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一種家畜腔前卵泡體外培養(yǎng)液及其制備方法與流程

文檔序號(hào):12108592閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種家畜腔前卵泡體外培養(yǎng)液,其特征在于:所述培養(yǎng)液為α-亞麻酸,α-亞麻酸在每1mL常規(guī)培養(yǎng)液中的添加量為100~200μg,所述常規(guī)培養(yǎng)液由100mLα-MEM溶液、1.5mL轉(zhuǎn)鐵蛋白,150μL胰島素,100μL維生素C,0.5mL亞硒酸鈉,500μg牛血清白蛋白,100ng海藻酸鈉,500IU FSH,0.06g青霉素鈉、0.1g硫酸鏈霉素組成。

2.一種家畜腔前卵泡體外培養(yǎng)液的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)取1.5mL轉(zhuǎn)鐵蛋白,150μL胰島素,100μL維生素C,0.5mL亞硒酸鈉,0.06g青霉素鈉、0.1g硫酸鏈霉素,溶于100mLα-MEM溶液,配制成基礎(chǔ)培養(yǎng)液;

2)取500μg牛血清白蛋白溶于基礎(chǔ)培養(yǎng)液中,緩慢混勻,避免泡沫產(chǎn)生,配制成Ⅰ液;

3)取10mg海藻酸鈉溶于10ml DMSO中,緩慢混勻,吸取100μL混勻后的溶液,加入Ⅰ液中,緩慢混勻,配制成Ⅱ液;

4)取10~20mgα-亞麻酸緩慢溶于10ml DMSO中,緩慢混勻,吸取100μL混勻后的溶液,加入Ⅱ液中,緩慢混勻,配制成工作液;

5)調(diào)節(jié)工作液pH值=7.0~7.1,過濾滅菌,放入4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

6)取500IU FSH加入100mL備用的工作液中,進(jìn)行卵泡體外培養(yǎng)。

3.一種家畜腔前卵泡體外培方法,其特征在于,包括以下步驟:

(A)從屠宰場(chǎng)獲取牛卵巢,在滅菌的生理鹽水(溫度30~35℃)中,盡快送到實(shí)驗(yàn)室,70%的酒精消毒滅菌后用30~35℃的生理鹽水將卵巢上殘留的酒精沖洗干凈;

(B)取出4℃冰箱中保存的卵泡培養(yǎng)工作液,在37℃水浴鍋中預(yù)熱,備用;

(C)將步驟(A)中的卵巢用手術(shù)刀片切成1cm×0.5cm×0.2cm的薄片,然后用滅菌的生理鹽水沖洗1~2次,放入表面皿中;

(D)在立體顯微鏡下,用25G針頭挑出家畜腔前卵泡,選擇直徑在160~220μm的腔前卵泡備用;

(E)將選擇的腔前卵泡放入24孔培養(yǎng)盤中,按照1ml/孔加入預(yù)熱的培養(yǎng)液進(jìn)行單卵泡培養(yǎng);

(F)間隔24小時(shí)更換70%培養(yǎng)液;

(G)利用帶刻度的顯微鏡每天檢測(cè)卵泡直徑,觀察卵泡腔的變化。

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