相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2015年9月8日提交的美國臨時(shí)專利申請no.62/215,401的優(yōu)先權(quán)，其全部內(nèi)容都以整體援引加入本文。發(fā)明背景免疫球蛋白富集的人血漿用于治療許多病征以及用于治療某些先天性缺陷。通常，通過從具有不同血型的多個(gè)供血者匯集血漿而獲得人血漿。血型可以分為四種主要的的類型。a血型-在紅細(xì)胞上僅具有a抗原(以及血漿中具有b抗體)；b血型-在紅細(xì)胞上僅具有b抗原(以及血漿中具有a抗體)；ab血型-在紅細(xì)胞上具有a和b抗原(但在血漿中既不具有a抗體也不具有b抗體)；和o血型-在紅細(xì)胞上既不具有a抗原也不具有b抗原(a和b抗體都在血漿中)。重要的是，具有特定血型抗原如a的紅血細(xì)胞從來都不會與結(jié)合此抗原的抗體如抗a抗原抗體接觸，因?yàn)榕c此類抗體接觸會導(dǎo)致其紅血細(xì)胞的凝集和/或溶血，這甚至?xí)?dǎo)致死亡。因此，具有a血型的受血者僅可接受來自具有a血型或ab血型的供血者的血漿；具有b血型的受血者僅可接受來自具有b血型或ab血型的供血者的血漿；具有ab血型的受血者僅可接受來自具有ab血型的供血者的血漿；而具有o血型的受血者被認(rèn)為是萬能受血者。不同血型的相容性對于安全的輸血和器官移植的開發(fā)是重要的。然而，在血液衍生的治療藥物的情況中，其中依賴于匯集來自很多人的血漿以獲得蛋白組分的恒定均值，此時(shí)確保受血者不會接受不相容的血漿將會是特別具有挑戰(zhàn)性的。已經(jīng)開發(fā)了很多方法來選擇性地從血漿中去除血型抗體，包括經(jīng)福爾馬林處理的熱處理紅細(xì)胞(voxsang.,1967,12,75-77)、經(jīng)熱處理的具有a和b抗原的大腸桿菌(escherichiacoli)o86:b7(transfusion,1972,12,98-102)、紅細(xì)胞基質(zhì)粉末、源自免疫吸附劑的紅細(xì)胞基質(zhì)抗原(chemicalsoc.rev.,1978,7,423-452)、和合成的血型a和b免疫吸附劑(rev.fr.transfus.immunohematol.1981,24,3,281-287)。已經(jīng)開發(fā)了固相層析免疫吸附劑作為商用層析介質(zhì)，以用以處理源自產(chǎn)物的血液以及也用于在輸血至abo不相容受血者之前對于供血者的準(zhǔn)備。利用合成的免疫吸附劑的一個(gè)關(guān)鍵優(yōu)勢在于，它們是合成構(gòu)建的而不是源自天然來源因而在批次與批次之間會具有更一致的性質(zhì)。目前，一些具有血型a抗原(a-抗原)配體和/或血型b抗原(b-抗原)配體的商業(yè)可用的層析介質(zhì)包括glycosorb-abo裝置(glycorextransplantationab)。此種glycosorb裝置用于將器官供者準(zhǔn)備為用來移植至具有不相容血型的患者。所述glycosorb-abo裝置中的血型抗原配體從器官供體的血液中結(jié)合并去除血型a抗原抗體(抗-a)和血型b抗原抗體(抗-b)，由此降低器官排斥的風(fēng)險(xiǎn)。另外，pct公開no.wo2015/001277討論了結(jié)合抗a或抗b抗體的親和層析基質(zhì)。發(fā)明概述本文所述的實(shí)施方案涉及新型的層析介質(zhì)，其用于從樣品(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物或ivig)中去除抗a或抗b抗體。相對于此前描述的層析介質(zhì)，本文所述的層析介質(zhì)對于去除抗a或抗b抗體具有若干優(yōu)勢，其在于所述介質(zhì)在酸性和/或堿性條件下在延長的時(shí)間段中保持穩(wěn)定。另外，此種介質(zhì)可以用包含磷酸、乙酸和苯甲醇的溶液來消毒，而不會損失其去除抗a或抗b抗體的能力。在本文所描述的一些實(shí)施方案中，提供了用于從樣品中去除抗-a抗體的層析介質(zhì)，其中所述介質(zhì)包含其上附著有血型a抗原配體的固體支持物，其中所述配體以至少0.8mg/ml固體支持物的配體載荷附著至所述固體支持物，其中所述層析介質(zhì)在酸性和堿性條件下都穩(wěn)定。在特定的實(shí)施方案中，所述配體載荷為至少1mg/ml固體支持物或至少1.5mg/ml固體支持物或至少1.65mg/ml固體支持物，并且其中所述層析介質(zhì)在酸性和堿性條件下都穩(wěn)定。在另一實(shí)施方案中，提供了用于從樣品中去除抗-b抗體的層析介質(zhì)，其中所述介質(zhì)包含其上附著有血型b抗原配體的固體支持物，其中所述配體以至少0.8mg/ml固體支持物的配體載荷附著至所述固體支持物，其中所述層析介質(zhì)在酸性和/或堿性條件下都穩(wěn)定。在特定的實(shí)施方案中，所述配體載荷為至少1.0mg/ml固體支持物或至少1.20mg/ml固體支持物并且其中所述層析介質(zhì)在酸性和堿性條件下都穩(wěn)定。在另一實(shí)施方案中，提供了用于從樣品中去除抗-a和抗-b抗體二者的層析介質(zhì)，其中所述層析介質(zhì)包含其上附著有血型a抗原配體和血型b抗原配體的固體支持物，每種均為至少0.8mg/ml固體支持物的配體載荷。在本文所描述的各個(gè)實(shí)施方案中，所述固體支持物包含選自以下組的聚合物：聚乙烯醚、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺和聚碳酸酯。在特定的實(shí)施方案中，所述固體支持物是基于聚乙烯醚的固體支持物。在一些實(shí)施方案中，所述固體支持物是珠的形式。在一些實(shí)施方案中，所述血型a抗原配體包含以下結(jié)構(gòu)：在一些實(shí)施方案中，所述血型b抗原配體包含以下結(jié)構(gòu)：在本文所描述的一些實(shí)施方案中，所述層析介質(zhì)包含血型a抗原配體和/或血型b抗原配體(用還原胺化化學(xué)附著至固體支持物)。在本文所描述的其它實(shí)施方案中，所述層析介質(zhì)包含血型a抗原配體和/或血型b抗原配體(用聚合物觸角(tentacle)化學(xué)附著至固體支持物)在一些實(shí)施方案中，所述層析介質(zhì)包裝在裝置中，例如層析柱。在層析介質(zhì)之外，本文所述的實(shí)施方案還涉及使用本文所描述的層析介質(zhì)從樣品(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物、或ivig添料)中去除抗a和/或抗b抗體的方法。在一些實(shí)施方案中，提供了從樣品中去除抗-a抗體或抗-b抗體的方法，其中所述方法包括以下步驟：提供包含起始已知量的抗-a抗體或抗-b抗體的樣品；在適宜介質(zhì)結(jié)合抗體的條件下，如果所述樣品含有抗-a抗體則將所述樣品與含有血型a抗原配體的層析介質(zhì)接觸，或者如果所述樣品含有抗-b抗體則將所述樣品與含有血型b抗原配體的層析介質(zhì)接觸；回收沒有結(jié)合至層析介質(zhì)的樣品部分；和測量沒有結(jié)合至層析介質(zhì)的樣品部分中抗-a抗體或抗-b抗體的量，其中沒有結(jié)合至層析介質(zhì)的樣品部分中抗-a抗體或抗-b抗體的量相對于樣品中抗a或抗b抗體的起始量降低了至少50％。本文所述的實(shí)施方案還涉及從含有抗-a和抗-b抗體的樣品中去除該二者的方法。在一些實(shí)施方案中，本文所述的方法利用順次使用本文所述的層析介質(zhì)。換句話說，首先將樣品與含有血型a抗原配體的本文所述層析介質(zhì)接觸，隨后是含有血型b抗原配體的本文所述層析介質(zhì)；又或者，首先將樣品與含有血型b抗原配體的本文所述層析介質(zhì)接觸，隨后是含有血型a抗原配體的本文所述介質(zhì)。在其它實(shí)施方案中，將樣品與兩種介質(zhì)的混合物接觸，其中所述在單一步驟中去除抗-a和抗-b抗體二者。在另外的實(shí)施方案中，本文所述的方法涉及使用這樣的層析介質(zhì)，其包括以至少0.8mg/ml的配體載荷附著至相同固體支持物的血型a抗原和血型b抗原配體。本文還描述了在使用之后將含有本文所述的層析介質(zhì)的層析柱消毒的方法，其中所述方法包括將所述柱與包含磷酸、乙酸和苯甲醇(pab)的溶液接觸至少三小時(shí)，并且其中所述層析介質(zhì)包含固定至固體支持物上的血型a抗原配體和/或血型b抗原配體，以及另外其中所述層析介質(zhì)在暴露于pab之后還保留其去除抗a和/或抗b抗體的能力。另外，本文所述的實(shí)施方案涉及清潔含有本文所述層析介質(zhì)的層析柱的方法，其中使用酸或堿溶液。在一些實(shí)施方案中，提供了清潔包含介質(zhì)的層析柱的方法，其中所述介質(zhì)含有固定至固體支持物上的血型a抗原配體和/或血型b抗原配體，其中所述方法利用在純化循環(huán)之間將含有層析介質(zhì)的層析柱與酸或堿溶液接觸，其中所述層析介質(zhì)即使在延長暴露于酸或堿溶液之后(例如，50小時(shí)或更久)仍保持其去除抗a或抗b抗體的能力。在一些實(shí)施方案中，所述介質(zhì)在2個(gè)純化循環(huán)之后、或5個(gè)純化循環(huán)之后、或10個(gè)純化循環(huán)之后、或15個(gè)純化循環(huán)之后、或20個(gè)純化循環(huán)之后、或25個(gè)純化循環(huán)之后、或30個(gè)純化循環(huán)之后、或35個(gè)純化循環(huán)之后、或40個(gè)純化循環(huán)之后、或45個(gè)純化循環(huán)之后、或50個(gè)純化循環(huán)之后、或超過50個(gè)純化循環(huán)之后、或者甚至超過100個(gè)純化循環(huán)之后，保持其去除抗a或抗b抗體的能力，其中在純化循環(huán)之間用酸或堿溶液清潔所述層析柱，并且典型的循環(huán)可以由暴露于清潔劑30分鐘組成。本文所述的介質(zhì)也可用于從澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物添料中純化單克隆抗-aigm或單克隆抗-b抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了從澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物添料純化單克隆抗-aigm抗體的方法，其中所述方法包括以下步驟：(a)提供含有單克隆抗-aigm抗體的澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物添料；(b)將所述添料與以至少0.8mg/ml的配體載荷具有附著至固體支持物的血型a抗原配體的介質(zhì)溫育，以促進(jìn)抗-aigm抗體結(jié)合至介質(zhì)；(c)用具有3.5-9.0范圍的ph的水成緩沖液洗滌所述介質(zhì)；(d)用具有2.0-3.0范圍的ph的緩沖液從所述介質(zhì)洗脫抗-aigm抗體，由此獲得洗脫物；和(e)回收洗脫物中純化的抗-aigm抗體。在其它實(shí)施方案中，提供了從澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物添料純化單克隆抗-bigm抗體的方法，其中所述方法包括以下步驟：(a)提供含有單克隆抗-bigm抗體的澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物添料；(b)將所述添料與以至少0.8mg/ml的配體載荷具有附著至固體支持物的血型b抗原配體的介質(zhì)溫育，以促進(jìn)抗-bigm抗體結(jié)合至介質(zhì)；(c)用具有3.5-9.0范圍的ph的水成緩沖液洗滌所述介質(zhì)；(d)用具有2.0-3.0范圍的ph的緩沖液從所述介質(zhì)洗脫抗-bigm抗體，由此獲得洗脫物；和(e)回收洗脫物中純化的抗-bigm抗體。在一些實(shí)施方案中，所述介質(zhì)包裝在層析柱中，并且含有抗-aigm單克隆抗體或抗-bigm抗體澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物添料流經(jīng)所述柱。附圖簡述圖1是代表性的寡糖配體，其結(jié)合抗a抗原抗體。圖2是代表性的寡糖配體，其結(jié)合抗-b抗原抗體。發(fā)明詳述近來對于用來從靜脈注射用免疫球蛋白(ivig)中去除抗-a和抗-bigg抗體的合成免疫吸附劑層析介質(zhì)的應(yīng)用有著日益增加的興趣，所述注射用免疫球蛋白(ivig)由提取自匯集的血漿的濃縮多價(jià)igg抗體組成，所述匯集的血漿得自若干供血者，有時(shí)可多達(dá)上千或者超過上千的供血者。然而，大多數(shù)商業(yè)可用的層析介質(zhì)收到其可以使用的操作條件的限制。本文所述的實(shí)施方案涉及用于從樣品中去除抗a或抗b抗體的新型層析介質(zhì)。本文所述的層析介質(zhì)與此前描述的層析介質(zhì)相比具有若干優(yōu)勢。例如，所述層析介質(zhì)可用于大規(guī)模操作，其中所述介質(zhì)可以在大范圍的ph條件下容易地洗脫和原處(inplace)清潔多次，而不損失其從樣品(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物、或ivig添料)中去除抗a或抗b抗體的能力。另外，用于本文所述層析介質(zhì)的載荷條件可跨越3.5-9的ph范圍并且洗脫條件可以跨越2-4的ph范圍。因?yàn)楸疚乃龅膶游鼋橘|(zhì)可以在廣闊范圍的ph條件下使用、于原處清潔以及消毒，它們在操作者使用所述介質(zhì)時(shí)提供了操作條件上很大的靈活性。本文所述的層析介質(zhì)可以使用磷酸-乙酸-苯甲醇(pab)緩沖液進(jìn)行消毒，該緩沖液此前未有描述可于原處清潔可用于去除抗-a和抗-b抗體的介質(zhì)。如本文的實(shí)施例所證實(shí)的，發(fā)現(xiàn)了本文所述的層析介質(zhì)即使在暴露于pab達(dá)150小時(shí)后仍保持其性能。本發(fā)明至少是基于令人吃驚的而且出乎意料的以下發(fā)現(xiàn)：可用于從樣品中去除抗a或抗b抗體的層析介質(zhì)可以用酸和堿溶液清潔。為使本文公開的實(shí)施方案可以更容易地理解，首先對某些術(shù)語進(jìn)行了定義。另外的定義在發(fā)明詳述的各處進(jìn)行說明。i.定義術(shù)語“結(jié)合能力”是指包裝在柱中并繼而在適宜條件下運(yùn)行的給定體積介質(zhì)所結(jié)合的分子的量。任何介質(zhì)的結(jié)合能力都高度依賴于所處的條件。一般而言，樣品的流速越低，結(jié)合能力越高。隨著流速接近零，結(jié)合能力達(dá)到可用能力的最大值。本文所述的層析介質(zhì)的結(jié)合能力是基于抗a或抗b抗體的量，所述層析介質(zhì)在設(shè)定的流速可以結(jié)合每體積的介質(zhì)。未經(jīng)適當(dāng)?shù)那鍧嵑拖?，層析介質(zhì)(包括親和層析介質(zhì))的結(jié)合能力，通常會跌至低于初始值。另外，層析介質(zhì)一般在暴露于酸或堿溶液后趨向于損失結(jié)合能力。當(dāng)結(jié)合能力低于期望值時(shí)，顯著量的本應(yīng)被介質(zhì)結(jié)合的分子可“突破”、或與流出部分共同洗脫，這是非常不期望的。本文所述的實(shí)施方案提供了用于從樣品(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物和ivtg添料)中去除抗a和/或抗b抗體的親和層析介質(zhì)，其即使在酸性或堿性條件下清潔后或者用pab消毒后仍會保持其結(jié)合能力。術(shù)語“靜態(tài)結(jié)合能力”定義為由層析介質(zhì)(例如，本文所述的親和層析介質(zhì))所吸收的蛋白質(zhì)(例如，在此情形中為抗a和/或抗b抗體)的質(zhì)量除以所使用的層析介質(zhì)的體積。用于測量層析介質(zhì)靜態(tài)結(jié)合能力的示例性方法如下。在將層析介質(zhì)與已知濃度的蛋白溶液接觸后，使該溶液與層析介質(zhì)溫育以促進(jìn)蛋白質(zhì)結(jié)合至層析介質(zhì)(例如，在此情形中為抗a和/或抗b抗體)。溫育時(shí)間可以變化(例如，5分鐘至72小時(shí))并且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定，例如，通過測量周期性地測量上清中蛋白的濃度(例如，通過在280nm處測量光吸收)直至上清中的濃度不再有可測量的變化。一旦結(jié)合至層析介質(zhì)的蛋白質(zhì)與溶液中的蛋白質(zhì)達(dá)到平衡，再一次測量上清中蛋白溶液的濃度。繼而通過蛋白的起始量(溫育之前)減去上清中蛋白的量(溫育之后)，再除以所使用的層析介質(zhì)的體積來測量靜態(tài)結(jié)合能力。特定層析介質(zhì)的靜態(tài)結(jié)合能力一般會受到蛋白溶液組成的影響，包括以下的一或多種因素：例如，蛋白質(zhì)的濃度、所使用的層析介質(zhì)的量、溶液中其它組分的濃度(鹽、有機(jī)分子、緩沖液)、溶液的ph和導(dǎo)電性。其也會受到蛋白溶液溫度的影響。所有這些變量一般都會保持恒定，以便可以比較兩種不同的層析介質(zhì)的靜態(tài)結(jié)合能力。術(shù)語“靜態(tài)結(jié)合能力”也可以稱為“飽和結(jié)合能力”或者“最大結(jié)合能力”?？梢酝ㄟ^使?jié){液中的層析介質(zhì)沉淀至容器或柱的底部而獲得與層析介質(zhì)接觸的樣品的上清。可以通過將層析介質(zhì)的漿液離心或者通過震動來使所述沉淀過程加速。繼而可以通過由移液管、注射器或者泵轉(zhuǎn)移至分離的容器來將所述上清溶液與所述層析介質(zhì)分離。在一些實(shí)施方案中，也可以在于樣品溫育之后，通過膜或者多孔材料過濾層析介質(zhì)的漿液來獲得所述上清。術(shù)語“動態(tài)結(jié)合能力”定義為，在層析柱中存在的蛋白質(zhì)溶液的濃度達(dá)到某濃度(通常是起始濃度的預(yù)定的百分比)時(shí)的節(jié)點(diǎn)，含有本文所述層析介質(zhì)的層析柱在流動條件下所結(jié)合的蛋白質(zhì)(例如，在此情形中為抗a和/或抗b抗體)的量。在實(shí)踐中，此預(yù)定百分比傾向?yàn)槠鹗紳舛鹊拇蠹s10％。繼而將蛋白的此質(zhì)量除以層析柱中層析介質(zhì)的體積。層析介質(zhì)的動態(tài)結(jié)合能力一般會受到所使用的蛋白溶液組成的影響，包括以下的一或多種因素：例如，蛋白質(zhì)的濃度、溶液中其它組分的濃度(鹽、有機(jī)分子、緩沖液)、溶液的ph和導(dǎo)電性。動態(tài)結(jié)合能力還可以受到柱進(jìn)行裝載時(shí)的溫度的影響以及受到蛋白溶液裝載至柱上時(shí)的流速的影響。降低蛋白質(zhì)溶液至層析柱中的流速會提高所測量的動態(tài)結(jié)合能力。相反，提高蛋白質(zhì)溶液至層析柱中的流速會降低所測量的動態(tài)結(jié)合能力。動態(tài)結(jié)合能力不應(yīng)超過靜態(tài)結(jié)合能力，因?yàn)閷游鼋橘|(zhì)的動態(tài)能力受到質(zhì)量遷移整體速度的限制。術(shù)語“樣品”定義為含有至少一種要結(jié)合至本文所述層析介質(zhì)的目標(biāo)蛋白質(zhì)(例如，在此情形中為抗a和/或抗b抗體)的溶液。在一些實(shí)施方案中，所述目標(biāo)蛋白質(zhì)是抗體或者免疫球蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白是血型a抗原抗體(也即，抗-a抗體)。在其它實(shí)施方案中，所述免疫球蛋白是血型b抗原抗體(也即，抗-b抗體)。樣品的實(shí)例包括但不限于：血液、血漿、血漿衍生物、血液制品、靜脈注射用免疫球蛋白添料(ivig或ivig添料)。術(shù)語“去除”如本文所用是指在樣品與本文所述的層析介質(zhì)接觸之后，所述樣品中存在的抗a或抗b抗體的量的實(shí)質(zhì)性降低。在一些實(shí)施方案中，抗a或抗b抗體的量與起始量相比降低至少50％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少95％、或超過95％。可以使用本領(lǐng)域已知的或者本文所描述的那些方法，來測量與本文所述的層析介質(zhì)接觸之前和之后的抗a和/或抗b抗體的量。例如，在與本文所述的層析介質(zhì)溫育之前和之后，可以使用凝集測定來測量樣品中抗a或抗b抗體量，例如，europeanpharmacopoeia(2.6.20)中所描述的直接coombs測試(dct)和間接coombs測試(ict)。然而，dct和ict都具有高度的可變性并且難以標(biāo)準(zhǔn)化(thorpesjetal.,voxsanguinis2009,97,160–168)。如本文所述，在用本文所述的層析介質(zhì)純化后，使用流式細(xì)胞術(shù)來測量從樣品(例如，ivig添料)中所去除的抗a或抗b抗體的量。使用紅血細(xì)胞來捕獲血型抗體的流式細(xì)胞術(shù)方法在文獻(xiàn)中有很好的記載(christenssonetal.,transfusion1996；36:50-505,dhainautetal.,2013；104:115–126)。如本文所述，將ivig樣品與a型或b型紅血細(xì)胞溫育給定的時(shí)間，深入洗滌，并用熒光標(biāo)記的次級抗體(f(ab’)2山羊抗-人iggh+l,jacksonimmunoresearch)染色。將樣品稀釋至對流式細(xì)胞術(shù)測量最佳的濃度。通過流式細(xì)胞儀(guava5ht,emdmillipore)評估樣品的平均熒光強(qiáng)度(mfi)。凈mfi用于比較在與含有血型a抗原配體或血型b抗原配體的本文所述層析介質(zhì)接觸之前和之后、以及暴露于或未暴露于酸性或堿性條件時(shí)，樣品(例如，ivig添料)中的抗-a或抗-b。通過比較流出液(或上清)中抗a或抗b抗體的水平與樣品中抗a或抗b抗體的水平，來計(jì)算抗a或抗b抗體的去除百分比。術(shù)語“酸穩(wěn)定性”定義為，即使在暴露于具有低ph(通常低于4)的溶液50小時(shí)后，層析介質(zhì)從樣品中去除實(shí)質(zhì)性百分比的雜質(zhì)的能力(例如，超過50％或超過60％或超過70％或超過80％或超過90％或更高的抗a和/或抗b抗體去除)。酸穩(wěn)定的層析介質(zhì)可以在酸性條件下洗脫/清潔和/或消毒。不是酸穩(wěn)定的那些層析介質(zhì)在暴露于酸性條件之后，一般在去除實(shí)質(zhì)性百分比的雜質(zhì)(也即，在此情形中為抗a和/或抗b抗體)時(shí)表現(xiàn)出能力降低。層析介質(zhì)通常用酸性溶液洗脫和清潔。例如，0.15m磷酸或0.3％v/v鹽酸是常用的清潔劑。示例性的洗脫溶液包括，例如，0.1m甘氨酸,ph2.0；0.1m甘氨酸,ph2.2；0.1m甘氨酸,ph2.5；0.1m甘氨酸,ph2.7；和0.1m甘氨酸,ph3.0。然而，大多數(shù)商業(yè)可得的介質(zhì)在暴露于此類條件后趨向于損失其從樣品中去除雜質(zhì)的能力。本文所述的層析介質(zhì)即使在延長的暴露于酸性條件之后(也即，即使在50小時(shí)之后或者更久)仍保持其從樣品中去除抗-a和抗-b抗體的能力，也即，它們是酸穩(wěn)定的?？梢酝ㄟ^將介質(zhì)暴露于酸性溶液特定的時(shí)間段然后再評估其相對于對照(未暴露于所述酸性溶液)的性能，來評估本文所述層析介質(zhì)的酸穩(wěn)定性。對介質(zhì)性能的評估可包括測量結(jié)合能力、對期望和不期望種類的拆分、雜質(zhì)的去除、或者其組合。術(shù)語“堿穩(wěn)定性”定義為，即使在暴露于具有高ph(通常高于9)的溶液50小時(shí)后，層析介質(zhì)從樣品中去除實(shí)質(zhì)性百分比的雜質(zhì)的能力(例如，超過50％或超過60％或超過70％或超過80％或超過90％或更高的抗a和/或抗b抗體去除)。堿穩(wěn)定的層析介質(zhì)可以在堿性條件下洗脫/清潔和/或消毒。不是堿穩(wěn)定的那些層析介質(zhì)在暴露于堿性條件之后，一般在去除實(shí)質(zhì)性百分比的雜質(zhì)(也即，在此情形中為抗a和/或抗b抗體)時(shí)表現(xiàn)出能力降低。層析介質(zhì)通常用堿性溶液消毒(例如，0.1m或0.5m氫氧化鈉)。然而，大多數(shù)商業(yè)可得的介質(zhì)在暴露于此類條件后趨向于損失其從樣品中去除雜質(zhì)的能力。本文所述的層析介質(zhì)即使在延長的暴露于堿性條件之后(也即，即使在50小時(shí)之后或者更久)仍保持其從樣品中去除抗-a和抗-b抗體的能力，也即，它們是堿穩(wěn)定的。可以通過將介質(zhì)暴露于堿性溶液特定的時(shí)間段然后再評估其相對于對照(未暴露于所述堿性溶液)的性能，來評估本文所述層析介質(zhì)的堿穩(wěn)定性。對介質(zhì)性能的評估可包括測量結(jié)合能力、對期望和不期望種類的解析度、雜質(zhì)的去除、或者其組合。在一些實(shí)施方案中，堿或酸穩(wěn)定性是指，即使在分別暴露于堿性或酸性溶液5小時(shí)之后、或10小時(shí)之后、或15小時(shí)之后、或20小時(shí)之后、或25小時(shí)之后、或30小時(shí)之后、或40小時(shí)之后、或50小時(shí)之后、或60小時(shí)之后、或70小時(shí)之后、或80小時(shí)之后、或90小時(shí)之后、或100小時(shí)之后，本文所述的層析介質(zhì)保留其結(jié)合能力的至少65％、或至少70％、或至少75％、或至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％的能力。在另一實(shí)施方案中，堿或酸穩(wěn)定性是指，即使分別暴露于堿性或酸性溶液5小時(shí)或10小時(shí)或15小時(shí)或20小時(shí)或25小時(shí)或30小時(shí)或40小時(shí)或50小時(shí)或60小時(shí)或70小時(shí)或80小時(shí)或90小時(shí)或100小時(shí)或者更久，配體初始結(jié)合能力的降低了少于70％、或少于60％、或少于50％、或少于40％、或少于30％。術(shù)語“初始結(jié)合能力”如本文所用是指，在介質(zhì)暴露于酸性或堿性條件之前，單位體積的本文所述層析介質(zhì)所能捕獲的抗a或抗b抗體的量。在一些實(shí)施方案中，本文所述的層析介質(zhì)能夠承受延長的時(shí)間的酸或堿清潔和/或消毒，這使得所述層析介質(zhì)成為有吸引力的候選，特別是對于從樣品中有成本效益地去除抗a和/或抗b抗體(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物、或ivig添料)。術(shù)語“配體載荷”如本文所用是指，在將配體固定至固體支持物上的偶合反應(yīng)期間，每單位體積的固體支持物所使用的配體的量。配體載荷測量為沉積體積的固體支持物的mg/ml或gm/升。在一些實(shí)施方案中，所述配體載荷為至少0.8mg/ml或至少1mg/ml或至少1.1mg/ml或至少1.2mg/ml或至少1.5mg/ml或1.65mg/ml或者更高。在特定的實(shí)施方案中，所述配體載荷對于血型a抗原配體的情形為至少1.65mg/ml，或者對于血型b抗原配體的情形為至少1.2mg/ml?？梢酝ㄟ^使固體支持物經(jīng)重力在固定小時(shí)內(nèi)沉積成含有儲存緩沖液或水的泥漿，來確定固體支持物的沉積體積。術(shù)語“介質(zhì)”或“層析介質(zhì)”在本文中可互換使用，是指其上固定有血型a抗原配體和/或血型b抗原配體的固體支持物，其中是以至少0.8mg/ml固體支持物的配體載荷。在一些實(shí)施方案中，接頭用于固定，其可以是配體本身的一部分或者是分離的實(shí)體。術(shù)語“接頭”定義為將血型寡糖抗原配體化學(xué)連接至用于固定至固體支持物上的官能團(tuán)的種類。此類接頭的非限制性實(shí)例包括(ch2)n、(ch2)m-o-(ch2)n、(ch2ch2o)n、(ch2)m-conh、(ch2)m-nr-(ch2)n、(ch2)m-nh-co-nh-(ch2)n、(ch2)m-nh-(ch2)n、and(ch2)m-conh-(ch2)n、(ch2)m-cos、(ch2)m-s-(ch2)n、(ch2)m-s-co-s-(ch2)n、和(ch2)m-cos-(ch2)n其中m和n的范圍可以是1-22。術(shù)語“層析”如本文所用是指從樣品中的其它分子分離或者去除分子(例如，在此情形中為抗a和/或抗b抗體)的動態(tài)分離技術(shù)。通常，在層析方法中，移動相(液體或氣體)將含有待分離或待去除分子的樣品轉(zhuǎn)移穿過固定相(通常為固體)介質(zhì)(例如，層析介質(zhì))。對于固定相的隔離性或親和性的差異將分子從樣品的其它組分分離出來。術(shù)語“親和層析”如本文所用是指如本文所用是指層析的模式，其中待分離或者待去除的分子(例如，抗a和/或抗b抗體)是通過其與另外的分子(例如，固定至固體支持物上的血型a抗原配體或血型b抗原配體)的相互作用分離，所述另外的分子特異性地與所述待分離或者待去除的分子相互作用。術(shù)語“igg”、"免疫球蛋白"、"ig"或"抗體"(本文中可互換使用)是指具有兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈組成的基礎(chǔ)四個(gè)多肽鏈結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，所述鏈例如通過鏈間二硫鍵來穩(wěn)定，其具有特異性地結(jié)合抗原的能力。術(shù)語"單鏈免疫球蛋白"或"單鏈抗體"(本文中可互換使用)是指具有重鏈和輕鏈組成的兩個(gè)多肽鏈結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，所述鏈例如通過鏈間肽鍵來穩(wěn)定，其具有特異性地結(jié)合抗原的能力。術(shù)語"結(jié)構(gòu)域"是指包含肽環(huán)的重鏈或輕鏈多肽的球形區(qū)(例如，包含3至4個(gè)肽環(huán))，其中例如是通過例如β-折疊片層和/或鏈間二硫鍵而穩(wěn)定的。結(jié)構(gòu)域在本文中進(jìn)一步稱作"恒定"或"可變"，這是基于在"恒定"結(jié)構(gòu)域的情況中各個(gè)類別成員的結(jié)構(gòu)域內(nèi)相對缺乏的序列差異，或者在"可變"結(jié)構(gòu)域情況中各個(gè)類別成員的結(jié)構(gòu)域內(nèi)顯著差異?？贵w或多肽"結(jié)構(gòu)域"在本領(lǐng)域中常常可互選地稱作抗體或多肽"區(qū)"?？贵w輕鏈的"恒定"結(jié)構(gòu)域可互換地稱作"輕鏈恒定區(qū)"、"輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域"、"cl"區(qū)或"cl"結(jié)構(gòu)域?？贵w重鏈的"恒定"結(jié)構(gòu)域可互換地稱作"重鏈恒定區(qū)"、"重鏈恒定結(jié)構(gòu)域"、"ch"區(qū)或"ch"結(jié)構(gòu)域?？贵w輕鏈"可變"結(jié)構(gòu)域可互換地稱作"輕鏈可變區(qū)"、"輕鏈可變結(jié)構(gòu)域"、"vl"區(qū)或者"vl"結(jié)構(gòu)域。抗體重鏈的"可變"結(jié)構(gòu)域可互換地稱作"重鏈可變區(qū)"、"重鏈可變結(jié)構(gòu)域"、"vh"區(qū)或者"vh"結(jié)構(gòu)域。免疫球蛋白或抗體可以是單克隆的或多克隆的并且可以單體或者多聚體的形式存在。術(shù)語“igm”或“免疫球蛋白m”是指具有五聚體結(jié)構(gòu)的抗體，例如，血清中發(fā)現(xiàn)的igm抗體。具有大約970kda的分子量，igm抗體要比具有單體結(jié)構(gòu)以及大約150kda的分子量的igg大得多。與具有2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的igg抗體不同，igm抗體具有10個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。igm抗體主要在受血者從不相容的供血者接受輸血時(shí)，負(fù)責(zé)紅血細(xì)胞的凝集。例如，具有血型a以及具有抗-bigm抗體的人在接受來自血型b供血者的輸血時(shí)將會經(jīng)歷凝集。大的igm抗體一般可通過分餾而與血漿中較小的igg抗體分離。在從樣品中去除抗a和/或抗b抗體之外，本文所述的組合物也可用于獲得純化的抗-aigm抗體或純化的抗-b抗體。在一些實(shí)施方案中，分別使用本文所述的血型a抗原配體介質(zhì)或血型b抗原配體介質(zhì)，從表達(dá)抗-aigm抗體或抗-bigm抗體的澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物中分離抗-aigm抗體或抗-bigm抗體。純化igm抗體的示例性的方法如下。使10mmpbs中的表達(dá)igm抗體的澄清細(xì)胞培養(yǎng)物流過含有血型a抗原配體介質(zhì)或血型b抗原配體介質(zhì)的柱。隨后用ph范圍3.0-9.0的水成緩沖液洗滌所述柱。用ph范圍2.0-3.0的酸性緩沖液從柱上洗脫結(jié)合至柱的抗-aigm抗體或抗-b抗體。本文所述的介質(zhì)可用于獲得抗-aigm或抗-bigm抗體，其具有至少80％、或至少90％、或至少95％、或超過95％的純度(由分析性大小排阻層析所確定)。在一些實(shí)施方案中，igm抗體的純度為至少95％，由分析性大小排阻層析所確定。在一些實(shí)施方案中，所述純化的抗-aigm抗體或抗-bigm抗體用作模型分子來評價(jià)含有血型a抗原配體或血型b抗原配體的層析介質(zhì)的質(zhì)量，如2015年9月8日提交的美國臨時(shí)專利申請62/215,423所描述。術(shù)語“純化”或“純化的”或“純度”如本文所用是指，在包含目標(biāo)分子和一或多種雜質(zhì)的樣品中提高該分子的濃度。通常，通過從樣品中去除(完全地或部分地)至少一種雜質(zhì)來提高目標(biāo)分子的純度。在一些實(shí)施方案中，分子的純度(例如，此情形中的igm抗體)測量為“百萬分之幾”或“ppm”。在一些實(shí)施方案中，單位ppm是指每個(gè)目標(biāo)分子(例如，單克隆igm)納克/毫克雜質(zhì)的量(例如，宿主細(xì)胞蛋白(hcp)，其中所述目標(biāo)分子和hcp在溶液中。在一些實(shí)施方案中，使用本文所述的組合物，將單克隆igm-a或igm-b抗體的純度提高至至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％或者更高。術(shù)語“澄清”或“澄清的”如本文所用是指用于去除細(xì)胞培養(yǎng)物添料中懸浮的顆?；蚰z體的方法，由此降低含有目標(biāo)分子的溶液的濁度(例如，含有igm抗體的細(xì)胞培養(yǎng)物添料)，通常測量為ntu(比濁法濁度單位)?？梢酝ㄟ^各種措施實(shí)現(xiàn)澄清，包括離心或者過濾。離心可以分批的或者連續(xù)的模式進(jìn)行，而過濾可以正常流(例如深度過濾)或者切向流的模式進(jìn)行。在如今的工業(yè)中所使用的方法中，離心之后通常跟著進(jìn)行深度過濾，以便去除不可溶雜質(zhì)，其不能由離心去除。另外，可以使用用于增強(qiáng)澄清效力的方法，例如沉淀。雜質(zhì)的沉淀可以通過各種措施來進(jìn)行，如通過絮凝作用、ph調(diào)節(jié)(酸性沉淀)、改變溫度、由于刺激響應(yīng)性聚合物或小分子的相變、或者這些方法的任意組合。在本文所描述的一些實(shí)施方案中，澄清涉及離心、過濾、深度過濾和沉淀中的任何一種或多種。術(shù)語“載荷ph”是指含有抗a和/或抗b抗體的樣品(其與本文所述的層析介質(zhì)溫育)的ph。在一些實(shí)施方案中，與本文所述的層析介質(zhì)溫育的樣品ph范圍是大約4.5至大約9.0(對于適宜用于去除抗-a抗體的介質(zhì))，以及大約ph4.0至大約9.0(對于適宜用于去除抗-b抗體的介質(zhì))。預(yù)期在這些條件下，樣品中抗a或抗b抗體的量相對于樣品接觸介質(zhì)之前降低了至少50％。如本文所用，術(shù)語“清潔”是指在層析方法中，涉及去除使用后的親和層析柱上(例如，用于去除抗a和/或抗b抗體的含有本文所述的層析介質(zhì)的柱)殘留的痕量水平的雜質(zhì)的步驟，以便保留柱和其中所含介質(zhì)的性能和完整性。當(dāng)清潔步驟從柱去除雜質(zhì)時(shí)，理想情況應(yīng)該對柱的性能影響最小(使用層析介質(zhì)的結(jié)合能力測量)。大多數(shù)商業(yè)可得的層析介質(zhì)使用酸性溶液或堿性溶液來進(jìn)行清潔。然而，大多數(shù)商業(yè)可得的層析介質(zhì)在極端的ph下不穩(wěn)定，并且因而不能使用酸性和堿性兩種條件清潔。本文所述的層析介質(zhì)可以使用酸性和堿性兩種溶液進(jìn)行清潔。清潔溶液的實(shí)例包括酸溶液如0.15m的磷酸或0.3％v/v的鹽酸。如本文所用，術(shù)語“原處清潔”或“cip”是無需拆開而清潔管、器皿、加工裝置、過濾器和相關(guān)配件的內(nèi)部的方法。使用cip的益處在于，清潔更快、勞動密集性更低并且更加可重復(fù)、以及帶給人們更低的化合物暴露風(fēng)險(xiǎn)。對于層析柱，cip是指不拆開柱而清潔層析介質(zhì)以及柱體和末端配件。通常，運(yùn)行之后經(jīng)清潔的層析柱立即進(jìn)行平衡以用于下次運(yùn)行。如本文所用，術(shù)語“行動(campaign)”是指若干輪的個(gè)別純化過程，一個(gè)接一個(gè)的進(jìn)行，以便加工出期望質(zhì)量的樣品。對于從樣品中去除抗a和/或抗b抗體的情形，行動通常涉及使用親和層析步驟來去除抗a和/或抗b抗體以及一或多個(gè)下游步驟，其可用于達(dá)成治療性組合物，例如，用于注射至患者，或者達(dá)成具有期望的組分的組合物。此類下游步驟可以根據(jù)行動的目標(biāo)在終端用戶之間有變化。雖然，清潔常規(guī)是在行動中于運(yùn)行之間進(jìn)行，但是當(dāng)行動完成時(shí)，要將層析柱進(jìn)一步消毒用于儲存，因?yàn)橥ǔＫ鲋谙麓涡袆又袝褂茫@會是幾天后或者幾周后或者幾個(gè)月后。術(shù)語“洗脫”是指純化過程中的步驟，其中本文所述的層析介質(zhì)與洗脫緩沖液接觸以去除結(jié)合至介質(zhì)的雜質(zhì)(也即，抗-a和/或抗-b)。洗脫緩沖液的實(shí)例包括0.1m甘氨酸,ph2.0；0.1m甘氨酸,ph2.2；0.1m甘氨酸,ph2.5；0.1m甘氨酸,ph2.7；0.1m甘氨酸,ph3.0。如本文所用，術(shù)語“消毒”是指完成行動之后的步驟，并且其設(shè)計(jì)用于將微生物群體降低至認(rèn)為安全或者可接受的水平(由fda其它管理機(jī)構(gòu)確定)。消毒通常通過加熱或者化合物來實(shí)現(xiàn)。要儲存待下次行動使用的層析柱通常用化學(xué)措施來消毒，這是由于加熱消毒不實(shí)用。大多數(shù)親和層析柱是使用高達(dá)0.5m的naoh進(jìn)行消毒。然而，0.5m的naoh也已知會降低層析介質(zhì)的性能。在本文所描述的一些實(shí)施方案中，包含磷酸、乙酸和苯甲醇(pab)的溶液被用于消毒。具體而言，本文所述的層析介質(zhì)即使在用pab消毒之后，仍保持其結(jié)合能力或者去除實(shí)質(zhì)性的量的抗a和/或抗b抗體的能力。術(shù)語“抗-a”或“抗-a抗體”是指這樣的抗體，其結(jié)合在具有a血型或ab血型的個(gè)體的細(xì)胞表面上發(fā)現(xiàn)的血型a抗原。因此，期望在血液衍生的樣品中去除此類抗體(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物、或ivig添料)。術(shù)語“抗-b”或“抗-b抗體”是指這樣的抗體，其結(jié)合在具有b血型或ab血型的個(gè)體的細(xì)胞表面上發(fā)現(xiàn)的血型b抗原。因此期望在血液衍生的樣品中去除此類抗體(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物或ivig添料)。ii.示例性的配體本文所述的組合物可用于從樣品(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物、或ivig添料)中去除抗a或抗b抗體。本文所述的組合物包括基于寡糖的配體(附著至適宜的固體支持物)。示例性的基于寡糖的配體在下文給出。示例性的基于寡糖的配體在下文給出。結(jié)構(gòu)中所使用的縮寫定義如下：gal＝d-半乳糖，fuc＝l-巖藻糖，galnac＝n-乙?；?d-半乳糖胺，glcnac＝n-乙?；?d-葡萄糖胺，r＝從配體至固體支持物的連接(但配體結(jié)構(gòu)上其它未知的連接也會用到)。a血型抗原配體的實(shí)例包括但不限于具有以下結(jié)構(gòu)的分子：三糖抗原a(galnacα1,3[fucα1,2]galβ–r),、1型四糖抗原a(galnacα1,3[fucα1,2]galβ1,3glcnacβ1–r)、2型四糖抗原a(galnacα1,3[fucα1,2]galβ1,4glcnacβ1–r)、3型四糖抗原a(galnacα1,3[fucα1,2]galβ1,3galnacα1–r)、和4型四糖抗原a(galnacα1,3[fucα1,2]galβ1,3galnacβ1–r)。在特定的實(shí)施方案中，所述配體是三糖抗原a(galnacα1,3[fucα1,2]galβ–r)，其附著至固體支持物。b血型抗原配體的實(shí)例包括具有以下結(jié)構(gòu)的分子：三糖抗原b(galα1,3[fucα1,2]galβ–r)、1型四糖抗原b(galα1,3[fucα1,2]galβ1,3glcnacβ1–r)、2型四糖抗原b(galα1,3[fucα1,2]galβ1,4glcnacβ1–r)、3型四糖抗原b(galα1,3[fucα1,2]galβ1,3galnacα1–r)、和4型四糖抗原b(galα1,3[fucα1,2]galβ1,3galnacβ1–r)。在特定的實(shí)施方案中，所述配體是附著至固體支持物的三糖抗原b(galα1,3[fucα1,2]galβ–r)。iii.示例性的固體支持物一或多種上述配體可以至少0.8mg/ml固體支持物的配體載荷附著至適宜的固體支持物，由此得到適用于去除血型a和/或血型b抗原抗體的層析介質(zhì)。固體支持物的實(shí)例包括但不限于氧化鋁、硅石、硅藻土、陶瓷、金屬氧化物、多孔玻璃、可控孔徑玻璃、碳水化合物聚合物、多糖、瓊脂糖、交聯(lián)瓊脂糖、交聯(lián)葡聚糖、葡聚糖、纖維素、淀粉、幾丁質(zhì)、沸石、合成聚合物、聚乙烯醚、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、尼龍、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚馬來酸酐、膜、空心纖維、以及纖維。在一些實(shí)施方案中，所述固體支持物是多孔或非多孔聚合物固體支持物并且包含選自以下組的聚合物：聚乙烯醚、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺和聚碳酸酯。在特定的實(shí)施方案中，所述固體支持物是基于聚乙烯醚的固體支持物。在一些實(shí)施方案中，所述固體支持物是珠的形式(例如，基于聚乙烯醚的多孔珠)。iv.將配體附著至固體支持物的方法可以利用無數(shù)的官能團(tuán)來促進(jìn)配體附著至固體支持物。此類官能團(tuán)的非限制性性實(shí)例包括胺、硫醇、呋喃、馬來酰亞胺、環(huán)氧樹脂、醛、烯、炔、疊氮、吖內(nèi)酯、羧基、活性酯、三嗪、和磺酰氯。在特定的實(shí)施方案中，使用胺基作為官能團(tuán)。所述固體支持物也可以經(jīng)修飾和/或激活以包括一或多個(gè)上文所述的促進(jìn)適宜的配體或多個(gè)配體固定至支持物官能團(tuán)。在特定的實(shí)施方案中，使用還原胺化化學(xué)來修改所述固體支持物，其中所述固體支持物經(jīng)衍生化以提供用于配體固定的醛基。此種衍生化通過以下來實(shí)現(xiàn)：首先修飾固體支持物(例如，基于聚乙烯醚的珠)以包括環(huán)氧基團(tuán)，其進(jìn)一步水解以產(chǎn)生二醇基團(tuán)。所述二醇基團(tuán)隨后被還原成醛基。含有醛的固體支持物(例如，固體支持物其醛密度為大約或高于1μmol/ml的固體支持物)繼而以期望的配體載荷(例如，至少0.8mg/ml)經(jīng)歷固定步驟(經(jīng)醛和胺基之間的還原胺化反應(yīng))。在特定的實(shí)施方案中，用聚合物觸角化學(xué)來修改固體支持物，其中所述固體支持物經(jīng)衍生化以包括羧酸基團(tuán)以用于配體固定步驟。此種衍生化是通過如下來實(shí)現(xiàn)的：首先使用鈰-起始的多聚化方法從固體支持物(例如，基于聚乙烯醚的珠)的表面多聚化適宜的單體(例如，丙烯酸、甲基丙烯酸、衣康酸、丙烯酸叔丁酯、甲基丙烯酸叔丁酯)。含有羧酸的固體支持物(例如，固體支持物其羧基密度為大約或高于1μmol/ml的固體支持物)以期望的配體載荷(例如，至少0.8mg/ml)經(jīng)歷固定步驟(經(jīng)羧酸和胺基之間的標(biāo)準(zhǔn)酸-胺偶合化學(xué))。經(jīng)活化羧基的配體固定也可直接應(yīng)用于固體支持物表面而無觸角形成。v.用于測量抗-a和抗-b抗體的去除百分比的測定法本文所述的層析介質(zhì)可用于從樣品中(例如，血液、血液制品、血漿、血漿衍生物、或ivig添料)去除抗a和/或抗b抗體。本文所述的層析介質(zhì)包括附著至固體支持物的血型a抗原配體和/或血型b抗原配體(以至少0.8mg/ml固體支持物的配體載荷)，并在可以對其進(jìn)行使用、清潔和/或消毒的操作條件的范圍方面提供了更高的靈活性。具體而言，本文所述的層析介質(zhì)在酸性和堿性條件下展現(xiàn)出穩(wěn)定性，即使是更長時(shí)間地暴露于此類條件。因此，本文所述的層析介質(zhì)在暴露于酸性或堿性條件后，保持其從樣品中去除抗-a和抗-b抗體的能力。一般而言，從樣品中去除抗a或抗b抗體的百分比可以如下進(jìn)行測量。將含有所述分子的樣品與在適當(dāng)條件下與適宜的介質(zhì)接觸適于該分子結(jié)合至所述介質(zhì)的時(shí)間。之后，將結(jié)合至介質(zhì)的分子從剩余的樣品溶液分離，并測量剩余樣品溶液中該分子的濃度(也即未結(jié)合的分子的濃度)。溶液中分子的濃度可以通過若干本領(lǐng)域已知的不同方法來確定?？?a和抗-b抗體的濃度也可以通過如下來確定：使用紅血細(xì)胞凝集測定、流式細(xì)胞術(shù)測定如基于紅血細(xì)胞的熒光激活細(xì)胞分選(facs)的那些、以及使用基于抗原的材料的酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)。在本文描述的方法中，在暴露或未暴露于酸性或堿性條件時(shí)，測量層析介質(zhì)從樣品中去除抗-a和抗-b抗體的能力。通過以下實(shí)施例對實(shí)施方案進(jìn)行進(jìn)一步說明，所述實(shí)施例不應(yīng)理解為限制。在本身請全文中引用的所有參考文獻(xiàn)、專利和公開的專利申請的內(nèi)容，以及附圖都援引加入本文。實(shí)施例實(shí)施例1.使用還原胺化(ra)化學(xué)來合成含有三糖a配體的介質(zhì)通過使用還原胺化化學(xué)將tria配體固定至專有的基于聚乙烯醚的多孔固體支持物(以珠的形式)之上，來合成了血型a抗原三糖(tria)配體介質(zhì)。tria和trib配體的聚體結(jié)構(gòu)分別在圖1和2中示出。將配體連接至固體支持物上的羥基基團(tuán)。將10ml的沉積的珠用異丙醇進(jìn)行了調(diào)理，并轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器皿中。向該反應(yīng)器皿，加入10ml的異丙醇和0.273ml的32％naoh溶液。在室溫將懸液攪拌30分鐘，隨后向該懸液加入1.22ml的1,4-丁二醇二縮水甘油醚(budge)。在室溫將該懸液攪拌了5小時(shí)。使用過濾組件以水洗滌所述懸液3次。將濕的珠轉(zhuǎn)移回反應(yīng)器皿。加入了11.8ml的水和0.26ml的冰乙酸，并在室溫將懸液再攪拌30分鐘。接著用水洗滌所述珠3次，并將其轉(zhuǎn)移回反應(yīng)器皿。將17ml的0.5m硫酸添加至所述珠，并在75℃將該懸液攪拌2小時(shí)。將所述珠洗滌若干次以將懸液的ph調(diào)節(jié)為4至5。使用過濾器組件吸出溶液，并將濕的珠轉(zhuǎn)移回反應(yīng)器皿。向該反應(yīng)器皿加入10ml的2.5％偏高碘酸，在室溫將所述懸液攪拌2.5小時(shí)。最后，用水將所述珠洗滌5次，以導(dǎo)致醛-修飾的聚乙烯醚基質(zhì)珠，其適宜用來與配體a或b偶合。將10ml醛-修飾的濕基質(zhì)珠轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器皿。向此器皿加入了16.5mg的三糖a、10ml的0.1mnahco3和150mg的氰基硼氫化鈉。在室溫將所述懸液攪拌16小時(shí)。將400mg的甘氨酸加入至反應(yīng)器皿并將懸液在室溫繼續(xù)攪拌至少2小時(shí)。將所得的含有tria配體的層析介質(zhì)用水洗滌5次以及用tris緩沖液在ph＝8洗滌3次。該介質(zhì)進(jìn)一步用0.05m乙酸溶液洗滌3次以及用水洗滌3次，并最終儲存在20％的乙醇溶液中。隨后評估了介質(zhì)從ivig添料去除抗-a抗體的能力(有和無暴露于酸性或堿性條件)，如下文中隨后的實(shí)施例中所描述的。實(shí)施例2.使用還原胺化(ra)化學(xué)來合成含有三糖b配體的介質(zhì)含有三糖b配體的介質(zhì)的制備類似于含有三糖a配體的介質(zhì)，如上文所述。如上文所制備的10ml醛-修飾的濕基質(zhì)珠被轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器皿。向此器皿加入了12.0mg的三糖b、10ml的0.1mnahco3和150mg的氰基硼氫化鈉。在室溫將所述懸液攪拌16小時(shí)。將400mg的甘氨酸加入至反應(yīng)器皿并在室溫將所述懸液攪拌了至少2小時(shí)。將所得的含有trib配體的層析介質(zhì)用水洗滌5次以及用tris緩沖液在ph＝8洗滌3次。將所述介質(zhì)進(jìn)一步用0.05m乙酸溶液洗滌3次以及用水洗滌3次，并最終儲存在20％的乙醇溶液中。隨后評估了介質(zhì)從ivig添料去除抗-b抗體的能力(有和無暴露于酸性或堿性條件)，如下文中隨后的實(shí)施例中所描述的。實(shí)施例3.聚丙烯酸(paa)觸角化學(xué)合成含有三糖a或b的介質(zhì)在此代表性實(shí)施例中，使用不同的化學(xué)，也即paa觸角措施，來將三糖a或b配體附著至基于聚乙烯醚的珠。將圖1和圖2所示的血型a和b抗原配體(三糖a和b)，在兩個(gè)分離的反應(yīng)中，用羥基基團(tuán)連接至基于聚乙烯醚的珠，一個(gè)反應(yīng)用于將三糖a配體附著至珠而另一個(gè)則用于將三糖b配體附著至珠。在合成的第一步，將珠修改以包括羧基，以用于與圖1和2所示的配體的胺基反應(yīng)。將10ml的沉積的珠用水調(diào)理，并轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器皿中。如下制備了兩種溶液，也即“單體溶液”和“起始溶液”。10ml的單體溶液通過混合以下進(jìn)行制備：0.137ml的丙烯酸、0.1ml的65％硝酸溶液和9.763ml的水，而10ml的起始溶液通過混合如下進(jìn)行制備：0.33gm的硝酸鈰銨、0.1ml的65％硝酸溶液和9.1ml的水。將所述單體溶液添加至含有濕珠的反應(yīng)器皿。用氮?dú)鈱⑺鰬乙汉推鹗既芤簝艋蠹s15分鐘。接著將起始溶液轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器皿，并在40℃氮?dú)夥諊聦乙簲嚢枇?小時(shí)。用水將所述珠洗滌7次、用0.2m的抗壞血酸和1m的硫酸溶液洗滌了10次、用水洗滌5x次、用pbs緩沖液洗滌2次，以及最后用水洗滌3次。將10ml的paa-修改的濕珠轉(zhuǎn)移至兩個(gè)分離的反應(yīng)器皿。向一個(gè)器皿加入16.5mg的三糖a、10ml的0.01mnahco3和0.1mg的1-乙基-3-(3-(二甲基氨基)丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(edc)。向另一個(gè)器皿加入了12.0mg的三糖b、10ml的0.01mnahco3和0.1mg的edc。在32℃將該兩種懸液攪拌16小時(shí)。將所得的層析介質(zhì)用0.01mnahco3洗滌3次以及用水洗滌3次，并用過濾器組件吸走洗滌溶液。再次將所述介質(zhì)轉(zhuǎn)移回反應(yīng)器皿，并將0.01mnahco3中5％v/v的乙醇胺溶液加至每個(gè)器皿。在室溫將懸液攪拌16小時(shí)，并用水將介質(zhì)洗滌5次。最終，將介質(zhì)儲存在20％的乙醇中。含有三糖a配體或b配體的介質(zhì)(用上文所述的paa觸角措施制備)，隨后分別評估其從ivig添料中對抗a或抗b抗體的去除(有和無暴露于酸性或堿性條件)，如下文中隨后的實(shí)施例中所描述的。實(shí)施例4.添料載荷ph對抗a或抗b抗體去除的作用在ph3.5至ph9.0的樣品條件范圍證明了使用本文所述的介質(zhì)對抗a或抗b抗體的去除。將含有抗a或抗b抗體的樣品(代表性的ivig添料)透析至具有范圍在3.5-9.0的不同ph的緩沖液中。隨后將以不同的附著化學(xué)制備的介質(zhì)樣品與具有變化ph值的添料材料接觸。如上文所述，對于以ra措施或者paa觸角措施制備的層析介質(zhì)，隨后評估了從各種添料材料中對抗a或抗b抗體的去除。使用已建立的流式細(xì)胞術(shù)方法(christensson,m.etal,transfusion,1996；36:500-505)確定了血型a或b抗原抗體(抗-a/b)的水平。將a型或b型紅血細(xì)胞與代表性的ivig添料溫育預(yù)定的時(shí)間，隨后深度洗滌。細(xì)胞繼而用熒光標(biāo)記的抗-人igg染色，并經(jīng)歷流式細(xì)胞術(shù)(guava5ht,emdmillipore)。凈平均熒光強(qiáng)度(mfi)值被用于比較與含有三糖a配體或三糖b配體的介質(zhì)接觸之前和之后ivig添料中抗-a或抗-b多克隆抗體的水平。通過將所得的流出液(或上清)中此類抗體的水平與起始添料材料中的水平進(jìn)行比較，來計(jì)算了抗a或抗b抗體的去除百分比。下表總結(jié)了在每個(gè)添料載荷ph條件對兩種不同的ivig添料材料的抗a或抗b抗體去除百分比。對于這兩種添料材料，觀察到這樣的趨勢，較高的ph水平提供了對抗-a和抗-b抗體更大的去除。據(jù)觀察，4.5以及更高的ph水平提供了超過65％的抗-a去除水平。對于4.0和更高的ph水平，抗-b去除水平超過65％。在更高的ph水平，ph5.0-9.0，對于抗-a和抗-b去除的去除百分比接近90％，由此證明了此種介質(zhì)在廣泛范圍的載荷ph有效，并且在較高的載荷ph(例如，ph5-9)也發(fā)揮良好的作用。表1.抗a或抗b抗體在不同的添料載荷ph值的去除百分比實(shí)施例5.在暴露于pab后評估介質(zhì)的穩(wěn)定性在此實(shí)施例中，在暴露于通常用于層析材料消毒的pab(120mm的磷酸、167mm的乙酸、2.2％室溫苯甲醇)之后，評估了本文制備的不同層析介質(zhì)的穩(wěn)定性。評估了如表2所示的具有不同配體載荷水平的介質(zhì)隨兩種不同ivig添料樣品中抗-a和抗-b的去除。通過以下證明了層析介質(zhì)的穩(wěn)定性：延長時(shí)間(即，至少50或至少150小時(shí))地將含有三糖a或三糖b配體的介質(zhì)暴露于pab，并繼而評估它們從ivig添料中去除抗a或抗b抗體的能力。如所觀測的，含有三糖a和b配體的介質(zhì)(以ra措施或者paa觸角措施制備)，在暴露于pab之后展現(xiàn)出穩(wěn)定性，也即，從ivig添料去除抗a或抗b抗體的能力。通過評估從ivig添料去除抗a或抗b抗體的能力來測量了介質(zhì)的穩(wěn)定性，如下文所述。具體而言，使用已建立的流式細(xì)胞術(shù)方法(christensson,m.etal,transfusion,1996；36:500-505)確定了血型a或b抗原抗體(抗-a/b)的水平。將a型或b型紅血細(xì)胞與添料材料溫育預(yù)定的時(shí)間，隨后深度洗滌。細(xì)胞繼而用熒光標(biāo)記的抗-人igg染色，并經(jīng)歷流式細(xì)胞術(shù)(guava5ht,emdmillipore)。凈平均熒光強(qiáng)度(mfi)值被用于比較與含有三糖a配體或三糖b配體的介質(zhì)溫育之前和之后添料材料中抗-a或抗-b多克隆抗體的水平。通過將所得的流出液(或上清)中此類抗體的水平與起始添料材料中的水平進(jìn)行比較，來計(jì)算了抗a或抗b抗體的去除百分比。如本文中所觀察的，含有三糖a或三糖b配體的層析介質(zhì)在暴露于pab之后分別保持它們?nèi)コ?a和抗-b抗體的能力。與未暴露于pab的對照樣品(在下表中表示為“0小時(shí)”的)相比，抗-a或抗-b的去除能力未觀察到顯著的變化。對于添料1，在對照的情形和暴露于pab之后，都去除了大約80％或更高的抗a或抗b抗體。對于添料2，在對照的情形和暴露于pab之后，都去除了大約90％的抗-a或抗-b。表2.在pab暴露之前和之后兩種配體載荷水平下抗a或抗b抗體去除的去除百分比實(shí)施例6.含有三糖a和三糖b配體的介質(zhì)在酸性條件下穩(wěn)定證明了含有三糖a和b配體的本文所述的介質(zhì)，在暴露于各種酸性和低ph緩沖液之后展現(xiàn)出化學(xué)穩(wěn)定性，例如，0.1m甘氨酸緩沖液ph2.0；0.1m甘氨酸緩沖液ph2.2；0.1m甘氨酸緩沖液ph2.5；0.1m甘氨酸緩沖液ph2.7；和0.1m甘氨酸緩沖液ph3.0。通過以下證明了酸穩(wěn)定性：將不同的介質(zhì)暴露于酸性條件指定的時(shí)間段(例如至少50小時(shí))，并接著評估該介質(zhì)從兩種添料材料中去除抗-a和抗-b的能力。也評估了沒有暴露于任何酸的對照樣品對于抗-a和抗-b的去除能力。如本文所觀察的，含有三糖a和b配體的介質(zhì)分別保持了它們?nèi)コ筧或抗b抗體的能力，即使是延長時(shí)間地暴露于酸性條件下。已經(jīng)暴露于酸溶液的樣品保持了它們從添料材料中去除大約80％或更多的抗-a和抗-b的能力。表3.在酸暴露之后抗a或抗b抗體的去除百分比還證實(shí)了，含有三糖a和三糖b配體的介質(zhì)，在酸性條件下消毒之后，分別保持結(jié)合和純化介質(zhì)igm-a和igm-b抗體的能力。對于含有三糖a和b配體的本文所述介質(zhì)，評估了它們在酸性或低ph條件下(例如pab)的穩(wěn)定性。這通過以下得到了證明：將所述介質(zhì)暴露于pab特定的時(shí)間段，例如至少50小時(shí)或150小時(shí)，并繼而評估igm-a和igm-b結(jié)合能力。未暴露于pab的對照樣品被用作基礎(chǔ)來使用下文的公式計(jì)算所保留的結(jié)合能力。下表4證明了含有三糖a和三糖b配體的介質(zhì)在暴露于酸性條件后所保留的igm-a和igm-b的結(jié)合能力。表4pab暴露時(shí)間(小時(shí))保留的igm-a結(jié)合能力(％)保留的igm-b結(jié)合能力(％)50961001509595實(shí)施例7.含有三糖a和三糖b配體的介質(zhì)在堿性條件下穩(wěn)定對于含有三糖a和b配體的本文所述介質(zhì)，評估了它們在堿性或者高ph條件下(例如，0.5mnaoh)的穩(wěn)定性。這通過以下得到了證明：將介質(zhì)暴露于0.5mnaoh指定的時(shí)間段(例如至少50小時(shí)或150小時(shí))，并接著評估該介質(zhì)從兩種添料材料中去除抗-a和抗-b的能力。也評估了沒有暴露于naoh的對照樣品對于抗-a和抗-b的去除能力。如本文所觀察的，含有三糖a和b配體的介質(zhì)分別保持了它們?nèi)コ筧或抗b抗體的能力，即使是延長時(shí)間地暴露于堿性條件下。即使暴露于naoh150小時(shí)之后，所述介質(zhì)仍能夠去除大約75％的抗-a和大約88％的抗-b。表5.在暴露于0.5mnaoh之后抗a或抗b抗體的去除百分比在進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中，顯示出含有三糖a和三糖b配體的介質(zhì)，在堿性條件下消毒后，分別保持了結(jié)合和純化介質(zhì)igm-a和igm-b抗體的能力。對于含有三糖a和b配體的本文所述介質(zhì)，評估了它們在堿性或高ph條件下(例如0.5mnaoh)的穩(wěn)定性。這通過以下得到了證明：將所述介質(zhì)暴露于0.5mnaoh特定的時(shí)間段，例如至少50小時(shí)或150小時(shí)，并繼而評估igm-a和igm-b結(jié)合能力。未暴露于naoh的對照樣品被用作基礎(chǔ)來通過上文實(shí)施例所示的公示計(jì)算所保留的結(jié)合能力。含有三糖a和三糖b配體的介質(zhì)在暴露于堿性條件之后所保留的igm-a和igm-b結(jié)合能力在下表6中示出表6naoh暴露時(shí)間(小時(shí))保留的igm-a結(jié)合能力(％)保留的igm-b結(jié)合能力(％)50941001509297實(shí)施例8.配體載荷對于去除抗-a抗體的作用配體載荷對于本文所述的層析介質(zhì)去除抗-a和抗-b抗體的百分比的作用如下進(jìn)行確定。將具有不同配體載荷的三糖a或三糖b介質(zhì)與代表性的ivig添料溫育，使用流式細(xì)胞術(shù)測定法來確定了抗-a抗體的去除，如前文描述的。結(jié)果在下表中示出。據(jù)發(fā)現(xiàn)，隨著三糖a配體載荷的提高，對于所測試的配體載荷范圍抗-a抗體的％去除提高了。對于paa觸角化學(xué)，在1.65mg/ml或更高的配體載荷獲得了超過70％的抗-a抗體去除，而在2.1mg/ml的配體載荷則獲得了超過80％的去除。作為比較，對于ra化學(xué)，在1.2mg/ml或更高的配體載荷獲得了超過80％的抗-a抗體去除。此結(jié)果是相當(dāng)?shù)某鋈艘饬?，因?yàn)榇饲?，?jù)報(bào)道期望會具有較低的配體密度(這意味著較低的配體載荷)，以便使此類介質(zhì)有效發(fā)揮作用(參見，公開號wo2015/001277)。表7.配體載荷對于兩種單獨(dú)介質(zhì)樣品抗-a去除百分比的作用實(shí)施例9.配體載荷對去除抗-b抗體的作用研究了配體載荷對于含有trib配體的本文所述層析介質(zhì)從代表性的ivig添料去除抗-b抗體的能力的作用。此配體載荷的作用通過以下進(jìn)行了證明：將添料與含有不同配體載荷的介質(zhì)樣品溫育，以及接著用流式細(xì)胞術(shù)測定法測量抗-b去除，如此前所述。結(jié)果在下表中示出。觀察到，隨著三糖b配體載荷的提高，在所測試的配體載荷范圍內(nèi)抗-b抗體的％去除提高。對于paa觸角化學(xué)措施，在1.2mg/ml或更高的配體載荷獲得了超過70％的抗-b抗體去除，而在1.65mg/ml的配體載荷獲得了超過80％的去除，以及在2.8mg/ml或更高的配體載荷獲得了超過90％的去除。作為比較，對于ra化學(xué)，在1.2mg/ml或更高的配體載荷獲得超過90％的抗-b抗體去除。如上文所述，此結(jié)果是相當(dāng)?shù)某鋈艘饬?，因?yàn)榇饲?，?jù)報(bào)道期望會具有較低的配體密度(者意味著較低的配體載荷)，以便使此類介質(zhì)有效發(fā)揮作用(參見，公開號wo2015/001277)。表8.配體載荷對抗-b抗體的去除百分比的作用實(shí)施例10.從樣品中順次去除抗-a和抗-b抗體本文所述的層析介質(zhì)可以順次使用，以用于從樣品中去除抗-a和抗-b抗體二者。換句話說，可以首選使用用于去除抗-a抗體的層析介質(zhì)，隨后是用于去除抗-b抗體的層析介質(zhì)。又或者，可以首選使用用于去除抗-b抗體的層析介質(zhì)，隨后是用于去除抗-a抗體的層析介質(zhì)。在此實(shí)驗(yàn)中，首選使ivig添料材料穿過含有層析介質(zhì)的柱，所述層析介質(zhì)含有三糖a配體，隨后是含有三糖b配體層析介質(zhì)的分離柱。用流式細(xì)胞術(shù)確定了抗-a和抗-b抗體的去除。相反的次序也得到了證實(shí)，其中所述添料首先與含有三糖b配體的層析介質(zhì)接觸，隨后是含有三糖a配體的層析介質(zhì)。下表顯示了使用這些措施從添料去除抗-a和抗-b抗體的總百分比。在使添料材料穿過兩種介質(zhì)之后，至少去除了87％的抗-a抗體。在使添料材料穿過兩種介質(zhì)之后，至少去除了92％的抗-b。表9.順次使用兩種不同的層析介質(zhì)之后，抗-a和抗-b抗體的去除百分比方法次序％抗-a去除％抗-b去除三糖a→三糖b8795三糖b→三糖a9192實(shí)施例11.鼠單克隆igm-a抗體的純化本文所述的組合物可用于從表達(dá)igm抗體的澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物添料中純化單克隆igm抗體。此實(shí)驗(yàn)描述了從澄清的細(xì)胞培養(yǎng)物添料中純化igm-a抗體。在一些實(shí)施方案中，純化的igm-a分子被用作模型分子來評價(jià)含有血型a抗原配體的層析介質(zhì)的質(zhì)量，如2015年9月8日提交的美國臨時(shí)專利申請no.62/215,423中所描述的。血型a抗原鼠單克隆igm抗體(抗-a)從商業(yè)可獲得的澄清細(xì)胞培養(yǎng)物添料中純化，所述細(xì)胞培養(yǎng)物添料含有從克隆birma-1(voxsang.,1991,61:53-58)產(chǎn)生的抗-aigm，其經(jīng)透析進(jìn)入10mmpbs緩沖液(產(chǎn)品號:jh-1l-bk,emdmillipore,billerica,ma,usa)。所述抗-a細(xì)胞培養(yǎng)物添料經(jīng)0.22微米的膜過濾，并在其上附著有血型a抗原三糖(tria)配體的介質(zhì)上經(jīng)過層析結(jié)合/洗脫，如本文所述。用所述tri-a配體介質(zhì)包裝直徑10mm的柱至64mm。用10mm的pbs緩沖液平衡該柱(10倍柱體積(cv)，以305.58cm/h，4.0ml/min)，并隨后裝載10mmpbs中的含有抗-a的澄清細(xì)胞培養(yǎng)物添料(40倍cv，229.18cm/h，3.0ml/min)。用10mmpbs緩沖液洗滌該柱(5倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)，隨后是10mmpbs緩沖液中的0.5m的氯化鈉(10倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)。接著，用0.1m的甘氨酸ph2.7洗脫抗-aigm抗體(9倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)。隨后用10mm的pbs緩沖液洗滌柱(10倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)并在進(jìn)一步使用前用0.5m的氫氧化鈉剝離(10倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)。將1ml的2.0mtris堿添加至45ml的所述抗-aigm洗脫液以將其溶液ph提高至6-7。隨后用透析管(standardrcdialysistrialkits,spectra/1-3,3.5kmwco,54mmflatwidth,序列號:132725,spectrumlaboratories,inc.ranchodominguez,ca,90220usa)將洗脫液透析至10mmpbs中。在10mmpbs透析后，基于在280nm的1.50的消光系數(shù)(根據(jù)igm抗體的氨基酸組成確定)發(fā)現(xiàn)所得的單克隆抗-aigm溶液具有大約1.1mg/ml的濃度。發(fā)現(xiàn)單克隆抗-aigm抗體為97％純(由分析性大小排阻層析確定)。實(shí)施例12.單克隆鼠igm-b抗體的純化血型b抗原鼠單克隆igm抗體(抗-b)從商業(yè)可獲得的澄清細(xì)胞培養(yǎng)物添料中純化，所述細(xì)胞培養(yǎng)物添料含有從克隆lb-2產(chǎn)生的抗-bigm，其經(jīng)透析進(jìn)入10mmpbs緩沖液血型(產(chǎn)品號:jm-1l-bk,emdmillipore,billerica,ma,usa)。所述抗-b細(xì)胞培養(yǎng)物添料經(jīng)0.22微米的膜過濾，并在其上附著有血型b抗原三糖(trib)配體的介質(zhì)上經(jīng)過層析結(jié)合/洗脫，如本文所述。用所述tri-b配體介質(zhì)包裝直徑10mm的柱至64mm。用10mm的pbs緩沖液平衡該柱(10倍柱體積(cv)，以305.58cm/h，4.0ml/min)，并隨后裝載10mmpbs中的含有抗-a的澄清細(xì)胞培養(yǎng)物添料(40倍cv，229.18cm/h，3.0ml/min)。用10mmpbs緩沖液洗滌該柱(5倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)，隨后是10mmpbs緩沖液中的0.5m的氯化鈉(10倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)。接著，用0.1m的甘氨酸ph2.7洗脫抗-bigm抗體(9倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)。隨后用10mm的pbs緩沖液洗滌柱(10倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)并在進(jìn)一步使用前用0.5m的氫氧化鈉剝離(10倍cv，305.58cm/h，4.0ml/min)。將1ml的2.0mtris堿添加至45ml的所述抗-bigm洗脫液以將其溶液ph提高至6-7。隨后用透析管(standardrcdialysistrialkits,spectra/1-3,3.5kmwco,54mmflatwidth,序列號:132725,spectrumlaboratories,inc.ranchodominguez,ca,90220usa)將洗脫液透析至10mmpbs中。在10mmpbs透析后，基于在280nm的1.44的消光系數(shù)(根據(jù)該蛋白的氨基酸組成確定)發(fā)現(xiàn)所得的單克隆抗-b鼠igm溶液具有大約1.3mg/ml的濃度。發(fā)現(xiàn)單克隆抗-aigm抗體為98％純(由分析性大小排阻層析確定)。慮及說明書中引用的參考文獻(xiàn)的教導(dǎo)而對說明書有了最深入的理解，所述文獻(xiàn)在此援引加入本文。說明書中的實(shí)施方案提供了對實(shí)施方案的說明而不應(yīng)被理解為限制其范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員(從業(yè)者)可容易地意識到，本公開還涵蓋了許多其它的實(shí)施方案。所有出版物和參考材料都以其整體援引加入。援引加入的材料與本說明書有沖突或者不一致時(shí)，以本說明書為準(zhǔn)。本文所引用的任何參考文獻(xiàn)并非認(rèn)可此文獻(xiàn)是現(xiàn)有技術(shù)。除非另有說明，本說明書(包括權(quán)利要求)中所使用的表示成分、細(xì)胞培養(yǎng)物、處理?xiàng)l件等等量的所有數(shù)字，都理解為在所有情況下都受到術(shù)語“大約”的修飾。因此，除非另有說明，數(shù)字參數(shù)都為大約數(shù)，并且可以基于期望的性質(zhì)(可從本文公開的實(shí)施例獲得)而改變。除非另有說明，在一系列要素之前的術(shù)語“至少”應(yīng)理解為是指該系列中的每個(gè)要素。本領(lǐng)域技術(shù)人員會意識到、或者能夠使用不超過常規(guī)的實(shí)驗(yàn)而確定本文所述具體實(shí)施方案的許多等價(jià)方案。此類等價(jià)方案要涵蓋在以下的權(quán)利要求中?？梢詫Ρ疚乃_的實(shí)施方案做出許多修改和變化而不偏離其精神和范圍，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是明顯的。本文所述的具體實(shí)施方案僅僅是以示例性的方式提供而不是要以任何方式進(jìn)行限制。本說明書和實(shí)例要理解為僅僅是示例性的，而本公開的真正范圍和精神是由以下的權(quán)利要求來指明的。當(dāng)前第1頁12