1.一種用于高通量測序檢測的NK細(xì)胞多基因變異文庫的構(gòu)建方法，其特征在于：覆蓋人類基因PDGFRA、c-KIT、STAT3、STAT5B、JAK-3、PI3K、TP53和K-ras上的基因突變位點(diǎn)，具體包括如下步驟：
(1)針對目的基因PDGFRA、c-KIT、STAT3、STAT5B、JAK-3、PI3K、TP53和K-ras設(shè)計(jì)一基本擴(kuò)增引物組，該基本擴(kuò)增引物組的正向引物和反向引物的5’端設(shè)有額外的2～5個T，且該2～5個T的靠近3’端的第一個T具有PNA修飾，同時該第一基本擴(kuò)增引物組的Tm值相差不超過1℃，具體的，該基本擴(kuò)增引物組包括KIT-1-F、KIT-1-R、KIT-2-F、KIT-2-R、KIT-3-F、KIT-3-R、KIT-4-F、KIT-4-R、KIT-5-F、KIT-5-R、PDG-1-F、PDG-1-R、PDG-2-F、PDG-2-R、PDG-3-F、PDG-3-R、KRAS-1-F、KRAS-1-R、KRAS-2-F、KRAS-2-R、KRAS-3-F、KRAS-3-R、P53-1-F、P53-1-R、P53-2-F、P53-2-R、P53-3-F、P53-3-R、P53-4-F、P53-4-R、P53-5-F、P53-5-R、P53-6-F、P53-6-R、P53-7-F、P53-7-R、P53-8-F、P53-8-R、JAK3-1-F、JAK3-1-R、STAT3-1-F、STAT3-1-R、STAT3-2-F、STAT3-2-R、STAT5B-1-F、STAT5B-1-R、PI-1-F、PI-1-R、PI-2-F和PI-2-R，其序列依次如SEQ ID 01～SEQ ID 50所示；
(2)設(shè)計(jì)一不對稱連接探針組與一不與人類基因組形成互補(bǔ)的通用引物，不對稱連接探針組含有多對不同的不對稱連接探針，每對不對稱連接探針均包括可自身形成環(huán)狀的一正向探針和一反向探針，該正向探針和反向探針從3’端至5’端均依次包括一能夠與不對稱連接探針的5’端若干連續(xù)堿基配對的互補(bǔ)序列、一與所述通用引物互補(bǔ)配對的擴(kuò)增序列和一與上述2～5個T相對應(yīng)的粘性末端識別序列，同時各正向探針和反向探針均具有相應(yīng)的標(biāo)簽序列，上述每對不對稱連接探針的正向探針和反向探針的Tm值相差不超過1℃，具體的，所述不對稱連接探針組包括Ion-BC1-FF、Ion-BC1-FR、Ion-BC1-RF、Ion-BC1-RR、Ion-BC2-FF、Ion-BC2-FR、Ion-BC2-RF、Ion-BC2-RR、Ion-BC3-FF、Ion-BC3-FR、Ion-BC3-RF、Ion-BC3-RR、Ion-BC4-FF、Ion-BC4-FR、Ion-BC4-RF、Ion-BC4-RR、Ion-BC5-FF、Ion-BC5-FR、Ion-BC5-RF、Ion-BC5-RR、Ion-BC6-FF、Ion-BC6-FR、Ion-BC6-RF、Ion-BC6-RR、Ion-BC7-FF、Ion-BC7-FR、Ion-BC7-RF、Ion-BC7-RR、Ion-BC8-FF、Ion-BC8-FR、Ion-BC8-RF和Ion-BC8-RR，其序列依次如SEQ ID 51～SEQ ID 82所示，上述BC1～8分別表示八種不同的標(biāo)簽序列；
(3)將模板、上述基本擴(kuò)增引物組置于一含有RingCap-Taq酶的PCR反應(yīng)體系中進(jìn)行擴(kuò)增，純化后得擴(kuò)增產(chǎn)物；將上述擴(kuò)增產(chǎn)物、不對稱連接探針組、通用引物和上述RingCap-Taq酶混合進(jìn)行PCR，純化后獲得所述用于高通量測序檢測的NK細(xì)胞多基因變異文庫；
上述RingCap-Taq酶由Taq酶、DNA連接酶和DNA末端修飾酶組成。
2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于：所述基本擴(kuò)增引物組由KIT-1-F、KIT-1-R、KIT-2-F、KIT-2-R、KIT-3-F、kiT-3-R、KIT-4-F、KIT-4-R、kIT-5-F、kIT-5-R、PDG-1-F、PDG-1-R、PDG-2-F、PDG-2-R、PDG-3-F、PDG-3-R、KRAS-1-F、KRAS-1-R、KRAS-2-F、KRAS-2-R、KRAS-3-F、KRAS-3-R、P53-1-F、P53-1-R、P53-2-F、P53-2-R、P53-3-F、P53-3-R、P53-4-F、P53-4-R、P53-5-F、P53-5-R、P53-6-F、P53-6-R、P53-7-F、P53-7-R、P53-8-F、P53-8-R、JAK3-1-F、JAK3-1-R、STAT3-1-F、STAT3-1-R、STAT3-2-F、STAT3-2-R、STAT5B-1-F、STAT5B-1-R、PI-1-F、PI-1-R、PI-2-F和PI-2-R組成。
3.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于：所述不對稱連接探針組由Ion-BC1-FF、Ion-BC1-FR、Ion-BC1-RF、Ion-BC1-RR、Ion-BC2-FF、Ion-BC2-FR、Ion-BC2-RF、Ion-BC2-RR、Ion-BC3-FF、Ion-BC3-FR、Ion-BC3-RF、Ion-BC3-RR、Ion-BC4-FF、Ion-BC4-FR、Ion-BC4-RF、Ion-BC4-RR、Ion-BC5-FF、Ion-BC5-FR、Ion-BC5-RF、Ion-BC5-RR、Ion-BC6-FF、Ion-BC6-FR、Ion-BC6-RF、Ion-BC6-RR、Ion-BC7-FF、Ion-BC7-FR、Ion-BC7-RF、Ion-BC7-RR、Ion-BC8-FF、Ion-BC8-FR、Ion-BC8-RF和Ion-BC8-RR組成。
4.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于：所述通用引物為C-primer，其序列如SEQ ID 83所示。
5.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于：所述RingCap-Taq酶由Taq酶、DNA連接酶和DNA末端修飾酶組成，比例0.8～1.2∶0.8～1.2∶0.8～1.2。
6.如權(quán)利要求5所述的構(gòu)建方法，其特征在于：所述RingCap-Taq酶由Taq酶、DNA連接酶和DNA末端修飾酶組成，比例1∶1∶1。
7.一種基于權(quán)利要求1至6中任一權(quán)利要求所述的構(gòu)建方法的試劑盒，其特征在于：包括：
一DNA富集反應(yīng)組件，由所述基本擴(kuò)增引物組組成；
一RingCap-Taq酶，由Taq酶、DNA連接酶和DNA末端修飾酶組成；
一Barcode1～8反應(yīng)組件，由所述不對稱連接探針組和通用引物組成，具體包括連在一起的八個反應(yīng)孔，每個反應(yīng)孔分別裝有對應(yīng)的標(biāo)簽序列的不對稱連接探針和通用引物；
一陽性質(zhì)控品；
和一陰性質(zhì)控品。