本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)、發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種含有枸杞子的冬蟲夏草菌種子培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：蟲草屬藥用真菌是我國(guó)的一類名貴野生中藥材，全世界已知蟲草類有350余種，我國(guó)目前有62種，其中，但最具藥用價(jià)值的是冬蟲夏草菌。冬蟲夏草是我國(guó)的一種名貴、稀有中藥，用藥歷史悠久，與人參、鹿茸并列三大滋補(bǔ)品之一，用于補(bǔ)益肺腎兩虛，久咳，支氣管炎，陽(yáng)痿，月經(jīng)不調(diào)，高血脂，心供血不足等癥，具有抗腫瘤，增強(qiáng)免疫力、抗病毒，抗真菌等藥理作用，科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草含有腺苷、蟲草素、蟲草酸，多糖等藥物化學(xué)物質(zhì)，是冬蟲夏草發(fā)揮藥效，也是制定冬蟲夏草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，近幾年，國(guó)內(nèi)外科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，蟲草素能干擾基因細(xì)細(xì)RNA和DNA的合成，抑制癌細(xì)胞等不正常細(xì)胞的分裂，表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗真菌、抗HlV－I型病毒和抑制梭菌活性，作為抗癌、抗病毒新藥，蟲草素在美國(guó)己通過FDA的安全評(píng)價(jià)，并進(jìn)入到三期臨床價(jià)段。冬蟲夏草菌是從新鮮、經(jīng)消毒的冬蟲夏草的蟲體或子座中分離得到的一種藥用真菌，用深層液體發(fā)酵生產(chǎn)得到的蟲草菌絲，含有與野生冬蟲夏草相同的藥物成分，用冬蟲夏草菌絲體制得多種產(chǎn)品，如金水寶、百靈膠囊等作為國(guó)家一類新藥已收入于中國(guó)藥典，具有很好的市場(chǎng)前景。十多年來(lái)，國(guó)內(nèi)許多單位，盡管已經(jīng)對(duì)冬蟲夏草菌的生長(zhǎng)特征、發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化和發(fā)酵工藝進(jìn)行大量研究工作，冬蟲夏草菌絲體活性成分較低，特別是冬蟲夏草菌絲體中蟲草素含量更低，因此有必要提高冬蟲夏草菌的蟲草素含量?，F(xiàn)有提高蟲草素的技術(shù)方案一般是對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行改良，或在發(fā)酵過程加入一些化學(xué)物質(zhì)，如油酸或其前體物類似物或植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等到發(fā)酵培養(yǎng)基中，由于發(fā)酵培養(yǎng)基體積大，所需原材料或添加物的重量大，成本高。很少見到通過對(duì)冬蟲夏草菌種子培養(yǎng)基的研究，來(lái)提高蟲草素含量的研究。因此，蟲草真菌發(fā)酵菌種子培養(yǎng)基技術(shù)研究的創(chuàng)新，對(duì)提高發(fā)酵冬蟲夏草菌蟲草素含量，改善冬蟲夏草菌的產(chǎn)品質(zhì)量和藥用效果有積極意義。枸杞子，是茄科多刺植物的藥食兩用的果實(shí)，與長(zhǎng)白山人參、東阿阿膠、瓊珍靈芝并稱中藥四寶，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》，《本草綱目》中均有記載?，F(xiàn)代研究表明，枸杞子含有大量的枸杞多糖和甜菜堿，具有促進(jìn)免疫、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、抗輻射、抗腫瘤、保肝等功效。目前，未見到將枸杞子用于食用真菌培養(yǎng)的相關(guān)報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種含有枸杞子的冬蟲夏草菌種子培養(yǎng)基。具體而言，本發(fā)明提供的冬蟲夏草菌種子培養(yǎng)基中，含有枸杞子2～8g/L或2～8g/kg。本發(fā)明所述枸杞子是指茄科植物枸杞的成熟果實(shí)。本發(fā)明所述冬蟲夏草菌是指從新鮮、經(jīng)消毒的冬蟲夏草的蟲體或子座中分離得到的藥用真菌；優(yōu)選為本領(lǐng)域公知的無(wú)性型中華被孢霉、有性型中華被孢霉、蟲草頭孢霉、彎頸霉、束絲霉或蝙蝠蛾擬青霉。本發(fā)明通過大量實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，將枸杞子用于冬蟲夏草菌的培養(yǎng)過程，可以顯著提高冬蟲夏草菌的品質(zhì)，尤其可以提冬蟲夏草菌中蟲草素的含量，從而提高其藥用價(jià)值。所述冬蟲夏草菌種子培養(yǎng)基中還包含碳源、氮源以及無(wú)機(jī)鹽。所述碳源、氮源以及無(wú)機(jī)鹽均可選用本領(lǐng)域常規(guī)的組分。具體而言，所述碳源可選用馬鈴薯或/和燕麥片以及葡萄糖或/和蔗糖，所述氮源可選用蛋白胨以及酵母膏；所述無(wú)機(jī)鹽可選用磷酸二氫鉀以及硫酸鎂。為了確保各組分之間協(xié)同作用，進(jìn)一步全面提高產(chǎn)品質(zhì)量，本發(fā)明優(yōu)選所述種子培養(yǎng)基中包含如下重量份的成分：枸杞子2.0～8.0份，馬鈴薯或/和燕麥片30～200份，葡萄糖或/和蔗糖16～21份，蛋白胨3.0～5.0份，酵母膏2.0～3.0份，磷酸二氫鉀0.6～1.0份，硫酸鎂0.3～0.5份。作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，所述種子培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，其中包含如下成分：枸杞子2～8g/L，馬鈴薯或/和燕麥片30～200g/L，葡萄糖或/和蔗糖15～21g/L，蛋白胨3～5g/L，酵母膏2～3g/L，磷酸二氫鉀0.6～1g/L，硫酸鎂0.3～0.5g/L，蒸餾水余量。更優(yōu)選地，所述種子培養(yǎng)基中包含如下成分：枸杞子4.0～5.0g/L，馬鈴薯150～200g/L，葡萄糖15～20g/L，蛋白胨3～4g/L，酵母浸膏1.5～2.5g/L，磷酸二氫鉀0.6～1.0g/L，硫酸鎂0.3～0.5g/L，蒸餾水余量。本發(fā)明提供的冬蟲夏草菌種子培養(yǎng)基，可按常規(guī)培養(yǎng)基的配制方法配制。如將上述質(zhì)量配比稱取原料，放入容器，加熱，溶解，混合均勻后按常規(guī)滅菌方法滅菌即可。本發(fā)明進(jìn)一步保護(hù)所述種子培養(yǎng)基在培養(yǎng)冬蟲夏草菌中的應(yīng)用。具體而言，可將所述種子培養(yǎng)基用于冬蟲夏草菌種子的培養(yǎng)，然后用所述種子培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的種子液接種到冬蟲夏草菌發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，從而顯著提高發(fā)酵液和發(fā)酵所得菌絲體中蟲草素含量。本發(fā)明可進(jìn)一步將所述的發(fā)酵液制備成冬蟲夏草口服液，或者在所述的發(fā)酵液中加入純糧米酒，制備成冬蟲夏草保健原漿酒。所述冬蟲夏草菌發(fā)酵培養(yǎng)基為本領(lǐng)域常規(guī)的發(fā)酵培養(yǎng)基。在利用所述種子培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，為了進(jìn)一步提高產(chǎn)品的質(zhì)量，本發(fā)明優(yōu)選所述冬蟲夏草菌發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：葡萄糖10～20g/L，蔗糖5～10g/L，小米5～15g/L，蛋白胨5～10g/L，豆餅粉10～20g/L，酵母浸膏2～3g/L，磷酸二氫鉀0.5～1g/L，硫酸鎂0.1～1g/L，維生素B10.01～0.05g/L。上述所述冬蟲夏草菌具體的種子培養(yǎng)方法以及發(fā)酵方法均為本領(lǐng)域常規(guī)操作，本發(fā)明不做特殊限定。本發(fā)明創(chuàng)造性地將枸杞子應(yīng)用于冬蟲夏草菌的種子培養(yǎng)和發(fā)酵中。本發(fā)明提供的冬蟲夏草菌種子培養(yǎng)基原料簡(jiǎn)單、取材方便，所需枸杞子少，成本低；用所述種子培養(yǎng)基培養(yǎng)的種子生長(zhǎng)速度快、質(zhì)量佳，按常規(guī)發(fā)酵條件轉(zhuǎn)種、發(fā)酵后得到的菌絲體中蟲草素含量高；用本發(fā)明提供的種子培養(yǎng)基培養(yǎng)所得的產(chǎn)品，可用于藥物以及保健品的生產(chǎn)。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。以下各實(shí)施例中，所涉及的冬蟲夏草菌是從西藏冬蟲夏草產(chǎn)區(qū)采集新鮮冬蟲夏草，經(jīng)過清洗、表面消毒、撥離外皮、把白色蟲體切成米粒大小塊，接種到改良PDA培養(yǎng)基上，15度培養(yǎng)20天左右，挑取真菌，進(jìn)一步分離，得到單一菌種；對(duì)該菌種進(jìn)行培養(yǎng)特征、顯微鏡觀察以及RNA測(cè)序，鑒定為冬蟲夏草菌。實(shí)施例1本實(shí)施例提供的種子培養(yǎng)基組成為：枸杞子2.5g/L，馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨3.5g/L，酵母膏2.0g/L，磷酸二氫鉀0.6g/L，硫酸鎂0.3g/L，蒸餾水余量。實(shí)施例2本實(shí)施例提供的種子培養(yǎng)基組成為：枸杞子4.0g/L，馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨4.0g/L，酵母膏2.5g/L，磷酸二氫鉀0.8g/L，硫酸鎂0.4g/L，蒸餾水余量。實(shí)施例3本實(shí)施例提供了一種冬蟲夏草菌種子培養(yǎng)基，其組成為：枸杞子5.5g/L，馬鈴薯200g/L，葡萄糖21g/L，蛋白胨4.0g/L，酵母膏3.0g/L，磷酸二氫鉀1.0g/L，硫酸鎂0.5g/L，蒸餾水余量。實(shí)施例4本實(shí)施例提供的種子培養(yǎng)基組成為：枸杞子6.0g/L，馬鈴薯200g/L，葡萄糖12g/L，蔗糖4g/L，蛋白胨5.0g/L，酵母膏2.5g/L，磷酸二氫鉀1.0g/L，硫酸鎂0.5g/L，蒸餾水余量。實(shí)施例5本實(shí)施例提供的種子培養(yǎng)基組成為：枸杞子7.0g/L,馬鈴薯200g/L，蔗糖16g/L，蛋白胨3.0g/L，酵母膏2.5g/L，磷酸二氫鉀0.8g，硫酸鎂0.4g/L，蒸餾水余量。實(shí)施例6本實(shí)施例提供的種子培養(yǎng)基組成為：枸杞子4.0g/L,燕麥片30g/L，葡萄糖13g/L，蔗糖5g/L，蛋白胨5.0g/L，酵母膏2.5g/L，磷酸二氫鉀0.7g，硫酸鎂0.5g/L，蒸餾水余量。實(shí)施例7將冬蟲夏草菌種分別接入實(shí)施例1提供的種子培養(yǎng)基和對(duì)照種子培養(yǎng)基，分別按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種；然后，分別把經(jīng)上述培養(yǎng)所得的菌種接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基，按常規(guī)方法培養(yǎng)發(fā)酵，收集發(fā)酵液。所述對(duì)照種子培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨3.5g/L，酵母膏2.0g/L，磷酸二氫鉀0.6g/L，硫酸鎂0.3g/L，蒸餾水余量。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖15g/L，蔗糖7g/L，小米10g/L，蛋白胨6g/L，豆餅粉15g/L，酵母浸膏2.5g/L，磷酸二氫鉀0.8g/L，硫酸鎂0.5g/L，維生素B10.03g/L，蒸餾水余量。通過本領(lǐng)域常規(guī)方法檢測(cè)每100ml發(fā)酵液中菌絲體所含的蟲草素含量mg，結(jié)果如表1所示表1：每100ml發(fā)酵液中菌絲體所含的蟲草素含量菌種培養(yǎng)基來(lái)源蟲草素含量(mg/100ml)對(duì)照0.055實(shí)施例10.153實(shí)施例8將冬蟲夏草菌種分別接入實(shí)施例2提供的種子培養(yǎng)基和對(duì)照種子培養(yǎng)基，分別按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種；其余操作以及對(duì)照種子培養(yǎng)基的配方和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方同實(shí)施例7，收集發(fā)酵液。通過本領(lǐng)域常規(guī)方法檢測(cè)每100ml發(fā)酵液中菌絲體所含的蟲草素含量mg，結(jié)果如表2所示表2：每100ml發(fā)酵液中菌絲體所含的蟲草素含量菌種培養(yǎng)基來(lái)源蟲草素含量(mg/100ml)對(duì)照0.050實(shí)施例20.210實(shí)施例9將冬蟲夏草菌種分別接入實(shí)施例3提供的種子培養(yǎng)基和對(duì)照種子培養(yǎng)基，分別按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種；其余操作以及對(duì)照種子培養(yǎng)基的配方和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方同實(shí)施例7，收集發(fā)酵液。通過本領(lǐng)域常規(guī)方法檢測(cè)每100ml發(fā)酵液中菌絲體所含的蟲草素含量mg，結(jié)果如表3所示表3：每100ml發(fā)酵液中菌絲體所含的蟲草素含量菌種培養(yǎng)基來(lái)源蟲草素含量(mg/100ml)對(duì)照0.047實(shí)施例30.263實(shí)施例10將冬蟲夏草菌種分別接入實(shí)施例4提供的種子培養(yǎng)基和對(duì)照種子培養(yǎng)基，分別按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種；其余操作以及對(duì)照種子培養(yǎng)基的配方和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方同實(shí)施例7，收集發(fā)酵液。將所述發(fā)酵液經(jīng)過均質(zhì)機(jī)處理，按體積比為1：1的比例加入的酒精度28度的純糧米酒，陳釀后得到蟲草原漿保健酒。通過本領(lǐng)域常規(guī)方法檢測(cè)每100ml蟲草原漿保健酒中蟲草素的含量mg，結(jié)果如表4所示表4：每100ml蟲草原漿保健酒中蟲草素含量菌種培養(yǎng)基來(lái)源蟲草素含量(mg/100ml)對(duì)照0.024實(shí)施例40.135實(shí)施例11將冬蟲夏草菌種分別接入實(shí)施例5提供的種子培養(yǎng)基和對(duì)照種子培養(yǎng)基，分別按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種；其余操作以及對(duì)照種子培養(yǎng)基的配方和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方同實(shí)施例7，收集發(fā)酵液；將所述發(fā)酵液經(jīng)過均質(zhì)機(jī)處理，按體積比為1：1的比例加入的酒精度28度的純糧米酒，陳釀后得到蟲草原漿保健酒。通過本領(lǐng)域常規(guī)方法檢測(cè)每100ml蟲草原漿保健酒中蟲草素的含量mg，結(jié)果如表5所示表5：每100ml蟲草原漿保健酒中蟲草素含量菌種培養(yǎng)基來(lái)源蟲草素含量(mg/100ml)對(duì)照0.025實(shí)施例50.124實(shí)施例12將冬蟲夏草菌種分別接入實(shí)施例6提供的種子培養(yǎng)基和對(duì)照種子培養(yǎng)基，分別按常規(guī)方法培養(yǎng)菌種；其余操作以及對(duì)照種子培養(yǎng)基的配方和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方同實(shí)施例7，收集發(fā)酵液；所述發(fā)酵液經(jīng)過膜濃縮至原體積的1/2后，制備得到冬蟲夏草口服液。通過本領(lǐng)域常規(guī)方法檢測(cè)每100ml冬蟲夏草口服液中蟲草素的含量mg，結(jié)果如表6所示表6：每100ml冬蟲夏草口服液中蟲草素含量菌種培養(yǎng)基來(lái)源蟲草素含量(mg/100ml)對(duì)照0.047實(shí)施例60.388雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明、具體實(shí)施方式及試驗(yàn)，對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3