技術(shù)特征：

1.一種快速進(jìn)行DNA末端修復(fù)和加接頭的方法其特征在于采用包含高保真DNA聚合酶的混合液進(jìn)行DNA末端修復(fù)、采用T4 DNA連接酶進(jìn)行接頭連接。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述包含高保真DNA聚合酶的混合液，其特征在于所述混合液包含高保真DNA聚合酶、dNTPs，反應(yīng)緩沖液和去離子水。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述包含高保真DNA聚合酶的混合液，其特征在于所包含的高保真DNA聚合酶濃度為0.05-0.2 U/μL，優(yōu)選為0.1 U/μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述包含高保真DNA聚合酶的混合液，其特征在于所包含的dNTPs中的dATP、dCTP、dTTP和dGTP的濃度比為1:1:1:1，所述dNTPs總濃度為0.4-2 mM，優(yōu)選為0.8 mM。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述包含高保真DNA聚合酶的混合液，其特征在于所包含的反應(yīng)緩沖液包括Tris-HCl、KCl、(NH4)₂SO₄和MgSO₄；

所述Tris-HCl濃度為5-60 mM，pH值為pH8.0-pH9.0，優(yōu)選的，濃度為40 mM，pH8.8；

所述KCl濃度為10-40 mM，優(yōu)選的為20 mM；

訴述(NH4)₂SO₄濃度為10-50 mM，優(yōu)選的為20 mM；

所述MgSO₄濃度為0-10 mM，優(yōu)選的為4 mM。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述包含高保真DNA聚合酶的混合液，其特征在于所述混合液為10 μL，包括如下組分：

Tris-HCl（pH8.8）40 mMKCl20 mM(NH4)₂SO₄20 mMMgSO₄4 mMdATP0.2 mMdCTP0.2 mMdTTP0.2 mMdGTP0.2 mM高保真DNA聚合酶1 U

加去離子水至10 μL。

7.一種權(quán)利要求2-6所述的所述包含高保真DNA聚合酶的混合液的使用方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

取10 μL包含經(jīng)過隨機(jī)打斷的待修復(fù)的DNA樣本4-12 ng置于0.2 μL PCR管；

向步驟(1)中包含DNA樣本的PCR管中加入10 μL包含高保真DNA聚合酶的混合液，渦旋混勻；

將步驟(2)包含DNA樣本和混合液的PCR管置于可控溫裝置，設(shè)置反應(yīng)溫度為72 ℃反應(yīng)10 min。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的使用方法，其特征在于步驟(2)所述打斷DNA樣本與混合液的體積比優(yōu)選為1:1。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的使用方法，其特征在于步驟(3)所述可控溫裝置，可為烘箱、水浴鍋、PCR儀等，優(yōu)選為PCR儀；所述反應(yīng)溫度為65-75 ℃，優(yōu)選為72 ℃；所述反應(yīng)10 min可為反應(yīng)5-20 min，優(yōu)選為10 min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述采用T4 DNA連接酶進(jìn)行接頭連接，其特征在于所述T4 DNA連接酶在進(jìn)行加接頭反應(yīng)的反應(yīng)體系中含量為100 U-700 U，優(yōu)選為350 U。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述采用T4 DNA連接酶進(jìn)行接頭連接，其特征在于所述接頭其中一端為平末端。

12.一種權(quán)利要求1、10、11所述的采用T4 DNA連接酶進(jìn)行接頭連接，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1) 利用權(quán)利要求7步驟(3)的PCR反應(yīng)管繼續(xù)配置連接反應(yīng)體系；

連接體系為：

末端修復(fù)反應(yīng)產(chǎn)物20 μLT4 DNA連接酶1 μLT4 DNA連接酶緩沖液10 μL10 μM接頭12 μL10 μM接頭 22 μL去離子水65 μL

總反應(yīng)體系為100 μL；

將步驟(1)中的PCR反應(yīng)管置于反應(yīng)裝置，22 ℃連接30 min。

13.一種快速進(jìn)行DNA末端修復(fù)和加接頭的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含如權(quán)利要求2-6所述的包含高保真DNA聚合酶的混合液，權(quán)利要求10-11所述的T4 DNA連接酶及其反應(yīng)緩沖液。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法在DNA片段末端補(bǔ)平修復(fù)及接頭連接實驗如高通量測序文庫制備中的應(yīng)用。