本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方及其制備方法。

背景技術(shù)：

抗菌肽(Antimicrobial pepertides)原指昆蟲(chóng)體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)而產(chǎn)生的一類(lèi)分子量在4KD左右，具有抗菌活性的堿性多肽物質(zhì)。最初，人們?cè)谘芯勘泵捞煨Q的免疫機(jī)制時(shí)，發(fā)現(xiàn)其滯育蛹經(jīng)外界刺激誘導(dǎo)后，其血淋巴中產(chǎn)生了具有抑菌作用的多肽物質(zhì)，這類(lèi)抗菌多肽被命名為天蠶素(Cecropins)。后來(lái)，從其他昆蟲(chóng)以及兩棲類(lèi)動(dòng)物、哺乳動(dòng)物中，也分離到結(jié)構(gòu)相似的抗菌多肽。迄今為止，在不同動(dòng)物組織中已發(fā)現(xiàn)了很多具有抗菌作用的蛋白質(zhì)和多肽，已有70多種抗菌多肽的結(jié)構(gòu)被測(cè)定，抗菌肽的概念得到了極大的擴(kuò)展。

根據(jù)抗菌肽的結(jié)構(gòu)，可將其分為5類(lèi)：(1)單鏈無(wú)半胱氨酸殘基的α-螺旋，或由無(wú)規(guī)卷曲連接的兩段α-螺旋組成的肽；(2)富含某些氨基酸殘基但不含半胱氨酸殘基的抗菌肽；(3)含1個(gè)二硫鍵的抗菌多肽；(4)有2個(gè)或2個(gè)以上二硫鍵、具有β-折疊結(jié)構(gòu)的抗菌肽；(5)由其它已知功能的較大的多肽衍生而來(lái)的具有抗菌活性的肽。其中最早分離到的Cecropins和從非洲爪蟾中分離到的Magainins等屬于第一類(lèi)抗菌肽，通常也將其稱(chēng)為Cecropin類(lèi)抗菌肽，目前對(duì)此類(lèi)抗菌肽的研究也較深入。

抗菌肽是生物中具有抗菌活性的一類(lèi)小分子多肽，抗菌肽具有抗菌譜廣，作用強(qiáng)，不良反應(yīng)小，安全范圍大，無(wú)環(huán)境污染，不產(chǎn)生抗藥性的特點(diǎn)，抗菌肽可廣泛存在于許多生物中。

目前已有一些研究報(bào)道了利用液態(tài)發(fā)酵工藝來(lái)生產(chǎn)抗菌肽的方法，其中《一種抗菌化合物的制備方法》(CN101979629A)、《一種枯草芽孢桿菌生產(chǎn)抗菌肽的發(fā)酵工藝》(CN103966297A)等，但這些方法所用的培養(yǎng)基原料多為葡萄糖、蛋白胨等碳源和氮源，存在生產(chǎn)成本高、獲得的抗菌肽效價(jià)低等缺點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供了一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方及其制備方法，該菌種培養(yǎng)基配方優(yōu)化抗菌肽菌種發(fā)酵環(huán)境。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.3％-0.6％、蛋白胨0.5％-2.0％、氯化鈉0.3％-0.6％、磷酸二氫鉀 0.05％-0.15％、磷酸氫二鉀0.03％-0.1％，余量為蒸餾水。

根據(jù)上述的抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.4％-0.5％、蛋白胨0.5％-1.5％、氯化鈉0.4％-0.6％、磷酸二氫鉀 0.08％-0.12％、磷酸氫二鉀0.04％-0.06％，余量為蒸餾水。

根據(jù)上述的抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.5％、蛋白胨1.0％、氯化鈉0.5％、磷酸二氫鉀 0.1％、磷酸氫二鉀0.05％，余量為蒸餾水。

一種抗菌肽菌種的制備方法，它包括以下步驟：

（1）培養(yǎng)基配置：將原料中的氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀溶于部分蒸餾水中充分?jǐn)嚢瑁敝寥芙?；將原料中的酵母浸粉、蛋白胨加入剩余的蒸餾水中攪拌溶解，去除泡沫；將上述含有氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀的水溶液與含有酵母浸粉、蛋白胨的水溶液混勻，制得培養(yǎng)基液體；

（2）調(diào)整：用氫氧化鈉調(diào)整所述培養(yǎng)基液體的 pH 值為6.5-7.0；

（3）殺菌：將所述培養(yǎng)基液體在殺菌設(shè)備中進(jìn)行殺菌處理；在不損失營(yíng)養(yǎng)的情況下，殺滅培養(yǎng)基液體中的細(xì)菌；

（4）接種培養(yǎng)：將殺菌處理后的培養(yǎng)基液體冷卻到37 ℃以下，接入抗菌肽菌種，調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度30℃-35℃，所述種子罐通入凈化空氣進(jìn)行有氧培養(yǎng)，培養(yǎng)12-14小時(shí)，即可制得抗菌肽生產(chǎn)菌種。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明原料來(lái)源豐富、價(jià)格低廉，采用本發(fā)明培養(yǎng)出的抗菌肽菌種生長(zhǎng)快、活力強(qiáng)、菌體含量高，接種后的菌種萌發(fā)率好、發(fā)酵周期短、成品率高。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)一步描述，但不局限于這些實(shí)施例。

以下原料酵母浸粉、蛋白胨、氯化鈉、磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀均為市售。

實(shí)施例1

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.3％-0.6％、蛋白胨0.5％-2.0％、氯化鈉0.3％-0.6％、磷酸二氫鉀 0.05％-0.15％、磷酸氫二鉀0.03％-0.1％，余量為蒸餾水。

一種抗菌肽菌種的制備方法，它包括以下步驟：

（1）培養(yǎng)基配置：將原料中的氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀溶于部分蒸餾水中充分?jǐn)嚢?，直至溶解；將原料中的酵母浸粉、蛋白胨加入剩余的蒸餾水中攪拌溶解，去除泡沫；將上述含有氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀的水溶液與含有酵母浸粉、蛋白胨的水溶液混勻，制得培養(yǎng)基液體；

（2）調(diào)整：用氫氧化鈉調(diào)整所述培養(yǎng)基液體的 pH 值為6.5-7.0；

（3）殺菌：將所述培養(yǎng)基液體在殺菌設(shè)備中進(jìn)行殺菌處理；在不損失營(yíng)養(yǎng)的情況下，殺滅培養(yǎng)基液體中的細(xì)菌；

（4）接種培養(yǎng)：將殺菌處理后的培養(yǎng)基液體冷卻到37 ℃以下，接入抗菌肽菌種，調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度30℃-35℃，所述種子罐通入凈化空氣進(jìn)行有氧培養(yǎng)，培養(yǎng)12-14小時(shí)，即可制得抗菌肽生產(chǎn)菌種。

菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)12小時(shí)活菌量≥80億/毫升。

實(shí)施例2

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.5％、蛋白胨1.0％、氯化鈉0.5％、磷酸二氫鉀 0.1％、磷酸氫二鉀0.05％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)13小時(shí)活菌量為85億/毫升。

實(shí)施例3

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.3％、蛋白胨1.0％、氯化鈉0.4％、磷酸二氫鉀 0.05％、磷酸氫二鉀0.1％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)12小時(shí)活菌量為82億/毫升。

實(shí)施例4

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.4％、蛋白胨1.5％、氯化鈉0.3％、磷酸二氫鉀 0.15％、磷酸氫二鉀0.05％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)14小時(shí)活菌量為81億/毫升。

實(shí)施例5

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.5％、蛋白胨2.0％、氯化鈉0.5％、磷酸二氫鉀 0.05％、磷酸氫二鉀0.08％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)13小時(shí)活菌量為89億/毫升。

實(shí)施例6

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.6％、蛋白胨1.5％、氯化鈉0.5％、磷酸二氫鉀 0.1％、磷酸氫二鉀0.03％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)14小時(shí)活菌量為86億/毫升。

實(shí)施例7

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.45％、蛋白胨1.0％、氯化鈉0.4％、磷酸二氫鉀 0.09％、磷酸氫二鉀0.07％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)13小時(shí)活菌量為83億/毫升。

實(shí)施例8

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.4％、蛋白胨1.5％、氯化鈉0.5％、磷酸二氫鉀 0.15％、磷酸氫二鉀0.09％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)12小時(shí)活菌量為85億/毫升。

實(shí)施例9

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.5％、蛋白胨1.0％、氯化鈉0.6％、磷酸二氫鉀 0.08％、磷酸氫二鉀0.04％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)14小時(shí)活菌量為88億/毫升。

實(shí)施例10

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.5％、蛋白胨1.2％、氯化鈉0.4％、磷酸二氫鉀 0.09％、磷酸氫二鉀0.06％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)13小時(shí)活菌量為80億/毫升。

實(shí)施例11

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.5％、蛋白胨1.4％、氯化鈉0.4％、磷酸二氫鉀 0.07％、磷酸氫二鉀0.04％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)12小時(shí)活菌量為87億/毫升。

實(shí)施例12

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.5％、蛋白胨0.9％、氯化鈉0.4％、磷酸二氫鉀 0.09％、磷酸氫二鉀0.08％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)14小時(shí)活菌量為90億/毫升。

實(shí)施例13

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.3％、蛋白胨1.6％、氯化鈉0.4％、磷酸二氫鉀 0.15％、磷酸氫二鉀0.05％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)13小時(shí)活菌量為86億/毫升。

實(shí)施例14

一種抗菌肽菌種培養(yǎng)基配方，所述培養(yǎng)基由如下以下重量百分比組分制成：酵母浸粉0.6％、蛋白胨1.0％、氯化鈉0.5％、磷酸二氫鉀 0.06％、磷酸氫二鉀0.03％，余量為蒸餾水。菌種活菌數(shù)：培養(yǎng)12小時(shí)活菌量為81億/毫升。

上述為本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式，在不脫離本發(fā)明所附權(quán)利說(shuō)明書(shū)所限定的本發(fā)明精神范圍內(nèi)，在形式和細(xì)節(jié)上對(duì)本發(fā)明所做的任何變化，都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。