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一種用于他汀類降脂藥個(gè)體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒及其檢測方法與流程

文檔序號:12249823閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于他汀類降脂藥個(gè)體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒,其特征在于,包括2X qPCR混合反應(yīng)液、檢測HMGCR基因rs17238540位點(diǎn)的引物mix、檢測APOE基因rs7412位點(diǎn)的引物mix、檢測APOE基因rs429358位點(diǎn)的引物mix和檢測SLCO1B1基因rs4149056位點(diǎn)的引物mix;4個(gè)引物mix均含有檢測其SNP位點(diǎn)的兩條特異性正向引物及一條反向引物,檢測HMGCR基因rs17238540位點(diǎn)的兩條特異性正向引物及一條反向引物序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示,檢測APOE基因rs7412位點(diǎn)的兩條特異性正向引物及一條反向引物序列如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示,檢測APOE基因rs429358位點(diǎn)的兩條特異性正向引物及一條反向引物序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11所示,檢測SLCO1B1基因rs4149056位點(diǎn)的兩條特異性正向引物及一條反向引物序列如SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于他汀類降脂藥個(gè)體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒,其特征在于,所述的2X qPCR混合反應(yīng)液中含PCR Buffer、MgCl2、dNTPs、Taq DNA聚合酶、兩條分別用FAM和HEX標(biāo)記的通用熒光探針,F(xiàn)AM標(biāo)記的通用熒光探針序列如SEQ ID NO.1所示,HEX標(biāo)記的通用熒光探針序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如權(quán)利要求1所述的用于他汀類降脂藥個(gè)體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒的檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:提取待檢測樣本的基因組DNA,然后分成4個(gè)反應(yīng)管(a、b、c、d)進(jìn)行檢測,首先在每個(gè)反應(yīng)管中分別加入2X qPCR混合反應(yīng)液,然后在第一反應(yīng)管(a)加入檢測HMGCR基因rs17238540位點(diǎn)的引物mix;在第二反應(yīng)管(b)加入檢測APOE基因rs7412位點(diǎn)的引物mix;在第三反應(yīng)管(c)加入檢測APOE基因rs429358位點(diǎn)的引物mix;在第四反應(yīng)管(d)加入檢測SLCO1B1基因rs4149056位點(diǎn)的引物mix,最后在4個(gè)反應(yīng)管(a、b、c、d)中加入待檢測樣本的基因組DNA,進(jìn)行核酸樣本的熒光定量PCR擴(kuò)增,在37℃進(jìn)行熒光信號的掃描,使用LightCycler 480Software release軟件中的Endpiont Genotyping模塊根據(jù)兩種熒光信號的強(qiáng)度及比值對基因型進(jìn)行自動判別。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于他汀類降脂藥個(gè)體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒的檢測方法,其特征在于,所述PCR擴(kuò)增程序如下:

預(yù)變性的條件為:溫度為94℃,時(shí)間為15秒;

PCR擴(kuò)增由第一階段和第二階段構(gòu)成;

第一階段由10次擴(kuò)增循環(huán)構(gòu)成,其條件為:

變性:溫度為94℃,時(shí)間為20秒;

退火+延伸:起始溫度為61℃,每一輪擴(kuò)增循環(huán)溫度遞減0.5℃,直至擴(kuò)增循環(huán)結(jié)束,時(shí)間為60秒;

第二階段由29輪循環(huán)構(gòu)成,其條件為:

變性:溫度為94℃,時(shí)間為20秒;

退火+延伸:溫度為55℃,時(shí)間為60秒;

信號掃描條件為:溫度為37℃,時(shí)間為60秒。

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