一種如權(quán)利要求1所述的快速定性檢測試劑盒在檢測乳粉中嗜酸乳桿菌成分的應(yīng)用。

9.一種如權(quán)利要求1所述的乳粉中嗜酸乳桿菌成分的特異性引物對,其特征在于,所述特異性引物對的序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

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