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一種檢測(cè)22q11.2微缺失的特異性引物、探針、檢測(cè)試劑盒及方法與流程

文檔序號(hào):12346670閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種檢測(cè)22q11.2微缺失的特異性引物,其特征在于,所述的特異性引物的序列如下:

TBX1-F:5’-TCGCGGACCTGTTTTTCGTA-3’,TBX1-R:5’-TCTCTGGTGCTAGATGCCCT-3’;RPP30-F:5’-GATTTGGACCTGCGAGC-3’,RPP30-R:5’-GGTTGGCCAGGCGCGAAG-3’。

2.一種檢測(cè)22q11.2微缺失的探針,其特征在于,所述的探針的序列如下:

TBX1:5’-ATGTTTGCTCTGGCGGCGTG-3’;RPP30:5’-CTGACCTGAAGGCTCT-3’;

探針的5’端標(biāo)記有熒光基團(tuán),3’端標(biāo)記有淬滅基團(tuán),兩個(gè)探針的5’端標(biāo)記的熒光基團(tuán)是不同的熒光基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)22q11.2微缺失的探針,其特征在于,所述的探針TBX1的5’端標(biāo)記的熒光基團(tuán)為FAM,3’端標(biāo)記的淬滅基團(tuán)為BHQ1;探針RPP30的5’端標(biāo)記有熒光基團(tuán)HEX,3’端標(biāo)記的淬滅基團(tuán)為MGB。

4.一種含有權(quán)利要求1所述的特異性引物和/或權(quán)利要求2所述的探針的檢測(cè)試劑盒。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于,包括2×ddPCR Supermix for Probes、微滴生成油、權(quán)利要求1所述的特異性引物和/或權(quán)利要求2所述的探針、陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于,所述的陰性對(duì)照為正常樣本DNA,所述的陽性對(duì)照為22q11.2微缺失陽性樣本DNA。

7.一種檢測(cè)22q11.2微缺失的檢測(cè)方法,其特征在于,提取待測(cè)樣本的基因組DNA為模板,利用權(quán)利要求1所述的特異性引物和權(quán)利要求2所述的探針進(jìn)行微滴數(shù)字PCR擴(kuò)增,檢測(cè)微滴的熒光信號(hào),得到目標(biāo)基因TBX1和內(nèi)參基因RPP30的拷貝數(shù),計(jì)算TBX1/RPP30拷貝數(shù)的比值,如果比值為0.40-0.62之間,則判斷樣本為22q11.2微缺失陽性樣本。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法,其特征在于,所述的微滴數(shù)字PCR擴(kuò)增,其ddPCR反應(yīng)體系為20μL,包括1×ddPCR Supermix for Probes,待測(cè)樣本基因組DNA 20ng,權(quán)利要求1所述的特異性引物TBX1-F、TBX1-R、RPP30-F和RPP30-R的終濃度均為250nmol/L,權(quán)利要求2所述的探針TBX1和RPP30的終濃度均為400nmol/L,余量為ddH2O。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法,其特征在于,所述的微滴數(shù)字PCR擴(kuò)增,其PCR反應(yīng)條件為:95℃,10分鐘;95℃,30秒,58℃,20秒,65℃,40秒,共40個(gè)循環(huán);98℃,10分鐘。

10.權(quán)利要求1所述的特異性引物和/或權(quán)利要求2所述的探針在檢測(cè)22q11.2微缺失中的應(yīng)用。

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