本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種阿維巴坦鈉關(guān)鍵中間體的手性異構(gòu)體的方法，具體涉及(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的手性異構(gòu)體的制備方法。

背景技術(shù)：

阿維巴坦鈉(Avibactam Sodium，NXL-104)屬于二氮雜雙環(huán)辛酮化合物，由Forest Lab和阿斯利康聯(lián)合開發(fā)，2014年2月阿特維斯收購(gòu)Forest Lab，取得開發(fā)權(quán)，2015年2月25日頭孢他啶與阿維巴坦鈉復(fù)方制劑AVYCAZ批準(zhǔn)在美國(guó)上市。阿維巴坦鈉是目前最被看好的新型β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，與三種已上市的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑相比，具有長(zhǎng)效和與酶可逆性共價(jià)結(jié)合，且不會(huì)誘導(dǎo)β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生。

頭孢他啶是一種頭孢霉菌素類抗微生物藥，對(duì)某些革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌有體外活性。頭孢他啶的殺細(xì)菌作用是通過(guò)與青霉素結(jié)合蛋白(PBPs)結(jié)合介導(dǎo)的。阿維巴坦鈉是一種非β內(nèi)酰胺類的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，滅活有些β-內(nèi)酰胺酶和保護(hù)頭孢他啶免受某些β-內(nèi)酰胺酶降解。

文獻(xiàn)所報(bào)道的阿維巴坦鈉合成主要是以N-叔丁氧羰基-L-焦谷氨酸乙酯為起始物料，經(jīng)開環(huán)、氯代、環(huán)合、還原、拆分成鹽得關(guān)鍵中間體(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，草酸鹽經(jīng)酰胺化、環(huán)合、脫保護(hù)、成磺酸四丁基乙酸銨鹽、最后經(jīng)鈉鹽交換反應(yīng)得到阿維巴坦鈉。(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽為阿維巴坦合成的關(guān)鍵中間體，其結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)手性碳原子，存在三個(gè)手性異構(gòu)體：分別為(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽、(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽、(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽。

在藥物開發(fā)過(guò)程中，中間體的質(zhì)量控制是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立需要一定量的對(duì)照品，所以雜質(zhì)的合成方法開發(fā)是藥物研究的一項(xiàng)重要任務(wù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于此，本發(fā)明的目的是通過(guò)關(guān)鍵的分離和精制方法，獲得阿維巴坦關(guān)鍵中間體(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽中的兩個(gè)手性異構(gòu)體(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽和(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，為中間體的質(zhì)量控制提供可靠的雜質(zhì)對(duì)照品。

為了達(dá)到上述的目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種阿維巴坦鈉關(guān)鍵中間體的手性異構(gòu)體的制備方法，所述阿維巴坦鈉關(guān)鍵中間體為(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，所述手性異構(gòu)體為(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，所述方法包括以下步驟：

S1、將合成(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽后分離得到的母液減壓濃縮成粘稠物1；

S2、粘稠物1中加入乙酸乙酯和純化水，調(diào)節(jié)pH值至堿性，分去水層，有機(jī)相干燥、過(guò)濾、濃縮得粘稠物2；

S3、粘稠物2經(jīng)柱層析分離得到(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物；

S4、將混合物溶于丙酮中，滴加草酸二水合物的甲醇溶液，加熱攪拌；

S5、降溫析晶，過(guò)濾除去固體；

S6、濾液加熱，再降溫析晶，過(guò)濾除去固體；

S7、將濾液濃縮后，所得粗品用丙酮和乙醇的混合液中進(jìn)行重結(jié)晶，獲得(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽精制品。

進(jìn)一步的，所述步驟S3中，包括以下步驟：

(1)粘稠物2溶于二氯甲烷中，加入200～300目柱層析硅膠拌樣，減壓蒸干，得拌樣樣品，其中，粘稠物2與拌樣硅膠質(zhì)量比為1:1～5；

(2)將200～300目柱層析硅膠加入石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，沉降，加壓將柱子壓實(shí)，將拌樣樣品加入至玻璃層析柱中，其中，粘稠物2和固定相硅膠的質(zhì)量比為1:10～50；

(3)用石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集目標(biāo)點(diǎn)并減壓蒸干，得到游離堿的混合物，其中，石油醚：乙酸乙酯的體積比為1～5:1。

進(jìn)一步的，所述步驟S4中，加熱溫度為60～65℃，草酸二水合物和游離堿的摩爾比為0.8～2:1，游離堿：丙酮：甲醇的質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:10～30:1。

進(jìn)一步的，所述步驟S5中的析晶溫度為40～50℃；所述步驟S6中，析晶溫度為30～40℃。

進(jìn)一步的，所述步驟S7中的析晶溫度為-10～10℃；粗品：丙酮：乙醇的質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:1～20:2。

一種阿維巴坦鈉關(guān)鍵中間體的手性異構(gòu)體的制備方法，所述阿維巴坦鈉關(guān)鍵中間體為(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，所述手性異構(gòu)體為(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，所述方法包括以下步驟：

S1、將合成(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽后分離得到的母液減壓濃縮成粘稠物1；

S2、粘稠物1中加入乙酸乙酯和純化水，調(diào)節(jié)pH值至堿性，分去水層，有機(jī)相干燥、過(guò)濾、濃縮得粘稠物2；

S3、粘稠物2經(jīng)柱層析分離得到(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物；

S4、將混合物溶于乙酸乙酯中，滴加草酸二水合物的甲醇溶液，加熱攪拌；

S5、降溫析晶，得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯粗品；

S6、粗品于甲苯和甲醇的混合液中加熱攪拌，趁熱過(guò)濾得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯第一次精制品；

S7、第一次精制品于乙酸乙酯和甲醇的混合液中進(jìn)行重結(jié)晶，獲得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽精制品。

進(jìn)一步的，所述步驟S3中，包括以下步驟：

(1)粘稠物2溶于二氯甲烷中，加入200～300目柱層析硅膠拌樣，減壓蒸干，得拌樣樣品，其中，粘稠物2與拌樣硅膠質(zhì)量比為1:1～5；

(2)將200～300目柱層析硅膠加入石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，沉降，加壓將柱子壓實(shí)，將拌樣樣品加入至玻璃層析柱中，其中，粘稠物2和固定相硅膠的質(zhì)量比為1:10～50；

(3)用石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集目標(biāo)點(diǎn)并減壓蒸干，得到游離堿的混合物，其中，石油醚：乙酸乙酯的體積比為1～5:1。

進(jìn)一步的，所述步驟S4中，加熱溫度為60～65℃，草酸二水合物和游離堿的摩爾比為0.8～2:1，游離堿：乙酸乙酯：甲醇的質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1；1～20:1。

進(jìn)一步的，所述步驟S5中，析晶溫度為10～50℃。

進(jìn)一步的，所述步驟S6中，過(guò)濾溫度為40～80℃，粗品：甲苯：甲醇質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:1～20:2。

進(jìn)一步的，所述步驟S7中的析晶溫度為0～50℃；第一次精制品：乙酸乙酯：甲醇的質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:1～20:2。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明通過(guò)合成的(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽母液或(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽母液為起始物料，經(jīng)濃縮、解鹽、柱層析、成鹽、精制等步驟過(guò)程分別得到(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽或(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽。本發(fā)明的制備工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，純度高，本發(fā)明制備出的手性異構(gòu)體ee％均為100％。

本發(fā)明所制備的手性異構(gòu)體雜質(zhì)，對(duì)于關(guān)鍵中間體的質(zhì)量控制，以及成品的質(zhì)量控制具有重要意義。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。

圖1為(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的HPLC圖譜；

圖2為(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的ESI-MS圖譜；

圖3為(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的¹H-NMR圖譜；

圖4為(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的HPLC圖譜；

圖5為(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的ESI-MS圖譜；

圖6為(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的¹H-NMR圖譜。

具體實(shí)施方式

應(yīng)該指出，以下詳細(xì)說(shuō)明都是示例性的，旨在對(duì)所要求的本發(fā)明提供進(jìn)一步的說(shuō)明，除非另有說(shuō)明，本發(fā)明使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。

以下結(jié)合具體實(shí)施例和附圖詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，目的是使本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)更翔實(shí)，而非限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例以及使用的方法，任何對(duì)本發(fā)明進(jìn)行同等替換、組合、改良或修飾，均包含于本發(fā)明內(nèi)。

阿維巴坦關(guān)鍵中間體(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的手性異構(gòu)體之一(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的制備，包括以下步驟：

S1、將合成(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽后分離得到的母液于40～80℃進(jìn)行減壓濃縮成粘稠物1，優(yōu)選為40～50℃。

S2、粘稠物1中加入乙酸乙酯和純化水，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至堿性，分去水層，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濃縮得游離堿粘稠物2，其中，pH為7～10，優(yōu)選為8～9。

S3、粘稠物2經(jīng)柱層析分離得到(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物，其中，包括以下步驟：

(1)粘稠物2溶于二氯甲烷中，加入200～300目柱層析硅膠拌樣，減壓蒸干，得拌樣樣品，其中粘稠物2與拌樣硅膠質(zhì)量比為1:1～5，優(yōu)選1:1～2；

(2)將200～300目柱層析硅膠加入至石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，沉降，加壓將柱子壓實(shí)，將拌樣樣品加入至玻璃層析柱中，其中粘稠物2和固定相硅膠的質(zhì)量比為1:10～50，優(yōu)選1:10～30；

(3)用石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集目標(biāo)點(diǎn)并減壓蒸干，得(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物，其中石油醚：乙酸乙酯的體積比為1～5:1，優(yōu)選2～3:1。

S4、將混合物溶于丙酮中，滴加草酸二水合物的甲醇溶液，加熱至60～65℃攪拌30分鐘，其中草酸二水合物和游離堿的摩爾比為0.8～2:1，優(yōu)選0.9～1.1:1，游離堿：丙酮：甲醇的質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:10～30:1，優(yōu)選1:15～25:1。

S5、降溫析晶，過(guò)濾除去固體，其中析晶溫度為40～50℃，優(yōu)選為40～45℃。

S6、濾液加熱，再降溫析晶，過(guò)濾除去固體，其中析晶溫度為30～40℃，優(yōu)選為30～35℃。

S7、將濾液濃縮后，所得粗品用丙酮和乙醇的混合液進(jìn)行重結(jié)晶，獲得(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽精制品，其中析晶溫度為-10～10℃，優(yōu)選0～5℃；粗品：丙酮：乙醇的質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:1～20:2，優(yōu)選1:8～12:2。

實(shí)施例1

(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的制備，包括以下步驟：

S1、將合成(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽后分離得到的母液于40～50℃減壓濃縮，得16g粘稠物1，HPLC檢測(cè)(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽和(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的質(zhì)量比為25:75。

S2、粘稠物1中加入90mL乙酸乙酯和50mL純化水，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為8～9，分去水層，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濃縮得11.8g粘稠物2。

S3、粘稠物2經(jīng)柱層析分離得到(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物，其中，包括以下步驟：

(1)粘稠物2溶解于60mL二氯甲烷中，加入15g 200～300目柱層析硅膠拌樣，減壓蒸干，得拌樣樣品；

(2)將250g 200～300目柱層析硅膠加入至1.5L二氯甲烷中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，沉降，加壓將柱子壓實(shí)，將拌樣樣品加入至玻璃層析柱中；

(3)用石油醚：乙酸乙酯的體積比＝3:1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集目標(biāo)點(diǎn)并減壓蒸干，得(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物9g。

S4、將混合物溶于180mL丙酮中，滴加草酸二水合物的甲醇溶液，其中草酸二水合物的添加量為4.4g，甲醇為9mL，加熱至60～65℃攪拌30分鐘。

S5、降溫至40～45℃析晶2小時(shí)，過(guò)濾除去固體。

S6、濾液加熱至50～60℃攪拌30分鐘，再降溫至30～35℃析晶2小時(shí)，過(guò)濾，除去固體。

S7、濾液濃縮，得粗品5g，加入丙酮和乙醇的混合液中進(jìn)行重結(jié)晶，獲得(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，包括以下步驟：

(1)將濾液濃縮后，所得粗品中加入50mL丙酮和10mL乙醇的混合液，加熱至50～60℃，維持30分鐘；

(2)降溫至0～5℃析晶4小時(shí)，過(guò)濾，所得固體于40～50℃減壓干燥得(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽3.1g，收率19.4％(以粘稠物1計(jì))，ee值100％。

所獲得(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的HPLC圖譜如圖1所示；(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的ESI-MS圖譜如圖2所示；(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的¹H-NMR圖譜如圖3所示。

ESI-MS(m/z)：279.16(M+H)

¹H-NMR(400MHz,DMSO):δ8.57(br,4H),7.36-7.29(m,5H),4.63(t,2H),4.22-4.12(m,3H),3.16-3.05(m,3H),1.93-1.77(m,2H),1.77-1.74(m,1H),1.48-1.47(m,1H),1.22(t,3H)。

實(shí)施例2

(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的制備，包括以下步驟：

S1、將合成(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽后分離得到的母液于40～50℃減壓濃縮，得23.2g粘稠物1。

S2、粘稠物1中加入120mL乙酸乙酯和70mL純化水，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為8～9，分去水層，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濃縮得16.3g粘稠物2。

S3、粘稠物2經(jīng)柱層析分離得到(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物，其中，包括以下步驟：

(1)粘稠物溶解于100mL二氯甲烷中，加入25g 200～300目柱層析硅膠拌樣，減壓蒸干，得拌樣樣品；

(2)將350g 200～300目柱層析硅膠加入至2L二氯甲烷中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，沉降，加壓將柱子壓實(shí)，將拌樣樣品加入至玻璃層析柱中；

(3)用石油醚：乙酸乙酯的體積比＝3:1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集目標(biāo)點(diǎn)并減壓蒸干，得(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物11.3g。

S4、將混合物溶于220mL丙酮中，滴加草酸二水合物的甲醇溶液，其中草酸二水合物的添加量為5.2g，甲醇為11.3mL，加熱至60～65℃攪拌30分鐘。

S5、降溫至40～45℃析晶2小時(shí)，過(guò)濾除去固體。

S6、濾液加熱至50～60℃攪拌30分鐘，再降溫至30～35℃析晶2小時(shí)，過(guò)濾，除去固體。

S7、濾液濃縮得粗品6.3g，加入丙酮和乙醇的混合液中進(jìn)行重結(jié)晶，獲得(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，其中，包括以下步驟：

(1)將濾液濃縮后，所得粗品加入63mL的丙酮和12.6mL乙醇混合液，加熱至50～60℃，維持30分鐘；

(2)降溫至0～5℃析晶4小時(shí)，過(guò)濾，所得固體于40～50℃減壓干燥得(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽4.0g，收率17.2％(以粘稠物1計(jì))，ee值100％。

阿維巴坦關(guān)鍵中間體(2S,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的手性異構(gòu)體之二(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的制備，包括以下步驟：

S1、將合成(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽后分離得到的母液于40～80℃進(jìn)行減壓濃縮成粘稠物1，優(yōu)選為40～50℃。

S2、粘稠物中加入乙酸乙酯和純化水，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至堿性，分去水層，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濃縮得粘稠物2，其中pH為7～10，優(yōu)選為8～9。

S3、粘稠物2經(jīng)柱層析分離得到(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物，其中，包括以下步驟：

(1)粘稠物2加入200～300目柱層析硅膠拌樣，減壓蒸干，得拌樣樣品，其中粘稠物2與拌樣硅膠質(zhì)量比為1:1～5，優(yōu)選1:1～2；

(2)將200～300目柱層析硅膠加入至石油醚中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，沉降，加壓將柱子壓實(shí)，將拌樣樣品加入至玻璃層析柱中，其中粘稠物2和固定相硅膠的質(zhì)量比為1:10～50，優(yōu)選1:10～30；

(3)用石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集目標(biāo)點(diǎn)并減壓蒸干，得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物，其中石油醚：乙酸乙酯的體積比為1～5:1，優(yōu)選2～3:1。

S4、將混合物溶于乙酸乙酯中，滴加草酸二水合物的甲醇溶液，加熱至60～65℃攪拌30分鐘，其中草酸二水合物和游離堿的摩爾比為0.8～2:1，優(yōu)選0.9～1.1:1；游離堿：乙酸乙酯：甲醇的質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:1～20:1，優(yōu)選1:8～12:1。

S5、降溫析晶，過(guò)濾得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽粗品，其中析晶溫度為10～50℃，優(yōu)選為20～30℃。

S6、粗品于甲苯-甲醇中加熱攪拌一定時(shí)間，趁熱過(guò)濾得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯第一次精制品，其中過(guò)濾溫度為40～80℃，優(yōu)選為50～60℃；其中粗品：甲苯：甲醇質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:1～20:2，優(yōu)選1:10:2；

S7、第一次精制品再于乙酸乙酯和甲醇的混合液中進(jìn)行重結(jié)晶，獲得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，其中第一次精制品：乙酸乙酯：甲醇的質(zhì)量體積比(g/mL/mL)為1:1～20:2，優(yōu)選1:8～12:2；其中析晶溫度為0～50℃，優(yōu)選20～30℃。

實(shí)施例3

(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的制備，包括以下步驟：

S1、將合成(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽后分離得到的母液于40～50℃減壓濃縮，得18.1g粘稠物1，HPLC檢測(cè)(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽和(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽質(zhì)量比為20:80。

S2、粘稠物1中加入150mL乙酸乙酯和100mL純化水，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為8～9，分去水層，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濃縮得12.8g粘稠物2。

S3、粘稠物2經(jīng)柱層析分離得到(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物，其中，包括以下步驟：

(1)粘稠物溶解于80mL二氯甲烷中，加入20g 200～300目柱層析硅膠拌樣，減壓蒸干，得拌樣樣品；

(2)將250g 200～300目柱層析硅膠加入至1.8L二氯甲烷中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，沉降，加壓將柱子壓實(shí)，將拌樣樣品加入至玻璃層析柱中；

(3)用石油醚：乙酸乙酯的體積比＝3:1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集目標(biāo)點(diǎn)并減壓蒸干，得(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物8g。

S4、將混合物溶于80mL乙酸乙酯中，滴加草酸二水合物的甲醇溶液，其中草酸二水合物的添加量為3.6g，甲醇為8mL，加熱至60～65℃攪拌30分鐘。

S5、降溫至20～30℃析晶6小時(shí)，得(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽粗品9.5g。

S6、粗品加入至甲苯(95mL)-甲醇(19mL)的混合液中，加熱至50～60℃攪拌2小時(shí)，趁熱過(guò)濾、干燥得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯第一次精制品6.2g。

S7、將第一次精制品加入至乙酸乙酯和甲醇的混合液中進(jìn)行重結(jié)晶，獲得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，其中，包括以下步驟：

(1)第一次精制品加入至62mL的乙酸乙酯和12.4mL甲醇混合液中，加熱至50～60℃，維持30分鐘；

(2)降溫至20～30℃析晶4小時(shí)，過(guò)濾，所得固體于40～50℃減壓干燥得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽4.7g，收率26.0％(以粘稠物1計(jì))，ee值100％。

所獲得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的HPLC圖譜如圖4所示；(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的ESI-MS圖譜如圖5所示；(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的¹H-NMR圖譜如圖6所示。

ESI-MS(m/z)：279.16(M+1)

¹H-NMR(400MHz,DMSO):δ7.36-7.29(m,5H),6.98(br,4H),4.62(t,2H),4.20-4.14(m,2H),3.98-3.97(m,1H),3.07(d,2H),3.02-2.98(m,1H),1.89-1.82(m,2H),1.73-1.72(m,1H),1.48-1.47(m,1H),1.21(t,3H)。

實(shí)施例4

(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽的制備，包括以下步驟：

S1、將合成的(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽母液于40～50℃減壓濃縮，得10.2g粘稠物1。

S2、粘稠物1中加入80mL乙酸乙酯和50mL純化水，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值為8～9，分去水層，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、濃縮得7.2g粘稠物2。

S3、粘稠物2經(jīng)柱層析分離得到(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物，其中，包括以下步驟：

(1)粘稠物溶解于50mL二氯甲烷中，加入10g 200～300目柱層析硅膠拌樣，減壓蒸干，得拌樣樣品；

(2)將160g 200～300目柱層析硅膠加入至1.8L二氯甲烷中，攪拌均勻后加入至玻璃層析柱中，沉降，加壓將柱子壓實(shí)，將拌樣樣品加入至玻璃層析柱中；

(3)用石油醚：乙酸乙酯的體積比＝3:1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集目標(biāo)點(diǎn)并減壓蒸干，得(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿和(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯游離堿的混合物5.2g。

S4、將混合物溶于52mL乙酸乙酯中，滴加草酸二水合物的乙醇溶液，其中草酸二水合物的添加量為2.4g，乙醇為5.2mL，加熱至60～65℃攪拌30分鐘。

S5、降溫至20～30℃析晶6小時(shí)，過(guò)濾得(2R,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽固體6.2g。

S6、粗品加入至甲苯(62mL)-甲醇(12.4mL)的混合液中，加熱至50～60℃攪拌2小時(shí)，趁熱過(guò)濾、干燥得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯第一次精制品3.8g。

S7、將第一次精制品加入至乙酸乙酯和甲醇的混合液中進(jìn)行重結(jié)晶，獲得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽，其中，包括以下步驟：

(1)第一次精制品加入至38mL乙酸乙酯和7.6mL甲醇混合液中，加熱至50～60℃，維持30分鐘；

(2)降溫至20～30℃析晶4小時(shí)，過(guò)濾，所得固體于40～50℃減壓干燥得(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽2.8g，收率27.5％(以粘稠物1計(jì))，ee值100％。

本發(fā)明的制備工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，通過(guò)本發(fā)明所述的方法制備的阿維巴坦鈉關(guān)鍵中間體的手性異構(gòu)體(2S,5S)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽或(2R,5R)-5-(芐氧氨基)-哌啶-2-甲酸乙酯草酸鹽純度高ee值為100％。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。